Documentos de Académico
Documentos de Profesional
Documentos de Cultura
ESTADO DE MORELOS
LABORATORIO DE PARASITOLOGÍA
“MANUAL DE
PRÁCTICAS DE
PARASITOLOGÍA”
Compilación
Biol. Ernesto Gustavo Ontiveros Fernández
Biol. Ana Jenny Saucedo Romero.
ESCUELA DE TÉCNICOS LABORATORISTAS
ÍNDICE
Página
Escuela de Técnicos
PRÓLOGO 3
I. INTRODUCCIÓN Laboratoristas 4
II. OBJETIVO 4
III. DEFINICIONES
IV. OBTENCIÓN DE LA MUESTRA 5
V. MUESTRAS PARA EXAMEN PARASITOLÓGICO 6
VI. TOMA, MANEJO Y TRANSPORTE DE MUESTRAS 6
VI.1 Condiciones específicas 6
VI.2 Rechazo de muestras 7
VII. TIPOS DE MÉTODOS PARA EL DIAGNÓSTICO DE PARÁSITOS 7
VIII. PROCEDIMIENTOS DE LABORATORIO PARA EL DIAGNÓSTICO
PARASITOLÓGICO EN HECES 8
- PRÁCTICA No. 1. “EXAMEN DIRECTO MACROSCÓPICO” 8
- PRÁCTICA No. 2. “DIAGNÓSTICO COPROPARASITOSCÓPICO” 12
- PRÁCTICA No. 3. “TÉCNICA DE WILLIS-MÉTODO DE CONCENTRACIÓN
- POR FLOTACIÓN” 16
- PRÁCTICA No. 4. “TÉCNICA DE RITCHIE-MÉTODO DE CONCENTRACIÓN POR
FLOTACIÓN” 19
- PRÁCTICA No. 5. “TÉCNICA DE KINYOUN” 23
- PRÁCTICA No. 6. “TÉCNICA DE FAUST”- MÉTODO DE CONCENTRACIÓN POR
FLOTACIÓN” 28
- PRÁCTICA No. 7. “TÉCNICA DE GRAHAM Y STOLL” 31
- PRÁCTICA No. 8. “TÉCNICA DE McMASTER” 35
- PRÁCTICA No. 9. “TÉCNICA DE BAERMANN” 39
IX. PROCEDIMIENTOS DE LABORATORIO PARA EL DIAGNÓSTICO
PARASITOLÓGICO EN SANGRE Y TEJIDOS 43
- PRÁCTICA No 10. “TÉCNICA PARA EL DIAGNOSTICO DE HEMOPARÁSITOS” 43
- PRÁCTICA No. 11. “LARVAS EN TEJIDOS, MÉTODO DE COMPRESIÓN” 47
X. APÉNDICES 50
Apéndice 1. “Reglamento del laboratorio” 50
Apéndice 2. Manejo y disposición de los desechos biológicos 51
Apéndice 2. “Guía para elaboración de reporte de prácticas 53
2
ESCUELA DE TÉCNICOS LABORATORISTAS
PRÓLOGO
El presente Manual de Prácticas de Parasitología, es un apoyo para el desarrollo de
las prácticas dentro de la materia de Laboratorio de Parasitología que se imparte en el
sexto semestre de la especialidad Escuela de Técnicos
de Técnico Laboratorista Clínico. Durante el
desarrollo de las prácticas, el alumno irá aplicando y relacionando las principales
Laboratoristas
metodologías utilizadas para la detección e identificación de los principales parásitos
que afectan al humano, permitiéndole reforzar e integrar los conocimientos sobre la
biología básica de las parasitosis, los mecanismos implicados en el parasitismo, los
aspectos taxonómicos, morfológicos, anatómicos, fisiológicos y ecológicos de los
distintos parásitos.
Por otra parte, el manejo de muestras biológicas como copros, sangre, tejidos, etc.,
permitirá al alumno conocer y aplicar correctamente la “NOM-087-ECOL-SSA1-2002,
Protección ambiental - Salud ambiental - Residuos peligrosos biológico-infecciosos -
Clasificación y especificaciones de manejo” que es de observancia obligatoria dentro
de un laboratorio de análisis clínicos en nuestro país.
3
ESCUELA DE TÉCNICOS LABORATORISTAS
I. INTRODUCCIÓN
II. OBJETIVO
III. DEFINICIONES
4
ESCUELA DE TÉCNICOS LABORATORISTAS
●
escala superior.
Laboratoristas
patogenicidad: capacidad de producir daño.
● protozoario: ser unicelular que puede ser de vida libre o parásita
● proglótido: segmento o anillo de la estróbila de las tenias o céstodes y que puede
ser inmaduro, maduro o grávido, según el estadío de desarrollo de sus aparatos
genitales.
● quiste: forma de resistencia de los protozoos, los cuales se rodean de una
membrana dura e impermeable.
● trofozoíto: forma vegetativa, libre y en movimiento de los protozoos.
● tremátodo: gusano aplanado o platelminto, que presenta su cuerpo indivisible.
Aspectos generales
✓ Los parásitos intestinales del hombre son protozoarios y/o helmintos, llamados
comúnmente gusanos intestinales. Estos helmintos o gusanos pueden ser
cilíndricos (nematodos), anillados o segmentados (céstodos).
✓ Para observar los trofozoítos, quistes u ooquistes de los protozoarios, así como
las larvas y huevos de helmintos, se debe usar un microscopio; en cambio, la
mayor parte de los gusanos o helmintos adultos son macroscópicos y su
morfología puede estudiarse directamente, con ayuda de un estereoscopio o
una lupa.
✓ Los protozoarios intestinales eliminan con las heces sus formas evolutivas
(trofozoíto, quiste, ooquiste y espora), según la especie involucrada.
✓ Los helmintos intestinales adultos (proglótidos de Taenia sp., Enterobius
vermicularis y Ascaris lumbricoides) pueden salir al exterior espontáneamente
o después del tratamiento.
✓ Los gusanos intestinales se eliminan con las heces.
✓ Los métodos de diagnóstico de los parásitos intestinales pueden ser: directo o
por concentración de los elementos parasitarios que se eliminan en las heces.
✓ En las heces podemos encontrar formas adultas y microscópicas (huevos,
larvas, trofozoitos, quistes, ooquistes y esporas) de los parásitos intestinales;
por ello, es importante obtener una buena muestra fecal, así como la
conservación óptima del espécimen.
