DOCUMENTO: Protocolo de Calificación de

Desempeño PQ

TÍTULO: Cromatógrafo de Líquidos

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1.0 OBJETIVO
Realizar la Calificación de desempeño del Cromatógrafo de Líquidos (XC-015) y demostrar, mediante
evidencia documentada que funciona de manera consistente de acuerdo a las especificaciones de uso
rutinario conforme a las Buenas Prácticas de Laboratorio y verificar que es apto para su uso en las
operaciones de rutina conforme a las Buenas Prácticas de Fabricación de Medicamentos, NOM-059-
SSA1-2015.

2.0 ALCANCE
Este protocolo aplica para la Calificación de Desempeño del Cromatógrafo de Líquidos (XC-015)
perteneciente a Amarox Pharma S.A. de C.V.

3.0 REQUERIMIENTO DE LA CALIFICACIÓN

De acuerdo al Plan Maestro de Validación PMV-2023 se requiere realizar la Calificación de
Desempeño del Cromatógrafo de Líquidos (XC-015) y demostrar, mediante evidencia documentada
que funciona de manera consistente.

4.0 DESCRIPCIÓN GENERAL

La cromatografía es un método físico de separación en el cual los componentes de una mezcla más o
menos compleja se distribuyen entre dos fases, una fija (fase estacionaria) y la otra que se mueve en
una dirección definida (fase móvil).

Se requieren tres pasos principales en la separación y la identificación de los componentes de una

mezcla mediante un Cromatógrafo de Líquidos.
1. Inyectar una muestra en el Cromatógrafo (se realiza en el inyector)
2. Separar la muestra en componentes individuales (se realiza dentro de una columna en el horno).
3. Detectar que compuestos había en la muestra (se realiza en el detector).

Módulo de separación e2695

El Módulo de separación e2695 de Waters® es un instrumento que integra un sistema de gestión de
solventes (bomba), un sistema de gestión de muestras (automuestreador), un Horno de columnas y un
Detector. La integración de estos componentes típicos en sistemas de cromatografía líquida de alto
rendimiento (HPLC) maximiza el rendimiento de todas las funciones de separación esenciales.
El sistema de bombeo permite la interacción de hasta cuatro solventes, los cuales son desgasificados
por vacío.
El automuestreador tiene una capacidad de 120 viales distribuidos en 5 carruseles, en los cuales se
colocan las muestras que serán inyectadas. El automuestreador permite manejar las muestras en un
rango de temperatura de 4°C a 40°C.
El Horno de columnas permite un intervalo de temperatura entre 4°C a 65°C. El horno para columnas y
el termostatizador para columnas de la serie Alliance están diseñados para controlar y mantener la
temperatura de la columna dentro del compartimiento de columnas. Cuando se fija la temperatura en el
módulo de separación, se envía una orden a una tarjeta del CPU del horno para columnas que controla
la temperatura encendiendo y apagando el elemento calefactor para obtener la temperatura deseada
de la columna.

El panel frontal cuenta con una pantalla de cristal líquido, una interfaz de usuario con teclado numérico.

El módulo de separación controla los siguientes parámetros:

 La programación del método
 La composición del solvente
 La velocidad de flujo.
 El lavado de los sellos del émbolo
 El lavado de la aguja
 La inyección de la muestra
  La desgasificación en línea
 Los eventos externos
 El horno de columnas (si está instalado)
 El termostatizador de muestras (si está instalado)

Detector de arreglo de diodos 2998 Waters (PDA)

El Detector de arreglo de diodos 2998 Waters (PDA) es un espectrofotómetro de luz ultravioleta/visible
con una matriz de 512 fotodiodos y una resolución óptica de 1.2 nm/pixel, el detector opera en un
intervalo de 190 a 800 nm. El detector de PDA logra un mayor rendimiento de la luz de resolución
espectral dada con el diseño de la celda TaperSlit.

El detector mide la cantidad de luz que incide sobre la matriz de fotodiodos, para determinar la
absorbancia de la muestra en la celda de flujo, La absorbancia se basa en los principios de la ley de
Beer. Este detector optimiza la relación señal-ruido eligiendo un intervalo en la longitud de onda
(Longitudes de onda de interés) y aumentando el valor de la resolución espectral. El detector utiliza un
filtro de Hamming para minimizar el ruido.

