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ESCUELA DE MEDICINA
ACADEMIA DE CIENCIAS BIOMÉDICAS
MANUAL DE PRÁCTICAS:
ELABORADO POR:
PLAN 2009
México, D. F.
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2020-1
INDICE
Reglamento 4
Práctica No 1
Elaboración de medios de cultivo para hongos. 12
Práctica No 2.
Metodología del diagnóstico micológico y microcultivo. 15
Práctica No 3.
Diagnóstico micológico de tiñas. 22
Práctica No 4
Diagnóstico micológico de micosis oportunistas. 27
Práctica No 5.
Evaluación de la respuesta inmunológica en las micosis. 33
Práctica No 6.
Diagnóstico morfológico de enteroparasitosis 37
(Métodos cualitativos, cuantitativos y especiales).
Práctica No 7.
Diagnóstico parasitológico de geohelmintiasis y otras nematodiosis. 42
Práctica No 8
Diagnóstico parasitológico de cestodiosis y trematodiosis. 46
Práctica No 9.
Diagnóstico de enfermedades parasitarias transmitidas por vectores 1. 49
(Paludismo y Leishmaniosis)
Práctica No 10.
Diagnóstico de enfermedades parasitarias transmitidas por vectores 2. 52
(Tripanosomiasis y Oncocercosis)
Práctica No 11.
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Diagnóstico parasitológico e inmunoserológico de Toxoplasmosis. 57
Práctica No 12
Insectos y Artrópodos de importancia Médica 61
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4
REGLAMENTO INTERNO DEL LABORATORIO.
1.- Cada sesión de laboratorio iniciará a la hora indicada, con una tolerancia de 10
minutos al inicio en las clases que comiencen a las 07:00 A.M. y cinco minutos de
tolerancia en las clases subsecuentes.
2.- El alumno que llegue después de los 10 o 5 minutos de tolerancia según sea el
caso.“NO PODRA INGRESAR AL LABORATORIO”.
6.- No se permite por ningún motivo la salida del alumno o interrupciones externas
una vez iniciada la práctica. En caso de que alguno de los profesores autorice la
salida del alumno este no deberá exceder más de 5 minutos de ausencia, de lo
contrario ya no se le permitirá su ingreso al laboratorio. No puede haber más de
dos alumnos fuera del laboratorio.
8.- Desinfectar las mesas de trabajo y tarjas con benzal empleando para ello una
esponja; al inicio y al finalizar cada práctica. Además, de colocar los bancos en su
lugar al término de la misma.
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9.- Durante la práctica sólo podrá permanecer sobre la mesa de trabajo el material
estrictamente necesario, para la realización de la misma y el cuaderno de apuntes.
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BOTE VERDE: MATERIAL NO CONTAMINADO
Envolturas: de jeringa, de guantes, de hisopos, de abatelenguas, de
kits, de medios de cultivo, papel estraza
17.- El material que sea destruido o roto durante la práctica el alumno deberá
reponerlo con material nuevo, a la siguiente práctica.
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21.- Colocar el objetivo de menor resolución en dirección a las manecillas del reloj.
22.- Enredar el cable.
23.- Colocar el microscopio en la gaveta correspondiente, de acuerdo al número
de microscopio.
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28.- La revisión del desarrollo del trabajo de investigación, se llevará a cabo
durante el ciclo escolar, para presentarse en la semana siguiente al tercer examen
parcial.
30.- Para tener derecho a los exámenes parciales y final el alumno deberá
contar con el 80% de asistencia tanto en las actividades teóricas como
prácticas.
31.- Cada equipo debe contar con al menos un manual de laboratorio impreso a
doble página por cuartilla, engargolado en color VERDE y en el que cada sesión
práctica deberán entregar por escrito un diagrama de flujo del procedimiento
experimental a seguir, y los siguientes puntos a investigar: ciclo de vida del
microorganismo a revisar, epidemiología de la infección, las manifestaciones
clínicas de la infección y el tratamiento recomendado; en un máximo de 2
cuartillas.
34.- Una vez formados los equipos en la primera semana de clases NO HAY
POSIBLIDAD DE CAMBIO DE EQUIPO de trabajo, NI ENTREGAS
INDIVIDUALES DE REPORTE O TRABAJO DE INVESTIGACIÓN.
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V.- DEL FORMATO DEL REPORTE DE PRÁCTICAS
Anotar con mayúscula los títulos de los temas y subrayar los subtítulos de los
subtemas que aborda el marco teórico.
La introducción deberá estar perfectamente referenciada empleando para
ello el sistema APA.
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El docente mostrará a los alumnos la forma en que se analizaran los resultados
empleando para ello una práctica muestra.
VIII.- CONCLUSIONES
Estas deberán ser puntuales y en base los objetivos de su práctica
IX.- REFERENCÍAS El alumno empleará para ello el sistema APA
(Apellido, Nombre., Apellido, Nombre., (Año), Título en cursivas, Lugar de la
edición: Editorial).
Mínimo 3 fuentes bibliográficas.
Instrucciones: la calificación por cada área a evaluar puede ser de 0 hasta 100 %. Seleccione la puntuación que considere más
adecuada al desempeño del estudiante.
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4. RESULTADOS (1.5) Que cuente con diagramas, gráficas, imágenes Si no cuenta con algún Que no contenga algún elemento
y cada una de ellas con su pie de figura. elemento anteriormente anteriormente mencionado y no
mencionado este referenciado.
5. ANÁLISIS Y DISCUSIÓN DE Explicación lógica, coherente de los resultados Si no existe una Si es una repetición de los
RESULTADOS (3.0) obtenidos, integra los conocimientos explicación lógica y resultados.
adquiridos en teoría para resolver una coherente de los
situación dada (descripción de 1 patología). resultados obtenidos.
referencia (mínimo 2 libros y 1 articulo)
.
6. CONCLUSIÓN (1.0) Basados en los objetivos propuestos en la Que no se tengan todas las Que las conclusiones no estén de
práctica la cual debe ser puntual, breve y conclusiones de acuerdo a acuerdo a los objetivos
concisa. los objetivos.
7. CUESTIONARIO (1.0) Todas las preguntas están correctas Si cuenta con la mitad del Responde correctamente menos de
cuestionario la mitad del cuestionario
correctamente
8. BIBLIOGRAFÍA (1.0) Que cuente con la bibliografía de acuerdo al Que no cuente con el Que no cuente con la bibliografía
sistema APA. formato del sistema APA,
que no haya concordancia
entre referencia y
bibliografía.
Calificación:
Nota: El reporte de práctica se entregará al inicio de la sesión de laboratorio, por ningún motivo se reciben prácticas extemporáneas.
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4 OCT (cps-faust) (eSTUDIO COPROLOGICo)
7-11 OCT PRÁCTICA # 7. Diagnóstico parasitológico de GEOHELMINTIASIS
Y OTRAS NEMATODIOSIS.
ENTREGA DE REPORTE DE LA PRÁCTICA 6
14-18 OCT PRÁCTICA # 8. Diagnóstico parasitológico de CESTODIOSIS Y
TREMATODIOSIS.
ENTREGA DE REPORTE DE LA PRÁCTICA 7
21-25 OCT ENTREGA DE REPORTE DE LA PRÁCTICA 8
ENTREGA DEL SEGUNDO AVANCE DEL PROTOCOLO DE
INVESTIGACIÓN
28 OCT – SEGUNDO EXAMEN PARCIAL
1 NOV 2DA ENTREGA DEL TRABAJO SEMESTRAL
4- 8 NOV PRÁCTICA # 9. DIAGNÓSTICO DE ENFERMEDADES
PARASITARIAS TRANSMITIDAS POR VECTORES 1 (Paludismo y
Leishmaniosis).
11-15 NOV PRÁCTICA # 10. DIAGNÓSTICO DE ENFERMEDADES
PARASITARIAS TRANSMITIDAS POR VECTORES 2
(Trypanosomosis y Oncocercosis).
ENTREGA DE TRABAJO FINAL DE INVESTIGACIÓN
ENTREGA DE REPORTE DE LA PRÁCTICA 9
18-22 NOV PRÁCTICA # 11. DIAGNÓSTICO PARASITOLÓGICO E
INMUNOLÓGICO DE TOXOPLASMOSIS
ENTREGA DE REPORTE DE LA PRÁCTICA 10
25-29 NOV PRÁCTICA #12. ARTRÓPODOS
ENTREGA DE REPORTE DE LAS PRÁCTICAS 11 y 12
2-6 DIC TERCER EXAMEN PARCIAL
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PRÁCTICA No 1
I.- OBJETIVO
Que el alumno comprenda la importancia de trabajar en condiciones de esterilidad,
preparando medios de cultivo los cuales son fácilmente contaminables cuando no se
manipulan de forma correcta.
