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Revisión de la Revista Brasileña de Salud 3958

ISSN: 2595-6825

Diferentes formas de amplificación isotérmica mediada por bucles (LAMP) para la

detección de virus humanos

Diferentes formas de amplificación isotérmica mediada por loop (LAMP)

para la detección de virus humanos

DOI:10.34119/bjhrv7n1-321

Recebimento dos originais: 31/12/2023

Aceitação para publicação: 29/01/2024

Yury Yzabella da Silva

Maestro de la ciencia
Institución: Universidad de Pernambuco (UPE)
Dirección: Rua Arnóbio Marques, 310, Santo Amaro, Recife - PE, CEP: 50100-130
Correo electrónico: yuryydasilva@gmail.com

Fabio Lopes de Melo

Doctor en Salud Pública
Institución: Instituto Aggeu Magalhães (IAM-FIOCRUZ)
Dirección: Avenida Professor de Moraes Rego, s/n, Ciudad Universitaria, Recife - PE,
CEP: 50740-465
Correo electrónico: fabio.melo@fiocruz.br

Edeneide María Xavier

Doctorado en Genética
Institución: Instituto Aggeu Magalhães (IAM-FIOCRUZ)
Dirección: Avenida Professor de Moraes Rego, s/n, Ciudad Universitaria, Recife - PE,
CEP: 50740-465
Correo electrónico: edeneide@gmail.com

Eliane Campos Coímbra

Doctorado en Innovación Terapéutica
Institución: Universidade de Pernambuco (UPE)
Dirección: Rua Arnóbio Marques, 310, Santo Amaro, Recife - PE, CEP: 50100-130
Correo electrónico: eliane.coimbra@upe.br

ABSTRACTO
Las infecciones causadas por virus en humanos pueden provocar enfermedades graves e incluso la muerte.
Esto significa que la detección y el diagnóstico tempranos son extremadamente importantes para el control
de estas enfermedades. Actualmente, la amplificación isotérmica mediada por bucle (LAMP) se considera
un método fiable porque, además de ser rentable, sencillo e innovador, permite amplificar ácidos nucleicos
sin necesidad de una gran estructura de gestión de laboratorio. Por lo tanto, el ensayo LAMP puede verse
como una técnica de detección avanzada de base molecular altamente eficiente para varios patógenos,
incluidos los virus. Los sistemas basados en LAMP tienen las siguientes características: amplificación
isotérmica, reproducibilidad y robustez, y pueden usarse cuando hay material genético escaso o de baja
calidad. La amplificación implica el uso de un conjunto máximo de tres cebadores diseñados
específicamente y una ADN polimerasa con actividad de cambio de cadena. En la mayoría de los casos, esta
técnica es muy superior a otras técnicas moleculares como, por ejemplo, la reacción en cadena de la
polimerasa (PCR) convencional y sus variantes. La principal ventaja del

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El método LAMP es su rentabilidad, ya que puede emplearse mediante termociclador, baño de agua o
termobloque. En esta mini-revisión se proporciona información sobre algunas de las principales
variantes de la técnica LAMP que han sido diseñadas para el diagnóstico de varios patógenos virales
humanos.

Palabras clave:LAMP, virus, infecciones, diagnóstico molecular.

RESUMEN
Las infecciones causadas por virus en humanos pueden resultar en víctimas mortales y muerte.
Esto significa que la detección y el diagnóstico precoz son extremadamente importantes para el
control de estas acciones. Actualmente, la amplificación isotérmica mediada por bucle (LAMP) se
considera un método confiable porque, además de ser económica, simple e innovadora, permite
amplificar dos ácidos nucleicos sin necesidad de una gran estructura de gestión de laboratorio.
Así, el ensayo LAMP puede ser visto como una técnica de detección avanzada, altamente
eficiente y basada en moléculas, para varios patógenos, incluido el virus. Los sistemas basados
en LÁMPADAS tienen las siguientes características: amplificación isotérmica, reproductibilidad y
robustez, y pueden ser usados cuando hay material genético escaso o de baja calidad. La
amplificación implica la utilización de un conjunto máximo de tres cebadores específicamente
proyectados y una polimerasa de ADN con atividade de deslocamento de fios. En la mayoría de
los casos, esa técnica es muy superior a otras técnicas moleculares, como, por ejemplo, la
reacción en la cadena de polimerasa convencional (PCR) y sus variantes. La ventaja principal del
método LAMP es su relación personalizada, una vez que se puede utilizar por medio de un
termociclador, baño de agua o termobloqueo. Nesta minirrevisão, são fornecidas informações
sobre algumas de las principales variantes de la técnica LAMP que foram concebidas para el
diagnóstico de varios patógenos virales humanos.

