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Vamos a empezar recordando un poco lo que vimos ayer. Ayer habíamos quedado en
el mecanismo de AMPciclico, segundo mensajero y cuya producción dependía de una
enzima que es la adenilato ciclasa. Lo importante es que la regulación de cada una de las
izo formas (5 diferentes )de la adenilato ciclasa es diferente. Algunas eran actividades por
la α y al mismo tiempo inhibidas por la β y γ , otras además de ser activadas por la α eran
co-estimuladas por β y γ. lo que nos da una posibilidad de diferentes reacciones antes la
misma enzima. Es interesante desde la perspectiva de la modulación de una enzima. Sea
como sea la Adenilato ciclasa tiene que ver con la producción del AMPc. Una vez que se
forma se va a la proteín kinasa A. la cual actúa se va a fosforilar una montón de cosas. Eso
permite la modulación de un montón de procesos diferentes. Una vez que se activo la
proteín kinasas A, todo lo que fue fosforilado cambia su actividad. Ya sea para potenciarla o
para inhibirla. Es importante mencionar que la fosforilación no solo significa la activación.
Eso es relativo a la proteína que se ve fosforilada, algunas se activan otras no, mas bien se
desactivan o inhiben.
Ya se activo el sistema y llegamos al punto en el cual ya no requerimos mas
actividad. Como hacemos para que la señales de AMPc disminuyen? Hay varias opciones.
Entre las mas importantes:
1. la primera es la regulación a través de Fosfodiesterasas. Las cuales rompen enlaces
fosfodiester. Y convierten el AMPc en AMP. El 5´AMP ya no es reconocido por la
PKA. Tiene igual el fosfato pegado pero ya no es cíclico. Por lo que es inactivo para
esa PKA. Hoy se sabe que hay PK activadas por AMP. No lo vamos a ver. Existen
fosfodiesterasas de varios tipos. Para AMPc, GMPc, activadas por calcio, etc. Todas
hacen lo mismo. Es interesante en relación con esto , se dice que el café es un
estimulante (no a todo el mundo). El mecanismo de acción de la cafeína es
inhibiendo una fosfodiesterasa. Al igual que la teofilina (té) y la teobromina
(chocolate). Que pasa sin yo inhibo una fosfodiesterasa? El AMPc, queda ahí y se
activa la proteín kinasa A y se activan las proteínas. Un ejemplo es en el sistema
reticular activante, es el encargado de mantener el estado de alerta. Es el que se ve
afectado por la cafeína favoreciendo el mantenimiento de los niveles de AMPc. Un
exceso puede producir coma.
2. Fosfatasas. Son enzimas que desfosforilan. Es muy importante para la regulación a
nivel biologico. Existen de varios tipos. Las mas importantes son las Serin/treonin
Fosfatasas ( desfosforilan en Serina o treonina). Que tipo de Kinasa es al PKA?
Serin/treonin kinasas. Hay de varios tipos de fosfatasas y todas desfosforilan. A lo
largo de la evolucion se escogieron solo algunos aminoácidos para ser fosforilados.
Desde luego la estructura química tiene relación, pero debe haber algo mas. Es
importante entender que aquello que se fosforila en tirosina, debe ser
desfosforiladoa por una fosfatasa de tirosina , igual que si se da en serina o treonina.
3. Sabemos que para que se produzca AMPc, necesitamos que se active una proteína
Gs, la cual para activarse tiene realizarlo con la activación de un receptor de 7
dominios transmembrana a traves de un ligando. Digamos que se dio el proceso y
tenemos muchísimo ligando, se comenzo a producir el AMPc, pero llego a un
momento en el cual la célula sintió que era una cantidad excesiva. Lo que se hace es
que llega una kinasas asociada a receptores de proteínas G, y fosforila el receptor. El
cual no reconoce a la proteína G. Como no es reconocida no se produce el AMPc.
Se sabe que las subunidades β y γ pueden activar este proceso en niveles muy altos
de AMPc. Ese es el primer paso. Es importante conocer que cuando esta fosforilado
ese receptor es reconocido por una proteínas que se conocen como arrestinas. Se
conocen así por que las primeras se descubrieron en el receptor β-adrenergicos.