II.- INTRODUCCIÓN
Los medios de cultivo se pueden clasificar en tres tipos: naturales, semisintéticos y
sintéticos, dependiendo de lo componentes, los naturales están elaborados con leche,
granos de diferentes cereales, frutas y otros compuestos, los semisintéticos como el
Sabouraud aportan una fuente de carbono y nitrógeno lo cual es suficiente para el
desarrollo de diferentes hongos debido a que no son tan demandantes
energéticamente hablando (Arenas 2011).
Los medios se preparan con facilidad, los ingredientes se disuelven por separado en
agua y se mezclan en un matraz Erlenmeyer; se solubiliza con calor se vierten en
tubos y se esterilizan en autoclave, puede también realizarse en cajas Petri. (Arenas,
2011 y Koneman, 2013).
Existen demasiados medios en el mercado útiles en el aislamiento de hongos pero el
Sabouraud Dextrosa Agar, Papa Dextrosa Agar, Agar Biggy, Agar Harina de Maíz,
Agar Czapeck, Medio Papa-Zanahoria y Mycosel son los más utilizados. (Bonifaz,
2012).
Existen también medios de cultivo selectivos o específicos y que son empleados para
el aislamiento de microorganismos más demandantes metabólicamente hablando
como es el caso de los hongos secundariamente tegumentarios o sistémicos (Arenas,
2011).
III.- MATERIAL
Balanza electrónica
Autoclave
Matraces Erlenmeyer de diferentes volúmenes
Probetas de diferentes volúmenes
Mechero Fisher
Cajas Petri estériles desechables
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Base Agar Dextrosa Sabouraud (SDA), Agar Papa Dextrosa (PDA), Agar
Mycosel y Agar Harina de Maíz
IV.-METODOLOGÍA
El alumno preparará el volumen que se le indique de los siguientes medios, Agar
Mycosel, Agar Harina de Maíz, Agar Dextrosa Sabouraud y Agar de papa y
Dextrosa.
1.- Verificar en el frasco que contiene la base de cada uno de los diferentes
medios antes mencionados la cantidad requerida para la preparación de 1000 mL.
de medio.
2. Realizar los cálculos pertinentes para conocer la cantidad necesaria que deberá
pesar para preparar el volumen indicado por el profesor.
3.- Una vez pesado el agar, hidratarlo con el volumen requerido de agua
bidestilada.
4.- Esterilizar los medios a 15 lb, 121 oC por 15 minutos o, a las condiciones que
indique el fabricante.
5.- Una vez transcurrido el tiempo indicado, esperar a que se enfríen hasta
alcanzar una temperatura aproximada entre 40 y 45 oC (Extremar precauciones
para evitar quemarse).
6.- En condiciones de esterilidad, vaciar aproximadamente 15 mL. de medio de
cultivo a cada caja Petri estéril, evitando que se formen burbujas, (No vaciar
estando el medio de cultivo muy caliente por que se forma exceso de agua de
condensación la cual podría contaminar sus medios de cultivo, ni tampoco dejar
que se enfríe demasiado por qué el medio se gelifica impidiendo que se pueda
vaciar a las cajas).
7.- Dejar enfriar hasta que gelifiquen y puedan moverse sin el riesgo que se
derramen.
8.- Tapar las cajas Petri con cuidado
9.- Identificar correctamente con el nombre del medio, grupo y equipo.
10.-Incubar a 37 oC por 24 horas.
11.- Revisar si alguna de ellas está contaminada y de ser así desecharlas, si no
existe ninguna contaminada guardarlas a 4 oC hasta su uso.
V.- RESULTADOS
Elabore gráficos, dibujos o lo que le sea conveniente para esta práctica no olvidando
colocar el pie de figura.
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VI.- ANÁLISIS DE RESULTADOS
Verifique cuantas cajas quedaron gelificadas correctamente, con el volumen
adecuado, sin burbujas y no contaminadas.
Analice y discuta la, o las causas que sucedieron para que no se obtuvieran los
resultados adecuados, integre sus conocimientos y mencione los efectos que pudiera
tener este resultado en el aislamiento y diagnóstico de una micosis y por último la
trascendencia de esto en el paciente.
VII.- CUESTIONARIO
1. En una tabla compare las características biológicas y necesidades nutricionales de
bacterias y hongos
2. ¿Qué es un medio de cultivo y para qué se utiliza?
3. ¿Cuáles son las diferencias entre los medios de cultivo enriquecidos, diferenciales
y selectivos?
4. Describa en una tabla las características y la utilidad de cada uno de los medios
de cultivo utilizados en esta práctica.
5. ¿Cuáles son las medidas higiénicas que se deben tomar en el laboratorio de
micología?
VIII. REFERENCIAS
1.- Arenas, R., (2011), Micología Médica Ilustrada, México D. F., 4ta edición.,
Editorial: Mc Graw Hill.
2.- Becerril, M. A., (2012), Parasitología Médica, México D. F., 3ra edición.,
Editorial: Mc Graw Hill.
3.- Bonifaz, A., (2012), Micología Médica, México D. F., 4ta edición., Editorial: Mc
Graw Hill.
4. - Jawetz, E. J., Menick, E. A., (2011),Microbiologia Médica, México D.F.,
Editorial. El Manual Moderno.
5.- Koneman, E. W., Washington, C. W., Allen, D. S., Procop, G. W., Janda, W. M.,
Schreckenberger, P. C., Woods, G. L., (2013), Diagnóstico Microbiológico Texto y
Atlas en color, México D. F., 6ta edición, Editorial: Médica Panamericana.
6.-Koneman, E. W., Roberts, G. D., (1996), Micología Práctica de laboratorio,
México D. F., 3ra edición, Editorial: Médica Panamericana.
7.- Murray, P. R., Rosenthal, K. S., Pfaller, M. A., (2009), Microbiología Médica,
Madrid España, 5ta edición, Editorial: Elsevier Mosby.
8.- Rojas, E. O., (2010), Inmunología de memoria, México D.F., 3ra edición,
Editorial: Medica Panamericana.
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9.- Romero C. R., (2007), Microbiología y parasitología humana, México D.F., 3ª
edición, Editorial: Médica Panamericana.
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PRÁCTICA No 2.
I.- OBJETIVO
Aislar de diferentes sitios del plantel, hongos saprofitos los cuales se encuentran
como contaminantes en el ambiente, realizará la técnica del microcultivo para
identificar los hongos aislados y conocerá las características biológicas, morfológicas
y estructurales de los hongos.
II.- INTRODUCCIÓN
La Micología es la ciencia que se encarga del estudio de los hongos y la Micología
Médica, tiene por objeto estudiar las enfermedades que estos producen en el ser
humano. Se calcula que existen alrededor de 1.5 millones de especies, de estas
aproximadamente la mitad han sido descritas, y sólo alrededor del 100, están
consideradas de interés para la Micología Médica (Arenas, R., 2011).
Existen dos tipos de hongos:
Levaduras: hongos unicelulares
Mohos u hongos filamentosos: hongos pluricelulares
En general, todos los hongos son heterótrofos, por lo que se nutren de materia
orgánica preformada utilizándola como fuente de carbono y energía, tienen una
pared celular constituida por polisacáridos, polipéptidos y quitina; su membrana
celular contiene ergosterol y muestran un citoplasma granular, son aerobios e
inmóviles con algunas excepciones, y la mayoría de ellos viven como saprofitos en
el suelo y agua; sin embargo muchos de ellos pueden ocasionar diferentes
patologías en el humano pasando de un estado saprófito a uno parásito (Bonifaz,
2012).
Existen hongos micro y macroscópicos pero ambos están formados por
estructuras filamentosas o elementos multicelulares, por lo que a la unidad
funcional de estos se les denomina hifa, y al conjunto de ellas se les denomina
micelio o talo.
El micelio o talo está constituido por dos partes:
Micelio vegetativo: es el encargado de la absorción de nutrientes, del desarrollo, la
fijación y la edificación de la parte reproductora.
Micelio aéreo: donde se forman los órganos de reproducción.
Existen hongos en los que el micelio se encuentra divido por tabiques
transversales y se le denomina micelio septado, a algunos que no presentan
estos septos o tienen muy pocos y se les denomina micelio continuo o
cenocítico.
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Se reproducen de forma sexual como asexuadamente siendo la forma asexuada
la mejor conocida y que permite realizar la identificación del hongo, basándose en
la identificación de células externas especializadas llamadas conidios y solo en
las zigomicotas son internas y se llaman endosporas o
esporangiosporas(Arenas, 2011 y Koneman 2013).
