La serie de muertes provocadas por un brote epidémico de una enfermedad respiratoria

misteriosa en Filadelfia se incrementó de 2 a 25, por lo que los investigadores médicos

aceleraron los esfuerzos para buscar una sustancia química o un veneno como posible causa
de la enfermedad.
—The New York Times, 7 de agosto de 1976
 Neumonia atípica

•El Dr. Joseph McDade y su equipo del Center

of Diseases Control (CDC) anunció, el día 18
de Enero de 1977, el descubrimiento de una
nueva bacteria.
•El hallazgo resultó como fruto de las
investigaciones iniciadas, casi siete meses
antes, tras la misteriosa e inexplicable
infección y muerte de varios asistentes a la
58ª Convención de la Legión Americana del
Estado de Pennsylvania alojados en el Hotel
Bellevue Stratford (Filadelfia) celebrada entre
los días 21 y 24 de julio de 1976.
Legionella pneumophilla
 Taxonomía.
• Comprende al menos 29 especies, tres •Dominio: Bacteria
subespecies, 21 serogrupos, 47 Filo: Proteobacteria
serovariedades, y han sido propuestas 5 Clase: Gammaproteobacteria
subespecies más.
Orden: Legionellales
Familia: Legionellaceae
Género: Legionella
Especie: L. pneumophila
Brenner DJ, Steigerwalt AG, McDade
JE 1979
 Características de la
bacteria.
• Son bacilos delgados Gram negativos
• De requerimientos nutricionales
especiales
• Aerobios obligados
• No forman esporas.
• Son intracelulares facultativos
• No se tiñen con safranina
 Presentan pleomorfismo dependiendo
el lugar donde crecen:
 En tejidos infectados y en secreciones
son bacilos pequeños a cocobacilos
uniformes.
 En cultivo varían de bacilos pequeños
uniformes a bacilos filamentosos
(pleomórfica)
 Las bacterias del género Legionella
son termofílicas, crecen en el agua a
temperaturas entre 20 y 50 ºC y
poseen un desarrollo óptimo entre 35
y 38 ºC.
 En su ciclo de vida presenta dos
estadios.
 La mayoría de las especies son móviles por
flagelos polares o subpolares.
 No oxidan ni fermentan los
carbohidratos, pero, utilizan los
aminoácidos como fuente de energía.
 Todas las especies tienen un
requerimiento absoluto de L-cisteína.
 La catalasa por lo general es positiva, en
tanto que la oxidasa es variable.
 La mayoría de las especies crece mejor en
un ambiente húmedo, pero requieren 5%
de CO2 para un crecimiento óptimo.
 Fotografía:
Legionella pneumophila
mostrando un flagelo polar.
Fotografía de una tinción de
Gram utilizando fenol-fucsina
como contrastante.
Legionella pneumophila crecida
en Agar, mostrando tanto formas
bacilares como filamentosas
Tinción de Gram
modificada
 L. pneumophila, proveniente
de medios de cultivo sólidos,
mostrando tanto formas
típicas bacilares como
formas filamentosas.
 Fenol-fucsina utilizado como
colorante de contraste.
Importancia médica.
 Son saprófitos acuáticos principalmente, que
ocasionalmente causan enfermedad en humanos.
 Los reservorios naturales principales de
Legionella spp parecen ser los sitios de agua
dulce (lagos, ríos, arroyos, lagunas termales
etc.), diferentes instalaciones de tubería de agua
potable fría o caliente, en tinas de hidromasaje,
en el agua que sale de los acondicionadores de
aire, etc.
Importancia médica
• Legionella pneumophila es la especie
involucrada en el 95% de los casos de
neumonía inusual grave.
• Hay 15 serogrupos. El serogrupo 1 representa
70-92% de los casos de legionelosis
detectados en laboratorio.
• Tiene dos fases distintas en su ciclo de vida: la
fase replicativa donde se multiplica y la fase
móvil, de dispersión, donde busca un nuevo
hospedero y se mueve libremente en el
sistema de agua. Esta fase a veces se
denomina Viable pero no cultivable (VBNC).
Ciclo de vida de la Legionella
 Fuentes comunes de
infección

