Materiales biomiméticos producidos

por impresión 3D para ingeniería de tejidos

Nanobiología II Articulo de discusión:
“Impresión 3D de compuestos basados ​en nanocristales
Docente: Dr. Alatorre Meda Manuel
de celulosa para construir estructuras biomiméticas
Equipo#3: robustas para la ingeniería de tejido óseo.”
Briceño Miranda Alan
Gómez Ontiveros Dionicio
Seimandi Gonzalez Humberto
Tapia García Jesús Gadiel
Vizcarra Fraire Ángel Iván
Fecha: 08 de marzo de 2024
 Contenido

Discusión del articulo

Introducción
Introducción y objetivo del artículo

Impresión 3D
Caracterización de filamentos

Ingeniería de tejidos
Síntesis de andamios y NCC

Biopolímeros sintéticos
Propiedades y resultados obtenidos

Biomimetismo
Conclusiones
 Introducción

Impresión 3D

Técnicas de impresión 3D

Bioimpresión Sinterización selectiva

Por laser

Trazado 3D Estereolitografía

Figura 1. representación ficticia de

la impresión 3D de órganos.

*Modelado por Deposición Fundida, por

sus siglas en Ingles FDM

N’Gatta, K.M., Belaid, H., El Hayek, J. et al. Sci Rep, 2022, 12, 21244. 1
 Introducción

Ingeniería de tejidos

Células
“Se centra en la regeneración de neotejidos a partir de células
con el apoyo de biomateriales y factores de crecimiento.”

Materiales
Andamios
Clave

Factores
de crecimiento

Figura 2. Micrografía SEM de

andamio producido por impresión 3D

Ikada, Y. RSC Adv., 2006, 3, 589-601. 2

 Introducción

Procesos de Extusión

• La extrusión consta de dos partes • Crea objetos transversales fijos empujando un

importantes en su mecanismo, el dado y su material a través de la matriz transversal
respectivo tornillo deseada.

Figura 2. Extrusor de un solo tornillo

Figura 3. Representación del dado y el
tornillo del extrusor

5
 Introducción

Biopolímeros sintéticos

Polímeros para andamios

PGA PCL
Ácido poliglicólico Policaprolactona
Figura 4. Estructura química de
Figura 3. Estructura química
PCL
de PGA
PLA
Ácido poliláctico Los biopolímeros sintéticos se utilizan
en la ingeniería de tejido óseo debido a
su biocompatibilidad y su capacidad
para controlar las propiedades
fisicoquímicas del armazón.

Figura 5. Estructura química

de PLA

Rodriguez, M.J.; Orrego, C.E. Revista científica, 2016, 25, 252-264. 3

 Introducción

Biomimetismo: Andamios

Matriz extracelular
Biomimetismo Andamio
(ECM)

El biomimetismo es un enfoque Un andamio biomimético se

de diseño e innovación que se refiere a una estructura diseñada
inspira en la naturaleza para para imitar las características de
resolver problemas. la matriz extracelular (ECM)
natural del tejido.

Figura 6. Micrografía SEM de la matriz

extracelular de la submucosa de una rata.

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 Discusión de artículo

Articulo de discusión

Titulo: Impresión 3D de compuestos

basados ​en nanocristales de celulosa para
construir estructuras biomiméticas
robustas para la ingeniería de tejido óseo.

Revista: Nature

Autor: Kanga Marius N´Gatta

5
 Discusión de artículo

Introducción al artículo

Objetivo
Desentrañar el efecto del contenido de CNC (Nanocristales de celulosa) en andamios de
PLA/CNC procesados ​por FDM (modelado por deposición fundida) y su influencia en las
propiedades estructurales, superficiales y mecánicas finales de los biocompuestos.

Tejido óseo

CNC

Figura 7. Estructura química de la celulosa.

Figura 8. Representación grafica de tejido óseo.

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 Discusión de artículo

Introducción al artículo

Matriz Polímero sintético

Armazón óseo ideal
tridimensional (PLA)

Andamio PLA/CNC

Nanocristales de Polímero natural

celulosa (CNC) (celulosa)

Figura 9. Micrografía SEM de andamio con

PLA/CNC

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 Síntesis

Síntesis de CNC

Método a partir de Ficus thonningii

1 3

Tratamiento con álcali Blanqueo Hidrólisis ácida

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 Síntesis

Síntesis de CNC

Figura 10. Proceso de síntesis de los CNC por el método de 3 pasos a partir de Ficus thonningii.

