Integration and evolution of the cichlid mandible:

The molecular basis of alternate feeding strategies

R. Craig Albertson, J. Todd Streelman, Thomas D. Kocher, and Pamela
C. Yelick
Introducción
• Una divergencia fundamental entre los peces óseos se produce entre las
especies que explotan diferentes tipos de recuros “presas”.
• Presas duras o adheridas al sustrato vs las Presas muy móviles.
• Causando modificaciones en la anatomía y la función de la mandibula:
Mandíbulas mordedoras vs mandíbulas que succionan.
• Diversos grupos han presenrado cambios a lo largo de este eje
funcional.
Introducción
La mandíbula de teleósteos se puede describir como dos mecanismos de
palanca opuestos: uno que define la ventaja mecánica del cierre y otro que
define la ventaja mecánica de la apertura.

La palanca de cierre se mide como la distancia entre la

articulación de la mandíbula y la unión del músculo
aductor mandibular en la apófisis coronoides ( línea
púrpura).
Introducción
La mandíbula de teleósteos se puede describir como dos mecanismos de
palanca opuestos: uno que define la ventaja mecánica del cierre y otro que
define la ventaja mecánica de la apertura.

La palanca de apertura es la distancia entre la

articulación de la mandíbula y la unión del ligamento
mandibular interopercular en el proceso retroarticular
(línea verde).
Introducción
La mandíbula de teleósteos se puede describir como dos mecanismos de
palanca opuestos: uno que define la ventaja mecánica del cierre y otro que
define la ventaja mecánica de la apertura.

La palanca de salida se toma tradicionalmente como

la distancia entre la articulación de la mandíbula y la
punta del diente más anterior (línea azul).
Introducción
La mandíbula de teleósteos se puede describir como dos mecanismos de
palanca opuestos: uno que define la ventaja mecánica del cierre y otro que
define la ventaja mecánica de la apertura.

La fuerza que se transfiere desde el insercón muscular

hasta el punto más distal de la mandíbula y se
denomina ventaja mecánica.

Una mayor ventaja mecánica equivale a una mayor

transmisión de fuerza, que es óptima para morder,
mientras que una menor ventaja mecánica se traduce
en una mayor transferencia de velocidad, que es típica
de los alimentadores de succión.
Introducción
La mandíbula de teleósteos se puede describir como dos mecanismos de
palanca opuestos: uno que define la ventaja mecánica del cierre y otro que
define la ventaja mecánica de la apertura.

Comprender las bases moleculares de los cambios que

diferencian a los oirganismos “mordedores” de los que se
alimentan por “succión” brindará información significativa
sobre la evolución adaptativa de las especies de peces.

La integración morfológica predice que las unidades

funcionales también serán genéticamente modulares, y que la
modulación genética y funcional es mediada por el desarrollo
embrionario.
OBJETIVOS
Probamos la hipótesis específica de que la mandíbula inferior de
cíclidos es una estructura integrada morfológicamente mediante la
segregación de la morfología funcional (apertura vs cierre), mapeano
una población F2 derivada de dos especies de cíclidos que emplean
diferentes modos de alimentación.

Exploraron el papel potencial de bmp4 (proteína morfogenética ósea 4),

un gen candidato para la evolución de la diversidad craneofacial, en la
regulación de los mecanismos de palanca mecánica en la mandíbula de
los teleósteos
OBJETIVOS
Los patrones de integración y modularidad son consistentes con la teoría
de la integración morfológica.

Que la arquitectura genética subyacente de la mandíbula del cíclido

refleja la complejidad funcional y de desarrollo de la anatomía que
codifica.

Demostrar que bmp4 está asociado y tiene el potencial de alterar las

diferencias de forma adaptativa de la mandíbula de los teleósteos.
Métodos
Labeotropheus fuelleborni (LF) Metriaclima zebra (MZ)

Especie succionadora:
Especie mordedora: mandíbula inferior
una mandíbula alargada más grácil
inferior corta y con una ventaja
robusta con una gran mecánica
ventaja mecánica. relativamente baja.
Métodos: Cruzas
Cruzamos dos especies del lago Malawi estrechamente relacionadas con
distintas morfologías y comportamientos alimentarios. Los machos LF se
colocaron en una piscina de 500 galones con hembra MZ.