• Los brotes de la enfermedad del

legionario a menudo se asocian a
sistemas de agua grandes o
complejos, como los que se
encuentran en los hospitales,
hoteles y cruceros.
Torres de enfriamiento y biopeliculas
 • Las infecciones por bacterias del genero
Legionella spp, se manifiestan básicamente de
dos formas clínicas principales:
• Como una neumonía grave, la denominada
enfermedad de los legionarios
• Como un síndrome febril sin focalidad de corta
Legionelosis duración, sin afectación pulmonar y
autolimitado, llamado fiebre de Pontiac.
• También está demostrada la infección
asintomática y otras formas menos frecuentes
secundarias a bacteriemia sin neumonía o la
infección de una herida por exposición a agua
contaminada.
Legionelosis
• Se desconoce porqué la infección por
microorganismos del genero Legionella spp
produce en unos casos neumonía y en otros
fiebre de Pontiac.
• Se han implicado diversos factores como el
diferente tamaño del inoculo, diferentes
modos de transmisión, el estado inmunitario
del huésped y la virulencia de la cepa.
• Se ha demostrado que en un mismo brote
epidémico pueden presentarse
simultáneamente ambas formas clínicas de la
enfermedad.
 Legionella spp. puede causar enfermedad
grave en individuos aparentemente sanos,
estas infecciones y los desenlaces fatales son
más comunes en pacientes con problemas de
el sistema inmune y ancianos.
 Los factores de riesgo mejor documentados
son: tabaquismo, EPOC, enfermedad
cardiovascular crónica, insuficiencia renal, e
inmunosupresión causada por enfermedad
subyacente o por terapia.
 La vía de diseminación de la infección que está mejor
documentada es la generación de aerosoles infecciosos a
partir de una fuente de agua contaminada con Legionella
spp.
 La aspiración de agua potable contaminada es un
mecanismo probable de infección.
Patogenia
 Enfermedad de los legionarios.
 Es una enfermedad multisistémica manifestada principalmente como neumonía lobular aguda, de curso
grave.
 La infección usualmente inicia con fiebre aguda, dolor de cabeza, escalofríos, debilidad, mialgias y tos no
productiva.
 Los síntomas del tracto respiratorio pueden presentarse sólo en la fase tardía de la enfermedad, cuando el
esputo puede ser sanguinolento o purulento.
 A medida que progresa la enfermedad
aparece fatiga, disnea, bradicardia y
estertores, y aumenta la dificultad
respiratoria. Cuando se produce
esputo, a menudo contiene células
inflamatorias, pero no se ven las
bacterias en la tinción de Gram.

 Son comunes las manifestaciones

extrapulmonares, con síntomas de
confusión, desorientación, náusea,
vómito y diarrea.
 Cuando la neumonía es grave hay bacteriemia
en un porcentaje importante (38%). Puede haber
diseminación local con
pericarditis, miocarditis, endocarditis, pancreatiti
s, pielonefritis, peritonitis, celulitis, absceso hepá
tico, abscesos del tracto gastrointestinal e infecci
ones de prótesis intravasculares.
 Fiebre de Pontiac

• Enfermedad febril aguda autolimitada, sin neumonía.

• Tiene un corto periodo de incubación 1-2 días, un alta tasa
de infección en las personas expuestas (>90%) y no se ha
asociado con factores de riesgo.
• Los síntomas predominantes son fiebre, malestar general,
mialgias y cefalea. Sólo requiere tratamiento sintomático y
la recuperación es la regla en el plazo de una semana.
• La sospecha diagnóstica debe surgir ante cuadros febriles
autolimitados de presentación epidémica.
 Diagnóstico de
Legionella pneumophilla

Material biológico.

 Esputo, lavado bronquial, aspirado transtraqueal,

líquido pleural, biopsias pulmonares o sangre.
 Recolección y transporte
de la muestra.

