CINETICA ENZIMATICA

Dra EMMA GUERRERO HURTADO

 CINETICA QUIMICA

Cintica Qumica es aquella parte de la Qumica que

se encarga de estudiar la velocidad de una Reaccin
Qumica y los factores que permiten su control.
Se limita a :

a) Reacciones Reversibles
 CLASIFICACION DE LA REACCIONES QUIMICAS

Segn el nmero de molculas:

A P

A+B p

A+B+C P
SEGN EL NMERO DE REACCIN

R. Primer Orden: A P

V= -d A= K (A)
dT

R. Segundo Orden: A+ B P

V= -dA = -dB + dP
dT dT dT

V= K (A) (B)
 CINETICA DE MICHAELIS-MENTEN
En 1913 Michaelis y Menten de Hill propusieron una
teria para explicar la velocidad inicial de una reaccin
catalizada por una enzima, en funcin a la concentracin
del sustrato.

La concentracin de sustrato que produce la mitad de la

velocidad mxima, llamada valor Km o Constante de
Michaelis, se puede determinar experimentalmente
graficando v1(velocidad inicial) como funcin de [S].
La expresin de Michaelis-Menten

Vo = Vmax [S]
Km + [S]
M.M.en 1913 investigaron el siguiente sistema :

invertasa
Sacarosa Glucosa + Fructosa
agua

Midieron la velocidad inicial Vo en condiciones

experimentales

a)(E) variable y (S) constante

b)(E) constante y (S) variable

A) Efecto de la (E) sobre la velocidad Enzimtica

Vo

(E)
 B) Efecto de la concentracin del sustrato
sobre la velocidad de una reaccin

-------------------------------------------------------

Vo 1/2 Vmax

KM
Sustrato (S)
 Se supone:
E+ S ES

ES E+P
KM = Constante de Michaelis -Menten
Constante global que sustituye o engloba las constantes de
velocidad de la reaccin de interaccin entre el enzima y
el sustrato

Vo = Velocidad inicial de reaccin

Vmax = Cuando el enzima se halla saturado

 Como se relacionan Vmax, Km y Vo?

Observemos : *
K1 K3

E+S ES E+P
K2 K4
Que hay un solo sustrato
Que la velocidad K4 se desprecia
* Que la concentracin del E es muy pequea
* Que la E puede estar como: E libre y ES
* Que el equilibrio alcanzado por K1 es ms rpido que
K3, por lo que ste es limitante determina, o limita, la
cantidad de producto formado
 POR LO QUE...

LA FORMACION DEL PRODUCTO SERA:

VO = K 3(ES)

LA ECUACION RESULTANTE SERA:

VO =Vmax.(S)

(S) + Km

Ecuac. Michaelis
Menten
La dependencia de la velocidad inicial de una reaccin
catalizada por enzima en [S] y en Km puede aclararse
valorando la ecuacin de Michaelis-Menten como sigue:

.-1) Cuando [S] es igual que Km:

vo= Vmax*[S] vo = Vmax*[S] = Vmax[S] = Vmax

Km + [S] [S]+ [S] 2[S] 2

2) Km= K2 + K3/
K1

Si K2>> K3 Km =K2/K1

K m= (E) (S) K = (E) (S)

(ES) ES)
 SIGNIFICADO E LA VELOCIDAD MAXIMA

Vmax= K3 (ET)

# de recambio

K3= nmero de molculas de Sustrato convertidas

en producto por unidad de tiempo, cuando la
enzima esta saturada
 NMERO DE RECAMBIO

Carboxipeptidasa 102

Tripsina 102 a 103

Cinasas 103
Deshidrogenasas 103
Transaminasas 103
Anhidrasa carbonica 106
Superoxido dismutasa 106
catalasa 107
 DETERMINACIN DE KM Y Vmax MEDIANTE UNA
ECUACION LINEAL

Se tiene:
vo= Vmax*[S] se invierte 1 = Km + [S]
Km + [S] vo Vmax*[S]

Se factoriza 1 = Km * 1 + [S]
vo Vmax [S] Vmax[S]

