Medios de cultivo

Ing. Ms. Nelly Pilar Caycho Medrano

 INTRODUCCIÓN

• Entre los factores más importantes a tener en cuenta para

lograr la respuesta morfológica deseada en un cultivo de
tejido in vitro, es la composición del medio de cultivo.
• El medio de cultivo está conformado por macro y
micronutrientes esenciales para la supervivencia de la
planta, nutrientes (hidratos de carbono, vitaminas),
agentes reguladores del crecimiento y hormonas
vegetales, que ayudarán a obtener un callo, una planta
completa, o un órgano vegetal en particular, a partir del
explante elegido (en condiciones de asepsia) y algún
agente gelificante inerte (agar, gelrite, etc.).
 Definición de medios de cultivo
• Es una mezcla de sustancias de elementos
nutritivos en el que las porciones de plantas
(yemas, nudos, meristemos), células y órganos
donde pueden crecer y/o desarrollarse.
• Es un factor importante en el éxito del cultivo
de tejidos.
 Composición de lo medios de cultivo
• Sustancias minerales:
Macroelementos: Nitrógeno, fosforo, potasio, calcio, magnesio y
azufre.
Microelementos: Fierro (hierro), sodio, cloro, boro, iodo, molibdeno,
cobalto, zinc, cobre, manganeso, níquel.
• Reguladores de crecimiento: Auxinas, giberelinas, citoquininas.
• Fuente de carbono: Azucares.
• Vitaminas.
• Agente gelificante: Agar ( medio solido).
• Agua.
• Suplementos orgánicos: Leche de coco, extractos de levadura.
• Reguladores del pH de los medios de cultivo.
 Sales minerales
Macro elementos: Son los elementos que la planta necesita en mayor
cantidad.

Nitrógeno: Es componente de los aminoácidos, vitaminas, proteínas y ácidos nucleicos.

Fosforo: Es parte de molécula de la energía ATP (Adenosin trifosfato), interviene en

las reacciones de la fotosíntesis y la respiración.

Potasio: Es responsable de dar resistencia a las plantas a las condiciones adversas.

Magnesio (Mg).- Es componente de la molécula de clorofila.
 Sales minerales
Calcio.- Es constituyente de la pared celular.
Azufre.- Forma parte de los aminoácidos
esenciales.
Micronutrientes.- Son utilizadas en cantidades
pequeñas, como catalizadores de reacciones
químicas en las plantas.
Hierro (Fe) interviene en el proceso de síntesis de
clorofila. Participa en la conversión de la energía
lumínica en energía química.
 Sales minerales
• Boro (B).- Interviene en el movimiento de los
azúcares en las plantas.
Exceso de boro causa la muerte en las plantas.
• Molibdeno (Mo).- Fijación del nitrógeno atmosférico.
• Manganeso.- Elemento esencial de la membrana del
cloroplasto.
• Cobalto (Co) es un elemento del complejo vitamínico
del complejo B12 , es esencial para la fijación del
nitrógeno.
 Sales minerales
• Zinc (Zn).- Elemento esencial de enzimas
involucradas con la formación de clorofila,
producción de auxinas en el AIA.
• Cobre (Cu).- Elemento esencial en procesos
bioquímicos de las plantas.
• Iodo (I).- Función desconocida.
REGULADORES DE CRECIMIENTO - AUXINAS

• Promueven la elongación celular

• La formación de callos y raíces adventicias.
• Inhiben la formación de brotes axilares adventicios y, en
ocasiones, inhiben la embriogénesis.
• Crecimiento radicular.
• Dominancia apical.
• Abscisión.
• Citocininas: promueven la división celular, regulan el
• crecimiento y el desarrollo de los tejidos vegetales.
• Otras: giberelinas, ácido absícico, etileno
REGULADORES DE CRECIMIENTO – AUXINAS
MAS UTILIZADAS
• Acido Naftalen - Acético (ANA)
• Acido Indol - Acético (AIA)
• Acido Indol Butírico (AIB)
• Acido 2-4 Dicloro fenoxi acético.
Auxina- Estimula el enraizamiento

