UNIVERSIDAD RICARDO PALMA

Facultad de Medicina Humana

Manuel Huamán Guerrero

Tarea N° 03: “Espectrofotometría: Curvas de Calibración y concentración de

sustancias en el organismo.”

Docente: Cecilia Katherine Rojas Guerrero

Asignatura: Bioquímica

Alumnos:
Anthony Alexis Loarte Sarmiento
Xiomara Rouss Manyavilca Briceño
Gonzalo Paolo Pisconte Pardo
Isabel Katherine Principe Aguilar
Maria Fernanda Rojas Román

2024.
Orientaciones Generales
1. Leer con detenimiento la guía de la presente práctica y revisar el
video alcanzado.

2. Trabajará de manera colaborativa con el grupo designado por su

docente de laboratorio.

3. Realizar el proyecto en un documento de word de Google Drive,

asimismo se colocan los nombres de los estudiantes que forman el
grupo y que hayan realizado la práctica.

4. Calcule las concentraciones en mg% de las diluciones del estándar.

En nuestro caso,la solución patrón,que es el Azul de Metileno, su
concentración es de 5 mg%.

● Tubo 1: 2 ml
Primero hallamos cuantos mg hemos añadido en dicho volumen:
5 mg - 100 ml
x mg - 2 ml
x = 0.1 mg

5*2
100
= 0.1 mg

Luego hallamos la concentración que hay en nuestra solución de 10ml

0.1 mg - 10 ml
y mg - 100ml
y = 1 mg

0.1*100
10
= 1 mg
● Tubo 2: 4 ml

5 mg - 100 ml
x mg - 4 ml
x = 0.2 mg

5*4
100
= 0.2 mg

0.2 mg - 10 ml
y mg - 100ml
y = 2 mg

0.2*100
10
= 2 mg
● Tubo 3: 6 ml
5 mg - 100 ml
x mg - 6 ml
x = 0.3 mg

5*6
100
= 0.3 mg

0.3 mg - 10 ml
y mg - 100ml
y = 3 mg

0.3*100
10
= 3 mg
● Tubo 4: 8 ml

5 mg - 100 ml
x mg - 8 ml
x = 0.4 mg

5*8
100
= 0.4 mg

0.4 mg - 10 ml
y mg - 100ml
y = 4 mg

0.4*100
10
= 4 mg
● Tubo 5: 10 ml
5 mg - 100 ml
x mg - 10 ml
x = 0.5 mg

5*10
100
= 0.5 mg

0.5 mg - 10 ml
y mg - 100ml
y = 5 mg

0.5*100
10
= 5 mg
 5. Grafique en papel milimetrado Abs vs Concentración del estándar.

Durante el laboratorio, calculamos el valor de la absorbancia con el valor

hallado de la transmitancia (%T) usando la fórmula: 𝐴𝑏𝑠 = 2 − 𝑙𝑜𝑔 (%𝑇).

Tubo 1 Tubo 2 Tubo 3 Tubo 4 Tubo 5

Abs 0.1226 0.2541 0.4134 0.5816 0.6989

mg% 1 2 3 4 5

6. Grafique en papel semilogarítmico %T vs Concentración del estándar.

7. Calcular la concentración de la muestra problema, haciendo uso de la
curva de calibración.

Utilizando la curva de calibración, que relaciona la concentración con la

absorbancia, y después de determinar la absorbancia de la muestra
problema, que en este caso es de 0.1226, trazamos una línea horizontal
hasta encontrarnos con la línea azul que representa la conexión de los
puntos de concentración y absorbancia de los 5 tubos de ensayo. A partir de
 ese punto, trazamos una línea vertical y encontramos la concentración de la
muestra problema, la cual en nuestro caso es de 2.44 mg%.

8. Calcular la concentración de la muestra problema haciendo uso del

F.C. y compare los resultados.

Para poder encontrar el F.C. Debemos usar los datos que hallamos en un
primer lugar, como la Abs y la concentración mg%. Así mismo hacer uso de
la Transmitancia (&T) que fue un dado proporcionado.

Tubo 1 Tubo 2 Tubo 3 Tubo 4 Tubo 5 MP

%T 75.4 55.7 38.6 26.2 20.0 47.1

Abs 0.1226 0.2541 0.4134 0.5816 0.6989 0.33

mg% 1 2 3 4 5 X

El valor del F.C. (factor de calibración) lo hallaremos con la siguiente fórmula

para cada tubo, porque luego con el promedio del F.C. de los 5 tubos vamos a
poder hallar el valor de la concentración de la muestra problema.

