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Optimizacion Del PCR en Tiempo Real
Optimizacion Del PCR en Tiempo Real
La medida de la fluorescencia se
realiza mientras la temperatura en el
termociclador aumenta de alrededor de
50°C a 95°C, siendo la fluorescencia
detectada dependiente de la presencia
de secuencias de doble cadena de
ADN o ADNc
ANÁLISIS DE LA CURVA DE FUSIÓN
Esta técnica relaciona la señal obtenida con la PCR al número de copias fijo de una
secuencia estándar utilizando un curva de calibración.
Ratio=2 -^^CP
Otro modelo para cuantificación relativa entre las diferentes eficiencias de la PCR tanto para los
genes en estudio como para los genes de referencia
(E target) ^Cp target (control-simple)
Ratio=
(Eref. ) ^CP
ref.
( control – simple)
En esta ecuación el ratio del gen en estudio se expresa en una muestra
frente a un control en comparación con un gen de referencia . E target
representa la eficiencia de la PCR en tiempo real del amplicom en
estudio
E ref representa la eficiencia de la PCR