INGENIERIA GENTICA

Blgo Mblgo Mg.Sc. Hector Luis

Tamayo C.
 La clonacin: consiste en la obtencin de un clon, entendido como un
conjunto de elementos genticamente iguales entre si e iguales a su
precursor.

- Amplificacin de molculas de ADN por clonacin clular

-Amplificacin de molculas de ADN por clonacin acelular (PCR)

- Manipulacin gentica y clonacin de organismos pluricelulares (animales y plantas)

 Biotecnologa: utilizacin de los seres vivos o sus componentes para realizar
determinados procesos qumicos con fines industriales.

Biotecnologa clsica: uso de microorganismos no manipulados

genticamente.
(tal cual se encuentran en la naturaleza)

Biotecnologa moderna basada en aplicaciones de la ingeniera gentica:

organismos manipulados genticamente.

La ingeniera es el arte de aplicar los conocimientos cientficos a la invencin,

perfeccionamiento y utilizacin de la tcnica industrial en todas sus
dimensiones
 Ingeniera gentica: conjunto de procedimientos que
permiten modificar artificialmente el genoma de los seres
vivos / alteracin, intencionada, del genoma de un ser vivo.

Tecnologa del ADN recombinante: mtodos y tcnicas que se

aplican en IG
 Conceptos previos
ADN recombinante: es una molcula de ADN formada por la unin artificial de ADN
proveniente de dos organismos diferentes.

Clon: copia idntica.

- de una molcula
- de una clula
- de un organismo

O.G.M. (GMO): organismo genticamente modificado.

Secuenciacin: tcnica que permite conocer la secuencia de bases del ADN (o de aa de una
protena...)

PCR: reaccin en cadena de la polimerasa. Tcnica que permite aumentar el n de copias de

un fragmento de ADN.

Vectores: elementos genticos que sirven para introducir genes extraos en clulas
hospedadoras.

Enzimas de restriccin: enzimas endonucleasas que cortan el ADN en puntos concretos

(secuencias especficas).
Clula transformada: clula que contiene y expresa ADN forneo
Estrategias generales de un proceso de
clonacion
1. Aislamiento del ADN forneo
2. Unin del fragmento de ADN forneo a
un vector
3.Introduccin del vector-DNA forneo en
la clula hospedadora
4. Seleccin de los transformantes
5. Estabilidad de la informacin gentica
 3.1. Aislamiento y obtencin del gen:
A ) Proc: corte del ADN cromosmico con ER para obtener el gen o genes.
seleccin del gen a partir de una genoteca

Enzimas de restriccin = Tijeras moleculares

Las enzimas de restriccin se encuentran sobre todo en las bacterias y se les da nombres
abreviados basados en los nombres del gnero y especie de las bacterias a partir de las que se
aslan. Por ejemplo, una de las primeras enzimas de restriccin en ser aislada, EcoRI, se denomina
as porque se descubri en una cadena de E. coli llamada RY13
Vectores de clonacin y unin del fragmento
de ADN
1. Aislamiento del ADN forneo y del ADN vector

Cortar el ADN forneo y el vector con

las mismas enzimas de restriccin
Vectores de clonacion
Son vehculos de ADN para ADN, capaces
de recibir ADN forneo y replicarlo.
Caracteristica principal
Se replican de forma autnoma (origen de
replicacin)
 Tipos de vectores:
Plsmidos
Permiten insertar hasta 20 kb de ADN pero son ms eficaces
con insertos ms pequeos (<10kb).
Contienen genes de resistencia a antibiticos.

Virus
Permiten insertar 15-20 kb.
El sistema de infeccin del virus permite la entrada del ADN en
E. coli.
Los virus de cadena sencilla tienen aplicaciones especiales para
secuenciar y realizar mutagnesis.

Vectores hbridos: csmidos. Permiten insertar hasta 40 kb.

Formacin de ADN recombinante: unin ADN
forneo-vector
 Formacin del ADN recombinante

Gen que queremos clonar + vector = ADN Recombinante

Cortador con E.R. Cortador con E.R.

Enzimas: DNA ligasa

Insercin del vector de inters
PLSMIDOS

- ADN circular
- tamao menor que el del
cromosoma.
- origen de replicacin
Seleccin de vectores de clonacin
Vector de clonacin: pequea molcula de ADN en la que se inserta el gen que
queremos clonar que tienen capacidad para replicarse dentro de las clulas
hospedadoras de forma independiente (vehculo del gen).

Seleccin del vector:(tamao y caractersticas del gen).

Tipos de vectores:
1. Plsmidos
2. Bacterifagos.
3. Csmidos.
4. YACs (cromosomas artificiales de levadura).
5. Genomas de los virus modificados.
 Marcadores
Adems del origen de replicacin, los vectores de clonacin deben
llevar otros genes denominados marcadores, que sirven para
identificar las clulas que contienen el vector de clonacin.
Se suelen utilizar :

Genes de resistencia a antibiticos. (bacterias crecen en medios

con el al antibitico)

Genes de luminiscencia. (la clula que contenga el gen que se

quiere clonar, tendr la propiedad de emitir luz). Este sistema se
emplea cuando la clula hospedadora es una clula eucariota
 3. 4. Introduccin del ADNrec en la
clula hospedadora
Transduccin

Transformacin.
 Bacterifagos

(Ej. Fago lambda, fago M13)

Se inserta el gen deseado en un

fragmento de ADN vrico.

