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Inmunologacap6
PabLo Hernndez Castillo pate2
Grupo 3-2
Radioinmunoensayo

1
3 1960 S.A. Berson y Rosalyn Yalow

2 1977 Premio Nobel

3 Unin Competitiva

4 Isotopo emisor de partculas gamma y beta

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 La primera etapa para llevar a
cabo un RIA es:
Determinar la cantidad de antgeno
necesaria para unir de un 50 a 70 % la
cantidad fija de un Ag*.

Para determinar la cantidad de Ag marcado

unida, el complejo Ag-Ab se precipita para
separarlo del Ag librese mide la
radiactividad y puede generarse una curva
estndar. LOGO
 Antisuero Antiisotipo secundario

Protena A Staphylococus Areus

Mtodos
Para RIA de fase solida

Separar Ab a cuentas de Sepharose

Ag
Inmovilizacin de Ab (fosos)

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 Ensayo de Inmunosorbente
ligado a enzima

ELISA Indirecto

ELISA en Sndwich ELISA (EIA)

ELISA Competitivo

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 Quimioluminiscencia

Sustrato Limite de
Medicion Deteccin
ELISA Luxgeno
aumenta

Luminol + H2O2
Ab-HRP + Ag Ab-HRP-Ag Luz

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Prueba ELISPOT

Modificacin de la prueba
ELISA,

Placas se recubren con

Ag-captura AB-captura.

El revelado Ulterior del ensayo

por la adicin de un sustrato
Cromgeno o Luxgeno

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Prueba ELISPOT

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 Western Blotting

Tambin se utiliza para detectar

Abprueba de confirmacin Identificacin de una protena en
VIH Una mezcla compleja.

Ab-Radiomarcado/Rayos X Western La mezcla se separa por

Ab-ligado a enzima
/sustratos Blotting Medios
Electroforticos

Gel de SDS-policrilamida
Complejos pueden
Visualizarse por varios
Mtodos.
Membrana nitrocelulosa
Bandas sumergidas en
Ab-mono, policlonales LOGO
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 Inmunoprecipitacin
Permite el aislamiento
Del Ag para anlisis
Mas amplios

Extracto obtenido
por rotura
De clulas o de un tejido
Se mezcla con Ab para
Formar complejo
Ag-Ab
Si la concentracin de
Ag es baja
el ensamblaje
Puede requerir
horas o das

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Evitar limitaciones:
Apoyo solido: cuenta
sinttica
Anticuerpo
especifico secundario
Acoplamiento de
cuentas magnticas

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 En conjunto con marcador biosinttico con
radioistopo , permite detectar si una clula o
tejido esta sintetizando un Ag particular.
Radiomarcado de protenasa. a
radiomarcados
Complejo se limpia
Contador de centelleo
Anlisis adicional con SDS, CALOR
Confirmar identidad de Ag marcado

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 Inmunofluorescencia

En 1944 Albert Coons

Las molculas absorben luz y emiten a dif. Long de onda
Fluorocromo
Fluoresceina,rodamina y Ficoeritrina
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 Citometra de flujo y
fluorescencia
Las tcnicas de Ab fluorescentes son
instrumentos cualitativos extremadamente
valiosos
Citmetro de Flujo
Automatizar el anlisis y separacin de clulas
Rayo laser y detector de luz
Forma sencilla y mas complicadas

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 Uso Clnico
Cuntas clulas expresan el antgeno blanco
como un numero absoluto y tambin como
porcentaje de clulas que pasan por el haz?
Distribucin de las clulas en la poblacin de
una muestra conforme a las densidades por la
intensidad de la fluorescencia
Tamao de las clulas

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 Citometra puede analizar poblaciones celulares
con dos o incluso tres anticuerpos fluorescentes
Ocupa una posicin fundamental en la
inmunologa, biologa celular, y un recurso
clnico indispensable

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 Alternativas de las reacciones
de antgeno-anticuerpo

Como defensa contra los anticuerpos de un

hospedador las bacterias desarrollan la capacidad
de elaborar protenas que se unen a la regin Fc de
las moL. IgG:

Protena A, de Staphylococcus aureus

Protena G estreptococos de los grupos C y G

La clonacin de los genes para las protenas G

y C generacin de un hibrido, protena
recombinante, prot. A/G

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 Microscopia Inmunoelectrnica
Observar componentes tisulares intracelulares
especficos.

Un marcador electrodenso se conjuga con la

porcin Fc de un Ab, para tincin directa o con
un reactivo antiinmunoglobulina.
Marcadores como Ferritina y oro coloidal .

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Bibliografa
Inmunologa de Kuby 6ta Edicin