Enraizamiento
División celular
Elongación celular
AIB, ANA, 2,4 D
Micropropagación
 REGULADORES DE CRECIMIENTO –
CITOQUININAS

• Retardo de la senescencia.
• División celular.
• Proliferación de tallos.
• Diferenciación de tallos a partir de callos y
órganos.
• Inhibe la dominancia apical.
 REGULADORES DE CRECIMIENTO –
CITOQUININAS MAS UTILIZADAS

• Benzilamino purina (BAP)

• Isopentil Adenina (2ip)
• Furfuril amino purina (Kinetina).
• Leche de coco.
 GIBERELINAS

• Influyen en el alargamiento celular.

• Ruptura de dormancia.
• Induce la partenocarpia.
La giberelina más utilizada es el Acido
Giberélico 3 (AG3).
Otros reguladores son el Acido Abscisico.
Interacción Auxina - Citoquinina
Auxina Citoquinina

Formación de raíces en esquejes

Embriogénesis

Formación de raíces adventicias en callos

Iniciación de callos en dicotiledóneas

Formación de tallos adventicios.

Proliferación de ramas

Citoquinina Auxina
 ¿Qué formulación usar?

• Basarse en experiencia previa (especie,

género, familia)
• Sin experiencia previa:
• Comparar formulaciones conocidas
(diluciones)
 Formulaciones de Medios de Cultivo
• Los medios de cultivo pueden sufrir diferentes
modificaciones.
• Sales minerales: 1X, 1/4X , 2X
• Citoquininas: 2ip 0 -30 mg/l.
Kinetina: 0 – 10 mg/l.
BAP: 0 – 10 mg/l.
• Auxinas: ANA, IBA ,AIA 0 - 10 mg/l.
• Vitaminas con ´o sin vitaminas
Interacciones entre auxinas y citoquininas.

Citoquinina (mg/l)
0 0.5 1.0 3.0 5.0 10
A 0 0/0 0.5/0 1.0/0 3.0/0 5.0/0 10/0
U 0.5 0/0.5 0.5/0.5 1.0/0.5 3.0/0.5 5.0/0.5 10/0.5
X (mg/l) 1.0 0/1.0 0.5/1.0 1.0/1.0 3.0/1.0 5.0/1.0 10/1.0
I 3.0 0/3.0 0.5/3.0 1.0/3.0 3.0/3.0 5.0/3.0 10/3.0
N 5.0 0/5.0 0.5/5.0 1.0/5.0 3.0/5.0 5.0/5.0 10/0.5
A 10 0/10 0.5/10 1.0/10 3.0/10 5.0/10 10/10
Interacciones Auxina/ Citoquinina
 Formulación de los medios de cultivo

• Las exigencias minerales varían con la especie,

la naturaleza del tejido y su estado fisiológico,
pero, además, también varían con el método
de cultivo y el tipo de y el tipo de
organogénesis estudiado. Por ejemplo, los
meristemos y, en forma general, los tejidos con
actividad metabólica elevada, pueden
presentar importantes necesidades en potasio.
 Medio de cultivo de Murashige y Skoog
• En 1962, Murashige y Skoog propusieron un medio para la investigación
del crecimiento óptimo de callos de la planta del tabaco (Nicotiana
tabacum). Este medio es netamente superior a los medios
anteriormente usados para iniciar la organogénesis y, particularmente,
para la formación de yemas.
• A partir de estos resultados, el medio MS se ha empleado de una manera
muy general para todos los tipos de cultivo in vitro. Además, puede
afirmarse que ha sido la utilización del medio MS junto con el empleo de
fitohormonas apropiadas (citocininas y auxinas), lo que ha permitido el
éxito de los trabajos sobre organogénesis en cultivo in vitro. El medio
MS está caracterizado, principalmente, por un contenido elevado de
nitrógeno del cual 1/3 del total está aportado en forma reducida (NH4+)
y por una concentración igualmente elevada en potasio.
Objetivo de los medios de cultivo
Medios de cultivo de tejidos
 Fuente de Carbono
• Los tejidos y células cultivadas in vitro son
ampliamente heterótrofos con respecto al carbono
debido a la ausencia o insuficiente asimilación por
clorofila. Por lo que resulta indispensable añadir
azúcares a los medios de cultivo, siendo los dos más
utilizados la sacarosa y la glucosa. La concentración
óptima del azúcar en los medios de cultivo varía
entre 20–80 g/L, en dependencia del tipo de cultivo,
material vegetal, etc. Los azúcares presentan una
acción metabólica y energética (Hall, 2000)
 Fuente de carbono