Como son intracelulares al reconocerlo lo meten a la célula . Asi no tienen ninguna
posibilidad de reconocer al ligando. Ese proceso se conoce como desensibilización.
Se conoce así por que el receptor sigue existiendo, pero ya no puede reconocer
ligandos. Es un mecanismos muy corriente. Se puede dar la fosforilación sin que se
de la internalización. Depende de la cantidad de AMPc.
4. otras cosa que mencionamos ayer fueron las proteínas GAP´s y la actividad
GTPasica, inactivan la proteína G, la cual no puede activar la adenilato ciclasa , y a
su vez no va a producir AMPc, no se va a activar la PKA, y así sucesivamente. No
se va a dar la respuesta. Es importante que entiendan que no es posible que en la
celula solo se de un proceso. Lo que quiere decir es que cuando se da una inhibición
de AMPc, no indica que ya no hay AMPc en la célula. Hay un nivel basal constante
en las células de AMPc. Cuando se exceden estos niveles es que se dan estos
procesos.
Este ejemplo es muy didáctico para entender como se combinan estos procesos.
Nota:
Dice que no va a explicar el efecto de la toxina de la pertusis. Pero que hay que revisarla
por lo que adjunto una versión de ello anterior:
VIDEO.
Que observaron? La primera parte era exactamente igual. En vez de activar la adenilato
ciclasa, se activa la Fosfolipasa C (PLC β, la γ existe pero no es activada por proteínas G).
El PIP-2 es un fosfolípido de membrana, que se encuentra asociado a la cara interna de la
membrana. El PLC corta y forma 2 partes un PIP-3 que es liberado al citoplasma y un DAG
(Diacilglicerol asociado a la membrana) . cada uno de ellos es un segundo mensajero, una
vez que se producen pueden generar la respuesta biológica característica de cada uno de
ellos. El IP-3 abre canales de tipo receptor (canal ionotrópico. Receptor de 4 dominios
transmembrana) en el retículo endoplasmatico. Por gradiente en un transporte pasivo sale
calcio. La salida de calcio al citoplasma da como resultado la activación de kinasas
Calcio/calmodulina dependientes. Estas ultimas unen calcio. Fosforilan proteínas.
En el caso de DAG también necesita del calcio liberado por el IP-3. por que el DAG
es capaz de activar Proteín kinasas C (c por calcio) y ellas solo van a migrar a la membrana
solo en unión a calcio, sino se quedan en el citoplasma. Una vez activadas fosforilan
diferentes proteínas, muchas de las cuales están relacionadas con la división celular. Por
ello es un campo de estudio en el manejo de las células tumorales.
Es importante recordar que estamos hablando de la PLC-β por que la PLC-γ no esta
asociada proteínas G, son de un solo dominio transmembrana. El DAG esta asociado a las
MAPK-kinasas, a través de la PKC. Las MAPK son proteínas que tiene que ver con
procesos de división celular formando procesos en forma de cascada. Las MAPK esta
asociadas a acciones a nivel nuclear.
Habla sin micrófono.... pero me parece escuchar al fondo que menciona algo de las
MAPK....el cáncer...etc.
....un ejemplo de las PKC/ calmodulinas dependientes, es la Kinasa de cadena ligera
del músculo liso y que permiten la contracción del músculo liso, las fosforilasas kinasas
que veran en metabolismo de CHO, entre otras.
Este es el ultimo ejemplo que vemos antes de irnos al recreo...recordemos que estos
procesos no estan aislados. Osea que no podemos aislar el PIP y el IP-3 por que ambos
estan en la misma célula. El DARPP-32 que es una proteína que tiene que ver con la
regulación del crecimiento en celulas dopaminérgicas.
El AMPc, activa una PKA, que fosforila al DARPP-32. Esa proteína es fosforilada
para ser activada. Por lo que denotamos que si esta desfosforilada esta inactiva. El DARPP-
32 cuando esta activo inhibe a la PP-1. resulta que la PP-1 va a activar una bomba de Na/K.