Palavras-chave:LÁMPARA, virus, infecciones, diagnóstico molecular.

1. INTRODUCCIÓN
Actualmente, diversas especies de virus infectan al ser humano con mayor o menor letalidad.

Los virus representan más de dos tercios de todos los nuevos patógenos humanos. En la literatura se

afirma que el primer virus humano descubierto fue el de la fiebre amarilla a principios del siglo XX.th

Siglo, en 1901 (REED; CARROLL; AGRAMONTE, 1901). Hace décadas, una de las principales formas de

realizar la detección viral era la inoculación de muestras en animales (es decir, aislamiento viral). Sin

embargo, esta era una técnica lenta y engorrosa, lo que provocaba retrasos en los resultados y, por

tanto, afectaba el tratamiento de los pacientes (BURRELL; HOWARD; MURPHY, 2016). Actualmente, el

diagnóstico se realiza principalmente mediante la obtención de información clínica; sin embargo,

varios virus tienen un patrón clínico similar, lo que dificulta un diagnóstico preciso. Por tanto, es

necesario adoptar nuevos enfoques metodológicos de diagnóstico alternativos que sean rápidos,

sensibles y eficaces. El propósito de emplear métodos moleculares era superar este tipo de

obstáculos, lo que los convirtió en una herramienta esencial en el laboratorio clínico. Hoy podemos

aprovechar técnicas que son capaces de identificar, cuantificar, genotipificar y/o

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secuenciar el genoma viral, ya que el seguimiento de las cargas virales y la respuesta al tratamiento son

factores clave en el diagnóstico (COBO, 2012).

Para que un método de diagnóstico pueda considerarse aceptable, debe cumplir ciertos

criterios, a saber: rapidez, sencillez, buena sensibilidad y especificidad y, en particular, una

rentabilidad significativa. La detección de ácidos nucleicos, descubierta por Kary Banks Mullis en

1983, supuso una revolución en la biología molecular y la técnica de reacción en cadena de la

polimerasa (PCR), ha sido ampliamente utilizada desde entonces debido a su alto grado de

sensibilidad (MACKAY, 2002). Tras los importantes avances en la técnica de PCR, se emplearon

metodologías para garantizar aún más sensibilidad y rapidez en el diagnóstico clínico. Entre

estas variaciones cabe mencionar RT-PCR, qPCR, Multiplex-PCR y Nested-PCR. Por otro lado, la

PCR tiene algunas desventajas, como altos costos y requiere de una infraestructura de

laboratorio especializada, para el desarrollo de equipos costosos y sofisticados (PARIDA et al.,

2008; TAWE, et al., 2018).

La amplificación isotérmica mediada por bucle (LAMP), técnica también basada en la PCR, se

considera una técnica progresiva para la amplificación de patógenos, especialmente virus, con un

grado de sensibilidad similar y/o superior a la PCR convencional (NAGAMINE et al., 2002). ). Además, a

diferencia de la PCR, que requiere un sistema de termociclado, la reacción LAMP es una técnica de

amplificación isotérmica y puede realizarse a temperatura constante, lo que facilita su ejecución

(KARAMI et al., 2011). Se han descrito varios métodos para la visualización y detección de amplicones

LAMP, que incluyen: turbidez, electroforesis en gel, colorantes, fluorescencia (ZHANG et al., 2014) y

bioluminiscencia (YANG et al., 2016). La detección basada en fluorescencia y bioluminiscencia a

menudo se lleva a cabo en LAMP en tiempo real y ayuda a la cuantificación del objetivo (SONG et al.,

2018).