✓ La muestra debe ser obtenida (entre 3 y 6 gramos) lo más fresca posible
(máximo 90 minutos, si se busca Entamoeba histolytica), y depositada en un
frasco de boca ancha con tapa rosca y rotulada correctamente con los datos de
identificación.
✓ La muestra debe obtenerse antes del uso de medicamentos antiparasitarios, o
hasta 2 a 5 días después de su administración.
✓ Las heces depositadas en el suelo no son las recomendadas para el
diagnóstico, debido a que pueden contaminarse con formas biológicas, como
5
ESCUELA DE TÉCNICOS LABORATORISTAS
Comprende las siguientes muestras: heces, bilis o jugo duodenal, esputo, secreción,
biopsia o preparaciones histológicas, siendo heces, la más frecuente.
Heces
- Características de la muestra
a. Recipiente o contenedor: boca ancha, con tapa rosca.
b. Cantidad: 3 - 6 g
c. Condiciones óptimas: No estar mezclado con orina, que no exista el antecedente de
haber ingerido bario u otros productos de contraste, y llevar la muestra al laboratorio
en corto tiempo (de 2 - 4 horas de su obtención).
- Procesamiento de la muestra
a. Debe realizarse lo antes posible y en un lugar apropiado (que no le llegue la luz
directa). Las muestras diarreicas y las que contienen sangre, deben examinarse en
forma macroscópica y microscópica apenas lleguen al laboratorio.
b. Se aplicará la metodología correspondiente de acuerdo a su aplicación
c. Los reactivos y colorantes empleados en el procesamiento deben estar en envases
adecuados, mantenerse fuera de los rayos del sol o luz, etiquetados (con nombre y
fecha de preparación), sometidos a un control periódico y con una preparación
proporcional a la demanda.
Condiciones específicas
Las muestras deben mantenerse en un ambiente fresco y lejos de la luz solar, se
deben evitar las temperaturas extremas o el desecamiento, deben contener cantidades
óptimas y estar en frascos o contenedores rotulados y con soluciones conservadoras
6
ESCUELA DE TÉCNICOS LABORATORISTAS
Procedimiento
1. Colocar la muestra elegida en un envase apropiado, rotulado correctamente y
en un recipiente secundario (podría ser de plástico u otro material resistente a
roturas)
2. Enviar la muestra al laboratorio lo antes posible; en caso fuera fresca, dentro
Escuela de Técnicos
de las 2 a 4 horas de obtenida.
Laboratoristas
3. Si el envío de la muestra va a demorar más de un día en llegar al laboratorio,
debe guardarse en un fijador conservador, aplicando las medidas de
bioseguridad correspondientes
7
ESCUELA DE TÉCNICOS LABORATORISTAS
VIII.1 Generalidades
Escuela deinfectantes.
Las muestras de heces son potencialmente Técnicos Se deben extremar las
precauciones durante su manejo y disposición final mediante la aplicación del
Laboratoristas
reglamento del laboratorio (Apéndice 1) y lo estipulado en la “NOM-087-ECOL-SSA1-
2002.
I. OBJETIVO DE LA PRÁCTICA
Determinar la presencia macroscópica de los parásitos adultos o sus fracciones
(helmintos) y las características organolépticas en muestras de heces.
IV. EQUIPOS
- Microscopio estereoscópico
8
ESCUELA DE TÉCNICOS LABORATORISTAS
V. MATERIALES Y REACTIVOS
V.4 Reactivos
Solución salina fisiológica al 0.85% (frasco con 100mL)
VI. PROCEDIMIENTO.
VI.1 Detección de helmintos o sus fracciones
9
ESCUELA DE TÉCNICOS LABORATORISTAS
Diagrama de flujo:
Escuela de Técnicos
Laboratoristas
Figura 1 y 2.
Fig. 1. Helminto cilíndrico Ascaris lumbricoides Fig.2 Helminto aplanado Taenia solium
10
ESCUELA DE TÉCNICOS LABORATORISTAS
VIII. CONCLUSIONES
Apegarse en lo dispuesto en el Apéndice 3. (Formato para la elaboración de reportes
de Prácticas).
IX. CUESTIONARIO
1. ¿Cuál es la aplicación del estudio coprológico?
2. ¿Qué indica la presencia de pus en las heces?
3. ¿Cuál es la relación de las características organolépticas fuera de lo normal con
las parasitosis?
X. DISPOSICIÓN DE RESIDUOS
Revisar Apéndice 2. (Manejo y disposición de los desechos biológicos).
XI. REFERENCIAS
Apegarse en lo dispuesto en el Apéndice 3. (Formato para la elaboración de reportes
de Prácticas).
11
ESCUELA DE TÉCNICOS LABORATORISTAS
I. OBJETIVO DE LA PRÁCTICA
Conocer la aplicación del diagnóstico coproparasitoscópico para la determinación e
identificación de formas parasitarias intestinales de protozoarios y helmintos.
Escuela de Técnicos
II. Laboratoristas
FUNDAMENTO Y APLICACIÓN
El lugol es un reactivo compuesto por iodo (I) y ioduro de potasio (IK), que tiene alta
afinidad por las estructuras biológicas de las fases parasitarias de helmintos y
protozoarios, lo que facilita su detección e identificación en una muestra de copro ya
que se tiñen de un color café claro a marrón pálido.
En este estudio, el material fecal más utilizado es el recién obtenido por expulsión
natural del paciente, ya sean heces bien formadas o evacuaciones disminuídas de
consistencia, con moco y/o sangre. Este método es de gran utilidad para la detección
en fresco de trofozoítos de Entamoeba histolítica, Giardia lamblia, Balantidium coli,
Trichomonas hominis y Blastocytis hominis. En la suspensión teñida con lugol se
pueden identificar con facilidad quistes de protozoos.
Este examen en fresco es sencillo, rápido y económico, pues requiere poco material.
-Es excelente para la búsqueda de trofozoítos y protozoos.
-Es eficaz en la búsqueda e identificación de quistes, huevos y larvas.
Los montajes en solución salina tienen la ventaja de que retienen la movilidad de los
trofozoitos, sin embargo, es difícil la observación de las estructuras internas, pues con
frecuencia son poco definidas. El Yodo se emplea para destacar las estructuras
internas de los parásitos presentes, pero inmoviliza trofozoítos.
