“AÑO DEL BICENTENARIO, DE LA CONSOLIDACIÓN DE
NUESTRA INDEPENDENCIA, Y DE LA CONMEMORACIÓN DE
LAS HEROICAS BATALLAS DE JUNÍN Y AYACUCHO”
DETECCIÓN DE BACTERIAS GRAM
ASIGNATURA: MICROBIOLOGÍA
LABORATORIO: TINCIÓN GRAM
DOCENTE: KENY PIERSON, HUAYANAY OSTOS
INTEGRANTES:
- GINO GONZALO. BLANCO CONDOR
- JHOSSARET JHAHAIRA, HINOSTROZA CRUZ
- EINER ABEL, MARCA DELGADILLLO
- HANS ENRIQUE, POICON SOTO
- JOHAN ANTHONY, TORRES QUISPE
HUANCAYO-2024
INTRODUCCIÓN
Las bacterias son organismos unicelulares procariontes, esto quiere decir que están
formados por una sola célula carente de núcleo. Su ácido desoxirribonucleico (ADN)
se encuentra libre en el citoplasma y no tienen organelos, como las mitocondrias,
cloroplastos o aparato de Golgi. A pesar de su sencilla organización celular, cuentan
con una pared celular (una capa de polisacáridos) que envuelve la célula
proporcionándole rigidez y protección. Son tan pequeñas que es imposible verlas a
simple vista, solamente cuando llegan a agruparse formando colonias es cuando las
podemos reconocer. Cuentan con una pared celular, cuando las condiciones
ambientales se tornan hostiles muchas bacterias forman en su interior estructuras de
protección llamadas endosporas, las cuales contienen el material genético y las
sustancias necesarias para poder sobrevivir. Algunas son tan resistentes que
permiten a la bacteria sobrevivir a altas temperaturas e incluso a largos periodos de
tiempo.
Se reproducen asexualmente por medio de una forma de división celular denominada
fisión binaria, que produce copias genéticamente idénticas a la célula original. En
condiciones ideales, algunas bacterias se duplican en cuestión de minutos por lo que
podrían en principio, dar origen a una población de millones de bacterias en poco
tiempo. Para poder identificar más fácilmente a las bacterias, se utiliza una tinción
diferencial, llama tinción de Gram, en la que utiliza dos colorantes y clasifica a las
bacterias en dos grandes grupos: bacterias Gram negativas y bacterias Gram
positivas. Es una de las tinciones más utilizadas universalmente debido a lo
económico, sencillo y eficaz que resulta. Los principios de la tinción de Gram están
basados en las características de la pared celular de las bacterias, la cual le confiere
propiedades determinantes a cada microorganismo.
CONTEXTO
En la práctica número dos de laboratorio trabajamos con la tinción de Gram, la cuál
es una técnica que nos permitió identificar las bacterias por su color y forma para
determinar qué tipo de bacteria es, por ello se divide en dos tipos de bacterias los
cuales son Gram Positivo que cuenta con una pared celular gruesa construida por
peptidoglicano, pero que no cuentan con membrana celular externa. Las bacterias G+
retienen el cristal violeta después de la decoloración y aparecen de color azul intenso.
El Gram Negativo está constituido por una capa fina de peptidoglicano y una
membrana celular externa, cuyo componente estructural único son los
lipopolisacáridos. Las bacterias G- no son capaces de retener el cristal - violeta
después de la decoloración y son teñidas de rojo con safranina.
En este laboratorio en mi grupo realizamos la tinción de las bacterias como proteus
vulgaris, Salmonella typhi, klebsiela neumonea y Pseudomonas aeruginosa, para
luego ser observadas a través del microscopio de las cuales pudimos identificar si
pertenecen al Gram+ o Gram- Los resultados obtenidos nos permitirán comprender la
importancia de esta técnica para la identificación bacteriana y su aplicación en el
diagnóstico microbiológico.
OBJETIVOS
OBJETIVO GENERAL:
● Dominar la técnica de tinción de Gram para identificar y diferenciar bacterias
Gram positivas y Gram negativas.