Se utilizaron dos machos LF y dos hembras MZ para producir dos familias F1,
que se cultivaron hasta la madurez sexual. Se generaron catorce familias F2 a
través de apareamientos hermano-hermana de la F1.

Una proporción significativa de nuestra población de mapeo F2 exhibió

patrones aberrantes o pérdida de dentición en sus mandíbulas orales. Por
estas razones, pensamos que medir la palanca hacia la punta de la mandíbula
(en lugar de la punta del diente) produciría las estimaciones más confiables de
la transmisión de fuerza.
Métodos QTL
Se escaneó el genoma en busca de marcadores que se segregaran con QTL putativo
mediante el mapeo de intervalos en MAPQTL 4.0 (20) y regresión lineal (SPSS versión
10.0 para Macintosh) para verirficar que los Los cofactores fenotipicos y los
marcadores que explicaron una cantidad significativa de la varianza fenotípica
mediante el uso de la regresión múltiple.
Los marcadores restantes después de la eliminación se utilizaron como cofactores en
el mapeo de QTL múltiple (MQM) para eliminar la variación inducida por QTL no
vinculado y evaluar con mayor precisión los efectos de QTL individual (21).
Se determinaron umbrales de LOD significativos para cada rasgo mediante una prueba
de permutación. La puntuación máxima de LOD sobre el genoma se calculó para cada
iteración, y la distribución de frecuencia de LOD se generó bajo la hipótesis nula de no
QTL. Se identificaron niveles de significancia en todo el genoma de alfa 0.05 y 0.01
para cada rasgo de 1,000 permutaciones de los datos y correspondieron a puntajes
LOD que van desde 2.60 a 10.54 (promedio 4.05).
Métodos Tinción
Los cartílagos y huesos de larvas de peces se tiñeron con azul
alcián y rojo alizarina.
Las preparaciones de cartílago y hueso se fotografiaron con un
sistema de imagen digital Zeiss Axiocam y se procesaron en
PHOTOSHOP 7 (Adobe Systems, San José, CA).
Métodos Alteraciones de BMP4
Se transcribió ARNm de longitud completa a partir del plásmido
pBluescript linealizado que contenía ADNc de bmp4 de pez cebra.
Se le inyectaron a las larvas diferentes cantidades de BMP4: 50,
100, 150 y 200 ng de bmp4mRNA poliadenilado (volumen de 1 a 3
nl).
Para asegurar la especificidad de la sobreexpresión de bmp4, se
examinó el desarrollo cardíaco asimétrico de izquierda a derecha
en embriones inyectados de 100 y 150 ng l. Se ha demostrado que
la sobreexpresión de Bmp4 aleatoriza la posición asimétrica del
corazón
Resultados Identificaron dos
QTL que afectaron
la ventaja
mecánica del
cierre y que juntos
representaron el
33% de la varianza
fenotípica en la
población F2
Resultados
Se identificaron
cuatro QTL que
afectaron la ventaja
mecánica de la
apertura y que
juntos explicaron el
47% de la varianza
(Tabla 1).
Resultados
Se identificaron dos
QTL que afectaron
la palanca de
salida, explicando
el 25% de la
varianza (Tabla 1).
Resultados
Los resultados suguieren que estos rasgos biomecánicos son
genéticamente modulares.

Implican que el sistema de palanca de apertura está integrado en

menor medida que el sistema de palanca de cierre.