 Al realizar el lavado bronquial o el aspirado

transtraqueal debe evitarse el uso de
solución salina, ya que los iones de sodio
pueden inhibir a la bacteria.
 Las muestras de lavado bronquial deben
centrifugarse tan pronto como sea posible,
y el sedimento será resuspendido en agua
estéril. Si los especímenes no se van a
procesar de inmediato, podrán guardarse
en refrigeración hasta 48 horas, o en
congelación a -70ºC.
 El esputo y las biopsias de
pulmón deberán diluirse 1:10 con
agua o con caldo de soya
tripticaseína (TSB) estériles,
antes de inocularlos en los
medios de cultivo. Los lavados
bronquiales, aspirados
transtraqueales y líquidos
pleurales deberán centrifugarse
antes de inocularlos en los
medios de cultivo.
 Examen directo.

 Las legionelas pueden visualizarse en

especímenes usando varias técnicas de
tinción específicas e inespecíficas.
 En general, las técnicas no específicas como
las tinciones de Gram, Giemsa, Giménez o la
de Plata son menos sensibles que la
inmunofluorescencia.
 El examen directo sólo debe
realizarse a los tejidos y líquidos del
tracto respiratorio y de sitios
extrapulmonares que normalmente
son estériles, con excepción de sangre
y orina.
 El esputo no es conveniente pues no
es posible diferenciar a las legionelas
de otros BGN de la microbiota normal
del tracto respiratorio superior.
 La inmunofluorescencia tiene la ventaja de
su especificidad (99.9%) y rapidez, pero tiene
la desventaja de la sensibilidad respecto al
cultivo (25-80%).
 Además, una prueba negativa no excluye la
enfermedad, pues no hay en el mercado
tantos antisueros como serovariedades
existentes.
Neumonía letal por un
bacilo Gram negativo
desconocido
ESTUDIO DE CASO
Nueva especie de Legionella
• Un varón de 54 años de edad con mieloma múltiple fue hospitalizado por padecimiento de dos días de evolución
con fiebre, náusea y diarrea. La exploración inicial de los campos pulmonares no reportó anomalías, pero
durante los primeros tres días de la hospitalización desarrolló neumonía en el lóbulo inferior derecho y derrame
pleural. El tratamiento inicial con antibióticos incluyó cefalotina, tobramicina y ticarcilina. Al tercer día se añadió
eritromicina intravenosa.
• Los cultivos iniciales de sangre, esputo, orina, líquido cefalorraquídeo y heces no demostraron el agente causal.
Se obtuvo un aspirado transtraqueal que también fue negativo, incluyendo la prueba DFA para Legionella. La
neumonía no se resolvió y continuó la fiebre en espigas. En el décimo tercer día de hospitalización se incrementó
la dificultad respiratoria con hemorragia franca proveniente de la porción superior del aparato respiratorio y el
paciente falleció
• En la autopsia, el dato más prominente fue bronconeumonía con organización focal y hemorragia en pulmón
derecho. Las tinciones de tejidos pulmonares fueron negativas para Gram, metenamina argéntica y métodos
acidorresistentes, pero la tinción argéntica de Dieterle reveló la presencia de bacilos cortos. Los cultivos
pulmonares recuperaron bacilos gramnegativos, que crecían en medios aerobios en un medio de cultivo con
extracto de levadura de carbón amortiguado, pero que no crecían en agar sangre o agar chocolate. Los
microorganismos eran similares a Legionella, pero no se teñían con conjugados inmunofluorescentes para
Legionella pneumophila y otras especies (L. micdadei, L. longbeachae, L. gormanii, L. dumoffi, L. bozemanii).
• Los microorganismos fueron enviados a los Centers for Disease Control and Prevention, donde finalmente fueron
identificados.
 Tinción de Gram de
Legionella pneumophila

• Raspado de tejido pulmonar de un paciente

con neumonía, fijado con formol. Se
observan numerosos bacilos delgados gram-
negativos, intra (dentro de LPMN) y
extracelulares.
 Legionella micdadei teñida
con Kinyoun modificado, en
tejido pulmonar de un paciente
con neumonía. Se observan
bacilos parcialmente AAR.
Inmunofluorescencia directa de
Legionella pneumophila en
secreciones respiratorias de un
paciente con neumonía.
Medios de cultivo