Entre los colorantes más utilizados se encuentran Sybr Green, Malachite Green y Calcein,

además de otros colorantes de la familia SYTO, que se pueden agregar para permitir una mejor

interpretación de los resultados, lo cual es necesario debido a la turbiedad (BECHERER et al., 2020 ; EL-

THOLOTH et al., 2020). Así, LAMP se ha convertido en un sistema alternativo que ha sido ampliamente

estudiado y desarrollado en todo el mundo. Los protocolos se pueden establecer en menos de media

hora (incluido el manejo de muestras) y son adecuados para regiones con recursos limitados

(NOTOMI et al., 2000). Dado que se están aplicando ampliamente diferentes formas de LAMP en la

detección de virus, este artículo sólo busca describir algunas de las principales variaciones en la

técnica para detectar los ácidos nucleicos virales que se requieren para el diagnóstico.

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2 LOS PRINCIPIOS DE LA LÁMPARA

LAMP utiliza la ADN polimerasa Bst como enzima principal: esta es una enzima con actividad

de separación de doble cadena y polimerización de ADN, obtenida deBacilo estearothermophilus

bacterias. Las enzimas más utilizadas son Bst 2.0 y Bst 3.0. Sin embargo, cuando se utiliza a 72°C, Bst

3.0 muestra actividad transcriptasa inversa. Los ensayos LAMP pueden utilizar un conjunto de cuatro

o seis cebadores, que se hibridan en seis u ocho regiones del ADN o ARN (ADNc) y, por lo tanto, dan

como resultado la síntesis de ácidos nucleicos mediante la formación de estructuras de bucle. La

técnica utiliza dos cebadores externos, F3 (Forward Outer Primer) y B3 (Backward Outer Primer), dos

cebadores internos, FIP (Forward Inner Primer) y BIP (Backward Inner Primer), y se pueden agregar

los cebadores Loop F y Loop B. para acelerar la eficiencia de amplificación y detección si es necesario

(BHAT; RAO, 2020). El uso de seis cebadores hace que el ensayo sea muy específico, ya que se utilizan

diferentes regiones objetivo para la amplificación, lo que diferencia a LAMP de otras técnicas

moleculares como la PCR convencional, que solo utiliza un par de cebadores.

Existen algunas limitaciones que deben tenerse en cuenta al desarrollar y optimizar

LAMP; por ejemplo, la fase inicial del proyecto de diseño del cebador (MOORE et al., 2021). El

diseño de cebadores para LAMP es un proceso más exigente y difícil que la PCR convencional

(SOROKA; WASOWICZ; RYMASZEWSKA, 2021). En la mayoría de los casos, los productos

amplificados no se pueden determinar a través de la turbidez, ya que esto requiere abrir el tubo

de reacción para agregar colorantes intercalantes de ADN, que pueden contaminar el ambiente

con amplicones (KARTHIK et al., 2014). Debido a su alta sensibilidad, la técnica es susceptible a la

contaminación, que es uno de los principales problemas de esta técnica (BAEK et al., 2020; QUOC

et al., 2018). Sin embargo, se ha demostrado que LAMP es una técnica rápida y sólida utilizada

para la detección de protozoos, bacterias y virus (MUKHTAR et al, 2018; AOKI et al, 2021;

MEURER, 2021).

3 LA ADOPCIÓN DE DIFERENTES ENFOQUES BASADOS EN LÁMPARAS PARA EL

DIAGNÓSTICO DE VIRUS HUMANOS
El estallido de la pandemia provocada por el SARS-Cov-2 provocó un caos mundial y tuvo

un gran impacto en la salud y la economía de todo el país (DOS SANTOS PEREIRA et al., 2022).