Se simplifica:
1= Km * 1 + 1
vo Vmax [S] Vmax

La ecuacin de la recta es:

y=a*x+b
La ecuacin de la recta es:
y=a*x+b
donde:
y = 1 y x = 1
Vo [S]

El valor de Km puede ser hallado a partir de la

grfica de Lineweaver-Burk o del doble reciproco
usando la pendiente y la interseccin negativa de x.
 Representacin recproca doble
(Lineweaver - Burk)
y=a*x+b

0.04

1/v
0.03

1/Vmax
0.02

1 Km 1 1
-1/Km
0.01
v Vmx s Vmx

0.00
-0.4 -0.2 0.0 0.2 0.4 0.6

1/s
 INHIBICION ENZIMATICA

ENTENDEMOS COMO EL EFECTO DE ALGUNAS SUSTANCIAS

SOBRE LA VELOCIDAD CATALITICA DEL ENZIMA

APLICAMOS LA ECUACION DE LINENWEAVER-BURKE EN LA

IDENTIFICACION DEL TIPO DE INHIBICION.
 INHIIBIDORES

1. Inhibidor reversible: establece un equilibrio con la enzima

libre, con el complejo enzima-substrato o con ambos:

E+I EI

ES + I ESI

2. Inhibidor irreversible: modifica qumicamente a la

enzima:
E+I E
 INHIBICIN REVERSIBLE
(a) El inhibidor se fija al centro activo de la enzima libre,
IMPIDIENDO LA FIJACIN DEL SUBSTRATO:
Inhibicin Competitiva

(b) El inhibidor se fija a la enzima independientemente de

que lo haga o no el substrato; el inhibidor, por tanto, NO
IMPIDE LA FIJACIN DEL SUBSTRATO a la enzima,
pero s impide la accin cataltica: Inhibicin No
Competitiva
 Inhibicin Competitiva
S
E ES E+P
I
Se define una constante de [E] [I]
equilibrio de disociacin del Ki =
EI inhibidor: [EI]

Caractersticas:
- Las fijaciones de substrato e inhibidor son mutuamente exclusivas
- A muy altas concentraciones de substrato desaparece la inhibicin
- Por lo general, el inhibidor competitivo es un anlogo qumico del
substrato.
- El inhibidor es tan especfico como el substrato
Por tanto, en la inhibicin competitiva,

1. El efecto cintico del inhibidor es el aumento aparente de la

Km, que aparece multiplicada por el factor (1 + i/Ki)

2. La Vmax no aparece modificada; para concentraciones muy

altas del substrato, v = Vmax, igual que en ausencia de inhibidor

3. Cuanto ms pequeo sea el valor de Ki mayor ser la potencia

del inhibidor competitivo.
Inhibicin competitiva - Representacin recproca doble

0.07
1/v
0.06

1/Vmax
0.05

0.04

-1/Km
0.03

0.02

0.01

1/s
0.00
-0.3 -0.2 -0.1 0.0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6
-1/(K m(1 + i/K i))
 Inhibidores
competitivos
Succinato deshidrogenasa COO-
CH2
COO- FAD FADH2 COO- COO-
CH2 CH
CH2 Malonato
SDH CH
COO- COO- COO-

Succinato C O
Fumarato
CH2
COO-
Oxalacetato
 COO-
CH2 Inhibidores competitivos
como nalogos estructurales
CH2 del substrato
COO-

Succinato

COO-
C O
CH2
COO-
Oxalacetato
 Inhibicin No Competitiva

S
E ES E+P
I I
S
EI ESI

El inhibidor se fija indistintamente a la enzima libre E

y al complejo enzima-substrato ES; ni el complejo EI
ni el complejo ESI son productivos
 INHIBICION NO COMPETITIVA

E+I EI

I + ES ESI
 El agente quelante EDTA se une reversiblemente al
Mg2+ y a otros cationes divalentes, e inhibe as de
modo no competitivo a algunas enzimas que precisan
esos iones para su actividad.
DROGA USO ENZIMA TIPO DE
TERAPEUTICO AFECTADA INHIBICION

Lovastina Hipercolestero HMGCoA Competitiva

lemia reductasa
5fluoroacil cancer Dihidrofolato competitiva
reductasa
alopurinol gota Xantino irreversible
oxidasa
cumadin anticoagulante Glutamilcar competitiva
boxilasa
captopril hipertensin ECA competitiva
concepto de Anlogo de Estado de Transicin (AET)

- El inhibidor no es estrictamente anlogo del substrato,

sino del Estado de Transicin de la reaccin.