• El medio solido no selectivo recomendado

para el aislamiento de legionelas es el agar
cabon-extracto de levadura con buffer
(BCYEα), que contiene L-cisteina.
• Ademas de BCYEα, se recomienda utilizar
medios selectivos para evitar el
sobrecrecimiento exagerado de la microbiota
normal (BCYE-α selectivo (Oxoid: con
Cefamandole, Polimixina B y Anisomicina).
Medios selectivos

• Agar BMPA: Agar base BCYE-α

suplementado con Cefamandol,
Polimixina B y Anisomicina.
• Agar GVPC: Agar base BCYE-α
suplementado con Glicina, Vancomicina,
Polimixina B y Cicloeximida.
• Agar MWY: Agar base BCYE-α
suplementado con Glicina, Anisomicina,
Polimixina B y Vancomicina.
 El pH es crítico y debe estar entre
6.85-6.95.
 Las cajas inoculadas deben
incubarse en una atmósfera con 2-
5% de CO2, con 80-90% de
humedad relativa y a 35ºC.
 Las cajas deben incubarse un
mínimo de 5 días.
 Las colonias miden
aproximadamente 0.5 mm a los dos
días, y de 1-2 mm a los 3 días.
 Los hemocultivos comienzan a
verse positivos a las 2 semanas, y
deben mantenerse durante un mes
antes de descartarse.
 Enriquecimiento
acido

• Se ha documentado que las

muestras respiratorias
contaminadas como esputo,
lavados bronquiales y aspirados
traqueales se le puede hacer un
lavado con una solucion acida
antes de la inoculación de placas
de BCYEα, o BMPA-α mejora el
aislamiento de Legionella.
 Protocolo de
descontaminación
• Antes de realizar el tratamiento con acido de la
muestra, preparar seis frotis para la prueba de IFD.
• 2. Inocular una placa de BCYEα y una placa de
BMPAα con tres a cinco gotas de la muestra
respiratoria no tratada y sembrar en estria para el
aislamiento.
• 3. Agregar 0,5 mL de muestra respiratoria a 4,5 mL de
solución acida (KC1/HC1 0.2 M, pH 2.2) en un tubo
con tapa de rosca.
• a. Sellar apretadamente el tubo y mezclar con cuidado
agitando bajo una capucha de seguridad.
• b. Dejar reposar la suspensión a temperatura ambiente
durante5 minutos.
• 4. Inocular un segundo conjunto de placas
de BCYEα y BMPA α preparada en el paso
3 y sembrar en estría para aislamiento.
Marcar las placas con una “A” para
identificar las placas inoculadas después del
tratamiento con acido.
• 5. Colocar las cuatro placas inoculadas en
bolsas de plástico permeables al CO2 (dos
por bolsa) e incubar en CO2 a 35 °C durante
2 semanas.
• Examinar cada 2 a 3 días para detectar
crecimiento.
Tratamiento térmico
• Las muestras procedentes de lavados
bronquiales, aspirados o incluso
biopsias deberán ser tratadas a 50 ℃
en baño maría durante:
• CDC: 30 min
• ISO 11731: 2 min
• Posterior mente inocular en los medios
de cultivo
 Las colonias microscópicas varían de incoloras a
azul iridiscente o rosa, son redondas, planas y
de bordes enteros. Las colonias macroscópicas
en su primer día son convexas, redondas, de
bordes enteros y de color blanco-azulado o
rosa; posteriormente se vuelven pleomórficas y
pierden su color. Las colonias se adhieren al
agar y forman un filamento al ser levantadas
con el asa.
Sin desarrollo de Legionella
pneumophila en agar
sangre, y desarrollo en agar
BCYE-a a los 3 días.
Crecimiento de Legionella pneumophila en agar BCYE-a
a los 4 días. Colonias blanco-grisáceas.
Consistencia adherente de
Legionella pneumophila
en agar BCYE-a.
Colonias de Legionella
pneumophila con microscopio
estereoscópico, mostrando la
apariencia de vidrio esmerilado.
 Autofluorescencia