• Generalmente, la mayoría de los cultivos de

células vegetales no son autótrofos y por lo
tanto dependen completamente de una
fuente externa de carbono.
• En muchos casos, se prefiere sacarosa, y
ocasionalmente glucosa (Ej., cultivos de
algodón) o maltosa (Ej., cultivo de anteras).
 FUENTES DE CARBONO
• La sacarosa (2% a 5%) es el azúcar que más se
utiliza, y se puede remplazar por glucosa en
menor medida por fructuosa; la maltosa y la
galactosa son menos efectivas.
• La incorporación de mioinositol al medio de
cultivo ( 100 mg/litro) generalmente da como
resultado un mejor crecimiento de los callos y
suspensiones celulares.
VITAMINAS DEL COMPLEJO B
 Otras vitaminas
• Vitaminas B1, B2, B6, vitamina H, vitamina E,
ácido fólico, ácido nicotínico, entre otras
 AGAR
• Es el agente solidificante en el medio de
cultivo, es una mezcla de polisacaridos
derivados de algas rojas.
• El agar permite que el explante se coloque
sobre la superficie del medio de cultivo, la
ventaja con respecto al medio líquido en este
caso el explante puede sumergirse y morir por
falta de oxigeno es más fácil de contaminarse.
 COMPOSICIÓN DEL AGAR
CONSTITUYENTES BACTO AGAR AGAR NOBLE AGAR PURIFICADO
Ceniza 4.5% 2.0% 1.75%
Calcio 0.13% 0.25% 0.27%
Bario 0.01% 0.01% 0.01%
Silica 0.19% 0.26% 0.09%
Cloro 0.43% 0.18% 0.13%
Sulfato 2.54% 1.90% 1.32%
Nitrógeno 0.17% 0.10% 0.14%
Hierro 11 mg./l 11 mg./l 11 mg/l
Magnesio 285 mg/l 260 mg/l 695mg/l
Cobre 5 mg/l 750 mg/l 20 mg/l
 Sustituto del Agar
• El solidificante GELRITE es derivado de la
bacteria Pseudomonas sp., es de apariencia
clara y no se ha observado efecto de
enfermedades en los cultivos.
• Se puede usar en mezcla con el agar.
Gelrite/Agar : 3/1
 Suplementos orgánicos complejos

• Composición variable, no definida

• Aportan aminoácidos, vitaminas y hormonas
• Algunos ejemplos:
• Jugos o pulpas de frutas
• Extracto de papa
• Agua de coco
 Agua
• Es un componente importante dentro del
medio de cultivo.
• El agua que se utiliza es destilada ó
desionizada.
• Es el agua químicamente pura ( sin residuos
orgánicos y minerales)
Equipo de destilación de agua.
Equipo de desionización del agua
 Carbón activado
• Se utiliza contra los agentes inhibidores del
enraizamiento.
• Oscurecimiento del medio de cultivo para
promover el enraizamiento.
Carbón activado
 pH