● Aprender a diferenciar entre microorganismos: Gram positivos y Gram
negativos.
OBJETIVOS ESPECÍFICOS:
● Conocer la estructura de la pared celular de las bacterias Gram-positivas y
Gram-negativas, y cómo esta estructura determina la respuesta a la tinción.
● Comprender el mecanismo de acción de cada reactivo utilizado en la tinción
de Gram (cristal violeta, lugol, alcohol-acetona, safranina) y su papel en la
diferenciación de las bacterias.
● Identificar y describir las características morfológicas de las bacterias Gram-
positivas y Gram-negativas observadas en los frotis teñidos.
● Analizar y comparar los resultados obtenidos con diferentes cepas bacterianas,
observando las variaciones en la tinción.
● Evaluar la importancia de la tinción de Gram en el diagnóstico microbiológico
y en la investigación de infecciones bacterianas.
JUSTIFICACIÓN
La tinción de Gram constituye una práctica esencial en la formación microbiológica
universitaria, al integrar tanto conocimientos teóricos como habilidades técnicas de
laboratorio. Esta técnica diferencial permite clasificar bacterias en Gram positivas y
Gram negativas, en función de la estructura de su pared celular, aportando así una
herramienta diagnóstica rápida y económica de amplio uso en microbiología y
medicina. La práctica en laboratorio no solo nos introduce en los protocolos de
identificación bacteriana, sino que también profundiza en el análisis de los reactivos y
condiciones que determinan los resultados de la tinción.
El aprendizaje y aplicación de esta técnica contribuyen al desarrollo de competencias
críticas en el manejo de instrumentos de laboratorio y en la interpretación de datos
microbiológicos, esenciales para la futura participación en investigaciones o en
diagnósticos clínicos. Al dominar el proceso, los estudiantes también adquieren
habilidades de precisión y rigurosidad científica, fundamentales para el avance en
estudios de resistencia antimicrobiana y en el control de infecciones bacterianas.
Esta práctica de tinción, además, nos prepara para enfrentar situaciones reales en las
que se requiere identificar bacterias patógenas de manera rápida y efectiva, lo cual
es vital en el contexto de la salud pública y la investigación aplicada. La comprensión
y aplicación de la tinción de Gram fortalecen así su formación como futuros
profesionales de las ciencias de la salud y del ambiente, brindándoles una herramienta
metodológica de relevancia tanto en el diagnóstico microbiológico como en
investigaciones científicas avanzadas.
MATERIALES
A) MATERIALES DE VIDRIO
● Soporte para tinción: Es un dispositivo utilizado en laboratorio para sostener
o fijar las muestras de tejido o microorganismos mientras se realiza un proceso
de tinción.
● Láminas portaobjetos: Son pequeñas placas delgadas, generalmente de
vidrio, en las cuales se colocan las muestras que se van a observar al
microscopio.
● Asas de nicromo de bacteriología: Son herramientas utilizadas en
microbiología para tomar muestras de microorganismos o cultivos. Están
hechas de un alambre de nicromo, que tiene una alta resistencia al calor y no
se oxida fácilmente.
● Placa Petri: Es un recipiente plano y redondo, generalmente de vidrio o
plástico, utilizado en microbiología para cultivar microorganismos.
B) REACTIVOS
● Cristal violeta: Es el colorante primario, tiñe todas las células.
● Solución de (lugol/yodo-yoduro): Es el mordiente, el cual se une al cristal violeta
en la célula y forma un complejo de cristal violeta-yoduro.
● Acetona/etanol (50:50 v:v): Es el agente decolorante, lava el colorante primario
de las bacterias que son incapaces de retener el colorante.
● Solución de Safranina: Es el colorante de contraste, se tiñen las bacterias
decoloradas (Gram negativa)
● Alcohol 96º: Es una solución de alcohol etílico (etanol) al 96%, utilizada en
laboratorios para la desinfección y esterilización de equipos, superficies o como
parte de ciertos procesos de tinción.
