FACULTAD DE

QUÍMICA

LABORATORIO DE ANÁLISIS INSTRUMENTAL

PRÁCTICA 11
SECCIÓN: HPLC
DETERMINACIÓN DE VAINILLINAS POR MEDIO DE CLAE

OBJETIVO
Determinar el contenido de vainillina y etilvainilllina mediante la CLAE de fase inversa, con
detección por UV, utilizando el área de los picos para determinar las concentraciones.

REACTIVOS Y MUESTRAS
Agua desionizada destilada, acetonitrilo calidad CLAE, filtrados a través de un montaje de
filtración Millipore, provisto de membranas de naylon, de tamaño de poro 0.45 m y
desgasificados.
Se emplea la siguiente fase móvil: sistema isocrático de agua-acetonitrilo en proporciones
de 60:40.
Muestra: Prepare una disolución de 5 mg de vainillina y etilvainillina en 10 mL de la fase
móvil (agua-acetonitrilo 60:40).

EQUIPO
Sistema de cromatografía CLAE, provisto de detector de arreglo de diodos.
Columna: Fase reversa C18 (4.6, 150 mm, 5 m).
Fase móvil: Agua desionizada destilada- acetonitrilo, en proporción 60:40.
Flujo: 1mL/min
Detector: Absorbancia a 280 nm y 260 nm
Temperatura de la columna: 35 °C.
Volumen de inyección: 10 L

PROCEDIMIENTO
Preparación de la muestra

Filtre la muestra preparada, para ello deposite la muestra en el cuerpo de una jeringa (sin
aguja) y adapte a un filtro millipore. Deposite el filtrado en un vial cromatográfico
etiquetado como ME#
Curva de calibración
Elabore disoluciones de la solución de reserva con concentraciones de 5, 10, 25, 50, 75, 100
y 125 ppm, empleando como disolvente a la fase móvil (agua-acetonitrilo 60:40).

Análisis CLAE
Siguiendo las recomendaciones proporcionadas por el profesor, realice la inyección y
análisis de cada uno de los puntos de la curva de calibración, posteriormente analice su
muestra.

DATOS Y CÁLCULOS
Construya las curvas de calibración utilizando los datos obtenidos para los patrones de cada
estándar: área de los picos vs concentración de estándar (mg/mL).
Calcule la concentración de vainillina y etilvainillina en la muestra, expresada en términos
de mg de estándar/mL.

REFERENCIA
Agilent Application Solution. Application note. Analysis of natural and artificial vanilla
preparations. A. G. Huesgen.
Perkin Elmer Application note. Analysis of vanillin, ethylvanillin and coumarin in vanilla
extracts products by UHPLC with PDA detection.