Desde que se confirmaron sus efectos, ha existido una gran necesidad de nuevas metodologías

para el diagnóstico clínico y la investigación de casos sospechosos, como las pruebas rápidas

basadas en inmunología y/o biología molecular, donde LAMP ha ganado gran protagonismo,

como una técnica prometedora (KASHIR; YAQINUDDIN, 2020).

LAMP tiene varias ventajas sobre la PCR y, desde su introducción, la técnica ha

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Se han desarrollado diferentes dispositivos técnicos que son variantes más adecuadas para muchos

tipos diferentes de patógenos, incluidos los virus. El método LAMP produce una cantidad considerable

de amplicones en un corto período de tiempo, que es, en promedio, 100 veces mayor que la cantidad

producida por la PCR convencional. Además, la amplificación de una parte del genoma viral mediante

el ensayo LAMP sigue siendo eficaz incluso en presencia de inhibidores que imposibilitan la

amplificación mediante PCR convencional (LAW et al., 2015). Los estudios han demostrado que

diferentes formas de la técnica LAMP pueden proporcionar un buen medio para llevar a cabo el

diagnóstico molecular de patógenos virales. Por ejemplo, la reacción Multiplex-LAMP (o M-LAMP) se

ha utilizado para la detección rápida y simultánea de virus de ARN (como DENV y CHIKV), cuando se

presentan síntomas similares. La variante de Transcripción Inversa-LAMP (o RT-LAMP) es el método

más utilizado para la detección de los virus más diversos como VIH, ZIKV, DENV, SARS-Cov-2, entre

otros (Figura 1).

Figura 1. Diferentes formas de ensayos LAMP para la detección de virus humanos.

Fuente: autores

Las siguientes secciones describirán diferentes formas de ensayos LAMP, junto con sus

aplicaciones en la detección de virus humanos.

3.1 CT-LAMP: AMPLIFICACIÓN ISOTÉRMICA MEDIADA POR BUCLE DE TUBO CERRADO La técnica

de tubo cerrado se diseñó para abordar un problema común al realizar el ensayo LAMP:

la contaminación cruzada. Debido a su alta eficiencia en la amplificación de la secuencia diana,

que la hace altamente sensible, la amplificación a menudo se obtiene incluso en controles

negativos (TOMITA et al., 2008).

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Un método utilizado para detectar amplicones LAMP es medir la turbidez causada por el

pirofosfato de magnesio precipitado al final de la reacción, aunque no siempre es posible

obtener un resultado simplemente empleando este método (MORI et al., 2001; MORI et al. .,

2004). Ante esto, se han empleado diferentes metodologías para la adición del colorante, sin

necesidad de abrir el tubo de reacción, con el objetivo de mitigar el riesgo inicial de

contaminación. Los tintes se pueden agregar en la interfaz interna de la tapa del tubo (p. ej.,

SYBR GREEN) (SUKPHATTANAUDOMCHOKE et al, 2020; LAI et al 2021) o dentro del propio

sistema de reacción (p. ej., SYTON).

Al inicio de la pandemia de COVID-19 se realizaron pruebas moleculares basadas en CT-

LAMP, con el objetivo de mejorar el manejo clínico. El estudio realizado por SONG et al. (2021)

utilizaron un tinte intercalante colorimétrico (Leuco Violet Crystal) para detectar amplicones en el

propio tubo de reacción. Este tinte pasa de ser incoloro (debido a la ausencia de amplicones) a

violeta en presencia de material genético y puede detectarse a simple vista.

Otra metodología CT-LAMP es el uso de cápsulas de tinta Agar. El estudio realizado por

KARTHIK et al. (2014), lograron resultados satisfactorios con este método. Inicialmente se

preparó y añadió agar (20 ul) a través de una jeringa intradérmica. Poco después, una vez que el

agar ya se había solidificado, se le añadieron otros 2μl de SYBR green y se añadió otra capa de

agar sobre el tinte. Luego de esta preparación se realizó normalmente la reacción CT-LAMP, con

todos sus reactivos y se agregó la cápsula a los tubos de reacción. La cápsula se mantuvo en

posición de manera que no tocara la tapa del tubo ni la mezcla de reacción (KARTHIK et al.,

2014).

