SENSOR

AMPEROMETRI
FAU Z I A H H B
N O F E N TA R I P U T R I
YO H A N A T I OV E L L A

SENSOR KIMIA
 DIRECT ELECTROLYTE METHODS
Sensor amperometri (voltametri) memiliki selektivitas
terhadap spesi yang dianalisis

REDUKSI OKSIDASI
Scanning potensial kearah Scanning potensial kearah
negatif positif

Polarogram Differential pulse polarogram yang khas dapat diperoleh dengan

penyapuan linear campuran 6 kation dalam larutan HCl 1M
DIRECT ELECTROLYTE METHODS

• Tidak sepenuhnya teknik

sensor
• Selektivitasnya rendah
kecuali elektroda
dimodifikasi
GENERASI
BIOSENSOR
Perkembangan biosensor dibagi menjadi
tiga generasi, yaitu generasi pertama,
generasi kedua, dan generasi ketiga.
• Generasi pertama: Biosensor berbasis
elektrodoa oksigen
• Generasi kedua: biosensor yang lebih
spesifik dengan melibatkan mediator
antara reaksi dan transducer
• Generasi ketiga: biosensor berbasis
enzyme coupling
 Pada elektroda enzim glukosa menggunakan molekul
oksigen sebagai pengoksidasi.

Reaksi ini menurunkan konsentrasi oksigen

menggunakan elektroda oksigen clark, dimana di
kembangkan pada tahun 1953 menggunakan prinsip
voltametri elektrokimia untuk mereduksi oksigen
dengan arus sel yang sebanding dengan konsentrasi
oksigen.
GENERASI Imobilisasi oksida glukosa didalam gel polyacrylamide

PERTAMA (THE
pada membrane gas permiabel yang mengcover
elektroda, dimana terdiri dari katoda platinum dan

OXYGEN
anoda perak.
Pada gambar 5.7 ditunjukkan jenis sensor glukosa yang

ELECTRODE)
mana sangat berguna di dunia medis.
 GENERASI
PERTAMA
(THE OXYGEN
ELECTRODE)
 GENERASI
PERTAMA
(THE OXYGEN
ELECTRODE)
 • Tingkat oksigennya harus dikontrol jika tidak

BEBERAPA respon electrode terhadap penurunan konsentrasi

oksigen tidak akan sebanding dengan penurunan

MASALAH PADA konsentrasi glukosa.

• Tingginya potensial reduksi yang dibutuhkan untuk
BIOSENSOR INI mereduksi oksigen (-0.7 V)
 GENERASI PERTAMA (THE OXYGEN
ELECTRODE)
• Cara pertama untuk mengukur oksidasi hydrogen peroksida

• Potensial elektrodanya hingga +0,60 V, masih cukup tinggi, karena asam askorbat teroksidasi
pada potensial tersebut.
• Pada enzim katalase Hidrogen peroksida terdekomposisi air dan oksigen reaksinya:

• Kadang hanya setengah oksigen yang diproduksi pada reaksi tersebut dan kemudian jika
hydrogen perokisdanya di recycled pada kenyataan nya hanya 50% yang dapat di recycled.
GENERASI PERTAMA (THE OXYGEN
ELECTRODE)
• Alternative lain yang dilakukan yaitu re-oksidasi air menjadi oksigen pada anoda

• Namun standar potensial sangat tinggi yaitu +1.23 V dan penerapan potensial seperti itu akan
mengoksidasi interferants yang ada.
• Beberapa ada yang berhasil dengan stabilisasi pada elektroda oksigen dimana memisahkan oksigen
generation circuit dan mengontrolnya menggunakan feedback amplifier dari analisis elektroda
oksigen.
 Pada biosensor generasi kedua, digunakan
mediator redoks untuk mengtransfer elektron
dari enzyme kepada permukaan elektroda kerja,

GENERASI Beberapa variasi mediator redoks yang dapat

membantu kinerja sensor yaitu ferrocene,
KEDUA ferricyanide, quinines, methylene blues dan lain –
lain.
(MEDIATOR)
Penggunaan mediator redoks untuk
menghilangkan kebutuhan oksigen untuk transfer
elektron pada permukaan elektroda. Dengan
demikian, mengatasi kelemahan tekanan oksigen
yang terbatas pada generasi pertama.
 GENERASI
KEDUA
(MEDIATOR
)
GENERASI KEDUA (MEDIATOR)

• Pada generasi kedua ini , laju oksidasi

diukur bukan oleh tingkat hilangnya
substrate atau keberadaan produk tetapi
dengan laju elektron mengalir dari
glukosa untuk elektroda permukaan .

