virus y

coninfecciones
en pollos de
engorde
Coinfección experimental de bronquitis infecciosa y virus de
influenza aviar H9N2 de baja patogenicidad en pollos de engorde
comerciales

En este estudio, los pollos de engorde comerciales se infectaron

experimentalmente con cepas ú nicas de bronquitis infecciosa (IBV) y virus
de la influenza aviar (AIV), Las aves fueron monitoreadas para determinar los
resultados clínicos y patoló gicos y la eliminació n del virus durante 10 días
posteriores a la infecció n (DPI). 

Se observaron algunos síntomas clínicos y se obtuvieron resultados de cada

una de las cepas usadas para poder dimensionar el impacto econó mico de
este tipo de infecciones en campo.
Tabla de contenido

Introduccion 01 02 Materiales y
metodos

Resultados 03 04 Discusion
Antecedentes Historicos
Hace 100
años
La gripe aviar, esta enfermedad, que fue por primera 1931-1936
vez identificada en Italia hace 100 años, afecta a los
animales de todo el mundo.
01 02
La BI se describió por primera
vez en 1931 (1) como una
enfermedad respiratoria de los
pollos y la causa viral fue
establecida en 1936 por Beach
y Schalm.
Durante
1983 y 1984
03
se produjo una epidemia en Estados que,
aunque inicialmente causó una baja
mortalidad, en los siguientes seis meses
dio lugar a una tasa de mortalidad del 90%.
Para controlar el brote, se destruyeron más
de 17 millones de aves con un coste de 65
millones de dólares.
 Introduccion
01
 Coinfecciones
Los brotes de enfermedades respiratorias en parvadas
comerciales de pollos de engorde han aumentado
recientemente, causando graves pérdidas económicas en la
industria de los pollos de engorde. influenza aviar, el virus de
la bronquitis infecciosa (IBV) y el virus de la enfermedad de
Newcastle (vNDV) se han aislado con frecuencia de
diferentes parvadas de pollos de engorde ( 
Hassan et al., 2016 ). Estos patógenos son de gran
importancia y tienen un gran impacto económico porque
son capaces de inducir enfermedades de forma
independiente o en asociación entre sí ( Roussan et al., 2008
 ).
El IBV está
causando una
enfermedad
respiratoria viral
aguda altamente
contagiosa de los
pollo, perteneciente
a Coronaviridae
Virus de la bronquitis infecciosa aviar
Aves de corral
Virus IBV y AIV
Están ampliamente diseminados en las
aves de corral con un gran impacto
económico porque pueden inducir
enfermedades de forma independiente
o en asociación entre sí.

Mortalidad
La alta prevalencia tanto de AIV-
como de IBV determinada en estudios
de campo destacó un papel potencial
de IBV en la exacerbación de la
manifestación de la infección por AIV-
H9N2 en pollos de engorde con alta
mortalidad
En este estudio, se investigó
la patogenia de las
infecciones por AIV e IBV
únicas y mixtas en
condiciones experimentales
en pollos de engorde
comerciales.
Lugares de estudio
Africa

Egipto
Materiales y metodos
Virus
Para los ensayos se usaron los
siguientes tipos de virus:

1. Subtipo de virus de la influenza

AIV – H9N2
2. Variante Bronquitis local IBV BSU-
MN-KB44/2013
3. Cepa de IBV aislada en la
universidad de Egipto
Evaluaciones
Todas estas cepas fueron evaluadas
en huevos embionados SPF libre de
patogenos especificos.
Materiales y metodos
Evaluacion de titulo viral
Para esta evaluacion se usan huevos
de 10 a 11 dias de incubacion los
cuales son libres de patogenos
especificos.

Se usa para cuantificar la concetracion

viral de cepas aisladas, de soluciones
de antigenos y de vacunas.