Existen diferentes tipos de estructuras de reproducción asexual que permiten
realizar la identificación de los hongos cuando se observan al microscopio
mediante una preparación en fresco teñido el colorante de azul de algodón, el
cual, permite diferenciar las estructuras antes mencionadas, sin embargo cuando
la preparación se realiza de un primo aislamiento proveniente de una caja Petri,
estas estructuras, pueden maltratarse o bien separarse del micelio donde estaban
sostenidas dificultando la identificación debido a que solo se observan las esporas
dispersas el medio; y para evitar esto se debe apoyar en otra metodología que
permita observar las estructuras intactas, facilitando o permitiendo con ello la
identificación de los hongos. (Koneman, 2013).
La técnica de microcultivo nos permite recuperar las estructuras mejor
conservadas y por consiguiente realizar la identificación de los diferentes géneros
y especies de hongos.
Para la identificación de levaduras se recurre a pruebas bioquímicas similares a
las que se utilizan para las bacterias, (se revisarán en una práctica posterior).
III- MATERIAL
Microscopio óptico
Portaobjetos y cubreobjetos
Colorante Azul de algodón lactofenol
Asa micológica
Mechero Fisher
Cajas Petri con Agar Dextrosa Sabouraud (SDA), Agar Papa Dextrosa
(PDA) y Agar Mycosel
Verduras o Alimentos en descomposición que contengan hongos (traer
muestra por equipo)
Estufa (ajustada a 28°C).
Dispositivo para microcultivo: caja de Petri estéril con varilla de vidrio
doblada en forma de “V”, con un portaobjetos y cubreobjetos.
Mango con hoja para bisturí estéril
Pinza de disección sin dientes
Portaobjetos y cubreobjetos
Azul de algodón
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1 caja Petri con agar Sabouraud de 5 mm. de espesor
10 mL de agua glicerinada al 10% estéril
IV.- METODOLOGÍA
Primera Sesión:
1.- Exponer las diferentes cajas de agar destapadas en los diferentes sitios que
indiquen los docentes por 10minutos.
2.- Cerrar las cajas
3.- Identificarlas correctamente
4.- Incubar los medios de cultivo a 28oC por 72 horas.
Segunda Sesión:
Observar las características macroscópicas de aquellas colonias que puedan
relacionarse con las características morfológicas que presentan los hongos
tomando en cuenta:
El tamaño de la colonia.
El color anverso y reverso
El aspecto (aterciopelado, velloso, lanoso, algodonoso)
La textura
La presencia de pigmento difusible
1.- Realizar preparaciones en fresco tiñéndolas con azul de algodón
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2.- Observar al microscopio primero a 10X y después a 40X.
3.- Dibujar lo observado y apoyándose en las referencias bibliográficas identificar
el tipo de estructuras que se observen.
Microcultivo
Primera Sesión:
Técnica Tradicional:
1.- Dentro del área estéril del mechero, cortar con bisturí estéril un cuadro de 1
cm2 de agar Sabouraud y colocarlo sobre un portaobjetos estéril.
2.- Inocular en cada uno de los lados del fragmento de agar; con el asa micológica
una pequeña alícuota.
3.- Colocar un cubreobjetos estéril sobre el fragmento de agar inoculado y verter
10 mL del agua glicerinada al 10% estéril teniendo cuidado de no mojar el medio.
4.- Incubar en la estufa durante a 28oC por 72 horas.
Segunda Sesión:
5.- Retirar cuidadosamente el cubreobjetosy colocarlo sobre un portaobjetos
limpio en el que se ha depositado previamente una gota de azul de algodón
lactofenol.
6.- Retirar cuidadosamente el fragmento de agar del portaobjetos con el asa
micológica.
7.- Depositar una gota de azul de algodón en las estructuras adheridas y colocar
un cubreobjetos.
8.- Observar al microscopio primero a 10X y después a 40X.
9.- Dibujar lo observado y apoyándose en las referencias bibliográficas identificar
el tipo de estructuras que se observen.
V.- RESULTADOS
Describir las características macroscópicas de las colonias de hongos en el medio
SDA, PDA o Mycosel.
Dibujar las características micro y macroscópicas de los hongos, identificando
todas sus estructuras.
Identificar las posibles especies de hongos que fueron aisladas, mediante sus
características macroscópicas y microscópicas.
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VI.- ANÁLISIS DE RESULTADOS
Discutir los resultados obtenidos con lo reportado en las referencias bibliográficas
tomando en cuenta los agentes aislados en el ambiente y la importancia que tienen
como patógenos en el humano.
VII.- CONCLUSIONES
En base a sus objetivos y los resultados obtenidos elaborar mínimo tres
conclusiones.
VIII.- CUESTIONARIO
1. Describa las características fisiológicas de los hongos
2. Apoyándose con imágenes represente las diferentes estructuras que se encuentran
en el reino fungi.
3. Mediante un diagrama represente los diferentes tipos de hongos que existen y señale
cuales son las clases de mayor interés en medicina.
4. Realice una tabla donde mencione la terminología utilizada para describir un cultivo
micológico a nivel macro y microscópico.
5. Describa brevemente las técnicas de laboratorio que se utilizan para el diagnóstico
micológico.
6. ¿En qué consiste la técnica de Ridell (microcultivo) y para qué se utiliza?
IX.- REFERENCIAS
1.- Arenas, R., (2011), Micología Médica Ilustrada, México D. F., 4ta edición.,
Editorial: Mc Graw Hill.
2.- Becerril, M. A., (2012), Parasitología Médica, México D. F., 3ra edición.,
Editorial: Mc Graw Hill.
3.- Bonifaz, A., (2012), Micología Médica, México D. F., 4ta edición., Editorial: Mc
Graw Hill.
4. - Jawetz, E. J., Menick, E. A., (2011), Microbiologia Médica, México D.F.,
Editorial. El Manual Moderno.
5.- Koneman, E. W., Washington, C. W., Allen, D. S., Procop, G. W., Janda, W. M.,
Schreckenberger, P. C., Woods, G. L., (2013), Diagnóstico Microbiológico Texto y
Atlas en color, México D. F., 6ta edición, Editorial: Médica Panamericana.
6.-Koneman, E. W., Roberts, G. D., (1996), Micología Práctica de laboratorio,
México D. F., 3ra edición, Editorial: Médica Panamericana.
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7.- Murray, P. R., Rosenthal, K. S., Pfaller, M. A., (2009), Microbiología Médica,
Madrid España, 5ta edición, Editorial: Elsevier Mosby.
8.- Rojas, E. O., (2010), Inmunología de memoria, México D.F., 3ra edición,
Editorial: Medica Panamericana.
9.- Romero C. R., (2007), Microbiología y parasitología humana, México D.F., 3ª
edición, Editorial: Médica Panamericana.
ANEXOS
1. Hifa
2. Conidióforo
3. Fiálide
4. Conidios
5. Tabique o septo
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Fig. 2 Ejemplificación de la técnica del microcultivo
24
Fig. 5 Morfología microscópica de: Fig. 6 Morfología microscópica de:
Cabeza aspergilar de Aspergilus fumigatus Macroconideos de Alternaria spp.
Tomada de: facmed.unam.mTomada de: groups.exeter.ac.uk
25
PRÁCTICA No. 3
DIAGNÓSTICO MICOLÓGICO DE TIÑAS
I.- OBJETIVO: Que el alumno conozca los diferentes agentes etiológicos de tiñas
mediante el aislamiento e identificación de los mismos a partir de diferentes muestras
biológicas tomadas de pacientes.
II.-INTRODUCCION
Las tiñas o dermatofitosis son un conjunto de micosis superficiales donde se ve
afectada la piel y sus anexos, (uñas y pelos), son ocasionadas por tres géneros
distintos de hongos denominados dermatofitos los cuales en raras ocasiones invaden
tejidos profundos (Bonifaz, 2012).
Los géneros antes mencionados son: Trichophyton, Epidermophyton y Microsporum,
algunas especies de estos pueden infectar a hombres y animales y de acuerdo al
tropismo que presentan se denominan: Antropofílicos, Zoofílicos y Geofílicos. Ninguno
de ellos forma parte de la microbiota normal de la piel (Arenas, 2011).
Las tiñas son padecimientos cosmopolitas aunque se presentan con mayor frecuencia
en climas cálidos y húmedos y algunas especies solo se presentan en zonas muy
restringidas.