• Elektron yang disumbangkan ke elektroda

menghasilkan arus yang sebanding dengan
laju oksidasi
 GENERASI KETIGA (DIRECTLY COUPLED ENZYME
ELECTRODES)
• Sebuah mediator dibutuhkan untuk memasangkan enzim dengan elektroda.
Kenapa tidak mungkin untuk mereduksi enzim secara langsung pada sebuah elektroda?
1. karena protein terdenaturasi pada permukaan elektroda.
2. Reaksi transfer electron menjadi lambat dan irreversible dan membutuhkan over potensial
yang tinggi.
Sehingga dimodifikasi lah permukaan contoh 4,4’-bipyridy pada elektroda emas. Bipyridy sendiri
tidak elektroaktif dan bukan mediator. Bipyridy memiliki ikatan hibrogen lemah dengan residu
lysine pada enzim.
Solusi terbaik yang dikemukakan oleh Albery dan Cranston (1987) dan Bartlett (1987)
menggunakan elektroda garam organic. Pada system ini etrathiafulva-lene(TTF) teroksidasi
secara reversible dan tetracyanoquinodimethane (TCNQ) tereduksi secara reversible (gambar
5.15)
DIRECT ENZYME- ELECTRODE
COUPLING
Teknik imobalisasi ini telah dikembangkan untuk mengikat enzim secara langsung ke electrode,
sehingga transfer electron menjadi cepat oleh karena itu tingginya densitas arus. Secara umum
melibatkan proses polimerisasi in situ menggunakan polimer redox.

Contohnya menggunakan glucose dehydrogenase (GDH) mengandung pusat redoks ,

pyrroloquinolinequinone (PQQ) , yang mana 'Kabel' ke elektroda karbon kaca melalui polimer
redoks, poli (vinylpiridin), sebagian nitrogen-kompleks dengan [osmium bis (bipyridine) klorida]2+
dan dikuatkan dengan bromoethylamine, (POs-EA), dan cross-linked dengan poli(ethylene glycol
400 diglycidyl ether) (PEGDE). Sensor ini tidak sensitive okesigen dan memiliki densitas arus pada
1,8 1.8 mA cm-’ with 70 mM glucose.
 NADH / NAD +
kofaktor yang banyak digunakan
NAD dalam proses biokimia

NAD+ + RR’CHOH  NADH + RR’C = O + H+

A. Struktur NADH dan bentuk reduksinya

B. Reaksi yang terjadi yaitu reduksi,
oksidasi dan dimerisasi
 NADH / NAD +

Satu masalah yang belum teratasi adalah bahwa NADH (dan NAD+) mahal
dan sangat tidak stabil dan tidak dapat dengan mudah diimobilisasikan pada
biosensor. Oleh karena itu, bahan-bahan ini harus ditambahkan langsung ke
larutan yang akan dianalisis.
 NADH / NAD +

Sementara biosensor dapat dibangun untuk analit dengan menggunakan elektroda konduktor-
garam, elektroda yang dimediasi ferrocene dapat digunakan jika ferrocene digabungkan ke NADH
melalui enzim diaphorase (lipoamide dehydrogenase)

MV : metil viologen
CONTOH AMPEROMETRI
SENSOR

Glukosa
CONTOH AMPEROMETRI
SENSOR

LAKTAT
CONTOH AMPEROMETRI
SENSOR
• 3. Phospat
• Uji ini tidak langsung menggunakan
sensor glukosa.
• Glukosa-fosfat dihidrolisis dengan
asam fosfatase (AP) untuk
membebaskan asam fosfat dan
glukosa, yang dapat ditentukan
dengan biosensor glukosa. Namun,
fosfat menghambat aksi fosfatase.
• Prosedurnya kemudian glukosa-6-
fosfat bereaksi dengan fosfatase
dengan adanya fosfat. Ini
menghambat reaksi dan jadi jumlah
glukosa berkurang terbentuk:
 AMPEROMETRIC GAS SENSORS
1. Oxygen

Jenis sensor amperometrik yang paling sederhana untuk oksigen didasarkan pada prinsip polarografi dan telah dikembangkan
menjadi elektroda Clark. Suatu potensial diterapkan di seluruh elektroda dan arus terbatas difusi, yang berbanding lurus dengan
konsentrasi oksigen.
Sulfur dioksida memiliki potensi redoks sekitar 750 mV, yang lebih katodik dari oksigen dan tidak akan mengganggu. Namun, gas
seperti nitrat oksida (NO) atau klorin, yang memiliki potensi redoks lebih anodik daripada oksigen, dapat mengganggu,