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 Síntesis

Extrusión de filamentos

Extrusión de un solo tornillo

Tabla 1. Formulación de compuestos PLA/CNC

Notación Composición Peso de PLA (g) Peso de CNC (g)

PLA 100% PLA + 0% CNC 30 0

PLA/CNC 1 99% PLA + 1% CNC 29.7 0.3

PLA/CNC 3 97% PLA + 3% CNC 29.1 0.9

PLA/CNC 5 95% PLA + 5% CNC 28.5 1.5

Se utilizó como solvente diclorometano (DCM, por sus siglas en ingles); la temperatura de extrusión fue de
160° a 165°.

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 Caracterización

Caracterización de filamentos PLA/CNCx

Los filamentos compuestos resultantes de la hibridación de PLA/CNC, exhiben buenas

capacidades para mejorar la unión y proliferación celular.

Figura 11. Micrografía SEM de filamentos compuestos de PLA y PLA/CNCx extruidos.

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 Caracterización

Análisis térmico

Figura 12. Análisis térmico de filamentos extruidos compuestos de PLA/CNC. a) TGA b)DTG c)Curvas DSC.

Tabla 2. Análisis térmico.

Muestra Tg (°C) Tcc (°C) Tm (°C) ΔHcc (J/g) Xc (%)
PLA 66 100 171 24 26
PLA/CNC 1 57 88 168 20 22
PLA/CNC 3 56 89 167 22 27
PLA/CNC 5 57 87 166 23 26

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 Caracterización

Análisis térmico

Tabla 3. Temperaturas de descomposición de filamentos compuestos.

Muestra Temperatura de Temperatura de máxima
descomposición (°C) degradación (°C)
PLA 318.8 373.39

PLA/CNC 1 311.8 370.62

PLA/CNC 3 325.5 365 - 374

PLA/CNC 5 320.4 369.22

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 Caracterización

Filamentos PLA/CNC 3

Buena dispersión y una buena adhesión

interfacial.

Se pueden procesar a temperaturas que

alcanzan los 300 °C sin dañarlos.

Los CNC crean importantes sitios de

proliferación y unión celular para cualquier
Figura 13. Micrografía SEM de filamento material de soporte implantable.
compuesto de PLA/CNC 3.

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 Síntesis

Impresión 3D de Andamios
Se seleccionaron filamentos de aproximadamente 1.75 ± 0.05 mm de diámetro para la
impresión 3D.

- El andamio se modeló mediante diseño asistido

por computadora (CAD).

- los diseños cilíndricos (porosos) (diámetro (10 mm)

× alto (2 mm)) y las piezas rectangulares (densas)
se diseñaron utilizando una impresora FDM.

- Los filamentos fueron tratados a una

temperatura de 200 °C.

- El espesor de cada capa fue de 0.15 mm.

- La velocidad de impresión fue de 30 mm/s.

Figura 14. Pasos de fabricación del andamio PLA/CNCx (extrusión del
filamento compuesto e impresión 3D).

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 Caracterización

Propiedades mecánicas

Elongación de rotura (%)

Modulo de Young (Gpa)

Máxima tensión de rotura (N)

Tensión de rotura (N)

Figura 15. . Propiedades mecánicas: (a) Foto de andamios de PLA y PLA/CNCx con forma de hueso de perro para pruebas de resistencia
a la tracción. (b) Módulo de Young. (c) Límite de elasticidad a la tracción. (d&e) tensión de rotura (***p 0,001, ns=no significativo)

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 Caracterización

Propiedades mecánicas

Tabla 4. Propiedades mecánicas.

Propiedad PLA PLA/CNC 3
Modulo de Young
(GPa) 2.4 ± 0.1 3.1 ± 0.2

Alargamiento de rotura
(%) 2.4 ± 0.3 2–3.6

La presencia de CNC tiende a mejorar la elastoplasticidad del PLA. Esto podría deberse
a la buena interacción fibra-matriz debido a un mejor entrelazamiento de la red CNC en
la matriz PLA.

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 Caracterización

Morfología de andamios

Tamaño de
puntal

Tamaño de poro

• Tamaño de poro de
PLA (a) 362 ± 19 µm

• Tamaño de poro del

compuesto
PLA/CNC3 (c) 458 ±
17 µm

Figura 16. Micrografías electrónicas de barrido de andamios impresos en 3D: vista superior de la morfología de ( a ) PLA y ( c )
PLA/CNC3. Sección transversal con un zoom en el recuadro de ( b ) PLA y ( d ) PLA/CNC3.