Que es lo que le hace? La bomba fosforilada es inactiva en ese caso. Cuando la PP-1
desfosforila la bomba la activa. La bomba de Na/K puede ser fosforilada por la PKC, y
también por la PKA, inactivándola.
NOTA: VIENE EN EL EXAMEN EL LO DIJO EN CLASE
Otro elemento es el calcio, que activa una fosfatasa, que desfosforila a la DARPP-32, y la
desactiva. Que resulta si hay cafeína? Que le hace a la bomba?
La cafeína aumenta el AMPc, se activa la PKA, se fosforila el DARPP-32, fosforilado es
activo y a su vez inhibe la PP-1 y si esta ultima esta inhibida no puede desfosforilar la
bomba que de estar así se encontraria inactiva. Otro mecanismo es que la PKA fosforile
directamente la bomba, pero ambas por el mismo mecanismo de transducción.
Y si se activo una proteína Gq? Como estara la bomba de Na/K?
Se libera calcio se activa la PKC, se fosforila la DARPP-32, no se desfosforila y se
mantiene abierto el canal.....pero la PKC puede también fosforilar el canal directamente y
así abrirlo. Y se da el proceso que llegue primero y se relaciona con los niveles de calcio, de
PKC, de AMPc, etc.
El primer grupo son los receptores guanilato ciclasa y como su nombre indica
producen GMP cíclico son como el adelinato ciclasa pero para nucleótidos de guanina.
Luego tenemos los receptores tirosin quinasa. (Que son muy interesantes porque son los
primeros que se descubrió que actúan sobre tirosina).
Dentro los receptores guanilato ciclasa tenemos el receptores del factor natriurético
atrial, es una proteína que se sintetiza en el atrio cardiaco y se libera cuando aumenta la
presión arterial, y cuando sube la presión uno de los mecanismos que utiliza el organismo
para bajar la presión es la diuresis, porque al aumentar el volumen urinario ayuda a
disminuir la presión plasmática, por lo tanto disminuye la presión arterial. Este factor lo que
favorece en el riñón es la liberación de sodio hacia el ultra filtrado, como el sodio es
osmoticamente activo arrastra agua y el volumen de orina aumenta y baja presión arterial.
Este receptor que recibe al factor natriurético es de un dominio transmembrana y en el
interior produce el efecto porque es un receptor guanilato ciclasa, cuando llega el factor al
receptor se produce un cambio conformacional y en el interior de la célula tiene un dominio
intracitoplasmático que tiene actividad ciclasa agarra un GTP y lo convierte en un GMP c y
éste se va a una proteína quinasa y la activa estas proteínas se denominan GMPc
dependientes que de manera muy original se llaman PKG esta es diferente de la PKA
porque sólo tiene una subunidad catalítica y una reguladora pero al igual que la PKA se
disocia cuando se pega el GMPc, dos GMPc por cada subunidad reguladora, se disocian y al
disociarse la unidad catalítica va a ir a fosforilar proteínas y uno de las proteínas que
fosforila es un canal de sodio que permite en el asa de Henley liberar sodio hacia el
ultrafiltrado por lo tanto se lleva al agua y así aumenta el volumen urinario.
En el caso de que se tenga el receptor de insulina y los IRS que son los sustratos del
receptor insulina, cuando se habla de sustrato de receptor insulina es una molécula, en este
caso proteica que es fosforilada por el receptor, por eso se llama sustrato, y lo fosforilará en
residuos de tirosina, una vez que está proteínas activa por activar varias cosas. Por ejemplo
el IRS 1 activa una proteína que se llama GRB2, que tiene un dominio SH2 y ese dominio
le permite reconocer el fosfato y al reconocerlo se activa, y activa a otra proteína que se
llama SOS, y luego este SOS activa una proteína monomérica ese llama RAS, muy
importante de regulación del ciclo celular porque mutaciones en ella producen cáncer. A su
vez RAS activará RAF (que se ha visto en la cascada del MAP-K), que también activa la
PKC, o sea que la misma cascada de las MAP-k puede ser activada por mecanismos
totalmente diferentes. (Redundancia y diversidad). Y por supuesto si se activa las MAP-k
se afecta el ciclo celular y es muy fácil entender porque entonces se dice que la insulina
también es un factor de crecimiento.