En México y Latinoamérica los cinco dermatofitos más frecuentes son: T. rubrum 70
%, T. mentagrophytes 10 % T. tonsurans 3 %, M. canis 13 % y Epidermophyton
flocosum 1% (Bonifaz, 2012).
Se han descrito 43 especies y todas viven como saprofitos del suelo y solo 11 se
consideran como patógenos para el humano, pudiendo ocasionar diferentes tipos de
tiña, aunque en la práctica que hay afinidad preferencial por las áreas afectadas. De
esta manera la tiña capitis variedad seca se asocia mayormente con T. tonsurans y
M. canis, el querión de Celso se asocia con mayor frecuencia a M. canis y T.
mentagrophytes, pudiendo ser ocasionado por T. verrucosum, el Favus se asocia
principalmente a T. schoenleinii y ocasionalmente a M. gypseum, la tiña corporis en
niños se asocia predominantemente a T. tonsurans y en adultos a T. rubrum, la tiña
imbricata o Tokelau se asocia únicamente a T. concentricum, la tiña de la ingle si es
muy limitada muy probablemente sea ocasionada por E. flocosum y si es diseminada
a T. rubrum y si es inflamatoria a T. mentagrophytes, solo por citar algunos ejemplos.
De esta manera cada una de las tiñas aun cuando son ocasionadas preferentemente
por una especie en particular, no está exentas de que otras especies pudiesen
desarrollar la misma patología. (Arenas, 2011 y Bonifaz, 2012).
La forma de diferenciar lo géneros y especies de estos hongos es por sus conidios,
en especial por los macroconidios ya que son específicos para cada género (Arenas,
2011).
Para lograr la identificación es necesario primero aislar al agente realizándose esto en
medios con o sin antibiótico, existen una gran variedad de medios en el mercado pero
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el Agar Dextrosa Sabouraud (SDA) o el Agar Mycosel, permiten el aislamiento de
estos agentes perfectamente (Bonifaz, 2012).
III.- MATERIAL
Estufa (ajustada a 28°C)
Benzal
Sanitas
Papel microfilm
1 caja con agar Mycosel, y una con SDA por equipo
Microscopio óptico
1 Mechero Fisher
1 Asa micológica
Caja Petri estéril
2 pares de guantes estériles
Portaobjetos estériles (en paquetes con dos portaobjetos)
2 Cubreobjetos
5 mL. De colorante Azul de algodón
IV.- METODOLOGÍA
Primera Sesión:
1.-Elaborar la historia clínica de un paciente con diagnóstico clínico presuntivo de
dermatofitosis; considerando los factores predisponentes intrínsecos y extrínsecos y
las manifestaciones clínicas del paciente.
2.- Recolectar una muestra clínica del paciente, tener presente las recomendaciones
para la recolección y transporte de la muestra.
3.-Dentro del área estéril del mechero; sembrar las muestras biológicas en el agar
Mycosel.
4.-Incubar el medio Mycosel a 28oC
5.-Observar los cultivos cada semana durante tres semanas consecutivas.
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Segunda Sesión:
6.-Observar las características macroscópicas y tomar la morfología colonial de
aquellas colonias que puedan relacionarse con las características morfológicas que
presentan los dermatofitos.
7.-Realizar preparación en fresco con azul de algodón de las colonias sospechosas.
8.-Observar al microscopio primero a 10X y después a 40X.
9.- Dibujar lo observado y apoyándose en las referencias bibliográficas identificar el
tipo de estructuras que se observen.
V.- RESULTADOS
Tomar la Morfología colonial de las colonias de dermatofitos aislados
Dibujar las características macroscópicas de dos colonias de dermatofitos en el
medio Mycosel.
Dibujar las características microscópicas de los dermatofitos, identificando cada
una de sus estructuras.
Identificar mediante sus características macroscópicas y microscópicas los
posibles dermatofitos que fueron aislados y que pudieron ocasionar el cuadro
clínico.
Integrar el diagnóstico clínico nosológico y etiológico del paciente.
VII.- CONCLUSIONES
En base a sus objetivos y los resultados obtenidos elaborar mínimo tres
conclusiones.
VIII.- CUESTIONARIO
1. Realice un diagrama de las micopatías que se pueden presentar y sus características
principales.
2. Defina micosis y describa los tipos de micosis que existen
3. Complete adecuadamente la siguiente tabla:
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Dermatofitosis Agente etiológico Diagnóstico Tratamiento
4. De la cabeza
Del cuerpo
De la ingle
De los pies
De las uñas
Complete adecuadamente la siguiente tabla:
29
ANEXOS
30
Fig. 13 Morfología microscópica de: Fig. 14 Morfología macroscópica de:
Trichophyton mentagrophytes. Trichophyton rubrum
Tomada de:tgw1916.netTomada de:thunderhouse4-yuri.blogspot.com
31
PRÁCTICA No. 4
II.- INTRODUCCIÓN
Desde hace más de 30 años se utiliza el término de “micosis oportunistas” para
designar a un grupo de infecciones por hongos que viven normalmente como
saprobios en el ambiente o en cavidades naturales de seres humanos, son termo
tolerantes y tienen la propiedad de presentar cambios bioquímicos y morfológicos en
contacto con personas que tienen defectos en sus mecanismos de defensa.
Los géneros que se aíslan con mayor frecuencia son Candida, Aspergillus,
Cryptococcus neoformans y Zigomicetos pero en personas comprometidas
inmunológicamente cualquier hongo saprofito puede comportarse como patógeno
secundario (Arenas, 2011).
Las anomalías en la inmunidad celular como en el caso del SIDA o en la humoral
(leucemias y mieloma) en alteraciones en la fagocitosis como en el Lupus o Diabetes,
en granulocitopenia por citotoxicidad o radioterapia, o en inmunosupresión
consecutiva al uso de glucocorticoides, quimioterapia o quemaduras entre otras;
favorecen la infección por este tipo de organismos. Observándose la siguiente
proporción Neumocistosis 32%, Candidosis 31%, Criptococosis 29%, e
Histoplasmosis 9.6%. Por cierto, estas infecciones pueden ser cutáneas, subcutáneas
y sistémicas. Donde, las formas sistémicas generan una, alta mortalidad (Arenas,
2011 y Bonifaz, 2012).
En esta práctica nos enfocaremos al estudio de Candida por la facilidad que se tiene
para el aislamiento del agente etiológico
La Candidosis es una infección primaria o secundaria, causada por levaduras del
género Candida, cuyas manifestaciones clínicas pueden ser extremadamente
variables de evolución aguda, subaguda, crónica o episódica y en las cuales el hongo
puede causar lesiones superficiales (cutánea o mucosas), profundas ó diseminadas.
La Candidosis es una patología de presentación universal y se le considera como una
de las infecciones oportunistas más frecuente en los seres humanos. Entre las
micosis, representa el 7,45% de las mismas y el 25% de las infecciones micóticas
superficiales que afectan a individuos de cualquier edad, género o grupo étnico. El
género Candida existe en la naturaleza, prácticamente en cualquier lugar donde haya
presencia de hidratos de carbono simples. Además, son habitantes habituales del
tracto digestivo, respiratorio, urogenital y tegumentario del hombre y animales
domésticos. El sistema gastrointestinal humano tiene una población pequeña pero
constante de C. albicans y ello se debe a un equilibrio entre este grupo de
32
microorganismos y la flora intestinal no patógena que evita su crecimiento
descontrolado. No obstante, el delicado balance que existe entre las levaduras y el
hospedero puede romperse y dar lugar al desarrollo de una infección oportunista
como se observa en los pacientes diabéticos e hipotiroideos; durante el embarazo;
tras la ingesta de antibióticos de amplio espectro, esteroides o anticonceptivos orales;
en asociación con procedimientos invasivos como la diálisis y la colocación de
sondas, catéteres o drenajes; durante el tratamiento de diversas enfermedades
neoplásicas; secundariamente a quemaduras extensas y graves y finalmente, en
patologías infecciosas como la Tuberculosis y el Síndrome de Inmunodeficiencia
Humana Adquirida.En general, la Candidosis cutáneo mucosa es frecuente en
pacientes con deficiencias de linfocitos T, tal como ocurre en las personas afectas de
SIDA o en pacientes con Diabetes Mellitus, mientras que las infecciones más graves,
la Candidosis profunda o diseminada que pone en riesgo la vida del paciente, se
desarrolla en individuos con compromiso inmunológico grave como en el caso de los
pacientes post-trasplantados o con enfermedades malignas de la sangre.