IV. EQUIPOS
- Microscopio óptico
V. MATERIALES Y REACTIVOS
12
ESCUELA DE TÉCNICOS LABORATORISTAS
V.4 Reactivos
Solución de lugol (gotero con 20-50mL)
Solución salina fisiológica al 0.85% (frasco con 100mL)
VI. PROCEDIMIENTO
1. Obtenga una muestra de heces en un frasco estéril equivalente al tamaño de
una nuez. La muestra debe ser reciente. Si es de la noche anterior debe ser
refrigerada mientras se lleva al laboratorio.
2. En un portaobjetos colocar una gota de solución salina fisiológica y en el otro
extremo una gota de lugol.
3. Con un aplicador tomar una muestra de heces (lo que se embarre solo en la
punta), de preferencia que contenga moco y sangre, homogeneizarlas
independientemente en las gotas de solución salina y en la de lugol. Utilizar un
aplicador para cada muestra. Colocar un cubreobjetos.
4. Observe al microscopio, a 10 X y después a 40 X.
5. Con ayuda de esquemas, libros etc., detectar e identificar las distintas fases
parasitarias de los helmintos y protozoarios (Figura 1).
6. De ser necesario, adicionar más reactivos por un lado del cubreobjetos para no
dejar secar la preparación.
Diagrama de flujo:
13
ESCUELA DE TÉCNICOS LABORATORISTAS
VIII. CONCLUSIONES
Laboratoristas
Apegarse en lo dispuesto en el Apéndice 3. (Formato para la elaboración de reportes
de Prácticas).
IX. CUESTIONARIO
1. ¿Cuál es la aplicación del estudio coproparasitológico?
2. ¿Qué diferencias existen entre el estudio macroscópico del
coproparasitológico?
1. Describir las diferencias entre quiste, ooquiste y trofozoito. Efectuar esquemas
y describir sus partes o estructuras.
3. Describe el ciclo de vida de los parásitos detectados
4. Describe los factores ambientales y fisiológicos que determinan la presencia de
estos parásitos en el humano.
X. DISPOSICIÓN DE RESIDUOS
Revisar Apéndice 2. (Manejo y disposición de los desechos biológicos).
XI. REFERENCIAS
Apegarse en lo dispuesto en el Apéndice 3. (Formato para la elaboración de reportes
de Prácticas).
14
ESCUELA DE TÉCNICOS LABORATORISTAS
Escuela de Técnicos
Laboratoristas
15
ESCUELA DE TÉCNICOS LABORATORISTAS
I. OBJETIVO DE LA PRÁCTICA.
Escuela de Técnicos
Conocer la técnica de Willis, para la búsqueda de huevos de helmintos o quistes de
protozoarios, en muestras de heces fecales.
Laboratoristas
II. FUNDAMENTO Y APLICACIÓN.
Este método se basa en un principio de flotación simple, utilizando una solución de
cloruro de sodio de una densidad entre 1.200 y 1.250 o sulfato de zinc al 33%
(densidad de 1.180 a 1.200), en la cual los quistes, huevos y larvas flotan
perfectamente, ya que suelen tener una densidad entre 1.050 y 1.150.
Los huevos de trematodos son generalmente más pesados y requieren soluciones
como la de yoduro mercúrico de potasio con densidad de 1.440; sin embargo, por ser
muy tóxica y corrosiva, ha caído en desuso.
IV. EQUIPOS
Microscopio compuesto
V. MATERIALES Y REACTIVOS
16
ESCUELA DE TÉCNICOS LABORATORISTAS
V.4 Reactivos
- Solución saturada de cloruro de sodio (frasco con 50mL)
- Solución de sulfato de zinc al 33% en agua (frasco con 50mL)
- Solución de lugol (gotero con 20-50mL)
VI. PROCEDIMIENTO
1. Tomar aproximadamente 1g de heces fecales con un aplicador de madera y
colocarlo en el vaso de precipitados.
2. Adicionar 10mL de solución saturada de cloruro de sodio o sulfato de zinc al
33% a la muestra, homogenizarla completamente con un abatelenguas o
aplicador.
3. Colocar la gasa sobre el embudo y filtrar la muestra recibiendo el líquido en un
vaso de precipitados.
4. Llenar con el líquido filtrado un tubo de vidrio hasta el ras.
5. Colocar el tubo en una gradilla procurando que este quede en posición vertical,
colocar un portaobjetos sobre el tubo de manera que el líquido haga contacto
con el portaobjetos.
6. Esperar 10 minutos. Los quistes de protozoarios y/o huevos de helmintos
flotarán y quedarán adheridos a la cara del portaobjetos.
7. Retirar con cuidado el portaobjeto y voltearlo para después adicionar una gota
de lugol, colocar el cubreobjetos y examinar la muestra al microscopio en
objetivo de 10X y 40X.
8. Alternativamente tomar con un gotero una muestra de la parte superior del
líquido, depositarla en un portaobjetos, adicionar una gota de lugol, colocar un
cubreobjetos y observar a los objetivos señalados anteriormente.
9. Con ayuda de esquemas, libros etc., detectar e identificar las distintas fases
parasitarias de los helmintos y protozoarios (Ver Figura 1 de la práctica 2).
10. Probablemente pueda encontrarse larvas de helmintos junto con los quistes de
protozoarios y/o huevos de helmintos.
17
ESCUELA DE TÉCNICOS LABORATORISTAS
Diagrama de flujo:
Escuela de Técnicos
Laboratoristas
VIII. CONCLUSIONES
Apegarse en lo dispuesto en el Apéndice 3. (Formato para la elaboración de reportes
de Prácticas).
IX. CUESTIONARIO
1. ¿Cuál es la importancia de conocer la densidad de la solución de cloruro de
sodio y la de los quistes y huevos de los parásitos a detectar?
2. ¿Qué tipo de parásitos se pueden identificar mediante esta técnica? Anexar
imágenes.
2. ¿Cuál es la diferencia entre un quiste de protozoario de un huevo de helminto?
Efectuar esquemas y describir sus partes o estructuras.
3. ¿Qué otro nombre recibe la técnica de Willis?.
4. Describe el ciclo de vida de los parásitos detectados.
5. Describe los factores ambientales y fisiológicos que determinan la presencia de
estos parásitos en el humano.
X. DISPOSICIÓN DE RESIDUOS
Revisar Apéndice 2. (Manejo y disposición de los desechos biológicos).
XI. REFERENCIAS
Apegarse en lo dispuesto en el Apéndice 3. (Formato para la elaboración de reportes
de Prácticas).