 Blanco-azulada de Legionella bozemanii

en agar BCYE-α, fotografiada con luz
ultravioleta de onda larga.
 L. penumophila y L. micdadei no
presentan autofluorescencia.
 Identificación
 No hay necesidad de que se identifiquen las
especies, simplemente conque se llegue
hasta género es suficiente.
 Resembrar en medio BCYE-α con L-cisteína
y en SBA.

Cuando crece Si crece solamente en el medio BCYE-α con

L-cisteína es Legionella spp
un BGN en el
medio Si crece tanto en el medio BCYE-α con L-

BCYE-α
cisteína como en el agar sangre, no es
Legionella spp.

Confirmar por Serología, PCR, y ante una

nueva especie. Análisis de RNA 16 S.
Mycobacterium
tuberculosis
 Dominio Bacteria
Phyllum Actinobacteria
Clasificación taxonómica
de las Micobacterias Clase Actinobacteria

Orden Corynebacteriales

Familia Mycobacteriaceae

Género Mycobacterium (140 especies)

De acuerdo al Bergey's Manual

Of Systematic Bacteriology.
 Estadísticas de la WHO
• La tuberculosis es una de las 10 principales causas de mortalidad en el
mundo.
• En 2015, 10,4 millones de personas enfermaron de tuberculosis y 1,8
millones murieron por esta enfermedad (entre ellos, 0,4 millones de
personas con VIH). Más del 95% de las muertes por tuberculosis se
producen en países de ingresos bajos y medianos.
• Seis países acaparan el 60% de la mortalidad total; encabeza esta triste lista
la India, seguida de Indonesia, China, Nigeria, el Pakistán y Sudáfrica.
• Se estima que en 2015 enfermaron de tuberculosis un millón de niños y que
170 000 niños murieron debido a esta causa (sin incluir los niños con VIH).
• La tuberculosis es una de las causas principales de defunción en las
personas VIH-positivas: en 2015, el 35% de las muertes asociadas al VIH se
debieron a la tuberculosis.
• Se estima que en 2015 desarrollaron tuberculosis multirresistente (TB-
MDR) unas 480 000 personas a nivel mundial.
 Micobacterias
Desde el punto de vista de su crecimiento se pueden
clasificar:
Las de rápido crecimiento (No tuberculosas) con 70 especies
Las de lento crecimiento
 Complejo Micobacterim tuberculosis: M. tuberculosis,
Mycobacterium bovis, Mycobacterium africanum y
Mycobacterium microti (tuberculosas).
 Complejo Mycobacterium avium. Este complejo tambien
denominado M. avium-intracellulare (CMA) se define
como cocobacilos acido-alcohol resistentes de
crecimiento lento (NO tuberculosas).
 • Son Bacilos Gram positivos
• No esporulados
Características M. • Aerobios estrictos
tuberculosis • Inmóviles
• Resistentes a la decoloración con
alcohol-ácido.
• De crecimiento muy lento.
MORFOLOGIA

• Bacilo delgado, recto o

ligeramente curvo
• Bastones de color rojo
brillante contra un fondo azul
en la tinción Acido-Alcohol-
Resistente.
• No prolifera en ausencia de oxigeno
• Colonias pequeñas, secas y con aspecto escamoso
con bordes irregulares
• Tienen aspecto de migajas de pan
• Su pH optimo es de 7
• Temperatura optima es 37 ℃
• Catalasa positivo
• Glucosa o glicerol positivo
• Resistentes a la desecación y a los productos
químicos
Colonias de Mycobacterim tuberculosis en
Agar Lowenstein Jensen.
Transmisión