Otro ejemplo de la técnica CT-LAMP, que merece la pena mencionar, es el estudio de

Liang et al. (2013) quienes diseñaron una reacción para detectar el virus de la hepatitis B (VHB) y

el virus H1N1 empleando un método que separa una solución SYBR Green I (SGI) de reactivos

usando cera sensible a la temperatura. El tinte se sella en el fondo del tubo para no interferir con

la reacción LAMP, pero se libera en la mezcla una vez completada la reacción, cuando la cera se

funde a una temperatura de 80°C (LIANG et al., 2013).

3.2 M-LAMP: AMPLIFICACIÓN ISOTÉRMICA MEDIADA POR BUCLES MULTIPLEX La detección

simultánea de varios genes diana puede mejorar la especificidad y confiabilidad de un

método de diagnóstico. Como resultado, la técnica LAMP también comenzó a hacer avances como el

multiplex LAMP (M-LAMP).

Por ejemplo, en un estudio de JANG et al., 2021, se utilizaron tres conjuntos de cebadores RT-LAMP.

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diseñado para detectar los genes de ARN polimerasa dependiente de ARN (RdRP), envoltura (E) y

nucleocápside (N) del SARS-CoV-2. Para obtener una reacción en tubo, se evaluaron los límites de

detección para cinco combinaciones de conjuntos de cebadores LAMP del SARS-CoV-2 (RdRP/E, RdRP/

N, E/N, RdRP/E/N y RdRP/N/control interno). actina beta) con muestras clínicas de hisopos

nasofaríngeos. Se utilizó el sistema RT-PCR en tiempo real para evaluar el rendimiento del ensayo RT-

LAMP múltiple. Mientras que el sistema RT-qPCR requiere alrededor de 2 horas y 30 minutos de

tiempo analítico, el ensayo multiplex SARS-CoV-2 demostró ser mucho más rápido y logró resultados

en 40 minutos.

En un estudio similar para la detección del coronavirus (CoV) que causa el SARS (SARS-

CoV), Kim et al (2019) diseñaron una M-LAMP. Este ensayo multiplex amplificó dos genes diana

en la misma mezcla de reacción en 20 minutos a 65°C y mostró la capacidad de detectar 10

copias. En este sistema, la identificación del material genético se produjo mediante la

amplificación de dos regiones distintas. Con la ayuda de dos conjuntos de cebadores LAMP,

diseñaron uno para el gen del marco de lectura abierto 1b (ORF1b) y otro para la amplificación

del gen SARS-Cov N (nucleocápside).

Aún en el diagnóstico del SARS-CoV-2, Zhu et al desarrollaron un ensayo M-LAMP combinado

con un ensayo de biosensor de flujo lateral (LFB) basado en nanopartículas (mRT-LAMP-LFB). (2020)

para el diagnóstico de COVID-19. El ensayo consta de dos secuencias diana (ORF1ab y el gen de la

nucleoproteína [N]), que se amplifican simultáneamente en una reacción isotérmica. El ensayo mostró

una especificidad del 100%.

Se han realizado otros ensayos M-LAMP para la detección de otros virus, como,
por ejemplo, diferentes serotipos del virus del Dengue (DENV 1-4). En este estudio, se detectó ARN del virus

del dengue en todas las muestras positivas mediante RT-LAMP durante aproximadamente 45 minutos y no

hubo reactividad cruzada con el ARN de otros arbovirus relacionados extraídos de muestras de suero. En

una única reacción, se añadieron a la reacción todos los conjuntos de cebadores (basados en las

secuencias del gen 3'-NCR) para los cuatro serotipos.