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 Caracterización

Morfología de andamios

a)
- La porosidad de los andamios de PLA y PLA/CNC3 es
Tamaño (µm)
relativamente alta (58 ± 2% y 67 ± 2%),
respectivamente.

- Una alta porosidad promueve la liberación eficiente

Poro Puntal
de biofactores, incluidas células, genes y proteínas.
b) c)
- La adición de 3% de CNC aumenta la porosidad de los
andamios de PLA, lo que se puede atribuir a la
interacción iónica entre los diferentes componentes
que crean más huecos en los andamios.

Figura 17. (a) Análisis estadístico de los diámetros de PLA y PLA/CNC impresos en 3D observados encima de las muestras mediante
SEM (Prueba Anova, ** p <0,01). Topografía de andamios impresos en 3D que normalmente muestran la rugosidad de la superficie de
( b ) PLA y ( c ) PLA/CNC3.

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 Caracterización

Morfología de andamios

Porosidad

W1: Cantidad de peso especifica de etanol

𝑾𝟏 − 𝑾𝟑
𝑷𝒐𝒓𝒐𝒔𝒊𝒅𝒂𝒅 % = 𝟏𝟎𝟎 ∗ W2: Peso total de los andamios sumergidos
𝑾𝟐 − 𝑾𝟑
W3: Etanol residual.

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 Caracterización

Ángulo de contacto e hinchamiento

Tabla 5. Angulo de contacto e hinchazón.

Materiales PLA PLA/CNC 3

Angulo de contacto (°) 101 ± 1 84 ± 2

Índice de hinchazón (%) 4.1 ± 0.3 9.8 ± 0.7

Wd: Peso de andamio conocido.

𝑾𝒉 −𝑾𝒅
Indice de hinchazón % = 𝟏𝟎𝟎 ∗ Wh: Peso de andamio con agua residual
𝑾𝒅
adsorbida.

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 Caracterización

Ángulo de contacto e hinchamiento

Figura 18. Imágenes de ángulo de contacto de el agua en (a) PLA y (b) PLA/CNC3.

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 Caracterización

Biodegradación

Degradación enzimática
Perdida de peso (%)

Los andamios de PLA y PLA/CNC 3 se sometieron a un

estudio de degradación in vitro sumergiéndolos en tampón
alcalasa durante un período de 28 días.

La incorporación de CNC a la matriz de PLA mejora

relativamente la degradación del PLA.
Tiempo de degradación (días)
Figura 18. Pérdida de peso de andamios de PLA y PLA/CNC3 en función
del tiempo de degradación (andamios sumergidos en tampón alcalasa
durante un período de 28 días).

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 Caracterización

Ensayos de mineralización
Se eligió el proceso de mineralización biomimética de andamios impresos en SBF para evaluar la
formación de apatita en la superficie de PLA y PLA/CNC3 con el fin de concluir sobre su
capacidad de regeneración ósea y unión.

Figura 19. Evaluación del crecimiento de apatita en andamios de PLA y PLA/CNC 3 mineralizados en SBF a los 14 días mediante
microscopía electrónica de barrido a alto y bajo aumento (SEM). (a) PLA (b) PLA/CNC 3.

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 Caracterización

Citocompatibilidad

Proliferación celular

Día 5 de cultivo

Expresión genética relativa (% de PLA)

Actividad luciferasa (% de control)

Figura 20. Citocompatibilidad de filamentos y andamios de PLA y PLA/CNC. (a) efecto de los filamentos sobre la viabilidad de los osteoblastos
humanos. (b) SEM que muestra células hFOB cultivadas en los andamios PLA y PLA/CNC3. ( c ) Crecimiento de células hFOB luminiscentes en los
armazones de PLA y PLA/CNC3 en los días 1, 2 y 4. ( d ) Expresión de genes marcadores de diferenciación osteogénica en células hFOB cultivadas
durante 2 días en presencia de eluatos de PLA y PLA/CNC3.
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 Caracterización

Conclusiones

• Se diseñaron con éxito andamios biomiméticos producidos por tecnología FDM, a los que se
les atribuyo que tienen una alta porosidad con una presencia evidente de una arquitectura
porosa repetitiva interconectada favorable a la mejora del crecimiento del tejido óseo al
permitir una vascularización óptima, nucleación de hidroxiapatita y maduración mineral.

• Los resultados arrojan luz sobre la relevancia del CNC en compuestos basados ​en PLA para la
ingeniería de tejidos y abren vías simples y prometedoras para diseñar andamios
multifuncionales impresos en 3D que sean activos para futuras aplicaciones de regeneración
de tejidos.

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