1 2
La infección tuberculosa se Para que se produzca la
adquiere principalmente por infección se requiere una
inhalación de residuos asociación frecuente y
desecados de gotitas prolongada con un paciente
infectado
Síntomas
Tuberculosis latente ( Sin síntomas
aparentes)
Tuberculosis activa:
Tos, a veces con esputo que puede ser
sanguinolento
Dolor torácico
Debilidad
Pérdida de peso
Fiebre y sudoración nocturna
 Patogenia
Bacilo Alvéolos Fagocitosis Macrófagos

Multiplicación
bacteriana

Infección primaria Torrente Pulmón

sanguíneo

Riñones Columna Ganglios

vertebral linfáticos
Factor cordón

Dimicolato de trehalosa , es un
glicolípido que se encuentra en la
pared celular de Mycobacterium
tuberculosis y especies similares.
Dinámica de la enfermedad
 Granuloma
• En la infección inicial (A) se generan
unas lesiones mínimas que crecen
rápidamente gracias a la
acumulación de los PMN y al
crecimiento extracelular de los
bacilos.
• Posteriormente, se generan lesiones
«hijas», que sufren el mismo
proceso (B).
• Y finalmente todas ellas se fusionan
en una gran lesión, burlando el
proceso de encapsulación (C).
 Tuberculosis pulmonar

• Es causada por microorganismos

implantados en los pulmones. Necrosis
de celular.
• Puede evolucionar rápidamente
después de la invasión
• Los microorganismos pueden ser
diseminados a otras partes del pulmón
y hacia el medio externo
 Tuberculosis
extrapulmonar
• Se presenta cuando los bacilos traslocan a
los vasos linfáticos y al torrente sanguíneo ,
llegan a órganos distantes donde se
multiplican ,causando lesiones semejantes
a las pulmonares
• Los sitios mas frecuentemente afectados
son: riñones, huesos, articulaciones, el
aparato genitourinario, las meninges y los
ganglios linfáticos
 Diagnóstico • Se deben obtener antes de iniciar el
tratamiento
de laboratorio: • Muestras de esputo obtenido
Recolección de espontáneamente o se puede inducir.
• Pus, liquido cefalorraquídeo, orina, material
muestra de lavado gástrico y líquidos de otras
cavidades serosas.
• Recolectar en recipientes estériles y
enviarlas de inmediato al laboratorio
 La detección de bacilos acidorresistentes en extendidos
coloreados representa el procedimiento mas sencillo y
mas rápido para la evaluación de una muestra clínica

Examen Coloración ácido-alcohol-resistente

microscópico Tinción en caliente: Ziehl-
Tinción en frio: Kinyoun
Neelsen

Tinción con auramina

 • Ideal para las micobacterias por poseer ácidos micólicos en su estructura
(BAAR).
• 1er colorante: fucsina fenicada
Ziehl- • Ácido- alcohol
Neelsen • 2do colorante: azul de metileno

• Fluorocromos auramia (amarillo) y rodamina (naranja-rojo), se fijan a

las bacterias que aparecen de color amarillo o naranja brillante contra
Auramina un fondo oscuro.
(fluorescente)

• Se usa una alta concentración de fenol en el colorante, el cual permite

disolver el material lipídico de la pared celular de la micobacteria, lo
cual ocasiona la penetración de la carbolfucsina sin la necesidad de
Kinyoun calor.
Numero de bacilos observados Método de informe
Cero Negativo(-)
1-2/300 campos (+/ -). Solicitar nueva muestra
y concentrar.
1-9/100 campos Positivo (1+)
1-9/10 campos Positivo (2+)
1-9/campos Positivo (3+)
Mas de 9/campos Positivo (4+)
 Produce resultados tardíamente pero es más sensible que la
baciloscopia.
UTILIDAD DEL Puede evidenciar un mínimo de 10 a 100 bacilos ácido
CULTIVO alcohol resistentes (BAAR) presentes en una muestra, si es
realizado en forma adecuada.
Permite detectar los casos antes de que lleguen a ser
infecciosos
  Mediante el cultivo es posible incrementar la confirmación del
diagnóstico de tuberculosis en aproximadamente 15-20% del total de
UTILIDAD DEL casos y en 20-30% de los casos de tuberculosis pulmonar.
CULTIVO  En la tuberculosis pulmonar confirmado bacteriológicamente, la
baciloscopia detecta el 70-80% y el cultivo 20-30% el restante.
Medios de cultivo