Además del DENV, el CHIKV se transmite por el mismo vector, con infecciones y síntomas

similares, a pesar de pertenecer a familias diferentes (Flaviviridae y Togaviridae, respectivamente). A

la luz de esto, Kumar et al. (2022a) realizaron un ensayo basado en el método M-LAMP, que permitió

un diagnóstico e identificación simultáneos de ambas enfermedades virales en entornos de bajos

recursos. Se desarrolló una variación de la técnica de amplificación isotérmica mediada por bucles

magnéticos multiplex (MM-LAMP) acoplando LAMP multiplex con una visualización a simple vista

basada en partículas magnéticas para superar las deficiencias resultantes de la detección simultánea

de las dos enfermedades. Inicialmente, la reacción implica desarrollar un M-

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LAMP con cebadores DENV y CHIKV recubiertos con biotina y digoxigenina, respectivamente, en

la reacción LAMP, seguido de precipitación del ADN amplificado con tampón polietilenglicol

(PEG) y finalmente aglomeración con estreptavidina y partículas magnéticas recubiertas con anti-

digoxigenina para virus. discriminación y visualización. El límite de detección de ADN de la

visualización MM-LAMP fue de 51,65 ng/μl, que es comparable a la visualización con luz UV de la

base de electroforesis (KUMAR et al., 2022).

Este estudio demuestra los avances de la técnica LAMP, donde no es necesario el uso de

colorantes fluorescentes ni turbidímetros, y que puede utilizarse en diferentes entornos,

especialmente aquellos con recursos limitados.

3.3 LÁMPARA EN TIEMPO REAL

LAMP en tiempo real es una alternativa extremadamente viable para la detección y cuantificación

de patógenos humanos, ya que puede ser hasta 10 veces más sensible y más rápido que qPCR (MASHOOQ

et al., 2016). Otra forma de monitorear la reacción en tiempo real es utilizar un turbidímetro, un dispositivo

capaz de detectar variaciones en la turbiedad del medio provocadas por el pirofosfato de magnesio (MORI

et al., 2004). El LAMP en tiempo real es de gran utilidad para su aplicación en enfermedades que requieren

un diagnóstico rápido, ya que el resultado del análisis se puede emitir luego de que la reacción supera un

umbral preestablecido, sin necesidad de perseguirlo hasta el final (OCWIEJA et al. . al., 2015).

Además, la evaluación en tiempo real permite la cuantificación tanto del producto formado como

del ADN diana que está presente al inicio de la reacción. La técnica LAMP en tiempo real se puede utilizar

para los mismos fines que la qPCR. Sin embargo, la técnica de seguimiento en tiempo real que se basa en

sondas marcadas tuvo que adaptarse a las condiciones isotérmicas, lo que dio lugar a un mecanismo de

reacción ligeramente diferente. En LAMP en tiempo real, la región 5' de la sonda está marcada con el

fluoróforo, pero sin presencia de extinción en el otro extremo. La extinción, en este caso, se añade al

extremo 5' de los cebadores FIP y BIP. De esta manera, la sonda está diseñada para hibridar en la región

F1c y B1c de los cebadores internos, donde el fluoróforo y la extinción permanecen cercanos. A medida que

se produce la amplificación del ADN objetivo, la acción cambiante de la ADN polimerasa garantiza la

liberación de la sonda, al permitir que las regiones F1c y B1c se emparejen internamente en el objetivo para

formar los bucles (TANNER; ZHANG; EVANS JR, 2012).

Se han desarrollado sistemas LAMP en tiempo real para la detección de patógenos

virales, como el virus Monkeypox (MPXV) (IIZUKA et al., 2009), ZIKV (LOPEZ-JIMENA et al., 2020),

adenovirus humano (HAdV) (SHURYAEVA et al., 2022) y Virus del Papiloma Humano - subtipo 16

(VPH-16) (HAMZAN et al., 2021) y SARS-CoV-2 (DONG et al., 2022; IQBAL et al.,

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2022).
En el estudio de Quoc et al. (2018) utilizaron enfoques combinados LAMP y CT-LAMP en

tiempo real para la identificación del VHB mediante un fluorómetro portátil en tiempo real. En

este estudio, se demostró que el ensayo HBV-LAMP fue preciso y más rápido que el método de

PCR (menos de 15 minutos). Además, se realizó un análisis de costes para que esta técnica

pudiera emplearse en entornos con recursos limitados (IQBAL et al., 2022).

