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Agrobacterium

tumefaciens
Agrobacterium tumefaciens es el
agente causal de la enfermedad de
agalla de la corona en ms de 140
especies de dicotiledneas. Es una
forma de varilla, bacteria Gram
negativa del suelo. Los sntomas son
causados por la insercin de un
pequeo segmento de ADN, a partir de
un plsmido, en la clula vegetal, que
se incorpora en una ubicacin semi-aleatoria en el genoma de la planta.
Agrobacterium tumefaciens es una alphaproteobacterium de la familia
Rhizobiaceae, que incluye los simbiontes de fijacin de nitrgeno de
leguminosas. A diferencia de los simbiontes fijadores de nitrgeno,
Agrobacterium producir tumores son patgenas y no se benefician de la
planta. La gran variedad de plantas afectadas por Agrobacterium hace que
sea de gran inters para la industria de la agricultura.
Econmicamente, A. tumefaciens es un patgeno grave de nueces, vias,
frutales de hueso, rboles de nueces, remolacha, rbano picante y el
ruibarbo.
CONJUGACIN
Con el fin de ser virulentos, la bacteria debe contener un plsmido inductor
de tumores, de 200 kb, que contiene el ADN-T y todos los genes necesarios
para transferir a la clula de la planta. Muchas cepas de A. tumefaciens que
no contienen un pTi.
Dado que el plsmido Ti es esencial para causar la enfermedad, los eventos
pre-penetracin en la rizosfera se producen para promover la conjugacin
bacteriana - intercambio de plsmidos entre bacterias. En la presencia de
opinas, A. tumefaciens que produce una seal de conjugacin difusible
llamado 30C8HSL o el autoinductor Agrobacterium. Esto activa el factor de
transcripcin TraR, regulando positivamente la transcripcin de genes
necesarios para la conjugacin.
MTODO DE INFECCIN
El Agrobacterium tumefaciens infecta la planta a travs de su plsmido Ti. El
plsmido Ti se integra un segmento de su ADN, conocido como T-ADN, en el
ADN cromosmico de sus clulas de la planta de acogida.
A. tumefaciens tienen flagelos que les permiten nadar a travs del suelo
hacia fotoasimilados que se acumulan en la rizosfera alrededor de las
races. Algunas cepas pueden mover hacia quimiotcticamente exudados
qumicos de las plantas, tales como acetosiringona y azcares. El primero es
reconocida por la protena VIRA, una protena transmembrana codificada en

el gen vira en el plsmido Ti. Los azcares son reconocidos por la protena
CHVE, una protena del gen cromosmico codificado situado en el espacio
periplsmico.
Al menos 25 genes vir en el plsmido Ti son necesarios para la induccin del
tumor. Adems de su funcin de percepcin, vira y CHVE inducen otros
genes vir. La protena de Vira tiene actividad autokinase: se fosforila en s en
un residuo de histidina. A continuacin, la protena de Vira fosforila la
protena virG en su residuo aspartato. La protena virG es una protena
citoplasmtica producida a partir del plsmido Ti gen virG. Se trata de un
factor de transcripcin, la induccin de la transcripcin de los operones vir.
La protena CHVE regula el segundo mecanismo de activacin de los genes
vir. Aumenta la sensibilidad Vira protenas en compuestos fenlicos.
El apego es un proceso de dos pasos. Despus de una fijacin dbil y
reversible inicial, las bacterias sintetizan fibras de celulosa que les anclan a
la clula vegetal heridos a los que se sintieron atrados. Cuatro genes
principales estn involucrados en este proceso: chvA, chvB, LCSP y att.
Parece que los productos de los primeros tres genes estn involucrados en
la sntesis real de las fibrillas de celulosa. Estas fibrillas tambin fijan las
bacterias entre s, lo que ayuda a formar una microcolonia.
VIRC, el gen de virulencia ms importante es un paso necesario en la
recombinacin de recolonizacin ilegtimo. Se selecciona la seccin de la
ADN en la planta husped que se sustituye y se corta en esta cadena de
ADN.
Despus de la produccin de fibrillas de celulosa una protena dependiente
de calcio de membrana externa llama se produce rhicadhesin, que tambin
ayuda en la bacteria se pegue a la pared celular. Los homlogos de esta
protena pueden ser encontrados en otras especies Rhizobia.
Compuestos de plantas posibles que inician Agrobacterium para infectar
clulas de la planta:

Acetosiringona: Compuesto fenlico


alfa-Hydroxyacetosyringone
Catecol
El cido ferlico
El cido glico
cido p-hidroxibenzoico
cido protocatquico
cido piroglico
cido Resorcylic
cido sinapnico
cido sirngico
Vanilina

BIOLOGA DE AGROBACTERIUM TUMEFACIENS


Esta bacteria, presente en el suelo, es patgena de muchas plantas a las
que produce un tumor conocido como "agalla de cuello". Penetra en los
tejidos vegetales causando una proliferacin celular.