Son consistentes con hallazgos recientes en la familia Labridae,

donde las modificaciones de la ventaja mecánica de apertura y
cierre ocurrieron de manera independiente durante la evolución de
este grupo.
Resultados
Nuestros datos genéticos sugieren que esta
geometría exhibe diferentes niveles de
integración.
Las dimensiones rostral y dorsal compartieron 2/3
QTL(67%)-
Los ejes rostral y ventral compartieron 1/5 QTL
(20%)
Los ejes dorsal y ventral compartieron 0/8 QTL
(0%).
En otras palabras, la palanca exterior y la palanca
interior de cierre mostraron niveles relativamente
altos de integración, la palanca exterior y la
palanca interior de apertura mostraron niveles
más bajos de integración, y las palancas internas
de cierre y apertura no mostraron ningún control
genético superpuesto. Esta tendencia también
está respaldada por diferencias en las pendientes
de nuestras correlaciones genéticas.
 Resultados
Las diferencias en el grado de integración son
consistentes con las diferencias regionales en la
complejidad funcional y de desarrollo de la mandíbula.
Por ejemplo, el cierre de la mandíbula es un proceso
relativamente simple que implica la acción coordinada
de elementos pertenecientes principalmente a las
mandíbulas orales.
La apertura de la mandíbula es un proceso más
complejo que se ha modificado ampliamente a lo largo
de la evolución actinopterigia (43). En teleósteos
avanzados, esta función se logra mediante la acción
sincronizada de varios sistemas biomecánicos definidos
por la mandíbula, hioides, opérculo, cráneo y cintura
pectoral.
 Resultados
Los cíclidos que emplean estrategias de alimentación
alternativas exhibieron diferencias en la morfología
mandibular en 7 dpf. El esqueleto faríngeo no está
mineralizado en esta etapa, pero las diferencias en las
relaciones de palanca eran obvias en el precursor
cartilaginoso de la mandíbula, el cartílago de Meckel.

Las larvas LF exhibieron una ventaja mecánica de

cierre relativamente alta, mientras que las larvas MZ
mostraron una ventaja mecánica de cierre mucho
menor. La ventaja mecánica de la apertura también
fue significativamente diferente en esta etapa, aunque
la diferencia fue mucho menos pronunciada.
Resultados

Nuestros datos genéticos ofrecen evidencia de que una

mutación causal que afecta la morfología funcional está
relacionada con BMP4 en los cíclidos.

La acumulación de sustituciones de aminoácidos se restringió

al prodominio, con poca variación encontrada en el péptido
señal o dominio maduro, lo que sugiere que la regulación de
Bmp4 podría ser la base de algún aspecto de la evolución del
cíclido.
 Resultados
No está claro si las diferencias en la expresión de
bmp4 en la mandíbula de los cíclidos se deben a la
divergencia en la estructura de la proteína o
elementos reguladores.

Las altas tasas de sustitución de aminoácidos en el

prodominio del cíclido de África oriental Bmp4
implican al procesamiento postraduccional como
un posible mecanismo de diversidad; sin embargo,
la acumulación de evidencia empírica y teórica
postula un papel significativo para la evolución de
los sistemas reguladores genéticos en la generación
de diversidad morfológica
Discusiones
Nuestro trabajo demuestra el potencial de integrar estudios en poblaciones
naturales y organismos modelo para abordar cuestiones relacionadas con la
evolución y el desarrollo.

Los análisis genéticos cuantitativos en cíclidos muestran que la mandíbula

inferior es una estructura morfológicamente integrada. También implican a bmp4
como candidato a diferencias en la ventaja mecánica del cierre.

Los análisis funcionales en el pez cebra corroboran el papel de bmp4 en la

regulación del sistema de palanca de cierre, pero también muestran que bmp4
tiene el potencial de estimular el crecimiento de los procesos coronoides y
retroarticulares, rasgos que se desacoplaron en los cíclidos.
Discusiones
El estudio da pasos importantes hacia la comprensión de los cambios
moleculares que han acompañado la evolución morfológica en los cíclidos,
pero quedan por abordar varias cuestiones importantes.
Comprender cómo la interacción entre los efectos genéticos y ambientales
podría influir en la evolución de la morfología de la alimentación de los
cíclidos será un tema importante a explorar. Por último, es importante
señalar que nuestra interpretación de las diferencias en el rendimiento de
alimentación de los cíclidos se basó en la variación en la forma del hueso.
Identificar las mutaciones causales y caracterizar las vías moleculares que
contribuyen a las transformaciones morfológicas adaptativas sigue siendo
una tarea ambiciosa que puede verse facilitada por el trabajo continuo en el
modelo de peces evolutivos y de desarrollo