Un microscopio electrónico es aquel que usa electrones en lugar de

fotones o luz visible para formar imágenes de objetos diminutos. Además, los
microscopios electrónicos permiten alcanzar amplificaciones mayores antes
que los mejores microscopios ópticos, debido a que la longitud de onda de los
electrones es bastante menor que la de los fotones.

Los microscopios ópticos pueden clasificarse entre microscopios de luz

transmitida y microscopios de luz reflejada. De un modo similar, dependiendo
de la técnica utilizada en los microscopios electrónicos, puede distinguirse
entre microscopios electrónicos de transmisión y microscopios electrónicos de
barrido.

A modo de comparación, el ojo humano puede ver hasta 0,1 milímetros;

el microscopio óptico, hasta 0,0002 milímetros; y el electrónico de barrido,
hasta más o menos 40 nanómetros. Asimismo, posibilita también obtener una
mayor profundidad de campo, lo que permite conseguir un efecto más real de
las tres dimensiones.

Partes del microscopio electrónico

Las partes principales de un microscopio electrónico incluyen aquellos

elementos utilizados para generar electrones y dirigirlos hacia la muestra. Esto
incluye:

Fuente de electrones: Es equivalente a la fuente de luz en un microscopio

óptico. En este caso es necesario disponer de un emisor de electrones. En
general, se utiliza un filamento de tungsteno. Este filamento es calentado de
modo que la energía de sus átomos y electrones aumenta. A partir de un cierto
nivel energético los electrones poseen suficiente energía para escapar de sus
átomos. Estos electrones libres son a continuación dirigidos hacia la muestra.

Lentes electromagnéticas: La función de estas es generar campos eléctricos

y magnéticos de modo que su interacción con los electrones hace que sus
trayectorias diverjan o converjan en un punto.

Cámara de vacío: El procedimiento expuesto anteriormente debe llevarse a

cabo dentro de una cámara de vacío. De lo contrario, los electrones
interactuarían con las moléculas del aire y no sería posible determinar sus
trayectorias adecuadamente. La muestra que se observa debe colocarse
también dentro de la cámara de vacío. En definitiva, es uno de los motivos por
el cual no es posible observar muestras vivas con un microscopio electrónico.

Detector (Pantalla fluorescente): Una vez los electrones han impactado

contra la muestra es necesario medir algún tipo de información para poder
reconstruir la imagen de la muestra. Esta pantalla reacciona de modo distinto
según cual sea el número de electrones que impactan en ella. De este modo es
posible detectar las zonas donde impactan más o menos electrones y deducir
así la imagen de la muestra. A continuación, la información capturada por la
pantalla fluorescente es transmitida a un ordenador que puede asignar colores
artificiales a la imagen obtenida. Dado que nuestros ojos no están preparados
para detectar electrones debemos incorporar este elemento detector en un
microscopio electrónico.

Tipos de microscopios electrónicos

Existen dos tipos principales de microscopios electrónicos. Los

microscopios electrónicos de transmisión y los microscopios electrónicos de
barrido. A continuación presentamos sus detalles:

 Microscopio electrónico de transmisión (MET)

La principal característica del microscopio electrónico de transmisión es

que se utilizan los electrones que atraviesan la muestra.

En primer lugar, los electrones son conducidos hacia la muestra

mediante las lentes electromagnéticas. Cuando los electrones impactan contra
la muestra, algunos de ellos consiguen atravesarla y otros son dispersados.
Los electrones que pueden pasar al otro lado de la muestra son capturados por
un detector dando lugar así a una imagen.

Para utilizar esta técnica es necesario preparar la muestra para que sea
muy delgada (espesor inferior a 2000 angstroms). De lo contrario, demasiado
espesor impide que los electrones puedan atravesarla
 Cabe destacar que, esta técnica de microscopía es muy útil para visualizar
los detalles internos de una muestra, por ejemplo, estructuras cristalinas. A
nivel conceptual esta técnica es similar a realizar una radiografía de la muestra.

 Microscopio electrónico de barrido (MEB)

En el microscopio electrónico de barrido también es necesario que los

electrones impacten contra la muestra. En este caso, los electrones no iluminan
toda la muestra simultáneamente sino que se hace un escaneado recorriendo
los distintos puntos de la muestra.

Asimismo, esta técnica de microscopía es muy útil para observar los

detalles de la superficie de microorganismos. Es habitual realizar una
preparación de la muestra depositando primero una capa de metal sobre la
muestra. De esta forma, existen más electrones secundarios que pueden
desprenderse cuando se aplica el haz principal de electrones. Este proceso de
preparación es en general más sencillo que el que se debe realizar para la
microscopía electrónica de transmisión.