- La afinidad de las enzimas por los AET es enorme, del

orden nM o pM, con lo que la fijacin es tan fuerte que
puede considerarse irreversible
 Estado de
transicin

Substrato

Anlogo de
estado de transicin
EN EL ESTADO DE TRANSICIN LAS INTERACCIONES ENTRE LA
ENZIMA Y EL SUSTRATO SON PTIMAS
 INHIBICIN IRREVERSIBLE

- Los inhibidores irreversibles reaccionan con un grupo

qumico de la enzima, modificndola covalentemente

E+I E
-El efecto de los inhibidores irreversibles depende del
-tiempo de actuacin del inhibidor.

- Los inhibidores irreversibles son, por lo general, altamente

txicos.
Algunos tipos de inhibidores irreversibles

1. Reactivos de grupos -SH

2. Organofosfricos

3. Ligandos de metales

4. Metales pesados
Reactivos de grupos -SH,

(a) Agentes alquilantes

Yodoacetato ICH2 COO- IH

E SH E S CH2 COO-

O
(b) Compuestos insaturados
E S
E SH N CH2 CH3
O
O
N CH2 CH3
N-Etil maleimida (NEM)
O
Reactivos de grupos -SH, 2
(c) Formadores de mercptidos

HOHg COO- p-Hidroximercuribenzoato

E SH E S Hg COO-

(d) Oxidantes

Promueven la oxidacin de dos tioles a un disulfuro

 Organofosfricos

Ser CH CH2 OH H 3C CH3

CH
Ser CH CH2 O P O
H3C CH3 CH
CH H 3C CH3
F P O
CH
DFP: H3C CH3
diisopropil - Actan sobre enzimas sernicas
fluorofosfato - nicamente sobre la Ser activa
- Insecticidas: Parathion, Malathion
- Inhibidores de la Acetilcolinesterasa
Ligandos de coordinacin de metales

Es el caso del ion cianuro, CN-

Se fija con gran afinidad a la sexta posicin de coordinacin

del Fe hemnico, impidiendo toda modificacin posterior.

Por ello acta sobre sistemas de Fe hemnico con la sexta

posicin de coordinacin libre, como la citocromo oxidasa,
de lo que deriva su elevadsima toxicidad
 SUBSTRATOS SUICIDAS

(Inhibidores activados enzimticamente)

- Se trata de molculas que se unen al centro activo de manera

especfica, igual que el substrato o los inhibidores competitivos

- Una vez unidos al centro activo, la enzima transforma la

molcula en una especie qumica muy reactiva que modifica
covalentemente a la enzima, inactivndola

-Tienen por tanto :

(a) la especificidad del inhibidor competitivo y

(b) la potencia de los inhibidores irreversibles

Modo de accin de los inhibidores suicidas

1 2 3
E+I EI EI* E + I*

1. El inhibidor se fija a la enzima igual que el substrato o un

inhibidor competitivo convencional

2. La accin cataltica de la enzima convierte al inhibidor I

en una especie altamente reactiva I*

3. I* modifica covalentemente a la enzima, inactivndola

de forma definitiva al igual que un inhibidor irreversible.
 INHIBIDORES SUICIDAS,
- SISTEMA DE LA b-LACTAMASA BACTERIANA

La utilizacin masiva de antibiticos b-lactmicos (penicilinas,

sus derivados semisintticos y cefalosporinas) ha conducido a
la aparicin de resistencias a los mismos.

