Microscopía

ELECTRÓNICA
Definición
La microscopía electrónica (ME) es una técnica
utilizada para obtener imágenes de ultra alta
resolución, utiliza electrones en lugar de
fotones o luz visible para formar imágenes de
objetos diminutos.

Los microscopios electrónicos permiten

alcanzar amplificaciones mayores antes que los
mejores microscopios ópticos, debido a que la
longitud de onda de los electrones es bastante
menor que la de los fotones.

El ME en comparación con el MO es que la longitud

de onda del haz de ME es 2 000 veces menor que la
del haz de luz del MO, lo que aumenta la resolución
por un factor de 10^3
 Tipos

MICROOSCOPIO MICROOSCOPIO
ELECTRÓNICO DE ELECTRÓNICO DE
TRANSMISIÓN (MET) BARRIDO (MEB)
Tipos
 MICROOSCOPIO
ELECTRÓNICO DE
TRANSMISIÓN
(MET)
Principio:
PASO
01 Un cañón emite electrones -> los electrones son atraídos
hacia un ánodo (electrodo +)

PASO
02 La diferencia eléctrica entre el cátodo y el ánodo da a los
electrones un voltaje de aceleración de 20 000 y 200 000
voltios --> esto genera el haz de electrones

PASO
03 El haz pasa por una serie de lentes -> lente condensador
cambia el diámetro del haz -> lente objetivo enfoca y
aumenta el haz -> lente proyector vuelve a aumentar el haz

PASO
04 La imagen final se ve en una pantalla fluorescente cubierta
de fósforo o capturado en una placa fotográfica
Preparación:
Los principios utilizados en la preparación de los
01 cortes son los mismos que se usan en la MO, solo hay
que trabajar con muestras de tres a cuatro órdenes
más finas que las utilizadas para la MO.
La preparación de rutina de muestras para ME de
02 transmisión comienza con la fijación en
glutaraldehído seguida de un enjuague en una
solución amortiguadora y la fijación con tetraóxido
de osmio.
03 Lo común es que se fijen piezas de tejido de no más
de 1mm^3. Se utilizan cuchillas de diamante.

El glutaraldehído, preserva constituyentes de proteínas mediante

enlaces cruzados entre ellas

El tetraóxido de osmio reacciona con lípidos, en particular

fosfolípidos.
 Tinción
La tinción de los cortes es necesaria para aumentar el contraste de
modo que los detalles de la estructura celular sean fáciles de ver y
fotografiar.

Los cortes se tiñen mediante la adición de materiales de gran

densidad, como iones de metales pesados.

Los iones de metales pesados se unen a los tejidos durante la

fijación o la deshidratación. El tetraóxido de osmio se une a
los fosfolípidos de las membranas, impartiéndoles densidad
adicional.

A las soluciones de alcohol en la deshidratación se les añade

nitrato de uranilo para aumentar densidad de los
componentes de las uniones intercelulares. La inmersión
secuencial en soluciones de acetato de uranilo y citrato de
plomo se usa para teñir los cortes antes de verlos con el MET
para proporcionar micrografías electrónicas de alto
contraste y mayor resolución.
 MICROOSCOPIO
ELECTRÓNICO DE
BARRIDO (MEB)
En la microscopía electrónica de barrido, el haz de
electrones no atraviesa la muestra, sino que se explora su
superficie.
Principio:
Las imágenes son tridimensionales y muestran la
01 estructura superficial de una muestra examinada.

Para el examen de tejidos, la muestra se fija, se deshidrata

por desecación de punto crítico, se cubre con una película
02 de oro-carbono evaporado, se monta en un soporte de
aluminio y se coloca en la cámara..

El barrido se consigue con el mismo tipo de exploración

03 que hace recorrer el haz de electrones sobre la superficie
de un tubo de televisión.

Los electrones reflejados desde la superficie y los

04 electrones que son expulsados de la superficie son

recogidos por uno o más detectores y reprocesados para
formar una imagen de alta resolución tridimensional de la
superficie de la muestra.