TEMA 1

SEPARACIONES CROMATOGRÁFICAS
 adsorventes sólidos e solventes variados.

éter de
petróleo
mistura de
pigmentos
mezcla de
pigmentos
CaCO3 pigmentos
separados

M. TSWEET (1903): Separación de mezclas de

Cromatografia
pigmentos vegetales =
en columnas rellenas con
kroma [cor] + graph [escrever]
adsorventes sólidos
(grego)

Cromatografia= kroma[color] + graph[escribir]

(griego)
PRINCIPIO BASICO
Definición:

 Método físico de separación en el cual los

componentes a separar se distribuyen entre
dos fases:
a) una de las cuales constituye la fase
estacionaria, de gran área superficial, y
b) la otra es un fluido (fase móvil) que pasa a
través o a lo largo de la fase estacionaria.
 Proceso de Separación Cromatográfica

 Los componentes de una mezcla son llevados por una

fase móvil a través de una fase estacionaria.

 Cada componentes es retardado o retenido en la fase

estacionaria debido a diversos factores:
 Superficie de adsorción
 Solubilidad relativa
 Polaridad
 Interacción química
Polaridad de los enlaces y las moléculas: Enlace
covalente polar
Un enlace covalente será polar si los átomos enlazados
tienen cierta diferencia de electronegatividad
Cada enlace tiene un momento dipolar “” (magnitud vectorial que depende la
diferencia de electronegatividad entre los átomos cuya dirección es la línea que
une ambos átomos y cuyo sentido va del menos electronegativo al más
electronegativo).
Dipolo

 A B 


Menos electro- Más electro-

negativo negativo

Electronegatividades de algunos elementos

H
2.2
Li Be B C N O F
1.0 1.6 2.0 2.6 3.0 3.4 4.0
Na Mg Al Si P S Cl
0.9 1.3 1.6 1.9 2.2 2.6 3.2
K Br
0.8 3.0
I
2.7
Valores establecidos por L. Pauling y revisados por A. L. Allred (Journal of Inorganic and Nuclear Chemistry, 1961, 17, 215).
 Momentos Dipolares de enlaces
Momento Dipolar Momento Dipolar
Enlace Enlace
(, Debye) ( ,Debye)
H-F 1.7 C-F 1.4
H-Cl 1.1 C-O 0.7
H-Br 0.8 C-N 0.4
H-I 0.4 C=O 2.4
H-C 0.3 C=N 1.4
H-N 1.3 C≡N 3.6

H-O 1.5

La dirección del momento dipolar es hacia el átomo más

electronegativo.
 La polaridad de las moléculas depende de dos
factores:
a) La existencia de enlaces covalentes polares
b) Una geometría que lo permita
 Moléculas polares.
Tienen   no nulo:
Moléculas con un sólo enlace
covalente. Ej: HCl.
Moléculas angulares, piramidales, ....
Ej: H2O, NH3
Moléculas apolares.
Tienen   nulo:
Moléculas con enlaces apolares.
Ej: H2, Cl2.
Moléculas simétricas   = 0.
Ej: CH4, CO2.
 CO2 BF3

CH4 H2 O

NH3
FUERZAS INTERMOLECULARES
 ESTRUCTURA MOLECULAR Y PROPIEDADES
FISICAS DE LOS COMPUESTOS ORGANICOS

 La fuerza intermoleculares son interacciones físicas entre

moléculas que hacen que las moléculas se asocien para formar
sólidos y líquidos y que están directamente involucradas en
propiedades físicas tales como densidad, puntos de ebullición y
fusión y solubilidad.

 Se pueden clasificar en dos grandes grupos:

 Fuerzas de van der Waals
 Dipolo permanente – dipolo permanente
 Dipolo permanente - dipolo inducido
 Dipolo inducido – dipolo inducido
 Puente de hidrógeno
 ESTRUCTURA MOLECULAR Y PROPIEDADES
FISICAS DE LOS COMPUESTOS ORGANICOS

 Influencia de la estructura sobre las propiedades moleculares.