III.- MATERIAL
Cepa de Candida albicans
Estufa ajustada a 37°C
Benzal
Sanitas
Portaobjetos
1 Caja Petri con agar Sabouraud
1 Caja Petri con agar Harina de maíz
0.5 mL. de plasma
1 Microscopio óptico
1 Mechero Fisher
1 Asa bacteriológica
Portaobjetos
Cubreobjetos
2 Pipetas Pasteur
1 Bulbo de plástico
5 mL. de colorante azul de algodón
IV.- METODOLOGÍA
33
Primera Sesión:
1.- En condiciones de esterilidad; sembrar una azada de la cepa de Candida albicans
por estría cruzada en Agar Dextrosa Sabouraud y en el Agar Harina de Maíz.
2.- Incubar a 37°C durante 24 horas.
3.- Con un hisopo estéril humedecido con agua estéril tomar una muestra de la
mucosa oral o de diferentes sitios anatómicos de uno de sus compañeros de equipo.
4.- Sembrar por estría abierta en el medio de Agar Dextrosa Sabouraud o Agar de
Papa y Dextrosa
5.- Incubar a 37oC por 24 horas.
6.-En condiciones de esterilidad inocular una azada de la cepa de Candida albicans
en el tubo que contiene 0.5 mL. de plasma humano.
4.-Incubar a 37oC por 3 horas.
Segunda Sesión:
5.- Observar la morfología colonial y microscópica de las colonias de los medios en
los que sembró Agar Dextrosa Sabouraud y Agar Harina de Maíz.
6.- Realizar una preparación en fresco empleando colorante azul de algodón.
7.- Con una pipeta Pasteur realizar una preparación en fresco del tubo de plasma
inoculado con Candida albicans. Se puede teñir con colorante de azul de algodón.
8.-Observar al microscopio a 10X y 40X.
9.- 9.- Dibujar lo observado y apoyándose en las referencias bibliográficas identificar
el tipo de estructuras que se observen.
V.- RESULTADOS
Tomar la Morfología colonial de los aislados de Candida spp. en los diferentes
tipos de medios.
Dibujar las características microscópicas de las preparaciones elaboradas de
los diferentes medios
Dibujar las características microscópicas de la búsqueda del tubo germinativo.
Identificar las posibles especies del género Candida.
Integrar el diagnóstico clínico nosológico y etiológico del paciente.
34
germinativo, esto hará posible que pueda identificar el género y especie de la muestra
de su paciente.
VII.- CONCLUSIONES
En base a sus objetivos y los resultados obtenidos elaborar mínimo tres
conclusiones.
VIII.- CUESTIONARIO
36
ANEXOS
37
Fig. 21 Morfología macroscópica de: Fig. 22 Candidosis de la zona del pañal
Candida albicans
Tomada de:nativeremedies.comTomada de:dermnet.com
PRÁCTICA No. 5
EVALUACIÓN DE LA RESPUESTA INMUNOLÓGICA EN LAS MICOSIS
II.- INTRODUCCION
Las micosis secundariamente tegumentarias en la clasificación de González-Ochoa o
sistémicas en clasificación del Dr. Arenas, comparten el mecanismo de transmisión
que es por vía respiratoria (inhalando las esporas) de los diferentes hongos, los más
frecuentes son: Histoplasma capsulatum, Coccidiodes posadasi y Paracoccidiodes
brasiliensis (Bonifaz, 2012).
De manera general estas micosis cursan de manera asintomática en su forma
primaria del (60 al 75 %) de los casos no manifiestan ningún síntoma y solo son
detectables por la positividad a los antígenos específicos del agente etiológico que
esté ocasionando la patología, por ejemplo, Histoplasmina, Coccidiodina y/o
Esferulina y Paracoccidiodina hablando de micosis (Arenas, 2011, Bonifaz, 2012);
pero también puede emplearse en el diagnóstico de infecciones bacterianas como la
Tuberculosis o parasitarias como la Leshmaniosis donde los antígenos utilizados
reciben el nombre del agente etiológico (tuberculina y leishmanina) respectivamente
(Becerril, 2013).
La aplicación de antígenos fúngicos de forma intradérmica. Permite evaluar la
respuesta inmunológica tipo IV es útil con fines epidemiológicos o para monitorear el
transcurso de la enfermedad.
Las pruebas de intradermorreacción son la forme más precisa de evaluar la
inmunidad celular de un individuo a través de las cuales se mide la reacción
38
inflamatoria que se desarrolla en respuesta a la inyección intradérmica de un antígeno
determinado. Una reacción positiva se manifiesta por la aparición, en el sitio de
inyección, de una zona de edema que en el transcurso del tiempo desarrolla eritema,
induración e incluso necrosis, en ese orden. El antígeno se aplica en la piel en forma
intradérmica. Esta prueba ha sido de gran utilidad, por ejemplo, en la clasificación de
los enfermos con lepra (reacción de Mitsuda): los pacientes con lepra tuberculoide
dan reacciones positivas a la lepromina en tanto que los pacientes con lepra
lepromatosa dan reacciones negativas; la lepromina es una preparación antigénica
cruda obtenida a partir de los nódulos de los paciente con lepra lepromatosa. Por
efecto de la enfermedad, los pacientes con lepra lepromatosa pierden su capacidad
de respuesta inmune celular contra el bacilo de la lepra, aunque pueden mantener su
capacidad de responder contra otros antígenos (Rojas, 2010)
III.- MATERIAL
0.1 mL. de Candidina
0.1 mL. de Histoplasmina
2 Jeringas de insulina con aguja estériles
Torundas con alcohol
Vernier o regla milimétrica
Benzal
Sanitas
IV.- METODOLOGÍA
Primera Sesión
1.- Hacer asepsia y antisepsia de la parte anterior del antebrazo.
2.- Inocular 0.1 ml de Candidina o Histoplasmina por vía intradérmica.
Segunda Sesión
3.- Medir el diámetro de induración a las 24, 48 y 72 horas.
V.- RESULTADOS
39
Hacer una tabla que indique los diámetros de induración a las 24, 48 y 72
horas de todas las personas que fueron inoculadas.
Interpretar y explicar de manera extensa el fundamento de los mecanismos
inmunológicos que intervienen durante la intradermoreacción. Indicando todos
los factores y células de la respuesta inmune que participan.
Interpretar los resultados en cada uno quienes fueron inoculados con los
factores predisponentes con relación al tipo de micosis posible.
VII.- CUESTIONARIO:
VIII.- CONCLUSIONES
En base a sus objetivos y los resultados obtenidos elaborar mínimo tres
conclusiones.
IX.- REFERENCIAS
1.- Arenas, R., (2011), Micología Médica Ilustrada, México D. F., 4ta edición.,
Editorial: Mc Graw Hill.
2.- Becerril, M. A., (2012), Parasitología Médica, México D. F., 3ra edición.,
Editorial: Mc Graw Hill.
3.- Bonifaz, A., (2012), Micología Médica, México D. F., 4ta edición., Editorial: Mc
Graw Hill.
40
4. - Jawetz, E. J., Menick, E. A., (2011), Microbiología Médica, México D.F.,
Editorial. El Manual Moderno.
5.- Koneman, E. W., Washington, C. W., Allen, D. S., Procop, G. W., Janda, W. M.,
Schreckenberger, P. C., Woods, G. L., (2013), Diagnóstico Microbiológico Texto y
Atlas en color, México D. F., 6ta edición, Editorial: Médica Panamericana.
6.-Koneman, E. W., Roberts, G. D., (1996), Micología Práctica de laboratorio,
México D. F., 3ra edición, Editorial: Médica Panamericana.
7.- Murray, P. R., Rosenthal, K. S., Pfaller, M. A., (2009), Microbiología Médica,
Madrid España, 5ta edición, Editorial: Elsevier Mosby.
8.- Rojas, E. O., (2010), Inmunología de memoria, México D.F., 3ra edición,
Editorial: Medica Panamericana.
9.- Romero C. R., (2007), Microbiología y parasitología humana, México D.F., 3ª
edición, Editorial: Médica Panamericana.
ANEXO
41
Fig. 25 Histoplasmoma en pulmón: Fig. 26 Paracoccidiodomaen pulmón
Tomada de:learningradiology.comTomada de:facmed.unam.mx
PRÁCTICA No. 6
DIAGNÓSTICO MORFOLÓGICO DE ENTEROPARASITOSIS
(MÉTODOS CUALITATIVOS, CUANTITATIVOS Y ESPECIALES)
I.- OBJETIVO
Integrar la etiopatogenia y los factores epidemiológicos observando, identificando y
diferenciando las diferentes fases infectantes de los parásitos quiste, huevo u
ooquiste causantes de parasitosis intestinales.