Los microorganismos resistentes a estos antibiticos lo son por

producir una enzima, la b-lactamasa, que inactiva a los antibi-
ticos b-lactmicos.
Penicilina (activa)
S
R CO NH CH3
N CH3
O
COO-

b-Lactamasa

S
R CO NH CH3
O C HN CH3
O-
COO-
c.peniciloico (inactivo)
 Muy a menudo los preparados de penicilinas o penicilinas
semisintticas se formulan aadiendo un inhibidor suicida
de la b-lactamasa, el cido clavulnico

O CH2OH O
O
C b-Lactamasa C CH2OH
N H C
O- HN H
O
-
COO
COO-
c.clavulnico
Esta molcula
reacciona con la
O serina activa de la
O
C CH2OH b-lactamasa,
C
CH CH2 O HN produciendo su
H
Ser inactivacin
COO-
- SISTEMA DE LA MONOAMINO OXIDASA (MAO) CEREBRAL

Los estados depresivos, en general, estn relacionados con un

descenso en la concentracin de neurotransmisores adrenrgicos
(dopamina, noradrenalina, etc.) en determinadas regiones del
cerebro.

Una de las enzimas encargadas de la degradacin de estos

neurotransmisores es la monoamino oxidasa (EC 1.4.3.4).

Por tanto, la inhibicin de la monoamino oxidasa se emplea como

teraputica de los estados depresivos. Se han desarrollado muchos
inhibidores suicidas de la MAO
 Noradrenalina
HO

HO CHOH CH2 NH2

O2 + H2O

Monoamino
oxidasa
NH3 + H2O2 La MAO es una flavoprotena:
tiene un grupo prosttico
HO
flavnico (FAD) fundamental
para la catlisis. Los inhibidores
HO CHOH CHO suicidas de la MAO inactivan
al cofactor FAD.

Dihidroxifenilglicol
 O
N,N dimetil
H 3C N
NH propargilamina
(pargilina)
E S H 2C N N O
R
CH3
+
HC C CH N
Flavina CH3

H3 C
N+ CH CH
Inhibicin suicida de la H3 C CH O
MAO mediante Pargilina
H 3C N
NH

E S H 2C N NH O
R
Flavina modificada
CINETICA DE REACCIONES BIMOLECULARES

1 )Reaccion Secuencial o de Desplazamiento Simple

Azahar:

A +E AE

AE+B AEB

B+ E BE

BE + A BEA
2) ORDENADA

MALATO + NAD
M.D

OXALACETATO + NADH.

E-NAD-MALATO
1 2
2) REACCION DE DOBLE DESPLAZAMIENTO

ASPARTATO + OXOGLUTARATO

OXALACETATO + GLUTAMATO

1) Aspartato + PLP-E NH3- PLP-E +

Oxalacetato

2) Oxoglutarato + NH3 PLP-E + Glutamato

qu son las molculas
efectoras o moduladoras ?
Son molculas que pueden ser
activadores (+) o inhibidores (-) de la
velocidad cataltica.

No cambian la afinidad del enzima

por el sustrato.

Pueden ser el mismo sustrato

denominado HOMOTROPICO o es
otra sustancia al que se le conoce
como HETEROTROPICO
SI!!

PORQUE LOS E.A. PRESENTAN 2

LOCALIZACIONES DE UNION DE
LIGANDOS:
1.- Las catalticas (Centro Activo) a las
que se une el sustrato.
2.- Las reguladoras (Centro Alostrico)
a las que se unen las molculas
denominada efectores o moduladores.
ENZIMAS ALOSTERICAS

CA C.ALOST.

ENZIMA
 CINETICA SIGMOIDEA
La unin cooperativa de la primera
molcula de S o ligando a la Enzima
incrementa la velocidad de unin de
subsecuentes molculas de sustrato
a los otros sitios de unin:
cooperatividad positiva
 ENZIMAS ALOSTERICAS

Enzimas
susceptibles de
ser modificadas
por molculas
pequeas.
 ESTADO CONFORMACIONAL

Baja afinidad por el sustrato

Alta afinidad por el sustrato

 MODELOS DE INTERACCIONES ALOSTERICAS

MODELO CONCERTADO:

+S

RR

TT

RR
MODELO SECUENCIAL :

RT
TT +S

+S

RR