2. Nitrous Oxide

Secara elektrokimia direduksi pada - 1,2 V sedangkan oksigengenis tidak kurang dari -0,65 V.
Skema telah dirancang untuk mengukur baik nitro oksida dan oksigen, dengan menerapkan pulsa polarisasi berturut-turut
sebesar -0,65 dan -1,45 V. Arus pada -0,65 V sebanding dengan konsentrasi oksigen, sedangkan pada - 1,45 V sebanding dengan
konsentrasi total gas. Oleh karena itu, dengan pengurangan satu dapat memperoleh konsentrasi oksida nitrat.
 AMPEROMETRIC GAS SENSORS
3. Halothane

Potensi reduksi halotan pada elektroda perak terlalu dekat dengan oksigen untuk menggunakan metode yang sama seperti
untuk campuran O2
dan N2O. Namun, pada waktu singkat pengurangan halotan sangat lambat. Pada waktu yang lebih lama, pengurangan halotan
menjadi difusi yang lebih terkendali (<20 dan> 50 ms).
Single pulse -1.45 V diterapkan dan berada dalam dua zona waktu pada <20 dan> 50 ms dan menghasilkan konsentrasi oksigen
dan halotan dalam campuran

4. Biological Oxygen Demand

Pengukuran oksigen biologis (BOD) biasa dilakukan dengan metode yang membutuhkan periode inkubasi
hingga 5 hari. Namun, biosensor berdasarkan elektroda oksigen akan ideal untuk pengujian ini dengan
Mikroorganisme, Clostridium butyricum dan Trichosporon cuteneum. Spesies ini dipasang di depan
elektroda oksigen, dan yang terakhir dibilas dengan larutan buffer jenuh oksigen dan arus oksigen dasar
dibaca. Sampel kemudian disuntikkan dan setelah stabilisasi
arus oksigen dibaca lagi. Jenis sensor ini digunakan pada suhu 60 ° C menggunakan bakteri termofilik,
diisolasi dari sumber air panas
 AMPEROMETRIC GAS SENSORS
5. Carbon Monoxide

Emisi karbon monoksida umumnya dihasilkan dari asap knalpot motor mobil, asap pemanas bahan bakar
padat domestik atau asap pemanas minyak. Terdapat perangkat yang dapat mendeteksi CO namun mahal dan
tidak terlalu selektif. Ini biasanya didasarkan pada pengukuran spektrofotometri infra merah. Namun,
beberapa bakteri telah ditemukan, terutama dalam kultur anaerob, yang mengandung enzim yang akan
mengkatalisis oksidasi CO menjadi CO2.
JURNAL
AMPEROMETRIC GLUCOSE SENSOR BASED
O N G L U C O S E OX I DA S E I M M O B I L I Z E D O N
G E L AT I N - M U LT I W A L L E D CARBON
N A N OT U B E MODIfiED GLASSY CARBON
ELECTRODE
PENDAHULUAN
• Penentuan kadar glukosa darah yang cepat dan akurat diperlukan untuk mengontrol diabetes.
Banyak perangkat elektronik yang tersedia secara komersial di pasar, dengan biaya produksi
rendah, respon cepat, sensitivitas tinggi dan selektivitas yang baik, enzim berbasis glukosa
oksidase (GOx) telah banyak digunakan untuk menentukan kadar glukosa darah. Namun, salah
satu aspek yang penting dalam pengembangan sensor glukosa adalah pemilihan matriks yang
cocok untuk imobilisasi Gox
• Karbon nanotube multiwalled (MWCNTs) digunakan untuk imobilisasi Gox karena kekuatan
mekanik yang tinggi, sifat konduktivitas dan antifouling yang baik.
• Beberapa matriks MWCNT yaitu cairan ionik n-oktilpyridinum hexa florofosfat terdispersi
MWCNT, MWCNT / nanopartikel emas- Komposit , Chitosan , nanopartikel emas kristal
termodifikasi MWCNT, nano partikel platinum / MWCNT komposit dan lainnya.
PENDAHULUAN
• MWCNT membutuhkan zat pendispersi yang cocok karena jika tidak cocok dapat
menyebabkan permukaan elektroda pasif atau menyebabkan kerusakan pada dinding MWCNT.
• Gelatin digunakan sebagai pendispersi karena :
1. Imobilisasi rantai asam amino non-polar dari gelatin pada dinding samping MWCNT terjadi
melalui interaksi hidrofobik-hidrofobik dan yang mengarah pada pembentukan dispersi stabil
MWCNT (Zheng dan Zheng )
2. Stabilitas dispersi MWCNT / gelatin dapat secara komprehensif ditambah dengan
meningkatkan jumlah MWCNT
 ELEKTROKIMIA
LANGSUNG GOX
• Gambar. 1 menunjukkan voltamogram siklik yang
diperoleh pada GCE , GOX/GAD, GNCT, DCNT,
DCNT / GOX / GAD dan GCNT / GOX / GAD
memodifikasi GCEs dalam PBS terdeoksigenasi
pada laju pemindaian 50 mV s− 1