II.- INTRODUCCIÓN
42
La Parasitología es una disciplina que estudia a organismos eucariontes que viven
a expensas de un hospedero, al que le pueden producir daño,comprende agentes
biológicos de diferentes formas y tamaño, clasificando a los parásitos en tres
grandes grupos: protozoos, helmintos y artrópodos.(Botero 2004)
Existe una gran diversidad morfológica en los organismos estudiados por la
parasitología por ejemplo; se incluyen tanto unicelulares (protozoos) como los
gusanos (helmintos), que se clasifican a su vez en gusanos de sección
redondeada (nematodos) y de sección aplanada (cestodos).(Botero 2004)
Las entero parasitosis son afecciones causadas por protozoarios o helmintos, que
afectan diversas porciones del tubo digestivo ocasionando manifestaciones
clínicas heterogéneas que impactan significativamente en la salud y calidad de
vida de los seres humanos.Las infecciones entero parasitarias no presentan una
clínica patognomónica, por lo que existe una gran variedad de síntomas y signos
que les son atribuidos o se han relacionado a ellas, como son síndrome diarreico
agudo o crónico, dolor abdominal, trastornos digestivos, vómitos, anemia, cefalea,
adinamia, fiebre, infecciones urinarias, eosinofilia, vulvitis, etc.(Fletcher et al.,
2012)
La frecuencia mundial de las distintas parasitosis intestinales es alta, en especial
en zonas geográficas donde las condiciones ecológicas favorecen la persistencia
de los parásitos, además de las características socioeconómicas poblacionales
como la pobreza, la ignorancia y la deficiente infraestructura; factores que
comparten países en vías de desarrollo. (Trinidad-Sánchez et al., 2000)
El diagnóstico de las parasitosis intestinales depende del hallazgo de huevos,
larvas o adultos de helmintos yquistes o trofozoítos de protozoos en heces
fecales,por lo tanto, la recolección y el manejoadecuado de las muestras fecales
son indispensables para la identificación correcta de los parásitos en el laboratorio
(Salazar 2011)
La identificación de los agentes etiológicos de las entero parasitosis se pueden
determinar mediante estudios de laboratorio como el examen
coproparasitoscopico (CPS) el cual es un estudio de la materia fecal para la
búsqueda, aislamiento e identificación de formas parasitarias con fines
diagnósticos. Se pueden clasificar en (CPS) cualitativos, cuando se emplean para
determinar las formas parasitarias que existen y cuantitativos para determinar el
número de formas parasitarias especialmente en caso de infecciones por
helmintos. Otro parámetro utilizado es el fundamento en que se basan para su
realización, como concentración, flotación o sedimentación (Salazar 2011)
III.- MATERIAL
Preparaciones fijas de quistes y trofozoítos de Entamoeba coli, E. hystolitica,
Giardia lamblia y Cryptosporidium parvum.
Microscopio óptico
43
Torundas de algodón con alcohol etílico.
Benzal
Sanitas
Centrifuga
1 Microscopio óptico
Copropack con 1 gramo de muestra fecal
Gradilla
Tubos de ensaye de 13 x 100
1 Coladera
1 Embudos de vidrio
2 Agitador de madera
2 Palillos de madera
1 Cápsula de porcelana
1 Cepillón
3 Portaobjetos
6 Cubreobjetos
10ml de Sol. de sulfato de zinc al 33%
Agua destilada
Sol. de lugol
6 pares de Guantes
6 Cubrebocas
IV.- METODOLOGÍA
Primera sesión
44
Observar la consistencia de la muestra fecal y la presencia de sangre, moco y/o
gusanos adultos.
3. Examen microscópico en fresco
Colocar sobre un portaobjetos con la ayuda de una pipeta Pasteur una gota de
solución salina isotónica y otra de yodo. Y tomar un fragmento de heces picando con
el asa de platino en varios lugares. Realizar una mezcla homogénea moviendo el asa
dentro de la gota.
Segunda sesión
1. Técnica de concentración por flotación con ZnSO4 (al 33%)
a) Colocar en el Copropack aproximadamente 1 g de heces.
b) Suspender la materia fecal en 10mL de agua destilada, agitando.
c) Filtrar la suspensión usando gasas como filtro
d) Vaciar la suspensión filtrada en un tubo de ensayo, hasta una altura que no
rebase el labio del tubo. Centrifugar durante 3 minutos a 1,500 rpm.
e) Decantar el líquido sobrenadante y resuspender el sedimento con 1 mL de
agua destilada agitando. Completar el volumen del tubo y centrifugar
nuevamente.
f) Decantar el líquido sobrenadante y repetir la misma operación sustituyendo el
agua destilada con la solución de sulfato de zinc. Centrifugar a la misma
velocidad.
g) Saque el tubo de la centrífuga y colóquelo en la gradilla. Agregar la solución de
sulfato de zinc hasta el borde dejando un menisco convexo.
h) Colocar un cubreobjetos sobre el tubo de ensayo y esperar 10 minutos
i) En el portaobjetos con la muestra colocar una gota de lugol, mezclar, colocar
un cubreobjetos y observar al microscopio a 10x y 40x.
45
2. ¿Cuáles son los signos y síntomas de una Enteroparasitosis?
3. ¿Qué densidad tiene y cómo se prepara la solución de ZnSO4?
4. ¿Qué se puede observar al teñir con lugol?
5. ¿Cuáles son los parásitos intestinales más frecuentes en México?
6. ¿Bajo qué circunstancias se indica un examen coproparasitoscópico?
7. ¿Bajo qué circunstancias se indica un examen coprocultivo?
8. ¿Cómo podemos diferenciar visualmente Entoameba hystolitica de
Entoameba coli?
9. Mencione 5 características distintivas de Giardia sp. y cuál es su fase
infectante.
10. Esquematice ciclo de vida de Cryptosporidium sp.
VII.- CONCLUSIONES
Elaborar tres conclusiones de la práctica realizada, considerando los puntos I, II, IV y
V de la práctica como experiencia de aprendizaje.
VIII.- BIBLIOGRAFÍA
Botero, Parasitosis Humanas, 3ª edición, Corporación para Investigaciones
Biológicas, Medellín Colombia, 2004
De Haro, Diagnóstico Morfológico de las Parasitosis, 2ª reimpresión, Méndez
Editores, 2002
García LS, Diagnostic Medical Parasitology, 4ª edición, Washington, Dc, ASM
Press. 2001
Giovanni Swierczynzki y Bruno Milanesi, Atlas of human intestinal protozoa,
http://www.atlas-protozoa.com/index.php
Sánchez-VegaJosé Trinidad, Tay-Zavala Jorge, Robert-GuerreroLilia, Romero-
CabelloRaúl, Ruíz-SánchezDora, Rivas-GarcíaCristino, “Frecuencia de
parasitosis intestinales en asentamientos humanos irregulares”, Rev Fac Med
UNAM Vol.43 No.32000
Salazar Schettino Maria Paz, Diagnostico morfológico de las parasitosis,
México D.F., Méndez Editores 2011
Stephanie M. Fletcher, Damien Stark, John Harkness, John Ellisa.,“Enteric
Protozoa in the Developed World: a Public Health Perspective”. Cli. Microbiol.
Rev. 2012
ANEXOS
46
Trofozoito de Entamoeba coli. Con Trofozoito de Giardia intestinalis.
pseudópodo hialino y numerosas vacuolas
Tomado de: Atlas of human
contenidas en el citoplasma
intestinalprotozoa
Tomado de: Atlas of human
intestinalprotozoa
47
PRÁCTICA No 7
I.- OBJETIVO
II.- INTRODUCCION
Los helmintos son metazoos planos y cilíndricos, que se pueden encontrar en el humano
principalmente en el aparato digestivo; algunos presentan órganos de fijación como tenias
y ucinarias; otros carecen de ellos como áscaris y enteriobius; con respecto al tamaño,
varían desde casi microscópicos como el macho de Trichinela spiralishasta los que miden
varios metros como la tenia bovina; con respecto al tamaño, sobre todo en nematodos, los
filiformes son del grosor de un cabello como las filarias pueden ser gruesos como un
lápiz, como Ascaris lumbricoides. En cuanto a la forma, también existe variación como en
forma de hoja (foliaciea) como los tremátodos, acintados con segmentos como los
céstodos o cilíndricos como losnematodos. Con respecto a su clasificación los helmintos
se han clasificado en 4 clases:
Cestoda
Trematoda
Adenophorea
Sescernetea
Las dos primeras corresponden a helmintos planos y las dos últimas a helmintos
cilíndricos conocidos como nemátodos, los cuales constituyen uno de los grupos de
invertebrados más importantes, por su número y diversidad de formas de vida. Habitan en
suelos áridos y húmedos, en agua dulce y salada, y muchos parasitan a plantas y
animales, ocasionándoles diversos trastornos, que en algunos casos revisten
gravedad(Salazar 2011).