Durante el contacto con las clulas vegetales la bacteria transfiere a las


clulas vegetales un plsmido llamado Ti (inductor de tumores). Este
plsmido se integra en el ADN del cromosoma de la clula vegetal. Este
plsmido transferido o T-ADN contiene los genes oncognicos (onc) cuya
expresin provoca una mayor produccin de hormonas de crecimiento,
stas son las que inducen las divisiones celulares que dan origen a la
formacin del tumor o agalla.
Este fenmeno natural es empleado para utilizar a la bacteria
Agrobacterium tumefaciens como vector de los genes que se desean
introducir en una clula vegetal, con lo que se transforma dicha clula, la
cual puede regenerar, por micropropagacin, una planta entera que ser
transgnica.

AGROBACTERIUM:
BIOTECNLOGOS

UN

PRECURSOR

NATURAL

DE

LOS

La bacteria Agrobacterium tumefaciens contiene como ya vimos en un


punto anterior, un plsmido Ti, que contiene los genes responsables de su
virulencia, llamados genes onc.
Cuando la bacteria infecta a la planta, provocando en ella un tumor, una
parte del plsmido Ti, llamada T-ADN, que contiene los genes onc, es
transferida al ncleo de la clula vegetal y se inserta en un cromosoma de
la planta.
De esta manera, la bacteria modifica la informacin gentica de la planta,
aadindole los genes onc. Agrobacterium se comporta , de esta forma,
como un ingeniero gentico natural.
Si en el plsmido Ti se eliminan artificialmente los genes onc y se sustituyen
por otros genes que interese clonar, se habr obtenido un sistema muy
eficaz para introducir ADN interesante a la planta, al mismo tiempo que se
habr evitado la aparicin de la enfermedad.
PLANTAS QUE SE ILUMINAN

En la transfeccin vegetal con Agrobacterium se ha ensayado un marcador


inusual: el gen de la enzima luciferasa, de las lucirnagas. El sustrato de
esta enzima es una proteina llamada luciferina, que con ATP y oxgeno
desprende luz.
Plsmidos Ti con este marcador, se transfirieron a clulas de tabaco, con las
que se formaron nuevas plantas. Las nuevas plantas obtenidas se regaron
en la oscuridad con agua y luciferina disuelta. El resultado fue sorprendente:
las plantas se iluminaron como si fuesen unas bombillas de poca potencia o
un dibujo de un anuncio fluorescente.

EXPRESIN GUS EN EXPLANTES DE Solanum phureja (Juz. et.


Buk) Var. Criolla Colombia, TRANSFORMADOS CON
Agrobacterium tumefaciens
El siguiente articulo cientfico trata de determinar si la variedad de papa citada en el
titulo (Solanum phureja) o papa criolla nativa de Colombia posee susceptibilidad a la
infeccin por el A. tumefaciens, para esto realizan una incubacin se puede decir, del
mismo en la papa y observan el comportamiento realizando una serie de anlisis y
clculos estadsticos para determinar la significancia.
Se han creado muchos transgnicos de la papa o patata, algunos con resistencia a
hongos, bateras y determinadas plagas. Todo esto se debe a la ingeniera gentica la
cual ofrece la posibilidad de introducir genes especficos a plantas sin alteras las
caractersticas agronmicas propias de las variedades empleadas. Entonces en este
experimento tratan de evaluar el potencial regenerativo de la variedad expuesta, con
respecto al A. tumefaciens.

Explantes
internodales
fueron infectados con la
cepa del A. tumefaciens
LBA4404 que contiene el
plsmido pCAMBIA2301.
La imagen nos muestra al
plsmido, este vector
contiene al gen reportero
gusA-intron y el gen ntpll
q codifica la protena
neomicina
fosfotransferasa.
Esta
ltima protena confiere
resistencia al antibitico
kanamicina.

MTODO
El mtodo utilizado fue de una propagacin invitro de plntulas de la papa criolla
(Solanum phureja), fueron propagados cada cuatro semanas mediante cultivo de
segmentos terminales. Tambien se evaluo la curva de sensibilidad a la kanamicina por
siete semanas y al final se tomo el peso freco y seco de los Explantes de cada
tratamiento. En los ensayos de transformacin gentica se usaron Explantes de 0.5 a
1cm provenientes de plntulas de seis semanas de edad a las cuales se les introdujo
una cepa del A. tumefaciens especficamente la LBA4404 con el plasmido
pCAMBIA2301. La bacteria se cultivo previamente en medio de Luria-Bertani con
50mg/L de kanamicina y estreptomicina durante 17 horas a 28C y 250rpm.

RESULTADOS
Con respecto a la curva de sensibilidad a la kanamicina no se encontr diferencia
significativa, debido a que no presento un menor porcentaje de oxidacin y clorosis.
Segn lo ledo en todo el proceso de investigacin del articulo, se determin al final
que la variedad de papa criolla (Solanum phureja) es totalmente susceptible a la
infeccin por el A. tumefaciens. Y se puede concluir que la bacteria infect clulas de
Explantes internodales derivados de S. Phureja y esta es la variedad mas adecuada
para realizar estos ensaos de transformacin usando genes de inters agronmico,
tambin se dio como sugerencia q se usen Explantes en buen estado fisiolgico y
controlando las condiciones ambientales de temperatura, humedad y luz durante las
etapas de regeneracin. Ya que se determin que esta variedad es bastante sensible
a dichos cambios, variaciones mnimas de los mismos y laos Explantes sufran estrs
afectando las respuestas morfogenicas. Por otra parte la papa normal (Solanum
tuberosum) siempre ha presentado mayor resistencia a estos cambios de condiciones
invitro.