• Rango apto para crecimiento: 5,0 – 6,5

• Afecta la absorción de nutrientes (nitrato, amonio)
• pH demasiado bajo:
• AIA se hacen menos estables
• Agar pierde rigidez
• Algunas sales (fosfato o hierro) pueden precipitar
• Vit. B1 y ácido pantoténico se hacen menos estables
• Se retarda absorción de amonio
• Con el autoclavado desciende 0,3 – 0,5 unidades
 Formulación y preparación de medios de
cultivo.
• UNIDADES DE MEDICIÓN:
Los envases que se utilizan en la preparación
de medios están calibrados en el sistema
métrico.
UNIDAD SIMBOLO VALOR RELATIVO
Litro l 1 litro
Mililitro ml 0.001 litros (10-3)
Microlitro µl 0.000001 litros (10-6)
 Unidad de volumen

1 litro = 1 kilo
de agua pura a la temperatura de 4 oC y una
presión equivalente a 760 mm de Hg.
1 l = 1000ml
1 ml = 1g
 Gramos por unidad de volumen

Ej.
8g/l de SO4Mg se prepara disolviendo 8g de
SO4Mg en un litro de agua. 8 o/oo
 Partes por millón (ppm)
• Son soluciones sumamente diluidas, se
preparan soluciones un las que sólo haya
miligramos de soluto por cada litro de solución.
• Cada miligramo de soluto por litro de solución
corresponde a una parte por millón ( 1 ppm).
Ej. 50 ppm (AIA) = 50 mg de AIA en un litro de
solvente (agua).
Relaciones: 1ppm = 1 mg/l a 1mg/Kg.
 Composición porcentual
• Porcentaje en peso: Se expresa la
concentración en función de los gramos de
soluto que hay en 100 g del peso total a
prepararse.
Ej. Una solución del 0.6% de agar.
0.6 g de agar en cada 100 g. de preparación.
 Composición porcentual

• Porcentaje en volumen: Expresa la

concentración en función de los gramos de
soluto que hay en 100 ml de solvente.
En este caso en una solución de agar 0.6%
tendrá 0.6 g de agar por cada 100 ml del
solvente.
 Peso Molecular
• Es el peso de una molécula expresado en
gramos.
• 1 mol H3BO3 H: 3 x 1 = 3.00
B: 1 x 10.83 = 10.83
O: 3 x 16.00 = 48.00
61.83 g.
1 mol = 1000 milimoles.
1 milimol = 1000 micromoles.
 MOLARIDAD (M)
• Se refiere al número de moles en un litro de
solución.
Ej. 1 mol H3BO3 1mol = 61.83 g/l 1 M.
UNIDADES SIMBOLO EQUIVALENCIAS
Molar M 1 M.
Milimolar mM 0.001M (10-3)
Micromolar µM 0.000001 Molar(10-6)
Picomolar pM 0.000000000001(10-12)
 MOLARIDAD (M)
• Si 100 uM de H3BO3 se requiere para preparar
un litro de MS. ¿ Cuantos mg H3BO3 se
necesita?
100µM H3BO3 = 10-6 x102 = 10-4 M
1 Molar 61.83 g/l
10-4Molar X

x = 61.83 g/l X 10-4

 MOLARIDAD (M)
• 61.83 g/l X 10-4 x 1000mg/g
61.83 g/l X 10-4 x 103= 6.183 mg/l H3BO3.
Molaridad
 NORMALIDAD (N)
Es la medida de concentración de una solución,
es la relación entre los equivalentes de una
sustancia y los litros de una solución.
N = equivalentes de una sustancia
litros de solución
El equivalente se refieren a las cargas por mol de
una sustancia:
Ácidos = Cantidad de cargas de los hidronio H+
 Normalidad (N)
Hidróxidos = Cantidad de cargas por grupo OH-.

Sales =Cantidad de cargas positivas de los

elementos metálicos que sustituyen los
hidrógenos de los ácidos.