Por su parte los geohelmintos son formas infectantes en el suelo que penetran por vía oral
o transcutánea, la transmisión es directa entre personas por medio del ciclo fecal-oral o
ano-mano-boca, P. ej.:Ascaris lumbricoides, Trichuris trichiura, Hymenolepis nana,
Strongyloides stercoralis. Los síntomas de las parasitosis provocadas por nematodos o
geohelmintos pueden pasar inadvertidos aunque de manera general puede presentarse:
diarrea, mala absorción de nutrientes, dolor abdominal, disminución de peso, alteraciones
del apetito, cefaleas, insomnio, prurito anal y anemia, dependiendo del geohelminto que
este parasitando al huésped.
48
Su asociación con contaminación fecal del suelo y de los alimentos, falta de agua potable,
baja escolaridad, ausencia de saneamiento ambiental y bajonivel socioeconómico hace
que continúen siendo un problema de salud públicaen los países en vía de desarrollo
(Chan 1997). Se estima que en el mundo dos mil millones de personas están
infectadascon geohelmintos, de las cuales por lo menos 300 millones sufrenmorbilidad
severa asociada como anemia, problemas de aprendizaje,desnutrición crónica y
trastornos del desarrollo y el crecimiento
IV.- MÉTODOS
Tubo de vidrio
49
Carne molida Papel filtro
SUELO
d) Saque los tubos e inmediatamente coloque el tapón para evitar que se desprendan
malos olores y se desequen los nematodos.
e) Traiga los tubos el día esta práctica.
f) Con ayuda del microscopio estereoscópico, compruebe la existencia de los
nematodos.
V.- RESULTADOS
Discuta los resultados tomando en cuenta la fase observada con relación al ciclo
biológico del parásito, así como su importancia en la patogenia y en el diagnóstico
etiológico.
VII.-CUESTIONARIO:
VIII.- CONCLUSIONES
50
Con base a sus objetivos y los resultados obtenidos elaborar mínimo tres
conclusiones.
IX.- BIBLIOGRAFÍA
Chan MS. The global burden of intestinal nematode infections-fifty years on.
Parasitol Today 1997; 13(11): 438-43
ANEXOS
Trichuris trichiura. Adultos
Trichuris trichiura. Huevos no embrionados
en heces. Tomado de. Dr. Benjamín Nogueda T,
Tomado de: Dr. Benjamín Nogueda T, Depto. de Parasitología, ENCB-IPN.
Depto. de Parasitología, ENCB-IPN.
51
A. lumbricoides. Infección masiva intestino
delgado
Tomado de: Dr. Rodolfo Acuña Soto,
Facultad de Medicina, UNAM
OBJETIVO
I.- INTRODUCCION
La teniosis es una infección producida por los helmintos de la familia Taenidae en su fase
adulta. Existen dos especies que afectan a los humanos: Taenia solium y Taenia saginata,
mismas que requieren dos hospederos intermediarios (cerdo y res, respectivamente) para
completar sus ciclos de vida. El hombre es el hospedero definitivo obligatorio para ambas
tenias. La teniosis generalmente es asintomática, ya que produce daño mínimo en la mucosa
intestinal. El diagnóstico se realiza por la identificación de proglótidos expulsados en el
excremento, los cuales deben ser observados al microscopio para la identificación de la
especie, o bien, por el análisis de los huevos mediante técnicas coproparasitoscópicas de
sedimentación y flotación.
Los primeros estudios para conocer la frecuencia de neurocisticercosis se realizaron en
hospitales y en series de necropsias, La expresión clínica de la cisticercosis es polimórfica; la
enfermedad puede ser desde asintomática hasta incapacitante y en ocasiones mortal. El
cuadro clínico depende de si la cisticercosis es subcutánea, muscular u ocular. Cuando afecta
al SNC las manifestaciones dependen del número, localización y estado evolutivo del
parásito; las más comunes son epilepsia de inicio tardío y cefalea. Actualmente el diagnóstico
se debe apoyar con estudios de imágenes: la tomografía computarizada (TC), así como la
resonancia magnética (RM).
La fasciolosis hepática es una enfermedad parasitaria que afecta a los conductos biliares de
rumiantes, cerdos, equinos, conejos y otros herbívoros, así como también al hombre Por lo
tanto es una enfermedad zoonótica y en comparación con la infección animal, la prevalencia
real de esta enfermedad en el hombre es aún desconocida y de difícil diagnóstico. Su agente
etiológico es la Fasciola hepatica, un trematodo que se localiza en los canalículos biliares. Su
52
mayor importancia radica en el impacto económico que ocasiona en productores de todo el
país, debido a los decomisos de hígados infectados y a la disminución de parámetros
productivos como leche, carne, lana y ganancia diaria de peso. Otras pérdidas ocasionadas
por esta parasitosis, tienen relación con el menor número de animales destetados y por los
costos que se producen en la compra de fasciolicidas.
El diagnóstico de la fasciolosis se establece por métodos directos, mediante la búsqueda del
parásito o sus huevos en las heces o bilis obtenida por sondeo duodenal. Lamentablemente
este método no es 100% eficaz ya que no detecta formas prepatentes de infección, es decir
cuando el parásito aún no alcanza su madurez sexual. Además, su uso es limitado en
hospederos infectados con pocas fasciolas o que se encuentran en período de invasión.
Entre los métodos indirectos de diagnóstico, la serología es la herramienta de elección para la
detección de anticuerpos específicos. Sin embargo, su valor diagnóstico ha sido limitado por
la presencia de reactividad cruzada con otros parásitos.
En la actualidad la prueba de ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay) es una de las
herramientas diagnósticas más empleadas y aplicable a gran escala, cuya sensibilidad y
especificidad depende de la fuente del antígeno utilizado. Es así como el uso de esta técnica
permite un diagnóstico más temprano de esta parasitosis, al detectar estados juveniles del
parásito y con ello realizar la aplicación de tratamientos en forma temprana y oportuna.
II.- MARCO TEÓRICO (CUESTIONARIO).
1.- Esquematice el parásito adulto, la fase larvaria, el huevo y los proglótides grávidos de
Taenia solium, Taenia saginata y H. nana. Rotule cada una de sus partes e identifique las
diferencias morfológicas entre ambos géneros.
2.- Esquematice el ciclo biológico de Taenia solium y Taenia saginata. Identificando el
mecanismo de transmisión, fase infectante, tipo de hospederos y hábitat en el hospedero
definitivo
3.- Diagnóstico parasitológico e inmunológico de las teniosis y la cisticercosis:
a) Métodos coproparasitoscópicos y métodos especiales: Especificidad y sensibilidad
b) Métodos inmunológicos: Especificidad y sensibilidad
4.- Tratamiento de elección
5.- Medidas de prevención
6.- Mencione qué Norma Oficial Mexicana se encarga de regular la vigilancia epidemiológica,
promoción, prevención y control de la Teniasis/cisticercosis.
IV.- METODO
53
V.- RESULTADOS Y ANÁLISIS DE RESULTADOS
VI.- CONCLUSIONES
VIII.- BIBLIOGRAFÍA
54
55
PRÁCTICA No. 9
I.-INTRODUCCION
56
la enfermedad misma. Excepto en Australia, se ha informado de casos de infección por
Leishmania en casi todos los continentes. En los países de América, esta infección puede
encontrarse desde el sur de México hasta el continente Suramericano. Se han reportado
brotes de leishmaniosis entre el personal militar que regresó del Golfo Pérsico
IV.- METODO
57
VI.- CONCLUSIONES
VII.- BIBLIOGRAFÍA
58
PRÁCTICA No. 10
DIAGNÓSTICODEENFERMEDADESPARASITARIASTRANSMITIDAS
PORVECTORES 2.
(TRIPANOSOMOSIS y ONCOCERCOSIS)
I.- INTRODUCCIÓN
59
Durante las fases crónica e indeterminada, es de gran importancia el diagnóstico de
laboratorio ya que se puede demostrar la presencia de anticuerpos específicos generados por
la infección de T. cruzi. El xenodiagnóstico y las biopsias de ganglios son estudios que se
realizan en esta fase. Las pruebas diagnósticas recomendadas por la Organización Mundial
de la Salud y la Organización Panamericana de la Salud (OPS) son: hemaglutinación
indirecta, ELISA indirecta e inmunofluorescencia indirecta. Es necesario realizar dos pruebas
simultáneas, pues se incrementa la certeza diagnóstica. Además, ya que la enfermedad es
incurable, salvo durante las primeras fases, y que hasta el momento no hay vacunas, el
control depende mucho de la eliminación de las poblaciones domésticas de los insectos
transmisores.
