Biosensores

Instrumentos analticos que transforman procesos

biolgicos en seales elctricas u pticas y permiten su
cuantificacin
 BIOSENSORES
Utilizan la especificidad de los procesos biolgicos:
Enzimas x Sustratos
Anticuerpos x Antgenos
Lectinas x Carbohidratos
Complementariedad de cidos nucleicos.
Ventajas:
Reutilizacin
Menor manipulacin
Menor tiempo de ensayo
Repetitividad
Tipos y usos mas comercializados:
1. Tiras colorimtricas
2. Electroqumicos:
Potenciomtricos: Glucosa, Lactato, Glicerol,
Alcohol, Lactosa, L-aminocidos, Colesterol
Amperomtricos: Glucosa, Sacarosa, Alcohol
3. pticos: BIAcore: Ag proteicos.
Propiedades de un buen Biosensor
 BIOSENSORES
1. Control de metabolitos crticos durante las operaciones quirrgicas.
2. Consultas y Urgencias Hospitalarias:
Obvia anlisis caros y lentos en laboratorios centrales
Acelera la diagnosis y el comienzo del tratamiento
Menor riesgo de deterioro de la muestra
3. Diagnstico Domstico:
Ensayos de Embarazos
Control de Glucosa en diabticos
4. Aplicaciones in vivo:
Pncreas artificial
Correccin de niveles de metabolitos
Problemas : Miniaturizacin y Biocompatibilidad
5. Aplicaciones Industriales, militares y medio ambientales:
Alimentacin
Cosmtica
Control de Fermentaciones
Controles de Calidad
Deteccin de Explosivos
Deteccin de gases nerviosos y/o toxinas biolgicas
Control de polucin.
 TIPOS DE BIOSENSORES
1. BIOSENSORES ELECTROQUMICOS
Amperomtricos: Determinan corrientes elctricas asociadas con los
electrones involucrados en procesos redox
Potenciomtricos: Usan electrodos selectivos para ciertos iones
Conductimtricos: Determinan cambios en la conductancia asociados
con cambios en el ambiente inico de las soluciones
2. BIOSENSORES TERMOMTRICOS
3. BIOSENSORES PIEZOELCTRICOS
4. BIOSENSORES PTICOS
De onda envanescente
Resonancia de plasma superficial
5. BIOSENSORES CELULARES
6. INMUNOSENSORES
UNIDADES FUNCIONALES
DE UN BIOSENSOR
 Material biolgico + Analito Analito unido Respuesta biolgica

Respuesta Electrnica

Respuesta (Mxima respuesta electrnica posible) x (Concentracin del analito)

electrnica =
(Constante de semisaturacin) + (Concentracin del analito)
Cinticas de reaccin en biosensores
 TIPOS DE BIOSENSORES
1. BIOSENSORES ELECTROQUMICOS
Amperomtricos: Determinan corrientes elctricas asociadas con los
electrones involucrados en procesos redox
Potenciomtricos: Usan electrodos selectivos para ciertos iones
Conductimtricos: Determinan cambios en la conductancia asociados
con cambios en el ambiente inico de las soluciones
2. BIOSENSORES TERMOMTRICOS
3. BIOSENSORES PIEZOELCTRICOS
4. BIOSENSORES PTICOS
De onda envanescente
Resonancia de plasma superficial
5. BIOSENSORES CELULARES
6. INMUNOSENSORES
Biosensores Electroqumicos
Amperomtricos:
El electrodo de Oxgeno
Electrodo de Oxgeno
Electrodo de Oxgeno

(A) Disco de resina epoxy

(B) Ctodo de platino en el centro de un saliente.
(C) nodo de plata en forma circular
(D) Anillo de goma que sostiene un papel
espaciador empapado en un electrolito y una
membrana de polytetrafluoroethylene que separa
los electrodos de la mezcla de reaccin.
DETERMINACION DE GLUCOSA
DETERMINACION DE GLUCOSA
DETERMINACION DE SACAROSA
Invertasa Glucosa-oxidasa
Glucosa
Electrodo

Sacarosa

flujo
O2
Fructosa
Glucosa

D-gluconolactona
respuesta H2O2

glucosa
sacarosa

tiempo
 DETERMINACION DE
LA FRESCURA DEL PESCADO

Tras la muerte, los nucletidos del pescado sufren una serie de

reacciones de degradacin progresiva:

ATP > ADP > AMP > IMP > HxR > Hx > Xantina > Acido rico
 DETERMINACION DE
LA FRESCURA DEL PESCADO
BIOSENSOR:
xantina-oxidasa y nuclesdio fosforilasa inmovilizadas sobre
una membrana de triacilcelulosa de un electrodo de Oxgeno.

K < 20 El pescado puede ser comido crudo.