• Tidak adanya GOx, tidak ada puncak redoks yang

signifikan yang terlihat pada rentang potensial ini
untuk GCE , GCNT atau DCNT yang dimodifikasi
serta GOX / GAD film juga tidak menunjukkan
puncak redoks.

• Sepasang puncak redoks terdefinisi dengan puncak

arus maksimum diamati pada GCNT / GOX /
GAD komposit film termodifikasi GCE karena
transfer elektron langsung GOx pada permukaan
GCE GCNT yang dimodifikasi.

• Semakin tinggi puncak redoks yang diamati pada

film komposit GCNT / GOx / GAD pada GCE
menunjukkan proses transfer elektron yang lebih
cepat
 P E R B E DA A N S C A N
R AT E
Gambar. 2 menunjukkan voltamogram siklik
GCNT / GOX / GAD komposit film GCE yang
dimodifikasi pada PBS terdeoksigenasi pada
tingkat pemindaian yang berbeda.

Rate electron transfer (ks) dapat dihitung

dengan:

Nilai ks pada GCNT / GOx / GAD film

komposit pada GCE dihitung hasilnya 1,08 − 1
lebih tinggi daripada yang dilaporkan oleh Yao.
dan Shiu untuk Gox diimobilisasikan pada
komposit koloid MWCNT-emas dengan poli
(diallydi- metilamonium klorida) (PDDA) pelapis
(ks = 1,01 s− 1) .

Hasil ini menunjukkan bahwa matriks GCNT

efisien memfasilitasi proses transfer elektron
antara GOX dan permukaan elektroda.
 PENGARUH PH

• Gambar. 3 menunjukkan pengaruh pH GOX

( pasangan redoks , FAD / FADH2) pada
GCNT / GOX / GAD modifikasi GCE di
berbagai buffer (pH 1 hingga 11).

• Arus puncak redoks tetap stabil dalam

rentang pH 1 sampai 11. Pasangan redoks
juga dapat direproduksi ketika film
komposit GCE yang dimodifikasi
dipindahkan dari satu larutan buffer ke
buffer lainnya.
PENETAPAN AMPEROMETIC
GLUKOSA PADA
GCNT/GOX/GAD
DIMODIFIK ASI GCE

• Dari tabel 1 terilihat jelas

bahwa GCNT/GOx/GAD
memiliki nilai jangkauan linear
yang baik (6.30-20.09) untuk
glukosa dimana secara
signifikan lebih tinggi
dibandingkan variasi Gox
modifikasi elektroda lain.
• Jangkauan linier yang baik dan
kemampuan elektrokatalis
yang baik dari penelitian ini
dapat dikatakan GCNT
biokompatibilitas yang baik
untuk matrix GOx
ANALISIS SAMPEL NYATA
• Sampel serum dikumpulkan dari wanita sehat. Selama percobaan
amperometric, volume tertentu serum disuntikan kemudian diaduk
oksidasi PBS mengandung GCNT/GOx/GAD film composite
modifikasi GCE. Potensial elektroda kerja dijaga konsisten pada -
0,44 V.
• Dari table S2, terlihat jelas bahwa GCNT/GOx/GAD menunjukan
rata rata pembaruan yang baik 97.27% untuk penentuan glukosa
pada serum manusia.
KESIMPULAN
Penelitian ini berhasil memeriksa elektrokimia GOx pada GCNT
modifikasi GCE. Kehadiran GCNT dalam film composite memfasilitasi
sangat baik proses transfer elektron antara GOx dan GCE. Untuk
dikembangkan sebagai biosensor glukosa, yang memiliki karakteristik
signifikan seperti biokompabilitas yang baik, seletivitas yang baik, respon
yang cepat, dan menjanjikan aktivitas elektrokatalis terhadap glukosa
dengan range linier yang baik. Selain itu, juga menunjukan respon biokatalis
yang cepat terhadap glukosa dalam sampel serum manusia tanpa ada
gangguan umum pada pH fisiologis.