● Agua destilada: Es agua que ha sido purificada mediante un proceso de
destilación, eliminando impurezas, minerales y microorganismos.
C) OTROS
● Mechero Bunsen o de alcohol: Es un dispositivo utilizado en laboratorios para
generar una llama controlada, que se utiliza para calentar, esterilizar o
realizar diversas reacciones químicas.
D) ÓPTICO
● Microscopio óptico: Utilizado para observar objetos pequeños que no son
visibles a simple vista. Utiliza lentes ópticas para magnificar la imagen de la
muestra.
MÉTODOS
1. Limpiar el porta objetos con gasas y encender el mechero. Colocar una gota
de solución salina sobre el portaobjetos y luego esterilizar el asa bacteriológica.
2. Siempre que “destapemos” una placa con colonias, deberá hacerse en
condiciones de esterilidad. Para conseguir estas condiciones podemos utilizar
un mechero Bunsen o un mechero de alcohol. Con el mechero, conseguiremos
que se forme un ambiente de esterilidad alrededor de la llama, por lo tanto, si
trabajamos cerca del mechero, tendremos un ambiente estéril.
3. A la hora de comenzar con la tinción, lo primero que realizamos es coger con
el asa de nicromo previamente esterilizado, una colonia del microorganismo
asignado, para ello añadimos una gota pequeña de agua destilada y las
extendemos sobre el portaobjeto con el agua destilada.
4. Una vez extendido, se vuelve a esterilizar el asa, ya que todo material debe ser
esterilizado antes de volver a ser guardado.
5. A partir de este punto se tuvo que teñir nuestra siembra de microorganismos
en el portaobjeto, con diferentes tipos de tinciones para poder visualizar cada
microorganismo en el microscopio.
6. Se utilizaron diferentes reactivos para la tinción:
* PRIMERO: El cristal violeta que es el colorante primario y tiñe todas las células, el
cual se aplicó por el lapso de 60 segundos y posteriormente enjuagado con agua
destilada.
* SEGUNDO: El lugol que es el mordiente, el cual se une al cristal violeta en la célula
y forma un complejo de cristal violeta-yoduro, el cual también se aplicó por el lapso de
60 segundos y posteriormente se enjuago con agua destilada.
* TERCERO: Se usó Acetona que es el agente decolorante, lava el colorante primario
de las bacterias que son incapaces de retener el colorante y se aplicó por el lapso de
5 - 10 segundos en pequeñas cantidades.
* CUARTO: La solución de Safranina que es el colorante de contraste el cual se aplicó
por el lapso de 45 segundos siendo este finalmente enjuagado con agua destilada.
ANÁLISIS Y RESULTADOS
Proteus vulgaris
- Tinción de Gram:
Se observa bajo el microscopio después de la tinción de Gram, apareciendo
como bacilos Gram-negativos, característicos por su color rosado.
- Prueba de Motilidad:
Proteus vulgaris es móvil y presenta un patrón de crecimiento en forma de
“swarming” en medios de cultivo como agar sangre, lo que significa que las
bacterias se dispersan en ondas.
- OBSERVACIÓN
AUMENTO: 4x20x40x40 AUMENTO: 4x20x40x100
Salmonella
- Tinción de Gram:
Al observarse al microscopio después de la tinción de Gram, Salmonella
aparece como bacilos Gram-negativos, caracterizados por un color rosado.
- Prueba de motilidad:
La mayoría de las especies de Salmonella son móviles y presentan motilidad
activa en un medio de cultivo semisólido.
- OBSERVACIÓN
AUMENTO: 4x20x40x40 AUMENTO: 4x20x40x100
Klebsiela neumonae
- Tinción de Gram
Resultado: La Klebsiella pneumoniae es una bacteria Gram-negativa.
Aparece de color rosado en la tinción de Gram
- Prueba de Motilidad
Resultado: La Klebsiella pneumoniae es no móvil. En el laboratorio, esto se
observa en medios semi-sólidos de motilidad, donde la bacteria no se dispersa
desde el sitio de inoculación.
