AGROBACTERIUM

TUMEFACIENS
 INTRODUCCIÓN

• Chilton et al. (1977) demostraron la presencia de un pequeño fragmento de ADN de la bacteria

A. tumefaciens cuando aislaron tumores axénicos de la agalla de la corona en tabaco.
• Se demostró la capacidad de esta bacteria de transferir ADN entre reinos diferentes.
• Agrobacterium tumefaciens y sus especies relacionadas como A. rhizogenes y A. vitis son
patógenos reconocidos de plantas y tienen la capacidad de integrar establemente parte de su
material genético dentro del genoma de su hospedero (Tzfira y Citovsky, 2000).
• Desde el año 1970 hasta nuestros días se ha venido estudiando en detalle el mecanismo por
el cual A. tumefaciens induce la formación de tumores en plantas y el conocimiento adquirido
ha sido fundamental para su uso como herramienta en la ingeniería genética de plantas.
• Ha dado pie a formular modelos de señalización celular, transporte célula a célula, importe
nuclear de proteínas y ADN y mecanismos de integración genómica (Tzfira y Citovsky, 2000).
• Durante el proceso de infección A. tumefaciens introduce en la célula vegetal una parte de su
ADN (ADN de transferencia) el cual es integrado dentro del genoma de la planta.
• Los genes del ADN-T son expresados en su hospedero e inducen la formación de tumores y la
síntesis de unos derivados de aminoácidos llamados opinas los cuales son aprovechados por
la bacteria.
• El ADN-T esta localizado en el plásmido Ti (Plásmido inductor de tumor), que además contiene
los genes vir que son necesarios para la transferencia e incorporación del fragmento de ADN
en el genoma de la planta.
• La especie A. rhizogenes produce el crecimiento vigoroso de las raíces infectadas mediante un
mecanismo semejante al de A. tumefaciens.
• En este caso el plásmido que contiene el ADN-T es llamado Ri (plásmido inductor de raíces).
• Un hallazgo crucial que permitió el diseño de vectores para la transformación genética de
plantas mediante el uso de especies de Agrobacterium es el hecho que sólo las secuencias
borde del ADN-T son requeridas para que la transferencia se lleve a cabo (Garfinkel et al.,
1981; Zambryski et al., 1983).
• Los huéspedes principales pertenecían a la clase dicotiledóneas de la división angiospermas y
a las gimnospermas, mientras que solo algunas monocotiledóneas pertenecientes a los
órdenes Liliales y Arales fueron susceptibles.
• Las especies de interés económico más afectadas son los frutales de hueso y pepita, la vid,
cultivos ornamentales como el rosal, dalia o crisantemo y especies forestales como el chopo, el
aliso o el sauce (Moore y Cooksey 1981; Mougel, 2000).
• La enfermedad causa pérdidas de producción ya que provoca un descenso de vigor y solo en
casos extremos puede causar la muerte de la planta (Faivre-Amiot, 1984; Garret, 1987; Nesme
et al., 1990).
 PROCESO INFECCIÓN
• Los tumores presentaban alteraciones en el metabolismo de sus fitorreguladores y sintetizaban unas
sustancias llamadas.
• Estas bacterias, además de su cromosoma circular, poseen material genético extracromosomal de
forma circular con un tamaño de aproximadamente 200 kilobases, el cual, por ser responsable de los
efectos oncogénicos, ha sido llamado plásmido Ti (del inglés Tumor Inducing, inductor de tumores) o
Ri (Root Inducing, inductor de raíces) según pertenezca a A. tumefaciens o A. rhizogenes.
• Se demostraron la existencia de un proceso de transferencia de la bacteria hacia las células vegetales
de una secuencia de ADN llamada T-ADN (del inglés Transferred DNA, ADN transferido) presente en
el plásmido que poseen.
• La información genética transferida incluye genes para la síntesis de metabolitos para la bacteria y
genes para la síntesis de fitorreguladores.
• En otra parte del plásmido, fuera de la región del T-ADN, se halla la información para la producción de
proteínas de virulencia, los genes virA y virG, cuyos productos intervienen en la transducción de
señales en la bacteria.
Estructura química de algunas opinas, moléculas que funcionan
como fuente nutricional para Agrobacterium tumefaciens
Esquema general de la estructura
celular de Agrobacterium
tumefaciens ilustrando el cromosoma
bacteriano y el plásmido Ti.
• En el momento en que una planta sufre daño mecánico, las células del área dañada liberan
una serie de sustancias conocidas como compuestos fenólicos, los cuales son detectados
por A. tumefaciens, actuando como mensajeros que le indican el lugar para una posible
invasión y posterior infección.
• Se sabe que el compuesto fenólico acetosiringona es un poderoso atrayente de las
bacterias.
• La participación de proteínas (codificadas en el cromosoma bacteriano) durante el proceso
de reconocimiento, específicamente los productos de los loci Chv, esenciales para la
adhesión de la bacteria a la pared celular vegetal.
• Los compuestos fenólicos interactúan con una proteína en la membrana de la bacteria, VirA,
la cual se autofosforila (se une a una molécula de fosfato) y actúa sobre la proteína
citoplásmica VirG, fosforilándola.
• Ésta modula la expresión de los genes de virulencia de la bacteria, el operón Vir, ubicado en
el plásmido Ti
• Modelo del proceso de infección de las células vegetales por Agrobacterium tumefaciens.
• Etapa I, percepción de los compuestos fenólicos y adhesión de la bacteria a la pared celular
vegetal.
• Etapa II, modulación de la expresión de los genes de virulencia de la bacteria, (El operon vir, se
encuentra ubicado en el plásmido Ti).
• Etapa III, formación del complejo de transferencia de T-ADN.
• Etapa IV, formación de un canal de transporte en la membrana celular bacteriana.
• Etapa V, integración del T-ADN al genoma de la célula vegetal, proceso que supone una
participación activa de las proteínas vegetales (Tomado y modificado de Tzfira y Citovsky, 2002).
 AGROBACTERIUM TUMEFACIENS COMO
HERRAMIENTA BIOTECNOLOGICA

• Se a utilizado para el desarrollo de plantas transgenicas en plantas dicotiledóneas y

monocotiledóneas.
• Las plantas transformadas mediante Agrobacterium fueron diseñadas para que expresen una
característica particular.
• Resistencia a herbicidas, producción de un nuevo compuesto, mejoramiento de la
productividad.
Ejemplos prácticos del uso de A. tumefaciens como
herramienta biotecnológica
 NUEVOS HORIZONTES

• El poder de la transformación genética va más allá de una simple herramienta.

• Se vislumbra como una alternativa para la elucidación del papel de los diversos componentes
celulares en procesos hasta ahora poco comprendidos o estudiados.
• Se ha reportado la transformación genética del hongo fitopatógeno Mycosphaerella
graminicola, generando mutantes debido a la integración del gen ABC, que normalmente
codifica para una proteína membranal de transporte.
• Estos transformantes son de gran valor para estudiar y desentrañar los mecanismos
moleculares de patogenicidad del hongo.