El detector puede recoger simultáneamente dos tipos de canales de datos: espectros (3D) y los
cromatogramas (2D). Permite obtener los mejores resultados en el análisis de comparación y pureza
de pico.

Para el funcionamiento del Cromatógrafo de Líquidos, código XC-015, son necesarios los siguientes
elementos:
 Conmutador (Switch) de 8 puertos. Su función es interconectar dos o más host de manera
similar a los puentes de red.
 Cliente (Estación de trabajo). Es el dispositivo que funciona como Interfase Hombre – Máquina
(HMI) y en donde se encuentra instalado el Software Empower 3.
 UPS. Es una fuente de suministro eléctrico que posee una batería con el fin de seguir dando
energía a un dispositivo en caso de interrupción eléctrica. En Inglés significa “Uninterruptible Power
Supply”

5.0 RACIONAL DE PRUEBAS:

En la Calificación de Desempeño se genera evidencia documental que asegura que el desempeño
del sistema, satisface los requerimientos de calidad, Buenas Prácticas de Laboratorio y
especificaciones de uso rutinario. La necesidad de realizar la Calificación de Desempeño (PQ), surge
con el fin de dar cumplimiento a las Buenas Prácticas de Fabricación, asegurar resultados analíticos
confiables y entregar un producto de calidad.
 7.1. CALIFICACIÓN DE DESEMPEÑO
Debido a que el Cromatógrafo de Líquidos (XC-015), fue calificado en Desempeño en enero 2023,
de acuerdo al Plan Maestro de Validación se retará el Desempeño del equipo para demostrar que
sigue funcionando de manera consistente.
Durante la calificación de desempeño se evaluarán las pruebas abajo descritas:

PRUEBA RACIONAL IMPACTO

Evaluar si el sistema es consistente bajo
Verificación de la precisión del
las mismas condiciones, valorando el Directo
sistema
tiempo de retención y las áreas obtenidas.
Verificar que a la longitud de onda
Verificación de la longitud de
programada de 225 nm el equipo sea Directo
onda
capaz de generar el análisis esperado.

6.0 REFERENCIAS
 NOM-059-SSA1-2015, Buenas prácticas de fabricación de medicamentos.

7.0 HISTÓRICO DE CAMBIOS

Código Fecha Cambio/Modificación
8.0 REPORTE DE FALLAS O DESVIACIÓNES.
10.1 REPORTE DE FALLA O DESVIACIÓN
Documentar en el siguiente formato cualquier falla o desviación al protocolo ocurrida durante su ejecución.
Hoja ____ de ____

Falla N° /Desviación Fecha:

Nombre de la Prueba: _________________________________________________________________________________________

Descripción de la Falla/Desviación_________________________________________________________________________________________________

____________________________________________________________________________________________________________________________

____________________________________________________________________________________________________________________________

____________________________________________________________________________________________________________________________

____________________________________________________________________________________________________________________________

____________________________________________________________________________________________________________________________

____________________________________________________________________________________________________________________________

____________________________________________________________________________________________________________________________

Justificación (razón por la cual se suscita la falla/Desviación): ___________________________________________________________________________

____________________________________________________________________________________________________________________________

____________________________________________________________________________________________________________________________

____________________________________________________________________________________________________________________________

____________________________________________________________________________________________________________________________

____________________________________________________________________________________________________________________________

________________________________________________________________________________________________

Responsable(s) Fecha estimada

Acción:_____________________________________________________________________________
Nombre y Firma: de término:
___________________________________________________________________________________
_______________
___________________________________________________________________________________
_______________ ____________

Conclusión:___________________________________________________________________________________________________________________

____________________________________________________________________________________________________________________________

____________________________________________________________________________________________________________________________

Documentado por:_________________________________________________ Fecha: ________________________

Revisado por :____________________________ __________________ Fecha: ________________________

 10.2 BITÁCORA DE FALLAS O DESVIACIONES
Hoja ___ de ___
Número de
Fecha de Número de
Falla/ Documentada por: Fecha de Cierre Estatus
Registro CAPA (si aplica)
Desviación
Cerrada
Cancelada
Cerrada
Cancelada
Cerrada
Cancelada