𝐶𝑜𝑛𝑐𝑒𝑛𝑡𝑟𝑎𝑐𝑖ó𝑛 𝑠𝑡.
𝐹𝐶 = 𝐴𝑏𝑠

1
1. FC: 0.1226
= 8.156
2
2. FC: 0.2541
= 7.870
3
3. FC: 0.4134
= 7.256
4
4. FC: 0.5816
=6.877
5
5. FC: 0.6989
= 7,1540

F.C. : Promedio de los 5 resultados 7,463

Luego de obtener el promedio de los F.C.,este valor se aplica en la fórmula ya antes

presentada, para así hallar el valor de concentración de la muestra problema:
𝐶𝑜𝑛𝑐𝑒𝑛𝑡𝑟𝑎𝑐𝑖ó𝑛 𝑠𝑡.
𝐹𝐶 = 𝐴𝑏𝑠

que también pasándolo a multiplicar, nos ayuda a hallar el valor de concentración:

𝐶𝑜𝑛𝑐𝑒𝑛𝑡𝑟𝑎𝑐𝑖ó𝑛 = 𝐹. 𝐶. 𝑥 𝐴𝑏𝑠
Concentración= 7,463 x 0,33
Concentración (MP) = 2,338
 9. Explique la aplicación de la espectrofotometría en el análisis de un
laboratorio clínico.

La espectrofotometría es una herramienta importante para la optimización de

las pruebas de laboratorio en el diagnóstico médico.Se basa en la capacidad
de analizar los resultados de cualquier experimento a través del
espectrofotómetro.
Por ello,la espectrofotometría se utiliza para optimizar el diagnóstico de
muchas enfermedades diferentes como enfermedades infecciosas, el
diagnóstico de cáncer y el diagnóstico de enfermedades autoinmunes.Se
puede usar para medir los parámetros relevantes para un diagnóstico como los
niveles de plomo, los niveles de nitrógeno y pruebas para la medición de la
glucosa y colesterol en la sangre, esto le permite a los médicos a identificar los
medicamentos o tratamientos adecuados para los pacientes.

También se utiliza para optimizar las pruebas de laboratorio relacionadas con

la medición del estado de salud. Estas pruebas incluyen la medición de los
niveles hormonales específicos, la medición de los niveles de proteínas en la
sangre, los análisis de sangre para detectar infecciones, e incluso los análisis
de líquidos corporales.

10. Explique porqué el %T es inversamente proporcional a la

concentración de un problema.
Se puede explicar por qué el %T disminuye a medida que aumenta la
concentración de un soluto de la siguiente manera: Cuando la concentración
de un soluto en una muestra aumenta, la cantidad de moléculas presentes en
la muestra que son capaces de absorber la luz también aumenta. Según la
ley de Beer, la absorbancia es directamente proporcional a la concentración
del soluto, lo que significa que a mayor concentración, mayor será la cantidad
de luz absorbida por la muestra. En consecuencia, la cantidad de luz que
logra pasar a través de la muestra, es decir, la transmitancia (%T), disminuye.
En resumen, a mayor concentración de soluto, menor será la transmitancia
de la muestra.

11. Encuentre ventajas de una curva de calibración Vs Factor de

calibración, para determinar la concentración de un problema.
Podemos identificar dos beneficios significativos al utilizar una curva de
calibración en comparación con el factor de calibración para determinar la
concentración de una muestra. La principal ventaja radica en la precisión que
se obtiene al trabajar con múltiples muestras para establecer una relación
lineal. Esta precisión es fundamental para obtener resultados confiables y
exactos en el análisis de la concentración del problema. Además, la
construcción de una curva de calibración lineal proporciona una ventaja
adicional: cualquier desviación de la linealidad en los datos puede indicar la
 presencia de errores, lo que permite una identificación temprana y una
corrección oportuna de posibles problemas experimentales.

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS:

● Díaz P. Espectrofotómetro: ¿Qué es y para qué sirve? [Internet]. Plastico.

2023 [citado el 15 de abril de 2024]. Disponible en:
https://www.plastico.com/es/noticias/espectrofotometro-que-es-y-para-que-sir
ve