20 > K < 40 El pescado debe ser cocinado.
K > 40 Pescado no apto para el consumo

Los nucletidos se podran determinar utilizando el mismo electrodo y

muestra, pero aadiendo nucleotidasa y adenosn-deaminasa
Varios mecanismos redox
 Mediadores
redox en
biosensores
amperomtricos
 Miniaturizacin
Posible por la capacidad
del pirrol para
polimerizar mediante
oxidaciones
electroqumicas en
condiciones
suficientemente suaves
como para atrapar
enzimas y mediadores
sin desnaturalizarlos
 Microelectrodo glucosa/lactato
Se puede recubrir la superficie de pequeos electrodos polimerizando
pirroles junto con biocatalizadores y mediadores, utilizando mtodos de
micro fabricacin de microprocesadores, en incluso disponiendo varios
sensores en los mismos
 Biosensores Electroqumicos
Potenciomtricos

Determinan cambios en la concentracin de iones concretos

Biosensores potenciomtricos
Biosensor potenciomtrico
 Biosensores Electroqumicos
Conductimtricos

Detectan cambios en conductividad elctrica

causados por alteraciones en la concentracin de
iones
 Sensor de Urea
NH2CONH2 +3H2O

Ureasa

2HN 4 + + HCO3- + OH-

Otros ejemplos:
amidasas,
decarboxilasas,
esterasas,
fosfatasas y
nucleasas.
Biosensores Termomtricos:
Sensores bioqumicos y TELISA
 Biosensor
termomtrico

Precisa un aislamiento Correcto

Puede detectar diferencias de 0,0001 C
Reacciones usadas en biosensores
termomtricos
 Biosensores Termomtricos
1) Poco xito comercial
2) Ventaja: se puede acoplar fcilmente varias reacciones en un
nico reactor
3) Ejemplo:
1) Detector de Lactato
Lactato + O2------(lactato -oxidasa)---> piruvato + H2O
Piruvato + NADH+ H+--(lactato deshidrogenasa)--> lactato + NAD+
4) Puede utilizarse clulas viables
5) Puede acoplarse a un inmunoensayo enzimtico: ELISA
termomtrico o TELISA
Biosensores Piezoelctricos:
Narices bioelectrnicas
Aprovechan las propiedades elctricas de los cristales:
- En transmisores y emisores de radio
- En transistores
- En chips
 Efecto Piezoelctrico
Produccin de un campo elctrico por
separacin de las cargas positivas y
negativas en algunos tipos de cristales al
someterlos a ciertas tensiones
1) Si un cristal piezoelctrico se somete a un campo
elctrico se deformar.
2) Si un cristal piezoelctrico se somete a un campo
elctrico que oscila a una frecuencia determinada
vibrar con una frecuencia caracterstica.
 Efecto Piezoelctrico
1) La frecuencia de resonancia se encuentra en el
rango de los 10 MHz (radiofrecuencia).
2) La frecuencia de resonancia depende de:
La composicin del cristal
El Grosor
La forma en que fue cortado
3) Un cristal piezoelctrico vara su frecuencia de
resonancia cuando se adhieren molculas a su
superficie.
 Biosensores Piezoelctricos
1) Se detectan variaciones muy pequeas en la
frecuencia de resonancia: cantidades de hasta un
ngr/cm2
2) La medida se compra con un electrodo de
referencia con cristal sin material biolgico.
3) Ejemplos:
1) Detectores gaseosos: SO2, CO, HCl, NH3, CO2
2) Detector de Cocaina
3) Detector de Formaldehido
4) Detector de Pesticidas (Organofosforados)
 Biosensores Piezoelctricos
1) Detector de Cocana:
Anticuerpos contra cocana fijados
sobre un cristal piezoelctrico.
Detecta una parte por billn
50 MHz de cambio en la frecuencia de
resonancia.
Se limpia en segundos por aireacin.
 Biosensores Piezoelctricos
2) Detector de Formaldehido:

CH2 +H2O +NAD+ g NADH +HC02H + H2

Catalizada por la formaldehido deshidrogenasa

inmovilizada con glutation (cofactor) por
entrecruzamiento con glutaraldehido en un
cristal de cuarzo a 9 MHz
 Biosensores Piezoelctricos

3) Detector de Pesticidas Organofosforados:

Colinesterasa inmovilizada en un cristal

de cuarzo mediante glutaraldehido.
 Biosensores Piezoelctricos

Inconvenientes:
Muy influidos por la humedad.
Baja = poco sensibles
Alta = desaparece el efecto piezoelectrico
Inutilizables en lquidos.
Introducir y secar
 Biosensores pticos:

Permiten el uso de materiales detectores no

elctricos, seguros en ambientes peligrosos
o sensibles (in vivo)
No precisan sensores de referencia
Biosensor de
fibra ptica
para lactato
Detecta cambios en la en
la concentracin de
oxgeno determinando la
reduccin de la
fluorescencia de un
fluorocromo (quenching)
 Biosensor de clula ptica para
albmina srica