Cerrada
Cancelada

Cerrada
Cancelada

Cerrada
Cancelada

Cerrada
Cancelada

Cerrada
Cancelada

Cerrada
Cancelada

Cerrada
Cancelada

Cerrada
Cancelada

Cerrada
Cancelada

Cerrada
Cancelada

Cerrada
Cancelada

9.0 INSTRUMENTACIÓN Y CALIBRACIÓN

 Verificar que todos los instrumentos utilizados durante las Calificaciones o validaciones se encuentren
calibrados. Registrar los resultados en las tablas anexas. Estas tablas pueden ser copiadas o reimpresas las
veces que sean necesarias para registrar todos los instrumentos.
TABLA DE REGISTRO DE CALIBRACIÓN – INSTRUMENTOS DE PRUEBA
Hoja ____ de ____
IDENTIFICACIÓN DESCRIPCIÓN
Descripción del Instrumento:
Ubicación:
Modelo: Fabricante / Marca:
N° de identificación (ID): N° de Serie:
Fecha Calibración: Fecha de Vencimiento:
Calibrado por (documente el ¿El instrumento posee una
laboratorio que realizó la etiqueta de calibración que
calibración): indica las fechas de
 Si  No
calibración, vencimiento y el
¿Se anexa copia de número de referencia del
 Si  No
Certificado? Certificado?:

IDENTIFICACIÓN DESCRIPCIÓN
Descripción del Instrumento:
Ubicación:
Modelo: Fabricante / Marca:
N° de identificación (ID): N° de Serie:
Fecha Calibración: Fecha de Vencimiento:
Calibrado por (documente el ¿El instrumento posee una
laboratorio que realizó la etiqueta de calibración que
calibración): indica las fechas de
 Si  No
calibración, vencimiento y el
¿Se anexa copia de número de referencia del
 Si  No
Certificado? Certificado?:

IDENTIFICACIÓN DESCRIPCIÓN
Descripción del Instrumento:
Ubicación:
Modelo: Fabricante / Marca:
N° de identificación (ID): N° de Serie:
Fecha Calibración: Fecha de Vencimiento:
Calibrado por (documente el ¿El instrumento posee una
laboratorio que realizó la etiqueta de calibración que
calibración): indica las fechas de
 Si  No
calibración, vencimiento y el
¿Se anexa copia de número de referencia del
 Si  No
Certificado? Certificado?:

Sección de Comentarios:

Realizó: Fecha:
Revisó: Fecha:
10.0 PRUEBAS DE CALIFICACIÓN DE DESEMPEÑO

12.1 VERIFICACIÓN DE LA PRECISIÓN DEL SISTEMA

Objetivo: Evaluar si el sistema es consistente bajo las mismas condiciones, valorando el tiempo de
retención, las áreas y la eficiencia.

Metodología:
1. Seguir la metodología descrita en el documento STP-IBH-01-01 de Irbesartán e Hidroclorotiazida 300
mg / 12.5 mg Página 14 (Ensayo por HPLC).
2. Registrar los resultados obtenidos en la precisión del sistema en la hoja de trabajo.

Criterio de Aceptación:

La eficiencia de la columna para los picos de Hidroclorotiazida e Irbesartán en la solución estándar no debe
ser menor a 2000 platos teóricos y el factor de coleo para los mismos picos no debe ser mayor a 2.0.

El %RSD para las áreas de los picos de Irbesartán e Hidroclorotiazida obtenido de las 5 inyecciones en la
solución estándar debe ser no mayor a 2.0.

El tiempo de retención para los picos de Irbesartán e Hidroclorotiazida debe ser aproximadamente de 3.5
minutos y 9.5 minutos.
 “VERIFICACIÓN DE LA PRECISIÓN DEL SISTEMA”

EFICIENCIA DE LA COLUMNA
NÚMERO
PLATOS TEÓRICOS FACTOR DE COLEO

RESULTADO
PUNTO ESPECIFICACIÓN
C/NC
La eficiencia de la columna para los picos de Irbesartán e
Hidroclorotiazida en la solución estándar no debe ser menor a 2000 SÍ NO 
EFICIENCIA DE LA platos teóricos
COLUMNA
El factor de coleo para los mismos picos no debe ser mayor a 2.0. SÍ NO 

