INCORPORACIÓN DEL CANGREJO

HERRADURA EN LA BIOMEDICINA

1st Jorge Alexander

Universidad Latina de Panamá
Escuela de ingenierı́a biomédica
Panamá, Panamá
jlalexander@est.ulatina.edu.pa

I. INTRODUCCI ÓN
En el desarrollo de este trabajo conoceremos alguna
de las caracterı́sticas que posee el cangrejo herradura y
sobre todo la implementación o aporte que tiene este
animal destacando su importancia en la biomedicina
a través de la prueba de lisado de amebocitos para
detectar endotoxinas bacterianas y el uso de su estructura
ósea en la creación de andamios de quitosano para
aplicaciones biomédicas avanzadas en regeneración de
tejidos y reparación ósea.
II. ABSTRACT
In the development of this work we will learn about
some of the characteristics that the horseshoe crab has
and above all the implementation or contribution that this
animal has, highlighting its importance in biomedicine
through the amebocyte lysate test to detect bacterial
endotoxins and the use of its bone structure in the
creation of chitosan scaffolds for advanced biomedical
applications in tissue regeneration and bone repair.
III. CANGREJO HERRADURA
El cangrejo de herradura del Atlántico y tres es-
pecies asiáticas de cangrejos de herradura han exis-
tido prácticamente sin cambios durante al menos 450
millones de años, mucho antes de los dinosaurios. Sin
embargo, la disminución del número de cangrejos de
herradura salvajes en Asia, agravada por el auge de
la demanda en el mercado biomédico de Asia-Pacı́fico,
amenaza con desplazar la industria aún más hacia el
cangrejo de herradura del Atlántico, según los grupos
conservacionistas y las empresas biomédicas. [1]
Fig. 1. Imágen obtenida de National Geographic.
IV. LISADO DE AMBEBOCITOS DE LIMULUS
(LAL)
La sangre o hemolinfa de los cangrejos de herradura
contiene hemocianina, una proteı́na rica en cobre, que
hace las funciones de transporte del oxı́geno a través
del organismo del animal. En contacto con el oxı́geno,
la hemocianina se vuelve de color azul. La hemolinfa
de esta especie contiene también amebocitos, semejantes
a los leucocitos de los vertebrados, los cuales reac-
cionan ante las endotoxinas bacterianas coagulándose.
Esto se utiliza en el lisado de amebocitos de Limulus
(LAL), esta es una prueba para detectar la contami-
nación en los productos farmacéuticos con endotoxi-
nas bacterianas y es una prueba para detectar varias
enfermedades bacterianas.[2] La Prueba del Lisado de
Amebocito de Limulus (LAL) es un método para la
detección y cuantificación de endotoxinas bacterianas
ampliamente utilizado por la industria farmacéutica y
biotecnológica, para la determinación de la seguridad
de los medicamentos parenterales y de los dispositivos
médicos.[3] El principio bioquı́mico se fundamenta en la
coagulación que ocurre cuando el factor C, obtenido de
los extractos de amebocitos presentes en la hemolinfa del
cangrejo herradura Limulus polyphemus del Atlántico,
reacciona en presencia de antı́genos de superficie micro- VI. REFERENCIAS
biana como los lipopolisacáridos, que se encuentran en • El cangrejo herradura salva vidas gracias a su
cantidades extremadamente pequeñas en la escala de los sangre única pero, ¿podemos proteger a estos an-
picogramos, o endotoxinas bacterianas. [4] imales? (2022, agosto 5). National Geographic. [1]
• Elcacho, J. (2016, febrero 23). La sangre azul que
V. MODIFICACI ÓN CON HEMOCIANINA DE está matando a un fósil viviente. La Vanguardia. [2]
ANDAMOS DE QUITOSANO
• Akbar JB, Kamaruzzaman BY, Jalal KCA, Kasimm
El primer paso del estudio fue la preparación de Z. 2012. TAL – a source of bacterial endotoxin
estructuras de quitosano que serı́an adecuadas para la detector in liquid biological samples. Int Food Res
modificación tanto con minerales de fosfato de calcio J 19:423-5. [3]
como con hemocianina de cangrejo de rı́o. Luego, la • 4Ding JL, Ho B. 2010. Endotoxin detection–from
modificación se realizó incorporando las fases min- Limulus amebocyte lysate to recombinant factor C.
erales durante el proceso de fabricación del andamio Subcell Biochem 53:187-208. [4]
o mediante la modificación posterior de los andamios • Arcticulo proporcionado por el profesor. [5]
con hemocianina mediante recubrimiento por inmersión.
Los andamios se evaluaron en términos de bioactivi-
dad (unión y liberación de iones de calcio, mediante
incubación en soluciones fisiológicas) y resistencia a la
compresión mecánica (en el estado seco inicial y de-
spués de la incubación). La citocompatibilidad se evaluó
mediante cultivo celular de hBMSC (Ácido etilenodi-
aminotetracético) y su diferenciación en osteoblastos y
mediante cultivo celular de hM (monocitos humanos)
y su maduración en osteoclastos. Además, se utilizó el
cocultivo de osteoblastos y hM (monocitos humanos)
para determinar la influencia del material del armazón en
la relación de actividad de osteoblastos/osteoclastos.[5]
Los armazones de quitosano se preincubaron durante
24 h en medio basal en placas de 48 pocillos. Las
hBMSC (Ácido etilenodiaminotetracético) se sembraron
como para el monocultivo de hBMSC (2,8 x 104 células
por armazón). La diferenciación osteogénica se indujo
a partir del dı́a 3. Durante los primeros 14 dı́as, se
permitió que las células se diferenciaran en osteoblastos.
Después de los primeros 14 dı́as, se realizó la adición de
hM (monocitos humanos, que se designa como 14d/1d,
dando puntos de tiempo de cultivo de monocitos y
osteoblastos precultivados. La adición de hMs (3,2 x 105
células por armazón) estuvo acompañada por un cambio
de medio de -MEM OS+ (medio esencial mı́nimo alfa
con suplementos osteogénicos) a MEM suplementado
con 7,5 Finalmente, como resultado de la interacción
entre osteoblastos y osteoclastos, se podrı́a inducir un
aumento en la maduración de los osteoclastos basado
en los osteoblastos. Por lo tanto, se demostró que la
modificación con hemocianina puede promover la os-
teoblastogénesis, lo que podrı́a ser una herramienta fu-
tura para promover directamente la curación de defectos
óseos grandes o de aquellos en huesos preenfermos, por
ejemplo, osteoporóticos. [5]