Peso equivalente gramo = Masa atómica/ equivlente mol

PREPARACIÓN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO

• Sobres de sales en polvo de

Murashige y Skoog.
• Soluciones Stock.
PREPARACIÓN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO

• Sobres en polvo.
• Los polvos son formulaciones de Murashige y
Skoog, es el medio universal utilizados en los
cultivos de tejidos.
• La cantidad de polvo es de 4.6 g de sales para
un litro de agua (destilada).
 Solución Stock
• Son soluciones concentradas de nutrientes,
son sales minerales que se emplean para un
medio en particular, algunos de estos se
emplean en bajas concentraciones de acuerdo
al mejor manejo en laboratorio y hace mas
rápida la futura preparación de medios y
posteriormente la siembra de tejidos
vegetales.
 ¿ Porque se utilizan soluciones stock?
1. Debido al elevado número de compuestos que
incluye y a que algunos de ellos se emplean a muy
baja concentración
2. Resulta más práctico preparar soluciones madre o
"stocks" concentrados.
3. Minimiza los errores, ya que la composición de una
solución se debe medir en términos de volumen y
masa, por lo tanto es indispensable conocer la
cantidad de soluto disuelto por unidad de volumen
o masa de disolvente, es decir su concentración.
Reactivos Murashige y Skoog
 Soluciones Stock
• Solución A ( x10) pesar en mg. en un litro de agua
destilada.
NH4NO3 16500
KNO3 19000
CaCl2. 2H2O 4400
KH2PO4 1700
H3BO3 62
MnSO4.4H2O 223
MnSO4.H2O 109
 Soluciones Stock
ZnSO4. H2O 61.4
KI 8.2
NaMoO4.2H2O 2.5
CuSO4.5H2O 0.25
CoCl2.6H2O 0.25
Solución B (x10) pesar en mg. 500 ml de H2O
destilada.
MgSO4. 7H2O 3700
 Soluciones Stock
• Solución C (x10)Pesar en mg. para 500 ml.
NaEDTA 372.5
FeSO4.7H2O 278.5
• Solución D (x10) pesar en mg. para 500 ml.
Mio-inositol 1000
• Solución E (x25) pesar en mg. para 100 ml.
Thiamina – HCl 10
Glycina 50
Acido nicotínico 12.5
Piridoxina – HCl 12.5
 Operaciones directas – Preparación.
1. Tomar un Beaker de 1.5 litros
Añadir:
2. 400 ml de agua destilada.
3. 100 ml de la solución A.
4. 50 ml de cada solución B,C y D.
5. 4 ml de solución E.
6. Solución Stock de reguladores de crecimiento de
acuerdo a la clase de medio.
7. Agregar el azúcar y completar a 1 litro
 Operaciones directas – Preparación.

8. Ajustar el pH a 5.6
9. Añadir y agar ( medio solido).
10. Dispensar en los recipientes ( tubos,
frascos,etc).
11. Autoclavar a 121 oC a 15 lb de presión por
15 minutos.
 Soluciones Stock de Reguladores de
crecimiento y vitaminas
Reguladores de Mg/500ml H2O [ ]ppm Disolver en
crecimiento Destidada

AG3 25 50 Alcohol 96% ó KOH 1N

BAP 25 50 HCl Ó KOH 1 N
ANA 25 50 Alcohol 96% ó KOH 1N
Pantotenato de Calcio 50 100 Agua destilda
AIA 25 50 KOH 1N
AIB 50 100 KOH 1N