3.4 RT-LAMP: LÁMPARA DE TRANSCRIPCIÓN INVERSA

RT-LAMP detecta virus de ARN mediante un ensayo de un solo paso que combina la

transcripción inversa y la amplificación en un solo tubo, sin paso de extracción de ARN

(RASHWAN et al., 2017). Estudios recientes han demostrado que la técnica RT-LAMP es una

alternativa para sustituir o complementar la detección de SARS-CoV-2, que con mayor frecuencia

se realizan mediante RT-qPCR (MAUTNER et al., 2020). Los sistemas RT-LAMP desarrollados no

mostraron reactividad cruzada con otros virus, como SARS-CoV, MERS-CoV, influenza, además de

otros virus respiratorios (PARK et al., 2020; BAEK et al., 2020). Un estudio realizado por Davidson

et al. (2021), demostraron que el uso de la prueba RT-LAMP para la detección de ácidos nucleicos

del SARS-CoV-2 en saliva humana sin preprocesamiento fue muy satisfactorio. En este caso, el

protocolo permitió detectar el virus en 60 minutos, con una sensibilidad analítica del 97% y una

especificidad del 100%, y con un límite de detección de 200 copias genómicas/μL de saliva del

paciente. Además, existe un artículo de revisión que corrobora los hallazgos de Davidson y

colaboradores, realizado por Mcphillip y Macsharry (2022). En él se describen estudios recientes

en la literatura que evaluaron la viabilidad del uso de la saliva en el diagnóstico de SARS-CoV-2,

ya que se trata de una muestra no invasiva.

También se detectaron otros virus ARN mediante los ensayos RT-LAMP, entre los que se encuentra

Cabe mencionar el virus Zika (ZIKV) (SILVA et al., 2019). Los resultados de la investigación han

demostrado que el ensayo RT-LAMP tiene un límite de detección 10 veces mayor que qRT-PCR.

Además, la prueba demostró ser altamente específica para el ARN del ZIKV cuando se probó con

muestras positivas para el virus del dengue (DENV), el virus chikungunya (CHIKV) y el virus de la fiebre

amarilla (YFV) (LAMB et al., 2018; WANG et al., 2020).

Otro punto importante a tener en cuenta es que África occidental ha experimentado durante

mucho tiempo la necesidad urgente de una prueba de diagnóstico para detectar el virus de Lassa (LASV),

que causa la fiebre de Lassa (LF), una fiebre hemorrágica viral endémica. La RT-PCR convencional se

considera el estándar de oro. Sin embargo, cuando se desarrolló el ensayo RT-LAMP en el sudeste y centro-

sur de Nigeria, fue posible detectar el genoma viral LASV en 23 minutos, siendo la RT-PCR la

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Realizado entre 2 a 3 horas. El ensayo mostró una especificidad del 98 % sin reactividad cruzada

con otros virus que causan síntomas similares (PEMBA et al., 2019).

RT-LAMP también se ha desarrollado para los virus de la influenza (KIM et al., 2016), DENV

(LAU et al., 2015), virus respiratorio sincitial - RSV (HOOS et al., 2017), virus de la hepatitis C - HCV

(ZHAO et al., 2017), el virus del Ébola (OLONINIYI et al., 2017) y el coronavirus del síndrome

respiratorio de Oriente Medio - MERS-CoV (LEE et al., 2016). Una de las aplicaciones más críticas de

este método es la detección del VIH, que puede identificarse incluso en su forma latente gracias a RT-

LAMP (DAMHORST et al., 2015).