Ejemplo: El punto de ebullición

 El punto de ebullición de un compuesto es la temperatura a la cual el

compuesto líquido se convierte en gas.
 Para que un compuesto se vaporice, las fuerzas que mantienen las moléculas
unidas unas a otras deben romperse.
 Entonces, el punto de ebullición de un compuesto depende de la atracción
entre las moléculas.
 Si las fuerzas intermoleculares son fuertes, se necesitará mucha energía para
separar las moléculas unas de otras y el compuesto tendrá el punto de
ebullición muy alto.
 Si las fuerzas intermoleculares son débiles, se necesitará una cantidad de
energía relativamente baja para separar las moléculas unas de otras, y el
compuesto tendrá el punto de ebullición bajo.
 Fuerzas de Van der Waals Puentes de hidrógeno

Dipolo-Dipolo
permanente

Dipolo-Dipolo
inducido
Fuerzas de
dispersión de
London (dipolo
inducido-dipolo
inducido
Los lagartos Gecko pueden adherirse a las paredes y techos, debido
a las fuerzas de Van der Waals.
 Fuerzas entre dipolos (Van der Waals)
a) Interacciones moleculares b) Interacciones moleculares
entre moléculas polares. entre moléculas apolares:
fuerzas de dispersión de
London.
La intensidad de las fuerzas intermoleculares (F. de Van der Waals)
viene determinada por:
- Tamaño de las moléculas
- Forma de las moléculas
- Polaridad de las moléculas

¿Por qué hay diferencia en los puntos de ebullición?

Ejemplo de interacción dipolo permanente
dipolo permanente (Van der Waals)

19
 Puente de Hidrógeno
Tipo especialmente intenso de enlace dipolo-
dipolo que se produce entre moléculas que
tienen átomos de hidrógeno unidos a átomos
especialmente electronegativos como el
oxígeno, nitrógeno o flúor
 El agua, los
alcoholes y las
aminas primarias y
secundarias
pueden actuar
como donantes o
aceptores de
hidrógeno

Los éteres,
aldehídos, cetonas
y ésteres sólo
pueden actuar
como aceptores
Posibles autoasociaciones entre moléculas de agua y
entre moléculas de metanol
Efecto de los puentes de hidrógeno sobre la temperatura de ebullición

¿Por qué hay diferencia en los puntos de ebullición?

H3C N CH3 H3C N CH2CH3 H N CH2CH2CH3

CH3 H H

pe = 3.5 ºC pe = 37 ºC pe = 49 ºC
 Es posible reconocer los compuestos con puentes de hidrógeno
gracias a los elevados puntos de ebullición que muestran
Punto Punto
Compuesto Fórmula Mol. Wt.
Ebullición Fusión
Dimetiléter CH3OCH3 46 –24ºC –138ºC
Etanol CH3CH2OH 46 78ºC –130ºC
Propanol CH3(CH2)2OH 60 98ºC –127ºC
Dietileter (CH3CH2)2O 74 34ºC –116ºC
Propilamina CH3(CH2)2NH2 59 48ºC –83ºC
Metilaminoetano CH3CH2NHCH3 59 37ºC
Trimetilamina (CH3)3N 59 3ºC –117ºC
Etilenglicol HOCH2CH2OH 62 197ºC –13ºC
Ácido acético CH3CO2H 60 118ºC 17ºC
Etilendiamina H2NCH2CH2NH2 60 118ºC 8.5ºC
Conceptos Teóricos
Básicos
Si un detector que responda a la
concentración se coloca al final de la
columna, y se registra su señal en función
del tiempo (o del volumen de fase movil
añadida), se obtiene una serie de señales,
como se muestra en esta figura.

Este gráfico denominado cromatograma, es

útil tanto para el análisis cualitativo y
cuantitativo.
Velocidad de Migración de los Solutos (analitos)
En general, los equilibrios de distribución implicados en cromatografía se
describen por ecuaciones sencillas que suponen la transferencia de un analito
entre las fases estacionaria y móvil. Así, para el soluto A, se puede escribir

Amóvil Aestacionaria

La constante de equilibrio K para este proceso se denomina constante de

distribución y se define como:
(Ec. 1)

Cs, concentración molar del soluto en la FE y cm, concentración molar del

soluto en la FM.

Idealmente K es constante en un amplio rango de concentraciones de soluto,

por lo tanto cs, es directamente proporcional a cm

Esta formulación es aplicable en la denominada cromatografía lineal, y en tal

caso, las señales son gaussianas simétricas características y los tiempos de
retención son independientes de la cantidad de analito inyectado.
TIEMPO DE RETENCIÓN

(Ec. 2)
(Ec. 3)
 (Ec. 4)

Reemplazando la ecuación 1 en ecuación 4:

(Ec. 5)
FACTOR DE RETENCIÓN O DE CAPACIDAD

Para una especie A, el factor de capacidad k´A se define como:

(Ec. 6)

Donde KA es el coeficiente de distribución de la especie A

Reemplazando la ecuación 6 en ecuación 5:

(Ec. 7)
Reemplazando la ecuación 2 y 3 en ecuación 7:

(Ec. 8)

Reordenando ecuación 8:

(Ec. 9)
 FACTOR DE SELECTIVIDAD

(Ec. 10)

KB es el coeficiente de distribución para la especie más fuertemente retenida y

KA es el coeficiente de distribución para la especie menos retenida.
Según esta definición, siempre es mayor que 1.