• Los medios son de dos tipos:

• A base de huevo y papa:
Lowestein-Jensen, Ogawa,
• A base de Agar: Middlebrook
 MEDIO COMPONENTES INHIBIDOR
Lowestein-Jensen Huevos frescos, Verde de malaquita
sales,glicerol,almidon de 0.025g/100mL
papa

Petragnani Huevo fresco, yema de Verde de malaquita

huevo, leche entera, papa, 0.052g/100mL
almidón de papa, glicerol Medios de
MIDDLEBROOK Sales, vitaminas, cofactores, Verde de malaquita
aislamiento
7H10 ácido oleico, albúmina, 0.02g/100mL
catalasa, glicerol, glucosa

MIDDLEBROOK Glicerol hidrolizado de Verde de malaquita

7H11 caseína al 0.1% 0.0025g/100mL
 Procesamiento

• Los especímenes con posibilidad

de contener flora bacteriana mixta
son tratados con un agente
descontaminante para reducir el
cremiento bacteriano indeseable y
para licuar el moco.
• El mas empleado es el método de
Petroff (NaOH al 4% para eliminar
Biota normal)
 Temperatura
Peoducción de
óptima para
pigmento
asilamiento

Identificación de
Acumulación de Reducción de
Mycobacterium Niacina nitratos a nitritos
tuberculosis

Inhibición por
Actividad catalasa hidracida del ácido
a 68°C carboxílico-2-
tiofeno (T2H)
Produccion de Niacina

• La niacina es excretada al medio, sobre

todo en medios con base de huevo, del
cual puede ser extraída y detectada.
• Las tiras de papel comerciales están
impregnadas con cloramina y tiocianato
potásico acidificado, y liberan cloruro
de cianógeno, el cual reacciona con PAS
(ácido para-aminosalicílico) y produce
un color amarillo en presencia de
Niacina. Si no esta ésta, no se produce
color.
Reducción de nitratos
• La prueba se basa en la capacidad de las
aminas aromáticas para formar cloruro de
dizalconio en presencia de nitrito sódico y
ácido clorhídrico. El cloruro de dizalconio
puede unirse al diclorhidrato de N-(1-naftil)
etilendiamina para formar un derivado azoico
que inicia la reacción.
• Es muy útil para diferenciar las especies de
micobacterias de crecimiento rápido, así
como algunas de crecimiento lento (M.
kansasii, M. tuberculosis, etc.).
• La termoestabilidad de la enzima
catalase, es la capacidad de ésta para
seguir actuando tras ser sometida a
altas temperaturas (68ºC).
 M. tuberculosis M. ulcerans M. marinum M. xenopi M. fortuitum M. haemophilum M. africanum
Temperatura 37 ℃ 32 ℃ 30 ℃ 42 ℃ 37 ℃ 30 ℃ 37 ℃
Tiempo de desarrollo 28 a 60 14 a 29
12 a 25 días días 5 a 14 días días 3 a 5 días 14 a 21 días 31 a 42 días
Acumulación Niacina + - V - - - V
Reducción de nitrato + - - - + - V
Reducción de Tween
80 (10 días) V - + - V - -
Catalasa 68 ℃ - + - + + - -
Arilsulfatasa (3días) - - V + + - -
Ureasa - V + - + - V
Pirazinamidasa + - + + + + -
Incorporación de
hierro - - - - + - -
MGIT (Mycobacterial Growth
Indicator
Tube)

• Es un medio fluorométrico basado en un 7H9 de

Middelbrook con un componente fluorescente
pentahidrato de rutenio) embebido en silicona.
• Bajo la luz ultravioleta el crecimiento se aprecia
mediante la visualización de un brillo fluorescente
anaranjado en la superficie y en el fondo del tubo
como consecuencia de una depleción de O2.
 Recuerde:
la seguridad es lo primero.