18
ESCUELA DE TÉCNICOS LABORATORISTAS
I. OBJETIVO DE LA PRÁCTICA
Conocer la aplicación y metodologíaEscuela de Técnicos
de la técnica de Ritchie para determinar ausencia
o presencia de parásitos, sean quistes, larvas y/o huevos que puedan quedar
sedimentados en la muestra de heces Laboratoristas
fecales.
IV. EQUIPOS
1 microscopio compuesto
1 centrifuga clínica
V. MATERIALES Y REACTIVOS
19
ESCUELA DE TÉCNICOS LABORATORISTAS
V.4 Reactivos
Solución formol al 10% (frasco con 50mL)
Éter etílico concentrado (frasco con 50mL)
Solución salina fisiológica al 0.85% (frasco con 100mL)
Solución de lugol (gotero con 20-50mL)
VI. PROCEDIMIENTO
1. Con el aplicador de madera colocar aproximadamente 1 g de materia fecal en
un vaso de precipitados. Añadir 10mL de solución salina y homogenizar.
2. Filtrar la suspensión a través de la gasa colocada en el embudo, recibir el
filtrado en un vaso de precipitados.
3. Llenar el tubo cónico con 10mL del filtrado.
4. Centrifugar la suspensión durante 1 minuto a 2000 rpm.
5. Decantar el sobrenadante. Resuspender el sedimento nuevamente con
solución salina, centrifugar y decantar las veces que sea necesario hasta que
el sobrenadante se observe claro.
6. Al último sedimento agregar 5mL de solución de formol al 10%, mezclar y dejar
reposar por 10 minutos.
7. Pasado el tiempo agregar 2.5 ml de éter, tapar los tubos herméticamente y
agitar enérgicamente durante 30 segundos.
8. Centrifugar por 2 minutos a 2000 rpm.
9. Después de centrifugar se observarán 4 capas:
a) Éter en la superficie.
b) Tapón de restos fecales.
c) Formaldehido
d) Sedimento en el fondo del tubo, conteniendo los elementos parasitarios.
10. Introducir la pipeta Pasteur hasta el sedimento y extraer una gota para
colocarla en el portaobjetos.
11. Añadir una gota de lugol, homogenizar y colocar el cubreobjetos.
12. Observar la preparación en el microscopio con objetivos de 10X y 40X.
13. Con ayuda de esquemas, libros etc., detectar e identificar las distintas fases
parasitarias de los helmintos y protozoarios (Ver Figura 1 de la práctica 2).
20
ESCUELA DE TÉCNICOS LABORATORISTAS
Diagrama de flujo:
Escuela de Técnicos
Laboratoristas
21
ESCUELA DE TÉCNICOS LABORATORISTAS
VIII. CONCLUSIONES
Apegarse en lo dispuesto en el Apéndice 3. (Formato para la elaboración de reportes
de Prácticas). Escuela de Técnicos
IX. CUESTIONARIO
Laboratoristas
1. ¿Cuál es la función del formol y éter en la práctica?
2. ¿Cuáles son las aplicaciones de esta técnica?
3. Qué diferencias existen entre esta técnica y la de Willis?
4. ¿Por qué las distintas soluciones no se mezclan posterior a la centrifugación y
forman un gradiente?
3. Qué es un ooquiste y un quiste? Efectuar esquemas y describir sus partes o
estructuras
5. Describe el ciclo de vida de los parásitos detectados.
6. Describe los factores ambientales y fisiológicos que determinan la presencia de
estos parásitos en el humano.
X. DISPOSICIÓN DE RESIDUOS
Revisar Apéndice 2. (Manejo y disposición de los desechos biológicos).
XI. REFERENCIAS
Apegarse en lo dispuesto en el Apéndice 3. (Formato para la elaboración de reportes
de Prácticas).
22
ESCUELA DE TÉCNICOS LABORATORISTAS
I. OBJETIVO DE LA PRÁCTICA
Detectar e identificar ooquistes de Cryptosporidium parvum, Isospora belli, Cyclospora
Escuela
cayetanensis y Sarcocystis sp mediante de Técnicos
tinción de Kinyoun en muestra de heces
Laboratoristas
fresca, refrigerada o preservada en formol-acetato.
A partir de esa técnica se desarrollaron una serie de variantes que permitieron colorear
otro tipo de agentes infecciosos y es el caso de la tinción de Kinyoun la cual difiere por
la ausencia de calentamiento de la muestra en proceso, este aspecto ha sido aplicado
en el caso de las fases ooquísticas de diferentes géneros de coccidios como:
Cryptosporidium, Cyclospora y su extensión a Sarcocystis e Isospora. Inicialmente
este procedimiento se usó para confirmación en muestras de heces de humano
(debido a que en individuos con inmunodeficiencia resulta muy común este tipo de
infecciones) y en aquellas muestras en las que hay dudas, esta coloración permite
confirmar la presencia de cuatro esporozoitos en el interior de los ooquistes, que en el
caso de Cryptosporidium parvum los ooquistes son pequeños y miden de 4 a 6 μm y
no son fácilmente visibles cuando el observador no tiene experiencia.
IV. EQUIPOS
Microscopio compuesto
23
ESCUELA DE TÉCNICOS LABORATORISTAS
V. MATERIALES Y REACTIVOS
V.4 Reactivos
Metanol absoluto (gotero con 20-50mL)
Carbol fucsina-fucsina fenicada (gotero con 20-50mL)
Alcohol ácido (gotero con 20-50mL)
Azul de metileno (gotero con 20-50mL)
Aceite inmersión
Agua destilada
VI. PROCEDIMIENTO
1. Con un aplicador tomar una pequeña porción de la muestra de heces fecales
y realizar un frotis delgado.
2. Dejar secar el frotis perfectamente a temperatura ambiente.
3. Fijar con unas gotas de metanol y esperar a que seque por completo.
4. Cubrir con carbol-fucsina durante 5 minutos, enjuagar hasta que el agua
salga transparente.
5. Agregar unas gotas del alcohol ácido, dejarlo actuar por tres minutos,
enjuagar hasta que el agua quede clara.
6. Cubrir con azul de metileno por tres minutos.
7. Lavar y dejar secar para observar al microscopio en 10X, 40X y con aceite de
inmersión a 100x.