2 ip 25 50 HCl 1N
2-4 D 25 50 KOH 1N
 Soluciones de Reguladores –
Preparación.
• BAP (50 ppm) 25 mg de BAP en 1 ó 2 ml de
KOH 1N si no se disuelve calentar en baño
maría y agregar agua destilada hasta 500 ml.
• AG3 (50 ppm) y ANA (25ppm) disolver en 1 ó
2 ml de alcohol 96% ó en KOH 1N si no
disuelve calentar en baño maría.
• Pantetonato de Calcio (100ppm) disolver 500
mg. Con 1 ó 2 ml de agua destilada y luego
completar hasta 500 ml.
 Derivados de los medios MS.
• MEDIO M.S.
Medio liquido con agitación
Líquido ( Estacionamiento)
Sólido ( Magenta)
Sólido (propagación)
8 ml AG3 50 ppm.
10 ml BAP 50 ppm
0.2 ml ANA 50 ppm
20 ml Pantetonato de Calcio(100 ppm)
30 g Sucrosa.
20 ml Pantetonato de Calcio(100 ppm)
20 g Sucrosa.
20 ml Pantetonato de Calcio(100 ppm)
20 g Sucrosa.
6 g Agar.
5 ml AG3 50 ppm.
20 ml Pantetonato de Calcio(100 ppm)
20 g Sucrosa.
6 g Agar.
 Derivados de los medios MS.
Sólido ( Meristema) 5 ml AG3 50 ppm.
20 ml Pantetonato de Calcio(100 ppm)
30 g Sucrosa.
6 g Agar.

Sólido (Conservación) 40 g de Manitol.

30 g Sucrosa.
8 g Agar

Sólido (LS1) 100 ml ANA 50 ppm.

40mg de Adenina.
30 g Sucrosa.
8 g Agar

Sólido MS 13 2 ml ANA 50 ppm. 50 ml de Agua de Coco.

(Regeneración) 16 ml de Zeatina. 8 g. de agar.
Manipulación de Soluciones Stock
• Los frascos a utilizar deben de ser nuevos.
• Cada solución stock se guarda en frasco
diferentes.
• Los frascos si se vuelven a utilizar se deben
lavar bien y luego enjuagarse con agua
destilada.
• Los frascos nuevos también se deben de
enjuagar con agua destilada.
 Manipulación de Soluciones Stock
• Utilizar pipetas diferentes para cada solución y
deben de marcarse.
• En caso de no tener pipetas suficientes antes de
utilizarlas en otra solución se lavan y se
enjuagan con agua destilada.
• Las soluciones deben etiquetarse: deben indicar
el tipo de solución, concentración, fecha de
preparación e iniciales de la persona que
prepara la solución.
 Manipulación de Soluciones Stock
• Las soluciones stock se guardan en refrigeración en el
caso de sales frascos oscuros y a 4 oC y la solución E en
frascos plástico y guardar en congelación ( - 15 oC)
• Antes de utilizar la soluciones stock se sacan de la
refrigeradora y se espera a que alcance la temperatura
ambiente.
• Las soluciones deben de almacenarse por espacio de
un mes como máximo.
• Durante este tiempo se debe revisar si existen colonias
de hongos, bacterias que destruyen los componentes.
Transformación a concentraciones
Transformación de concentraciones.
 Transformación de concentraciones
• La cantidad utilizada en g/L de este componente es 0.170, esta se
multiplica por la concentración que es 100x da como resultado 17 g / L.
Después se realizan cálculos mediante una regla de tres para determinar
cuantos gramos utilizaran para un volumen de 200 mL, se lleva acabo el
siguiente procedimiento:

17 g                              1000 mL
 X                                   200 mL
  
    (200 mL)(17 g)                3400 g/mL
                           =                                           =  3.4 g
   1000 mL                      1000 mL
 Transformación de concentraciones
Ácido Bórico.   H3BO3

6.2 g                              1000 mL

  X                                    200 mL

    (200 mL)(6.2 g)                1200 g/mL

                              =                                    =  1.24 g
   1000 mL                        1000 mL
 Transformación de concentraciones
• Molibdato De Sodio Dihidratado.  Na2MoO4.2H2O

0.025 g                              1000 mL

     X                                     200 mL

    (200 mL)(0.025 g)                5 g/mL

                                =                               =   0.005 g
   1000 mL                         1000 mL