El siguiente ejemplo el muy importante porque relaciona a los receptores tirosin
quinasa, específicamente la insulina con algo metabólico que se verá en metabolismo de
carbohidratos. Volvemos al sustrato del receptor insulina 1, que es activado, y activa la
PIP3-k,…(inaudible).
Esta PIP3-k convierte en el PIP2 en PIP3 y por lo tanto la fosfolipasa C no lo
reconoce, y al tener este fosfato el PIP3 es capaz de activar una proteín quinasa B por
dominios SH2, proteín quinasa B en es una serin treonin quinasa también, que tiene dos
acciones muy importantes para el metabolismo de carbohidratos:
1- Es capaz de fosforilar la glucógeno sintesa quinasa 3 y la inactiva, esta enzima
fosforila la glucógeno sintasa, que como su nombre lo indica es la que sintetiza
glucógeno, y si se fosforila se inactiva es decir no puede sintetizar glucógeno,
pero si la glucógeno sintasa está desfosforilada puede sintetizar glucógeno. Si se
inhibe la glucógeno sintasa quinasa 3 por fosforilación la síntesis de glucógeno
aumenta. Es decir la insulina favorece la síntesis de glucógeno.
2- La otra función es la capacidad de la PKB de fosforilar unas proteínas de una
vesícula, donde se encuentran los GLUT-4, que tienen la particularidad de ser
dependientes de insulina. La insulina hace que estas proteínas lleven al GLUT4
a la membrana. Si el GLUT4 no es estimulado para ser puesto la membrana no
puede transportar glucosa; o sea la insulina activa la exposición del GLUT4 en
la membrana a través de la fosforilación de las vesículas que poseen el GLUT4.
El GLUT4 está principalmente en dos tejidos, el tejido adiposo y en el músculo
esquelético, que son desde el punto de vista de masa los predominantes en el
cuerpo.
Se llama receptores nucleares porque toda las acciones que ellos realicen ocurrir en
el núcleo, pero intracelulares porque se encuentran dos dentro de las células.
Existen siete tipos de receptores intracelulares pero nos centraremos sólo en dos,
porque son los mejor conocidos.
El primer grupo aceptan hormonas esteroides, los ligandos de este grupo son
esteroides como: el estradiol, la progesterona, el cortisol, testosterona. Estos receptores se
encuentran en el citoplasma cuando están inactivos y se encuentran en el citoplasma
asociados con las HSP´s (chaperonas), cuando llega el ligando que es un esteroide y por lo
tanto por atravesar la membrana muy fácilmente, llegan el citoplasma y se encuentren con
un receptor se une al receptor y suelta la HSP y de esta manera se puede unir con otro
receptor formando un homodímero, una vez que está formado el homodímero, este migra
hasta el núcleo, y se une al ADN en una región llamada elemento de respuesta hormonal
(HRE), estos elementos de respuesta hormonal no son proteínas, son secuencias de
nucleótidos están en el ADN, una vez que ese dímero se une al HRE o sea activa o se
inactiva a un proceso de transcripción de ciertos genes para dar origen a ciertas proteínas,
en el grupo 1 siempre se tienen homodímeros.
El grupo 2 los receptores nunca se encuentran en el citoplasma, siempre están en el
núcleo, nunca están asociados a chaperonas, además los receptores de tipo 2 pueden actuar
como homodímeros, como monómeros incluso, o como heterodímeros. Entonces a llegar al
ligando ya pueden actuar como monómeros, pueden formar un dímero (homodímero o
heterodimero), y luego va al HRE, por lo que este grupo día más posibilidades de
interacción, es importante señalar que según sea el caso activan genes diferentes. A estos
receptores se puede unir retinoides, hormonas tiroideas, vitamina D.