24
ESCUELA DE TÉCNICOS LABORATORISTAS
8. Con ayuda de esquemas, libros etc., detectar e identificar los ooquistes de los
géneros de Cryptosporidium, Cyclospora e Isospora (Ver Figuras 1, 2 y 3).
Diagrama de flujo:
Escuela de Técnicos
Laboratoristas
25
ESCUELA DE TÉCNICOS LABORATORISTAS
Escuela de Técnicos
Laboratoristas
Cyclospora cayetanensis
26
ESCUELA DE TÉCNICOS LABORATORISTAS
IX. CUESTIONARIO
4. ¿Cuáles son las aplicaciones de esta técnica?
5. ¿Qué colorante es el que tiñe a los ooquistes y que coloración manifiestan?
6. ¿Cuál es la función del alcohol ácido?
7. ¿El azul de metileno qué estructuras tiñe?
8. Describe el ciclo biológico de Cryptosporidium parvum, Cyclospora
cayetanensis e Isospora belli
9. ¿Cuál es la vía de transmisión de estos parásitos al humano?
10. ¿Cuál es la sintomatología de las enfermedades producidas Cryptosporidium
parvum, Cyclospora cayetanensis e Isospora belli en el humano?
11. Describe los factores ambientales y fisiológicos que determinan la
contaminación de estos parásitos en el humano.
12. Cuál es la diferencia entre ooquiste y quiste?. Efectuar esquemas y describir
sus partes o estructuras.
13. Cuál es la diferencia entre un quiste de un esporoquiste? Efectuar esquemas y
describir sus partes o estructuras
X. DISPOSICIÓN DE RESIDUOS
Revisar Apéndice 2. (Manejo y disposición de los desechos biológicos).
XI. REFERENCIAS
Apegarse en lo dispuesto en el Apéndice 3. (Formato para la elaboración de reportes
de Prácticas).
27
ESCUELA DE TÉCNICOS LABORATORISTAS
I. OBJETIVO DE LA PRÁCTICA
Escuela
Conocer la aplicación de la técnica de
densidad
de la
Faust para Técnicos
identificación de parásitos de alta
Laboratoristas
II. FUNDAMENTO Y APLICACIÓN
En este método se precipitan los parásitos por centrifugación después de haber filtrado
la muestra. Es un exámen coproparasitoscópico cualitativo de concentración por
centrifugación y flotación. Además, hace una buena concentración de quistes, huevos
y larvas.
Este método es efectivo y específico en la búsqueda de ooquistes de protozoarios.
Identifica los parásitos que tiene el paciente para poder tener una idea de su fuente de
contagio, basándose en las características del microorganismo y evitar una plaga y
poder dar un tratamiento.
IV. EQUIPOS
Microscopio compuesto
Centrifuga clínica
V. MATERIALES Y REACTIVOS
28
ESCUELA DE TÉCNICOS LABORATORISTAS
VI. PROCEDIMIENTO
1. Colocar de 1 a 2g de heces (tamaño de una nuez) en un vaso de precipitados,
adicionar 10mL de solución salina y homogenizar perfectamente con un
aplicador o abatelenguas.
2. Filtrar con doble gasa y recibir el filtrado en un tubo de ensayo de 13 x 100.
3. Centrifugar el filtrado a 2500 rpm por 3 min y decantar el sobrenadante.
4. Resuspender el sedimento con solución salina y volver a centrifugar.
5. Repetir los pasos 3 y 4 dos o tres veces o hasta que el último sobrenadante
este claro.
6. Decantar el último sobrenadante, resuspender el sedimento con 5-7mL de
sulfato de zinc, dejar reposar por 5 minutos.
7. Centrifuga el tubo a 2500 rpm por 1 min.
8. Sin mover o agitar el tubo, tomar suavemente con una pipeta Pasteur varias
muestras de la superficie del líquido, colocarlas en portaobjetos, adicionar una
gota de lugol, colocar un cubreobjetos y observar a 10 y 40x
9. Con ayuda de esquemas, libros etc., detectar e identificar las distintas fases
parasitarias de los helmintos y protozoarios (Ver Figura 1 de la práctica 2).
Diagrama de flujo:
29
ESCUELA DE TÉCNICOS LABORATORISTAS
VIII. CONCLUSIONES
Apegarse en lo dispuesto en el Apéndice 3. (Formato para la elaboración de reportes
de Prácticas).
IX. CUESTIONARIO
¿Cuáles son las densidades de los organismos que se pueden determinar con la
técnica?
¿Por qué esta técnica se recomienda como el método más eficiente para la
observación de parásitos?
¿Cuál es el propósito de la solución salina y el sulfato de zinc en esta técnica?
¿La solución de sulfato de zinc ¿puede ser sustituida por alguna otra solución? ¿Cúal?
X. DISPOSICIÓN DE RESIDUOS
Revisar Apéndice 2. (Manejo y disposición de los desechos biológicos).
XI. REFERENCIAS
Apegarse en lo dispuesto en el Apéndice 3. (Formato para la elaboración de reportes
de Prácticas).
30
ESCUELA DE TÉCNICOS LABORATORISTAS
I. OBJETIVOS DE LA PRÁCTICA
Técnica de Graham. Conocer y aplicar la técnica de Graham, para encontrar por
Escuela de Técnicos
medio del raspado perianal huevos de Enterobius vermicularis.
IV. EQUIPOS
Microscopio compuesto
V. MATERIALES Y REACTIVOS
31
ESCUELA DE TÉCNICOS LABORATORISTAS
Perlas de vidrio
V.2 Materiales que debe traer el alumno o equipo de trabajo
Material biológico: muestras de copro del tamaño de una nuez en un envase
estéril (para la toma y manejo de las muestras de copro, ver los apartados IV, V
y VI de este Manual )
Porta y cubreobjetos
Escuela de Técnicos
Palillos o aplicadores de madera Laboratoristas
de aproximadamente 7 a 10 cm sin punta de
algodón
Abatelenguas de madera
1 Rollo de papel toalla
2 Pipetas Pasteur o goteros de plástico
Imágenes de huevos y larvas del parásito Enterobius vermicularis
V.4 Reactivos
Solución de hidróxido de sodio (NaOH) 0.1N (100mL)
Solución de lugol (frasco con 20-50mL)
VI. PROCEDIMIENTO
Técnica de Graham:
1. Sobre un extremo del abate lenguas colocar la cinta adhesiva transparente con
la parte adherente hacia fuera, y sujetar con los dedos pulgar e índice.