Después de que se tienen los cálculos, en el laboratorio, estos se pesan en la balanza

analítica , se disuelven de uno en uno en agua destilada en un matraz de Erlenmeyer a
un volumen de 100 mL, después se afora en una probeta graduada a un volumen de
200 mL, se vierte en una botella color ámbar y se guarda en refrigeración.
 Posibles síntomas, posibles causas y
soluciones.
SINTOMAS POSIBLES CAUSAS SOLUCIONES POSIBLES
1.- Muerte del explante. • Desinfectante fuerte. • Desinfectante más debil.
• Medio muy concentrado. • Usar ½ ó ¼ parte de la
• Fase de crecimiento concentración.
equivocada. • Obtenga explantes en
diferentes fases de
crecimiento.

2. Cultivo oscurece y • Contaminación. • Desechar con cuidado,

muere revisar la esterilización.
•Exudado. • Transferir antes que
muera.
• Use antioxidantes en el
medio.
•Problemas de agar. • Chequear la pureza del
agar.
• Problemas de agua. •Chequear la pureza del
agua.
 Posibles síntomas, posibles causas y
soluciones
SÍNTOMAS POSIBLES CUAUSAS SOLUCIONES POSIBLES
3.- Explante vive pero • Dormancia. •Someter a frio por unos
no crece. meses.
•Medio demasiado • Bajar las concentraciones
concentrado. de sales y hormonas.
• Temperaturas extremas • Cambiar la temperatura.
( demasiado calor ó frio).
•Formula incorrecta. •Probar nuevas
formulaciones.
4.- Crece muy lento. • Demasiado frio ó calor. • Cambiar la temperatura.
• Medio incorrecto. • Probar diferentes medios.
5.- Tallos demasiados • Poca citoquininas en el • Incrementar citoquininas.
largos( ahilados y pobre medio de cultivo. • Incrementar aireación.
multiplicación) •Incrementar la relación
Citoquininas/ auxinas,
 Posibles síntomas, posibles causas y
soluciones
SíINTOMAS POSIBLES CAUSAS SOLUCIONES POSIBLES
6.- Tallos demasiados • Hormonas muy • Disminuir ó omitir
cortos. concentradas. hormonas.
7.- No hay multiplicación. •Poca citoquininas. • Incrementar citoquininas
• Necesita frio. • Almacenar en frio por 4 a
8 semanas.
•Demasiado frio. • Incrementar la
temperatura.
• Requiere de período de • Tratar con frio de 3 – 8
dormancia semanas.

8.- Tallos gruesos, hojas • Mucha citoquinina. • Disminuir citoquininas.

pálidas y pequeñas.
9.- Callos indeseables. • Hormona incorrecta. • Incrementar la relación
auxina/ citoquina.
• Omitir citoquininas.
 Posibles síntomas, posibles causas y
soluciones
SINTOMAS
10. Hojas cloróticas.
11.- Hojas suculentas,
aguadas, vitrificación.
12.- Enraizamiento
prematuro
POSIBLES CAUSAS SOLUCIONES POSIBLES.
• Contaminación. • Chequear
contaminantes.
• Demasiado calor. • Disminuir la temperatura.
• Elevado potencial • Disminuir la temperatura.
osmótico. • Mayor aireación al
cultivo.
•Incrementar la
Concentración de agar.
• Demasiado citoquininas. • Disminuir hormonas.
• Cultivo viejo. • Transferir
frecuentemente.
• Balance hormonal •Incrementar citoquininas y
equivocado. disminuir auxinas.
 Posibles síntomas, posibles causas y
soluciones.
SÍNTOMAS POSIBLES CAUSAS SOLUCIONES POSIBLES.
13.- Tallos rojizos. • Stress • Cambiar de iluminación
y/o temperatura.
• Demasiado azúcar. •Cambiar el contenido de
azúcar.
•Poco NO2.
• Incrementar nitratos.
Síntomas de vitrificación
Planta clorótica
Tallos demasiados cortos
Tallos gruesos, hojas pálidas y pequeñas
Callos indeseables.