DICTAMEN
CRITERIO DE ACEPTACIÓN
(C/NC)
La eficiencia de la columna para los picos de Hidroclorotiazida e Irbesartán en la solución
estándar no debe ser menor a 2000 platos teóricos y el factor de coleo para los mismos picos no
debe ser mayor a 2.0

En caso de Falla o
FALLAS O DESVIACIONES Desviación indique el Falla  Desviación  N/A  Referencia: _____
número de Reporte

Realizó: Fecha:
Revisó: Fecha:

Sección de comentarios:
 “VERIFICACIÓN DE LA PRECISIÓN DEL SISTEMA”

ÁREA
NO. DE INYECCIÓN
HIDROCLOROTIAZIDA IRBESARTÁN
1

PROMEDIO

% RSD

DICTAMEN
CRITERIO DE ACEPTACIÓN
(C/NC)
El %RSD para las áreas de los picos de Hidroclorotiazida e Irbesartán obtenido de las 5
inyecciones en la solución estándar debe ser no mayor a 2.0.

En caso de Falla o
FALLAS O DESVIACIONES Desviación indique el Falla  Desviación  N/A  Referencia: _____
número de Reporte

Realizó: Fecha:
Revisó: Fecha:

Sección de comentarios:
 “VERIFICACIÓN DE LA PRECISIÓN DEL SISTEMA”

TIEMPO DE RETENCIÓN
NO. DE INYECCIÓN
HIDROCLOROTIAZIDA IRBESARTÁN
1

PROMEDIO

DICTAMEN
CRITERIO DE ACEPTACIÓN
(C/NC)
El tiempo de retención para los picos de Hidroclorotiazida e Irbesartán debe ser
aproximadamente de 3.5 minutos y 9.5 minutos.

En caso de Falla o
FALLAS O DESVIACIONES Desviación indique el Falla  Desviación  N/A  Referencia: _____
número de Reporte

Realizó: Fecha:
Revisó: Fecha:

Sección de comentarios:
12.2 VERIFICACIÓN DE LA LONGITUD DE ONDA

Objetivo: Evaluar el desempeño del Cromatógrafo de Líquidos (XC-015) a una longitud de onda establecida.

Metodología:
1. Verificar que el equipo muestre las lecturas del análisis a la longitud de onda establecida de 225 nm de
acuerdo a la metodología STP-IBH-01-01 de Irbesartán e Hidroclorotiazida 300 mg / 12.5 mg.

2. Obtener los cromatogramas tipo de 5 inyecciones del estándar de manera independiente y registrar los
resultados en la hoja de trabajo.

Criterio de Aceptación: El equipo debe ser capaz de ejecutar el análisis a la longitud de onda establecida
de 225nm exhibiendo señales en el tiempo de retención definido, para los picos de Hidroclorotiazida e
Irbesartán aproximadamente de 3.5 minutos y 9.5 minutos.
 “VERIFICACIÓN DE LA LONGITUD DE ONDA”

VERIFICACIÓN DE LA LONGITUD DE ONDA A 225 nm

NÚMERO
PICO DE HIDROCLOROTIAZIDA PICO DE IRBESARTÁN

1 SÍ NO  SÍ NO 

2 SÍ NO  SÍ NO 

3 SÍ NO  SÍ NO 

4 SÍ NO  SÍ NO 

5 SÍ NO  SÍ NO 

DICTAMEN
CRITERIO DE ACEPTACIÓN
(C/NC)
El equipo debe ser capaz de ejecutar el análisis a la longitud de onda establecida
de 225nm exhibiendo señales en el tiempo de retención definido, para los picos de
Hidroclorotiazida e Irbesartán aproximadamente de 3.5 minutos y 9.5 minutos.

En caso de Falla o
FALLAS O
Desviación indique el Falla  Desviación  N/A  Referencia: _____
DESVIACIONES
número de Reporte

Realizó: Fecha:
Revisó: Fecha:

Sección de comentarios:
 11.0 APROBACIÓN DE RESULTADOS DE CALIFICACIÓN DE DESEMPEÑO

Aprobados
Aprobados con CAPA´S, Desviaciones o Controles de Cambios abiertos
No Aprobado

Dictamen:

Emitió: Revisó:
Identificación de firma y fecha Identificación de firma y fecha

Aprobó:
Identificación de firma y fecha