En los últimos años, se han desarrollado variaciones de RT-LAMP para detectar ARN viral. Para

Por ejemplo, se ha empleado un ensayo RT-LAMP, combinado con biosensores electroquímicos,

para el diagnóstico de COVID-19 (SULEMAN, et al. 2021; KUMAR et al., 2022b). Brevemente, esta

tecnología consiste en añadir amplicones de RT-LAMP a la superficie del biosensor con el

objetivo de mejorar la detección de secuencias diana del virus mediante la hibridación con

sondas específicas (SAXENA et al. 2022). Además, se ha empleado RT-LAMP, combinada con

CRISPR/Cas, para mejorar la sensibilidad y especificidad de la detección del SARS-COV-2 (SELVAM

et al., 2021; REZAEI et al., 2021; BHATT et al. 2022). CRISPR-Cas (repeticiones palindrómicas cortas

agrupadas y regularmente espaciadas y proteínas asociadas a CRISPR) es un sistema de defensa

procariótico que se dirige al ADN o ARN de bacteriófagos invasores y otros ácidos nucleicos

extraños (BARRANGOU; MARRAFFINI, 2014). El sistema LAMP integrado CRISPR-Cas se formó

utilizando la actividad de escisión objetivo de la enzima Cas en los amplicones de los ensayos RT-

LAMP y reduciendo así la incidencia de falsos positivos (ALI et al., 2020). La tecnología RT-LAMP o

LAMP integrada con CRISPR también ha sido diseñada para el diagnóstico de otros virus como el

VHC (KHAM-KJING et al. 2022), los virus de la influenza (PARK et al., 2021) y el VPH (MUKAMA et

al. , 2020).

4. CONCLUSIÓN
La amplificación isotérmica mediada por bucle-LAMP es una prueba sencilla, innovadora y de alta

sensibilidad y especificidad, que permite la amplificación de ácidos nucleicos sin necesidad de costosos

equipos. Las pruebas moleculares como la PCR han demostrado ser un complemento útil del diagnóstico

clínico, así como de las pruebas citológicas e histológicas, cuando se realizan para la detección de

infecciones virales. Sin embargo, la PCR tiene un alto costo y su desarrollo requiere una infraestructura de

laboratorio especializada, con equipos costosos y sofisticados para la amplificación del ADN. En vista de

esto, los ensayos LAMP también pueden considerarse un método atractivo para su uso en grupos sociales

de bajos ingresos, como los de los países en desarrollo, debido a su baja

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coste y el hecho de que no es necesario ningún equipo especializado. Estudios recientes han demostrado

que combinar LAMP con tecnologías innovadoras puede mejorar su eficiencia y dar como resultado una

detección de virus más rápida.

Actualmente, existen varios ensayos con lámparas que han sido aprobados comercialmente para

la detección de patógenos microbianos (MUKHTAR et al, 2018), en particular para el diagnóstico del

SARS-COV-2. Cabe mencionar que el período de la pandemia provocada por el SARS-COV-2 tuvo un

efecto considerable en el aumento de la producción de varios kits basados en LAMP. A medida que la

pandemia de COVID-19 evolucionó y pasó por diferentes fases, los estudios se centraron cada vez

más en el diseño de diferentes formas de pruebas LAMP para una tasa de detección rápida y eficaz

del SARS-COV-2. Así, la pandemia aceleró los estudios de muchas formas de ensayo LAMP. Hasta la

fecha, hay más de diez ensayos RT-LAMP que han sido aprobados para la detección del SARS-CoV-2

(FDA, 2023) y algunos de ellos han obtenido el estatus de la FDA, es decir, autorización de uso de

emergencia (FDA, 2020a, 2020b, 2020c). . Por lo tanto, sobre la base de los estudios mencionados en

esta revisión, se puede concluir que un ensayo LAMP puede proporcionar un buen medio para llevar a

cabo el diagnóstico molecular de patógenos virales a pesar de que es una técnica más nueva que la

PCR e incluye algunas variaciones. en sus entornos clínicos. Por este motivo, es necesario aclarar

mucha información compleja, incluidos los límites técnicos realistas de sensibilidad y eficacia y en qué

medida dependen del tipo de virus y de la muestra.

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