2. Presionar la superficie adherible de la cinta adhesiva sobre la región perianal
hacia uno y otro lado.
3. Separar cuidadosamente la cinta del abate lenguas y adherir la cinta sobre un
portaobjetos.
4. Despegar parcialmente y agregar una gota de lugol. Volver a pegar sobre el
portaobjetos y observar al microscopio.
Técnica de Stoll:
1. Colocar en el tubo cónico 5.6mL de la solución de NaOH 0.1 N.
2. Agregar materia fecal con la ayuda del aplicador de madera hasta elevar el
nivel del líquido a 6mL.
3. Añadir cinco perlas de vidrio, tapar y agitar vigorosamente durante un minuto
hasta que las heces se desmoronen por completo.
4. Inmediatamente, con una pipeta tomar 0.07mL del centro de la suspensión y
depositarla sobre un portaobjetos
5. Colocar un cubreobjetos y observar la muestra a 10 y 40X, contar todos los
huevos y larvas presentes. Procurar no contar la misma estructura (Figura 1).
32
ESCUELA DE TÉCNICOS LABORATORISTAS
Diagrama de flujo:
Técnica de Stoll
Agitar
vigorosamente
por un minuto
33
ESCUELA DE TÉCNICOS LABORATORISTAS
Figura 1.
Escuela de Técnicos
Laboratoristas
VIII. CONCLUSIONES
Apegarse en lo dispuesto en el Apéndice 3. (Formato para la elaboración de reportes
de Prácticas).
IX. CUESTIONARIO
1. Menciona las ventajas del método de Graham
2. ¿Cuáles son las instrucciones previas a la toma de muestra que deben dársele
al paciente?
3. ¿Qué importancia tiene el que se haga correctamente la toma de la muestra?
4. Describe el ciclo de vida de Enterobius vermicularis
5. Describe los factores ambientales y fisiológicos que determinan la
contaminación de estos parásitos en el humano.
6. ¿Cuál es la vía de transmisión de estos parásitos al humano?
7. ¿Cuál es la sintomatología de esta parasitosis?
XIII. REFERENCIAS
Apegarse en lo dispuesto en el Apéndice 3. (Formato para la elaboración de reportes
de Prácticas).
34
ESCUELA DE TÉCNICOS LABORATORISTAS
IV. EQUIPOS
Microscopio compuesto
V. MATERIALES Y REACTIVOS
35
ESCUELA DE TÉCNICOS LABORATORISTAS
V.4 Reactivos
Solución saturada de glucosa o de cloruro de sodio (NaCl) frasco con
100mL)
VI. PROCEDIMIENTO
1. En un tubo Mc Master depositar solución saturada de glucosa o cloruro de
sodio hasta la primera línea del tubo.
2. Depositar un gramo de muestra de heces lo que equivale a llegar a la segunda
línea del tubo.
3. Depositar nuevamente solución saturada hasta la tercera línea del tubo, cerrar
y agitar hasta lograr un homogenizado completo, de ser necesario apoyarse
con un abatelenguas o aplicador de madera.
4. Introducir una gasa para que cumpla la función de filtro o colador.
5. Dejar reposar 10 minutos
6. Con la ayuda de un gotero, obtener el líquido que se encuentra dentro de la
gasa y depositarlo en la cámara Mc Master cuidando que no se formen
burbujas.
7. Colocar la cámara de Mc Master en el microscopio compuesto y enfocar las
cuadriculas con el objetivo 10x.
8. Para realizar la lectura e interpretación, enfocar el ángulo superior derecho del
cuadro e ir subiendo y bajando entre cada carril hasta completar el recorrido en
las seis divisiones de la primera cámara (Figura 1).
9. Registrar el número de ooquistes y quistes de protozoarios así como los
huevos y larvas de helmintos encontrados.
10. Realizar el mismo procedimiento con la segunda cámara y al terminar el conteo
sumar el total de las fases parasitarias encontradas en ambas cámaras,
multiplicar por 100 y dividir entre dos; el resultado será el número de ooquistes
y quistes de protozoarios y de huevos y larvas de helmintos por gramo de
heces de materia fecal.
36
ESCUELA DE TÉCNICOS LABORATORISTAS
Diagrama de flujo:
Escuela de Técnicos
Laboratoristas
Figura 1.
37
ESCUELA DE TÉCNICOS LABORATORISTAS
IX. CUESTIONARIO
1. ¿Cuáles son los componentes que integran el equipo Mc Master?
2. ¿Por qué se debe de tomar en cuenta la lectura de los parásitos en dos
compartimientos de la cámara de Mc Master?
3. ¿Por qué los huevos y larvas de helmintos y ooquistes y quistes de
protozoarios flotan en la solución utilizada en la prueba?
4. ¿Cuál es el volumen de las cámaras Mc Master?
5. ¿Qué función tiene la gasa en esta técnica?
6. ¿Cuál es la importancia de conocer el número de parásitos por gramo de
muestra de copro?
X. DISPOSICIÓN DE RESIDUOS
Revisar Apéndice 2. (Manejo y disposición de los desechos biológicos).
XI. REFERENCIAS
Apegarse en lo dispuesto en el Apéndice 3. (Formato para la elaboración de reportes
de Prácticas).
38
ESCUELA DE TÉCNICOS LABORATORISTAS
I. OBJETIVO DE LA PRÁCTICA
Escuela de Técnicos
Determinar de manera experimental la presencia o ausencia de larvas de helmintos en
heces de humano
Laboratoristas
II. FUNDAMENTO Y APLICACIÓN
Esta técnica permite una buena concentración de las larvas vivas Strongyloides,
partiendo de un volumen grande de heces. Es demasiada engorrosa para ser
empleada como técnica de rutina, pero es excelente para constatar los resultados del
tratamiento médico. Existen diferentes modos de montarla, con igual resultado y
permitiendo la migración activa de larvas de helmintos a partir del fototropismo.
Ésta técnica ayuda a detectar una infección parasitaria en aquellos pacientes en
riesgo; en personas desnutridas, alcohólicas, con cirrosis, quemadas severas,
pacientes oncológicos, pacientes viviendo con SIDA y otros. Para verificación
terapéutica. Se aumenta la probabilidad de diagnóstico con exámenes repetidos
durante varios días o semanas.