Reemplazando la ecuación 6 y su análoga para la especie B

en la ecuación 10:

(Ec. 11)
 Reemplazando la ecuación 9 y su análoga para la especie B
en la ecuación 11:

(Ec. 12)

Ecuación muy útil, ya que  se puede determinar a partir de datos experimentales

METODOS PARA DESCRIBIR LA EFICACIA DE
LA COLUMNA
Una molécula individual del soluto, durante la migración experimenta miles de
transferencias entre las fases estacionarias y móvil
1. El tiempo que en cada fase de cada molécula es muy
irrregular.
2. Por ello, en algunos casos, el tiempo de residencia en uma
fase dada puede ser transitorio o en otros relativamente
largo. Como resultado, su migración por la FM es también
muy irregular.
3. Por lo tanto algunas moléculas se desplazan más rápido
que otras.
4. Como consecuencia de estos procesos individuales
aleatorios, se obtiene una DISPERSIÓN SIMÉTRICA DE
LAS VELOCIADADES ALREDEDOR DEL VALOR MEDIO
5. Este valor medio representa el comportamiento de la
molécula promedio
6. La anchura de una banda aumenta a medida que se mueve
a través de la columna, debido a que se dispone de más
tiempo para la dispersión
METODOS PARA DESCRIBIR LA EFICACIA DE
LA COLUMNA

Cada “estado” de equilibrio es

llamado PLATO TEÓRICO

(Ec. 14)

(Ec. 13)

La anchura de una gaussiana está directamente relacionada con la varianza

2 o la desviación estnadar  de una medida
EVALUACIÓN EXPERIMENTAL DE H Y N

 = Varianza del pico analítico

L/tR = velocidad lineal promedio de la especie en cm/seg

(Ec. 15)
 EVALUACIÓN EXPERIMENTAL DE H Y N

1. Puede demostrarse que el área de esta triángulo es aprox. el 96% del área
total bajo la gaussiana.
2. Se sabe este 96% del área bajo un pico gaussiano se encuentra dentro del
intervalo comprendido entre mas o menos dos deviaciones estándar (±2)
alrededor de su máximo.
3. Así, las intersecciones en la figura de arriba tienen lugar a una distancia de
aprox. ±2, por lo tanto:

W = 4. (Ec. 16)

Reemplazando la ecuación 16 en ecuación 15 y reordenando:

(Ec. 17)
Reemplazando la ecuación 17 en ecuación 14 y reordenando:

(Ec. 18)

Reemplazando la ecuación 18 en ecuación 13 y reordenando:

(Ec. 19)

(Ec. 20)
El número de platos teóricos de
una columna (N) puede ser
calculado por:

tR
Columna más
N eficiente
wb
Valores típicos de
H y N: dC df H N
0.10 0.25 0.081 370370
0.25 0.25 0.156 192308
0.32 0.32 0.200 150000
0.32 0.50 0.228 131579
Capilares, L = 30 m
0.32 1.00 0.294 102041
0.32 5.00 0.435 68966
0.53 1.00 0.426 70423
0.53 5.00 0.683 43924
2.16 10% 0.549 3643
Empacadas, L = 2 m
2.16 5% 0.500 4000

Valores de H para columnas capilares y empacadas son

próximos, pero como L para las columnas capilares es
MUCHO mayor , éstas son más eficientes
Resolución (R)
• Es un parámetro que indica cómo dos señales
están separadas una de la otra
• Otras formas de calcular R usando datos
experimentales se muestra a continuación:
Eficiencia de los Sistemas Cromatográficos

Una migración de un analito

por la columna provoca
inevitablemente un
ensanchamiento de su banda:

TIEMPO
 Efectos del ensanchamiento de las
señales cromatográficas
Separación deficiente de analitos Picos mas largos y menos
con retenciones próximas intensos = menor detectabilidad

EFICIENCIA Capacidad de elución con un

mínimo de dispersión del analito.