Cabe resaltar que, el aumento que alcanza este tipo de microscopios es

menor que el que se puede obtener con un microscopio electrónico de
transmisión. Sin embargo, la información tridimensional que proporciona esta
técnica lo convierte en un instrumento muy útil para determinados tipos de
muestras

Preparación de la muestra en el Microscopio Electrónico de Transmisión

(MET)

El proceso de la preparación de espécimen en el microscopio electrónico

de transmisión implica muchos pasos:

Fijación: La fijación del espécimen estabiliza la célula de modo que más futuro
cambie o no suceso el daño a la célula. Con este proceso, la muestra se
preserva para dar a una foto de la célula viva. La fijación se puede hacer con
dos métodos como sigue:
  Fijación química: Este método se utiliza para estabilizar muestras
biológicas, la sustancia química usada en este método es aldehído
glutárico.
 Criofijación: Este método implica la congelación rápida de la muestra
en nitrógeno líquido o helio del líquido. El contenido en agua en la
muestra consigue así transformado en una forma vítrea del hielo.

Enjuagar: El proceso de fijación del tejido puede causar acidez creciente en el

espécimen. Para prevenir esta condición y mantener el pH, debe ser enjuagado
correctamente usando un almacenador intermedio tal como cacodilato de sodio

Fijación secundaria: Para aumentar el contraste de las estructuras del minuto

dentro del espécimen y dar más estabilidad, una fijación secundaria se realiza
usando el tetróxido del osmio (Oso4).

Inclusión: Tiene como finalidad proporcionarle al tejido un soporte sólido que

posibilite realizar un corte muy fino, por lo que es de suma importancia que el
medio utilizado para la inclusión penetre al interior del tejido. Aquí se forman
bloques de parafina dentro de los cuales están las muestras a estudiar.
Después de su inclusión y posterior secado, estos se deben poner a enfriar en
un congelador para su posterior corte.

Microtomía: Se realizan cortes histológicos muy delgados según lo requerido o

la costumbre del laboratorio donde se realice la técnica. Los cortes van desde
0,5 micras hasta 8 u 10 micras. Los cortes se echan al baño de flotación y se
recogen con un portaobjetos, se marcan con la fecha, el tipo de tejido y la
tinción con que se van a procesar. El ángulo de corte entre el cuchillo del
micrótomo y el bloque ha de estar entre 10º y 15º. Una vez realizado el corte se
da un baño de agua destilada, para que la parafina se estire.

Preparación de muestras para el microscopio de barrido

Las muestras destinadas al microscopio electrónico de barrido han de cumplir

dos condiciones: deben estar secas y ser conductoras. El proceso de secado
ha de llevarse a cabo preservando al máximo la estructura original de la
muestra.
Para ello, tenemos dos alternativas: usar el método clásico de fijación y
deshidratación química que el usuario realiza en su laboratorio y que finaliza
con el secado por punto crítico, o utilizar el moderno método de fijación física
por Criofijación que ya está acoplado a uno de los microscopios. En ambos
casos la muestra necesita recubrirse después con un material que la haga
conductora y permita su observación en el microscopio.

Recubrimiento de muestras en bajo vacío: Con este método se realizan dos

tipos de recubrimientos: la pulverización catódica de oro para obtener las
mejores condiciones de imagen y, si se requiere microanálisis por rayos X, el
recubrimiento por hilo de carbono.

Recubrimiento de muestras en alto vacío: Sus aplicaciones van más allá de

la necesidad de obtener una muestra conductora para el microscopio
electrónico de barrido. Consigue recubrimientos de grano mucho más fino y
está preparado para realizar la pulverización con distintos metales. También
trabaja por el método de evaporación, con lo que aumenta el rango de posibles
elementos de recubrimiento.

Observación de muestras criofijadas: El microscopio electrónico de barrido

puede dotarse de un sistema capaz de observar la muestra a muy baja
temperatura de forma que su preservación estructural es máxima y la
capacidad de trabajo del microscopio no se afecta en absoluto, pues ya no
tratamos con una muestra hidratada sino congelada.

El proceso se inicia fuera del microscopio, enfriando la muestra a la máxima

velocidad posible mediante nitrógeno nieve. A continuación ya pasa al sistema
de crio-observación, donde se puede fracturar, sublimar el hielo superficial y
recubrir con oro o carbono para su observación y análisis. La ventaja de este
sistema es que se puede observar cualquier muestra biológica o hidratada con
una preparación mínima y rápida con una buena preservación estructural.

Bibliografía

https://www.mundomicroscopio.com/microscopio-electronico/

https://traductordeciencia.es/como-funciona-un-microscopio-electronico/
https://es.wikipedia.org/wiki/Microscopio_electr%C3%B3nico_de_transmisi
%C3%B3n

https://es.wikipedia.org/wiki/Microscopio_electr%C3%B3nico

http://www.upv.es/entidades/SME/info/753330normalc.html

https://www.news-medical.net/life-sciences/Sample-Preparation-in-TEM-
(Spanish).aspx

https://mmegias.webs.uvigo.es/6-tecnicas/6-electronico.php?tema