IV. EQUIPOS
Centrifuga clínica
Microscopio estereoscópico
Microscopio compuesto
Fuente de luz (Base con foco)
V. MATERIALES Y REACTIVOS
39
ESCUELA DE TÉCNICOS LABORATORISTAS
Abatelenguas de madera
1 Rollo de papel toalla
2 Pipetas Pasteur o goteros de plástico
2 Gasas de 10 x 10cm
Hilo o masking tape Escuela de Técnicos
Imágenes de larvas de helmintos
Laboratoristas
V.3 Equipo de seguridad
Bata de algodón
Guantes de nitrilo
Lentes de seguridad
Cubrebocas
V.4 Reactivos
Agua potable precalentada 37°C (2 L)
VI. PROCEDIMIENTO
1. Montar el aparato de Baermann de la siguiente manera:
a) Conectar el embudo con el tubo de ensayo con la manguera de látex,
asegurase que la conexión entre el embudo y tubo sea firme.
b) Colocar el embudo-tubo de manera vertical en el arillo del soporte universal
2. Llenar el embudo-tubo con agua a 37°C hasta aproximadamente 2 cm del
borde del embudo, asegurándose qué tanto el tubo y la manguera queden
totalmente llenos de agua, oprimiendo la manguera para permitir la eliminación
de burbujas de aire.
3. Tomar una muestra de heces del tamaño de una nuez y colocarla en el centro
de la gasa, tomar las esquinas de la gasa hacia arriba y sujetarlas con hilo o
masking tape para formar un pequeño saco.
4. Colocar el saco con la muestra de copro en el embudo con agua.
5. Acercar una fuente de luz (foco) al aparato de Baermann cerca del tubo
evitando que el calor generado por el foco le llegue directamente a este.
6. Dejar transcurrir una hora evitando vibraciones.
7. Pasado el tiempo, retirar la muestra de copro, tomar el embudo y tubo de
manera vertical, flexionar solo el embudo sin mover el tubo para eliminar el
agua.
8. Quitar el tubo de la manguera y centrifugar por 5 minutos a 3,000 rpm
9. Eliminar el sobrenadante con una pipeta Pasteur, dejando aproximadamente
1.0cm de altura del líquido.
10. Agitar el sedimento y transferirlo con la pipeta a una caja petri de vidri
11. Observar en microscopio estereoscópico a 4X, de ser necesario tomar
muestras y observarlas a 10 y 40x con el microscopio compuesto.
12. Con ayuda de esquemas, libros etc., detectar e identificar las distintas larvas
de los helmintos encontrados (Figura 1).
40
ESCUELA DE TÉCNICOS LABORATORISTAS
Escuela de Técnicos
Embudo
Laboratoristas
Manguera látex
Diagrama de flujo:
Figura 1.
Strongyloides stercolaris
41
ESCUELA DE TÉCNICOS LABORATORISTAS
VIII. CONCLUSIONES
Escuela
Apegarse en lo dispuesto en el Apéndice de Técnicos
3. (Formato para la elaboración de reportes
de Prácticas).
Laboratoristas
IX. CUESTIONARIO
1. ¿Por qué el agua que se utiliza para esta técnica debe de mantenerse a una
temperatura de 37°C?
2. ¿Por qué debe de ser una muestra fresca de heces?
3. ¿Qué es el fototropismo?
4. Menciona otros métodos para la identificación de larvas en copro.
5. ¿Cuál es la importancia de la fuente de luz?
6. ¿Cuál es el ciclo biológico del parásitos Strongyloides stercolaris?
7. ¿Qué provoca y cómo afecta S. stercolaris al humano?
X. DISPOSICIÓN DE RESIDUOS
Revisar Apéndice 2. (Manejo y disposición de los desechos biológicos).
XI. REFERENCIAS
Apegarse en lo dispuesto en el Apéndice 3. (Formato para la elaboración de reportes
de Prácticas).
42
ESCUELA DE TÉCNICOS LABORATORISTAS
Escuela de Técnicos
IX.1 Generalidades
Las muestras de sangre y tejidos son Laboratoristas
potencialmente infectantes. Se deben extremar
las precauciones durante su manejo y disposición final mediante la aplicación del
reglamento del laboratorio (Apéndice 1) y lo estipulado en la “NOM-087-ECOL-SSA1-
2002.
I. OBJETIVO DE LA PRÁCTICA
Aprender a realizar el diagnóstico de hemoparásitos en muestras clínicas de sangre
mediante microscopía.
IV. EQUIPOS
Microscopio compuesto
43
ESCUELA DE TÉCNICOS LABORATORISTAS
V. MATERIALES Y REACTIVOS
V.4 Reactivos
Kit Hemocolorante rápido
Colorante de Wright (gotero con 20-50mL)
Colorante de Giemsa (gotero con 20-50mL)
Aceite de inmersión
VI. PROCEDIMIENTO
VI.1 Preparación de frotis sanguíneos
La forma de preparar los frotis sanguíneos puede lograrse utilizando dos láminas
portaobjetos o un portaobjeto y laminilla
44
ESCUELA DE TÉCNICOS LABORATORISTAS
Coloración de Wright.
1. Preparar el frotis sanguíneo de acuerdo a lo especificado en el punto VI.1
2. Fijar el frotis en metanol absoluto por 10 segundos
3. Colocar la lámina sobre un soporte con el frotis hacia arriba
4. Cubrir totalmente la lámina con el colorante durante tres minutos y un máximo
de cuatro
5. Lavar con agua destilada.
6. Secar a medio ambiente para poder observar al microscopio en objetivo de 40X
e inmersión (100X), determinar la presencia de hemoparásitos (Figura 1).
Coloración de Giemsa
1. Preparar el frotis sanguíneo de acuerdo a lo especificado en el punto VI.1
2. Fijar el frotis en metanol absoluto por 10 segundos
3. Secar a medio ambiente el frotis
4. Sumergir la lámina en el colorante de Giensa durante 20 a 30 minutos
5. Lavar con agua destilada y colocar la lámina verticalmente
6. Secar a medio ambiente para poder observar al microscopio en objetivo de 40X
e inmersión (100X), determinar la presencia de hemoparásitos (Figura 1).
Diagrama de flujo:
45
ESCUELA DE TÉCNICOS LABORATORISTAS
Figura 1.
Escuela de Técnicos
Laboratoristas
VIII. CONCLUSIONES
Apegarse en lo dispuesto en el Apéndice 3. (Formato para la elaboración de reportes
de Prácticas).