Detecta la absorcin de luz a

630 nm que pasa a travs de la
clula detectora.
Se evala el cambio de
amarillo a azul verdoso del verde
de bromocresol cuando se une a
la albmina srica a pH 3.8
Respuesta lineal a la albmina
en un intervalo de 5 a 35 mg/cm3
 Biosensores pticos
1) Deteccin de Vapores:
Ensayo slido colorimtrico que detecta vapor de
alcohol utilizando alcohol-oxidasa, peroxidasa y 2,6-
diclorindofenol slidos dispersados sobre placas de TLC
(cromatografa en capa fina) de celulosa microcristalina
transparente.
2) Tiras colorimtricas de un solo uso:
Los ms utilizados: anlisis de sangre y orina.
Control de la glucemia en diabticos
- Glucosa oxidasa, peroxidasa de rbano y un
cromgeno que cambia el color al ser oxidado

Cromgeno (2H) + H2O2----(peroxidasa)--->colorante + 2H2O

 Biosensores pticos
3) Reacciones luminiscentes:
Utilizacin de luciferasa
Detecta la presencia de microorganismos en orina al
liberar ATP en su destruccin

Luciferina + ATP----(luciferasa)---> oxiluciferina + CO2 + AMP + ppi + luz

 Biosensores pticos de onda evanescente

Menor ndice de refraccin >

Mayor ndice de refraccin >

Un haz de luz ser reflejado en su totalidad cuando incida

sobre una superficie transparente presente entre dos medios,
cuando proceda del medio con mayor ndice de refraccin y
cuando el ngulo de incidencia sea mayor que un valor critico
 Biosensores pticos de onda evanescente

Menor ndice de refraccin >

Mayor ndice de refraccin >

En el punto donde se produce la reflexin, se induce un campo

electromagntico que penetra en el medio que tiene menor
ndice de refraccin
Este campo es denominado onda evanescente y decae
exponencialmente con la distancia de penetracin,
desapareciendo tras unos pocos nanmetros
 Biosensores pticos de onda evanescente

Menor ndice de refraccin >

Mayor ndice de refraccin >

La onda evanescente decae exponencialmente con la distancia

de penetracin, desapareciendo tras unos pocos nanmetros
La profundidad a la que penetra depende del ndice de
refraccin, de la longitud de onda de la luz utilizada y puede ser
controlada con el ngulo de incidencia.
 Biosensores pticos de onda evanescente

Menor ndice de refraccin >

Mayor ndice de refraccin >

La onda evanescente puede interaccionar a su vez con el

medio, provocando un campo electromagntico que puede
volver al medio con mayor ndice de refraccin, dando lugar a
cambios en la luz que contina a lo largo de la gua de ondas.
 Inmunosensor de onda evanescente
Especialmente indicados para
inmunoensayos:
No es necesario separar el resto
de los componentes de una muestra
clnica
La onda solo penetra hasta el
complejo antgeno anticuerpo
Se excitan fluorocromos unidos a
la superficie mediante la onda
evanescente, y la luz emitida por
ellos volver a la fibra ptica
La cantidad de muestra necesaria
es mnima
 Resonancia de plasma superficial

Si la superficie del cristal est recubierta por una capa metlica

(oro, plata, paladio) los electrones de su superficie pueden
oscilar en resonancia con los fotones generando un onda de
plasma superficial y amplificando el campo evanescente en la
cara mas alejada del metal
 Resonancia de plasma superficial

Si la capa de metal es lo suficientemente delgada como para

permitir al campo evanescente penetrar hasta la superficie
opuesta, el efecto ser muy dependiente del medio adyacente al
metal
 Resonancia de plasma superficial

Este fenmeno sucede slo cuando la luz incide con un ngulo

especfico, el cual depende de la frecuencia, el grosor de la capa
metlica y el ndice de refraccin del medio que se encuentra
inmediatamente sobre la superficie metlica
 Resonancia de plasma superficial

La produccin de esta resonancia de plasma superficial

absorbe parte de la energa de la luz reduciendo la intensidad de
la luz reflejada internamente
 Resonancia de plasma superficial

Los cambios que suceden en el medio provocados por

interacciones biolgicas pueden ser apreciados detectando los
cambios de intensidad de la luz reflejada o el ngulo de
resonancia
 Cambio en la absorcin por
efecto de la resonancia de plasma
superficial
Deteccin de la
gonadotropina
corinica humana
(hCG) mediante un
anticuerpo unido a
la superficie del
biosensor:
La unin cause un
cambio en el
ngulo de
resonancia
 Resonancia de plasma superficial

Permiten detectar partes por milln

Un anlisis tpico requiere 50l de muestra y tarda 5 a 10 minutos
Puede utilizarse con DNA y RNA.
Biosensores celulares
Inmunosensores
 Tipos de
inmunosensores