Se hacen diluciones seriadas y se

inoculan los huevos embrionados en la
cavidad alantoidea. Para el caso de
bronquitis usualmente se hacen
2
diluciones desde 10 hasta 105
Titulaciones virales
Se realiza lectura diaria y se lleva hasta
los 7 días, a partir de este día se
obtienen los cálculos por medio del
método Reed & muench.
Materiales y metodos
Antisueros

Se utilizo una vacuna atenuada de la

marca NOBILIS IBV para estudiar el
efecto de las vacunas variantes IBV
en la patogenia de la infección por
AIV-H9N2. Para la prueba de
inhibición de la hemaglutinación (HI)
de IBV; Las cepas variantes
purificadas, concentradas y tratadas
con enzima fosfolipasa C tipo 1 y
cepa clásica similar a Mass con sus
antisueros de control positivo.
Prueba de inhibicion de la hemaglutinacion
El procedimiento de la prueba de IH consiste
en medir con qué efectividad se unen los
anticuerpos a las proteínas HA y evitan que
"peguen" los glóbulos rojos entre sí (es decir,
inhibición de la hemaglutinación). En la
imagen se puede ver un ejemplo de inhibición
de la hemaglutinación

Los anticuerpos que se usan en la prueba de

IH se obtienen tras infectar a un
inmunológicamente. El sistema inmunitario
del animal genera anticuerpos en respuesta a
los antígenos presentes en la superficie del
virus específico que se utilizó para infectar
ese animal.
 Pollos
experimentales
Pollos experimentales
Se dividieron en grupos
Pollos de engorde
de 7 pollos
115 7 grupos de 15
animales animales

Edad Edad vacunacion triple

(dias) IBV,NCL,AIV (dias)
20-25
100%
2-9
100%
 Grupos
experimentales
1. Grupo control negativo
2. Grupo infectado con cepa variante
IBV
3. Grupo infectado con cepa clásica
IBV
4. grupo infectado con la cepa
clásica mixta AIV-H9N2N2/IBV
5. grupo infectado con la cepa mixta
AIV-H9N2/ Grupo infectado con la
cepa vacunal IBV 4/91

Se recogieron muestras de sangre

antes del desafío para pruebas de HI y
AGPT para IBV.
Coleccion de muestra
Muestras
Se realiza a los 20 dias del
desafio para pruebas serologicas
e isopados traqueales para
pruebas de eliminacion del virus
esto se hizo a los 2,5 y 7dias

Serologia post desafio

Se recogieron los sueros de los
pollitos restantes a los 10 DPI para
la determinación del título de
anticuerpos séricos contra AIV-
H9N2 mediante la prueba HI
Titulos de eliminacion de virus

El ARN viral se extrajo para la detección y cuantificación de AIV-H9N2 y el gen S1 de IBV. El

volumen de reacción de qRT-PCR fue de 25 μl que contenía 5 μl de ARN extraído, 12,5 μl 2 ×
mezcla lista para-RT-PCR de un solo paso, 1,25 μl de potenciador de RT, 0,25 μl de mezcla de
enzimas Verso, 1 μl de 20 pmol de primers forwars y reverse, 0,25 μl de sonda específica de
virus y 3,75 de agua libre de nucleasas. El perfil térmico incluyó un paso de transcripción
inversa a 50 °C durante 15 min seguido de 15 min a 95 °C. El ciclado de PCR fue de 40 ciclos
de desnaturalización a 95 °C por 15 s, hibridación a 60 °C por 60 s, y una extensión final a 72
°C por 10 min. Para determinar los títulos de excreción de virus AIV-H9N2 e IBV.
Resultados
Signos clínicos
Se observaron los signos clínicos
de pollos de engorde infectados
experimentalmente hasta 10 DPI.
Los signos clínicos variaron
desde signos leves como
conjuntivitis, estornudos, tos y
sacudidas de cabeza hasta
signos respiratorios graves
representados en estertores y
respiración bucal
150´000.000
Aves muertas por influenza y
bronquitis desde el 2003
Lesiones macroscopicas
Resultados produccion de anticuerpos
 Conclusiones

Los brotes de enfermedades con tasas de mortalidad variables y

diferentes manifestaciones clínicas se han incrementado en
parvadas de pollos comerciales, siendo las afecciones respiratorias
la queja más común. Las afecciones respiratorias representan un
gran problema para la industria avícola por su naturaleza. Los
estudios demostraron que la infección mixta, especialmente con los
virus IB y AIV-H9N2, era la condición más común en las aves de
corral.