IX. CUESTIONARIO
1. ¿Cuál es el fundamento de la Técnica de Hemocolorante y qué estructuras
celulares tiñe de los hemoparásitos?
2. ¿Cuál es el fundamento de la Técnica de Wright y qué estructuras celulares
tiñe de los hemoparásitos?
3. ¿Cuál es el fundamento de la Técnica de Giemsa y qué estructuras celulares
tiñe de los hemoparásitos?
4. De las tinciones antes mencionadas, cuál es la más adecuada para la tinción
de hemoparásitos y por qué?
5. ¿Cuáles son los principales hemoparásitos que se encuentran en nuestro país?
6. Describir el ciclo biológico de Tripanozoma cruzi y Plasmodium vivax
7. ¿Cómo afectan los hemoparásitos T. cruzi y P. vivax al humano?
X. DISPOSICIÓN DE RESIDUOS
Revisar Apéndice 2. (Manejo y disposición de los desechos biológicos).
XI. REFERENCIAS
Apegarse en lo dispuesto en el Apéndice 3. (Formato para la elaboración de reportes
de Prácticas).
46
ESCUELA DE TÉCNICOS LABORATORISTAS
I. OBJETIVO DE LA PRÁCTICA
Conocer el método de compresión para la detección de larvas de parásitos en tejidos
musculares.
Escuela de Técnicos
II. Laboratoristas
FUNDAMENTO Y APLICACIÓN
Se basa en la compresión de un tejido, generalmente muscular, con ayuda de dos
portaobjetos para poner en evidencia los quistes de Trichinella spiralis y poder
observarlos al microscopio.
Este método se utiliza sobre todo como control de calidad para verificar la presencia o
ausencia de T. spiralis en la carne de los animales de sacrificio para consumo humano
(cerdo y equinos) los cuales parasita comúnmente y son trasmisibles al humano
IV. EQUIPOS
Microscopio compuesto
V. MATERIALES Y REACTIVOS
V.1. Materiales proporcionados por el laboratorio
Caja petri de vidrio
Vidrio de reloj
Mango de bisturí
Charola metálica
Pinzas de disección
V.3 Reactivos
Solución de lugol (frasco con 20-50mL)
Solución salina fisiológica al 0.85% (100mL)
47
ESCUELA DE TÉCNICOS LABORATORISTAS
VI. PROCEDIMIENTO
1. Pesar 0.5g de tejido de diafragma de cerdo o de equino libre de sangre y/o
grasa
2. Colocar el tejido en un portaobjetos y presionarlo con un trozo de papel
Escuela de Técnicos
secante para eliminar el exceso de agua.
3. Colocar sobre el tejido otro portaobjetos y hacer presión sujetando los
Laboratoristas
extremos hasta comprimir el tejido.
4. Observar en un microscopio estereoscópico o uno óptico para determinar la
presencia de larvas o quistes de Trichinella spiralis (Figura 1).
Diagrama de flujo:
Figura 1.
l
Quistes de T. spiralis en tejido de diafragma de cerdo Larvas de Trichinella spiralis
VIII. CONCLUSIONES
Apegarse en lo dispuesto en el Apéndice 3. (Formato para la elaboración de reportes
de Prácticas).
IX. CUESTIONARIO
1. ¿Cómo se llama a la parasitosis causada por Trichinella spiralis?
2. ¿Cuál es el ciclo biológico de T. spiralis?
3. ¿Cómo se infecta el humano con este parásito?
4. ¿Cómo afecta la larva T. spiralis al ser humano?
5. ¿Por qué el parásito migra hacia los músculos de su hospedero?
48
ESCUELA DE TÉCNICOS LABORATORISTAS
XI. REFERENCIAS
Apegarse en lo dispuesto en el Apéndice 3. (Formato para la elaboración de reportes
de Prácticas).
49
ESCUELA DE TÉCNICOS LABORATORISTAS
XII. APÉNDICES
3 Las alumnas con cabello largo deberán de permanecer toda la práctica con el cabello
recogido. Los alumnos deberán de tener un máximo de cabello largo de 4 cm
7 Se solicitará una o dos credenciales por equipo, mismas que serán devueltas al final
de la práctica cuando se entregue la mesa de trabajo limpia y desinfectada, bancos
arreglados, tarjas limpias y secas.
8 Queda estrictamente prohibido dejar sobre la mesa o áreas de trabajo del laboratorio,
residuos de muestras biológicas (copros, sangre etc.,) o sus contenedores, porta y
cubreobjetos u otros materiales.
9 Las muestras utilizadas así como sus contenedores, deberán desecharse de acuerdo
a las instrucciones del profesor y técnico de apoyo del laboratorio.
El o los alumnos que no lleven a cabo alguno(s) de los puntos anteriores, no podrán
permanecer dentro del laboratorio, es decir, no podrán efectuar la práctica
correspondiente.
Firma de enterado
50
ESCUELA DE TÉCNICOS LABORATORISTAS
51
ESCUELA DE TÉCNICOS LABORATORISTAS
52
ESCUELA DE TÉCNICOS LABORATORISTAS
Escuela de Técnicos
ESCUELA DE TÉCNICOS LABORATORISTAS
Laboratoristas
MATERIA: LABORATORIO DE PARASITOLOGÍA
Participación Participación en el
Nombre del alumno Firma
práctica reporte
53
ESCUELA DE TÉCNICOS LABORATORISTAS
3 Introducción
Breve resumen de conceptos y/o importancia del tema. La información debe
tener relevancia para la práctica y no debe ser una copia de un libro o de
internet. Procurar que no exceda de una cuartilla.
6 Resultados y discusión
Se describen los resultados obtenidos, se indican las tablas, figuras,
esquemas, fotografías así como una explicación con fundamentos científicos
del porqué se obtuvieron esos resultados.
7 7Conclusión.
Definir si se cumplió con el objetivo o propósito, detallar el porqué se cumplió o
no.
En caso de reporte por equipo, cada integrante desarrollará su conclusión.
8 Cuestionario
Se deben contestar las preguntas indicadas, las cuales están relacionadas con
los fundamentos, la relevancia, la ampliación o aplicación de los resultados o
los métodos utilizados.
9 Bibliografía
Al menos 3 referencias a partir del año 2012. En caso de libros de
Parasitología, pueden ser consultados de años anteriores.
NOTAS:
b) El contenido del reporte debera elaborarse a mano por los integrantes del
equipo **
54
ESCUELA DE TÉCNICOS LABORATORISTAS
55