- OBSERVACIÓN
AUMENTO: 4x20x40x40 AUMENTO: 4x20x40x100
Pseudomonas aeruginosa
- Tinción de Gram
Resultado: Pseudomonas aeruginosa es una bacteria Gram-negativa. Se tiñe
de color rosado en la tinción de Gram, lo que indica su pared celular de tipo
Gram-negativo.
- Prueba de Motilidad
Resultado: Pseudomonas aeruginosa es móvil. Esta bacteria tiene flagelos
polares, que le permiten moverse.
- OBSERVACIÓN
AUMENTO: 4x20x40x40 AUMENTO: 4x20x40x100
DISCUSIÓN
Como grupo se identificó varios factores que pudieron influir en la calidad de la tinción,
como el manejo de las muestras y la aplicación de reactivos. Las diferencias en las
técnicas de los miembros del grupo también pudieron causar variaciones. Además, se
mencionó que algunas bacterias con paredes celulares atípicas o cápsulas mucoides
podrían interferir con la tinción.
También, se enfatizó la importancia de la precisión en la aplicación de la tinción y se
sugirió incluir más muestras y métodos adicionales en futuras investigaciones para
mejorar la identificación de especies bacterianas.
Por último, la detección de bacterias Gram-negativas resistentes es crucial para el
tratamiento de infecciones nosocomiales y la prevención de brotes en hospitales.
CONCLUSIONES
- La tinción de Gram es una técnica rápida y eficaz para la clasificación inicial de
bacterias, permitiendo distinguir entre Gram-positivas y Gram-negativas. Sin
embargo, presenta limitaciones, como la incapacidad para identificar especies
bacterianas con precisión. Factores como la variación en la intensidad de la
tinción y la morfología bacteriana pueden afectar los resultados, lo que resalta
la necesidad de pruebas complementarias, como bioquímicas y moleculares,
para una identificación más exacta.
- A pesar de sus limitaciones, la tinción de Gram es fundamental en diagnósticos
clínicos, facilitando la clasificación rápida de bacterias y ayudando en la toma
de decisiones sobre tratamientos antibióticos, especialmente en infecciones
graves y en entornos hospitalarios con bacterias multirresistentes.
- El trabajo en grupo permitió a los miembros mejorar su comprensión de
técnicas microbiológicas, perfeccionando la aplicación de la tinción y la
interpretación de resultados. Se enfatizó la importancia de la uniformidad en el
uso de reactivos.
- Sugerimos complementar la tinción de Gram con métodos adicionales y un
control más riguroso de variables experimentales, así como aumentar el
número de muestras. Esto es crucial para la detección temprana de patógenos
en el contexto de salud pública, especialmente en el control de infecciones
nosocomiales.
REFERENCIAS
[1] MORA, Xavier. Diferenciando bacterias gram+ y gram- . Selecciones avícolas,
2012, p. 25-27. Disponible en: https://seleccionesavicolas.com/wp-
content/uploads/2012/02/6536-diferenciando-bacterias-gran-y-gram.pdf
[2] MOLLINEDO, Marcela; GONZÁLES, Cynthia. Bacterias Gram Negativas. Revista
de Actualización Clínica Investiga, 2014, vol. 49, p. 2609. DOI:
http://www.revistasbolivianas.ciencia.bo/scielo.php?pid=S2304-
37682014001000005&script=sci_arttext&tlng=es
[3] MOLLINEDO, Andrea; VILLALOBOS, Cynthia. Bacterias gram negativas. Revista
de Actualización Clínica, 2014, vol. 49, p. 2609-2613. Disponible en:
http://revistasbolivianas.umsa.bo/pdf/raci/v49/v49_a05.pdf
Anexos
PSEUDOMONAS AERUGINOSA
SALMONELLA
PROTEUS VULGARIS
KLEBSIELA NEUMONAE
NOSTOCOIDE LIMCOTA
REACTIVOS
MÉTODOS DE RECOLECCIÓN DE CULTIVO
MÉTODO DE TINCIÓN PARA VERIFICACIÓN DE GRAM