Posteriormente se ensamblarn las

distintas partes del virus.

As quedar el virus completo. En el

siguiente paso se insertar este ADN
por el proceso de la TRANSDUCCIN.
 Cosmidos
Son plsmidos que contienen
el fragmento de ADN deseado
que posee un extremo cos
(borde cohesivo procedente
del genoma del fago lambda)
y se empaqueta en el interior
de un fago.

Se construye el csmido
uniendo los tres elementos
gnicos, y el resultado final es
poder introducir en la clula
receptora fragmentos largos
de ADN.
 Genotecas
Genoteca: coleccin de clones que contiene todo el
genoma de un organismo.

Tipos de genotecas:
Genmicas
Parciales
ADNc. Coleccin de ARNm

Tipos de vectores:
Plsmidos (Genotecas parciales)
Fagos (Genotecas genmicas pequeas y de ADNc)
Csmidos, BAC (genotecas genmicas complejas)
 O bibliotecas genicas
Muchas estrategias de clonacin comienzan
preparando una biblioteca de DNA. Las bibliotecas son
colecciones de fragmentos de DNA clonados de un
organismo particular contenidos dentro de bacterias o
virus como hospedadores.
Las bibliotecas pueden almacenarse durante perodos
relativamente largos de tiempo y rastrearse para
elegir diversos genes de inters. Se suelen utilizar dos
tipos de bibliotecas para la clonacin:
las bibliotecas de DNA genmico y las bibliotecas de
DNA complementario (bibliotecas de cDNA)
 PCR
La reaccin en cadena de la polimerasa (PCR), es una
tcnica que permite amplificar entre cientos de miles y
millones de veces, en el transcurrir de pocas horas e in
vitro, pequeas cantidades de ADN.

Es un mtodo alternativo a la clonacin muy rpido y

eficaz

Por su alta sensibilidad, esta tcnica permite

identificar un gen a partir de un solo cabello, una clula
somtica o un espermatozoide.
PCR
Es un proceso cclico
(cada ciclo consta de 3 pasos)

94C desnaturalizacin (separacin

de las dos hebras de ADN)

50C Anillamiento de "cebadores"

72C copia de cada una de las

hebras de ADN por la ADN
polimerasa
 APLICACIONES DE LA PCR

Secuenciacin
Una de las razones mas comunes para el uso de la PCR es la formacin de
suficiente cantidad de ADN molde para su secuenciacin. Es mucho mas
sencillo y rapido que la clonacin en clulas.

Estudios evolutivos
Mediante la PCR se pueden amplificar genes de organismos ya extinguidos,
como del mamut, o restos antiguos humanos. Se pueden comparar estos
genes con los genes semejantes de organismos actuales y poder reconstruir
rboles filogenticos.
El PCR tambin se ha utilizado para conseguir el mapa del genoma humano.

Huellas dactilares del ADN.

La determinacin de las huellas dactilares genticas constituye una de las
aplicaciones mas interesantes de la PCR.
Mediante esta tcnica es posible comparar muestras diferentes de ADN para
comprobar si pertenecen al mismo individuo o no, o si existe parentesco entre
ellas.
Esta tcnica se aplica actualmente en Medicina forense e investigaciones
policiales, con el fin de identificar indiividuos a partir de muestras biolgicas,
como sangre, semen, piel o cabellos. Tambin se utiliza en las pruebas de
paternidad.
 Mutaciones
Las mutaciones son errores en la copia del ADN,
producidos:
Al azar
Inducidos por agentes mutagnicos:
Factores fsicos: rayos X
Sustancias qumicas: como sustancias que hay en el tabaco
Las mutaciones pueden afectar:
A 1 gen (gnicas): es un error al copiar el ADN. Es la
causa de que aparezcan alelos diferentes para 1 gen
(aumentan la diversidad)
A 1 cromosoma (cromosmicas): es un error al
repartirse los cromosomas en la mitosis o meiosis (ms
importante porque forma clulas reproductoras)
 Una mutacin puede resultar:
Favorable: facilita la supervivencia y deja ms
descendencia.
Neutra: ni beneficia ni perjudica la descendencia (pero
permanece en la poblacin)
Desfavorable: los individuos que la tienen presentan
problemas para sobrevivir
Si el medio cambia, lo que es desfavorable puede
llegar a ser favorable (o viceversa). Por ej la anemia
falciforme en lugares donde hay malaria (y ver diapositiva siguiente)

Adems de las mutaciones hay otra forma de

aumentar la diversidad Cul?
 http://portalacademico.cch.unam.mx/alumno
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combinante/ejercicio4
Preguntas examen