TEMA 6.

RECONOCIMIENTO
DE ESTRUCTURAS
BACTERIANAS MEDIANTE
TINCIONES SELECTIVAS
2ENFERMERA
MICROBIOLOGA Y PARASITOLOGA
PROF. PATRICIA NARBN


Tinciones selectivas

Las tinciones selectivas nos permiten observar estructuras de las
clulas gracias a su mayor afinidad por los colorantes utilizados
Se pueden observar estructuras como la pared celular, cpsula,
flagelos, material nuclear, e inclusiones como depsitos de
materiales de reserva de poli--hidroxibutirato, glucgeno y
grnulos metacromticos.
Observacin de esporas
Algunas bacterias son capaces de desarrollar formas de
resistencia denominadas esporas como mecanismo de defensa a
agresiones ambientales. Son estructuras de pared gruesa en las
que el microorganismo logra soportar las condiciones
desfavorables de calor, desecacin, acidez, etc. Cuando las
condiciones ambientales vuelven a ser favorables las esporas
"germinan" y vuelven a generarse formas vegetativas.
Las endosporas son impermeables a los colorantes, por lo que
cuando se hace una tincin, se observan al microscopio como
cuerpos altamente refringentes y sin teir. Sin embargo, las
endosporas se pueden teir aplicando calor a la preparacin
previamente cubierta con una solucin de colorante que en la
tcnica de Shaeffer y Fulton es el verde de malaquita. El lavado
con agua elimina este colorante de las clulas vegetativas y la
aplicacin de un colorante de contraste permitir distinguir
claramente a las esporas de color verde.
La deteccin de esporas debe realizarse en cultivos con
condiciones estresantes para la clula. Suelen utilizarse
cultivos viejos en los que la escasez de nutrientes provoca
la esporulacin de las bacterias.
La presencia de esporas en el mbito clnico nos dirige
hacia los gneros Clostridium y Bacillus. Algunas esporas se
desarrollan sin deformar a la clula vegetativa. Otras si lo
hacen y generan segn la disposicin formas centrales o
terminales (palillo de tambor). La posicin relativa y la
morfologa de la espora constituyen caracteres taxonmicos
en las especies de ambos gneros.

POSICIN DE ENDOSPORAS EN LAS BACTERIAS
terminal
subterminal
central
Bacillus
Observacin de cpsula

Algunas bacterias presentan una capa externa a la
pared denominada cpsula. Est compuesta de
azcares y protenas. No es una estructura vital para
la bacteria, de modo que es posible que bajo
determinadas condiciones ambientales o del propio
desarrollo genere cpsula y bajo otras no lo haga. Se
ha comprobado que la presencia de cpsula dificulta
de algn modo la fagocitosis de las bacterias, es decir
las cpsulas constituyen un factor de virulencia de los
microorganismos.

La tincin de cpsula se denomina tincin negativa
porque tie el fondo de la preparacin y no el
microorganismo. Desde el punto de vista formal no
es una tincin propiamente dicha, porque no fija los
microorganismos. Se parece ms a una preparacin
en fresco. Su realizacin consiste en colocar la
muestra hmeda sobre el porta objetos y
mezclarla con tinta china. La tinta cubre toda la
preparacin a excepcin de las cpsulas. En el
microscopio se observa el fondo negro y los
microorganismos con cpsula sin color.

Mtodo de la tinta china para cpsula

1.-En el centro de un
portaobjetos se coloca una gota
de agua, otra de tinta china y un
poco del cultivo de una cepa
capsulada. Se mezcla
suavemente sin extender.
2.-Se coloca un cubreobjetos
sobre la suspensin y se presiona
suavemente evitando que queden
burbujas.
3.-Observar inmediatamente al
microscopio.
4.-Desechar la preparacin en un
recipiente con antisptico.
La cpsula se observa como una
gran estructura alrededor de la
clula delimitada por los
pequeos fragmentos de carbn
de la tinta china.
TINCIN FLAGELOS
Los flagelos pueden ser teidos, pero
debido a su dimetro tan pequeo, se
requieren tcnicas especiales.

1. Hacer un crculo en un portaobjetos perfectamente
limpio para lo cual previamente fue sumergido en mezcla
crmica durante 24 horas, lavado posteriormente con agua
destilada, enjuagado con alcohol y secado con un trozo de
tela limpio. Desengrasarlo pasando por una flama varias
veces.
2. Colocar dentro del crculo con pipeta Pasteur, una gotita
de la suspensin bacteriana e inclinar el portaobjetos de
uno y otro lado para extender la muestra.
3. Fijar la preparacin al aire ya que si esta operacin se
hace usando la flama del mechero se pueden destruir los
flagelos.

4. Humedecer la preparacin con el Colorante de Leifson y
dejarla en reposo a temperatura ambiente durante 10
minutos en tiempo caluroso o en la incubadora.
5. Lavar con agua corriente.
6. Secar y observar con objetivo de inmersin.
INTERPRETACION:
Los flagelos se tien bien de color rojo en aquellas
bacterias que no presentan flagelos extremadamente
delicados.



Otras tcnicas de tincin

Colorante primario. Para-rosa anilina.
Mordiente. Acido tnico
Colorante de contraste. Azul de metileno
Vibrio cholerae
Proteus sp.