La Oncocercosis, o Ceguera de los ríos es una enfermedad producida por las larvas del
nemátodoOnchocerca volvulus, que ocasiona daños en la piel y puede llegar a producir graves
alteraciones en los ojos, hasta dejar ciegas a las personas. Las larvas pueden producir
comezón, salpullido e hinchazones en la piel. Cuando llegan a adultos, los gusanos
construyen nódulos en los cuales se meten, y allí se reproducen, exportando larvas pequeñas
a todo el cuerpo. Cuando la persona llega a estar altamente parasitados porlarvas en
elcuerpo, se producen lesiones graves, como la pérdida de la elasticidad de la piel,
especialmente en la cara, las orejas y la región inguinal.
Lo peor que puede llegar a producir la oncocercosis es dificultad para ver y, finalmente,
ceguera. Este gusano entra al cuerpo de las personas a través de la picadura de una mosca
del género Simulium, la cual crece en los riachuelos torrentosos y limpios. Cuando por
diferentes razones se sospecha que en una comunidad hay oncocercosis, se realiza un
procedimiento que consiste en practicar biopsias o pequeños cortes de piel a 30 personas de
la comunidad. Las biopsias se toman de la cadera y de la espalda, y se examinan en el
microscopio, para ver los gusanitos adultos o las larvas (microfilarias).
II.- OBJETIVO
IV.- MÉTODO
60
- Observación de los adultos vectores de Chagas en México.
- Observación de nódulos deOnchocerca volvulus.
VI.- CUESTIONARIO
1.- Identifique las diferentes especies de trypanosomas que son capaces de producir una
enfermedad en los seres humanos y mencione la patología.
2.- Esquematice el ciclo biológico de Trypanosoma cruzi y de Onchocerca volvulus, e
identifique:
a) Mecanismos de transmisión/infección.
b) Tipo de hospederos
c) Fase infectante.
3.- Epidemiología de la Enfermedad de Chagas y de la Oncocercosisen México. Mencione
focos epidemiológicos.
4.- Describa los diferentes métodos diagnósticos que se pueden emplear en la Enfermedad
de Chagas y en la Oncocercosis. a) Parasitológica directa, b) estudios serológicos.
5.- Mencione el esquema de tratamiento de la enfermedad de Chagas y medidas de
prevención primaria, en la Enfermedad de Chagas y Oncocercosis respectivamente.
6.- Mencione qué Norma Oficial Mexicana se encarga de regular la vigilancia epidemiológica,
promoción, prevención y control de las enfermedades transmitidas por vectores.
7.- Complete las siguientes frases.
61
VII.- CONCLUSIONES
- Elaborar las conclusiones de la práctica realizada acorde a lo observado y a la
experiencia de aprendizaje obtenida.
VII.- BIBLIOGRAFÍA
62
ANEXO
63
Fig. 5 Corte de un nódulo oncocercósico. Fig. 6 Simulium metallicum, vector de la
Tomado de:http://grauhall.com oncocercosis.
Tomado de:http://www.bio-nica.info
PRÁCTICA No. 11
I.-INTRODUCCION
En personas no inmunodeprimidas:
64
Enfermedad leve con fiebre semejante a la mononucleosis
Inflamación de los ganglios linfáticos en cabeza y cuello
Dolor de cabeza
Dolor de garganta
Dolor muscular
En infecciones congénitas:
OBJETIVO
Centrifuga clínica
Kit Inmunoserólogico IgM anti Toxo
Sanitas
Benzal
Incubadora a 37°C
65
MATERIAL POR EQUIPO:
IV.- METODOS
Primera Sesión
- Observar las preparaciones fijas de trofozoítos de Toxoplasma gondii a 10X, 40X y
100x
- Procedimiento para la Detección Cualitativa de anticuerpos IgM anti Toxoplasma
gondii mediante un ensayo inmunoabsorción ligado a enzimas (ELISA).
66
B) Procedimiento de la Prueba
1.- Añadir 200 µl de muestra, control negativo (solución R3) y control positivo (Solución R5)
en cada pozo e incubar a 37°C durante 30 minutos.
2. Retirar cuidadosamente el líquido y lavar 2 veces con 350 µl de solución de lavado R2.
3. Adicionar 200 µl de solución R6 e incubar 30 minutos a 37°C.
4. Retirar cuidadosamente el líquido y lavar 2 veces con 350 µl de solución de lavado R2.
5. Adicionar 200 µl de solución cromógeno R9 y e incubar 15 minutos a temperatura
ambiente.
6. Añadir 100 µl de solución de paro de la reacción R10 y observar los cambios de coloración.
Validación de la Prueba
1.- Control Positivo (Anticuerpos IgM anti-T. gondii): El líquido debe tornarse amarillo-
ámbar.
2.- Control Negativo (plasma humano negativo para anticuerpos anti-T. gondii): El líquido
debe permanecer translúcido.
VI.- CONCLUSIONES
VII.- BIBLIOGRAFÍA
67
Tay. Microbiología y Parasitología Médicas, 3ª edición, Méndez Editores, 2003
PRÁCTICA No.12
II.- INTRODUCCIÓN
68
Los artrópodos cuyo nombre deriva del hecho de que tienen apéndices articulados,
son animales invertebrados de exoesqueleto quitinoso, poseen simetría bilateral y
cuerpo segmentado, estos incluyen una gran variedad de especies, clases y ordenes
(Calderón y col., 2004; Apt, 2013).
A través de millones de años los artrópodos y los vertebrados han evolucionado para
que los primeros de adapten como reservorios o transmisores de microorganismos.
Estas adaptaciones han permitido que los artrópodos sean responsables de la
transmisión de enfermedades humanas y animales (Botero, 2012).
El modo en que los artrópodos interfieren en la salud humana es dispar, provocando
patologías a causa de mecanismos defensivos (pelos urticantes), por venenos
(arañas y escorpiones), conductas parasitarias (miasis y ácaros), ingesta de sangre
(chinches de cama), hábitos (moscas y cucarachas) y por un papel más importante,
como agentes transmisores de bacterias, virus, protozooarios y helmintos, muchos de
los cuales han sido problemas de primer orden, causando grandes epidemias
(Fernández-Rubio, 1997; Calderón y col., 2004).
Las distintas formas en que los artrópodos de relacionan con la salud del hombre se
clasifica de la siguiente manera (Harwood y James, 1993):
1. Artrópodos como agentes directos de enfermedades o molestias.
a. Entomofobia.
b. Molestias y pérdida de sangre
c. Daño accidental a los órganos de los sentidos.
d. Envenenamiento.
e. Dermatosis.
f. Miasis.
g. Alergias.
2. Artrópodos como vectores o huéspedes intermediarios de agentes patógenos.
a. Vectores mecánicos.
b. Vectores biológicos.
c. Portadores foréticos de artrópodos perjudiciales.
III.- MATERIAL
Microscopios
Cajas Petri
Pinzas entomológicas
69
Alcohol al 70%
Diversos artrópodos de importancia médica preservados en alcohol, en
seco o preparaciones fijas (pulgas, piojos, chinches, arañas, alacranes y
garrapatas).
IV.- METODOLOGÍA
V.- RESULTADOS
VII.- CONCLUSIONES
VIII.- REFERENCIAS
70
3. Fernández-Rubio, F. (1997). Artrópodos y salud humana. Bol. S.E.A.
20: 167-191.
4. Calderón, R.L., Tay, J., Sánchez, J.T.V. y Ruíz, D.S. (2004). Los
artrópodos y su importancia en medicina humana. Rev. Fac. Med.
UNAM. 47(5): 192-199.
5. Harwood, R.F. y James, M.T. (1993). Entomología Médica y
Veterinaria. 1a edición. Editorial: Limusa, Noriega Editores.
6. Marquetti, F.M.C. (2001). Capítulo 127: Vectores de importancia
médica. En: Microbiología y parasitología médicas (Llop, A.H.,
Valdes-Dapena, M.M.V. y Zuazu, J.S.). La Habana. Editorial de
Ciencias Médicas. Tomo III: 427-431.
7. Tay, Z.J., Castillo, A.L., Sánchez, V.L., Romero, C.R. (1999) Insectos
venenosos de importancia médica. Rev. Mexicana de Pediatría.
66(2): 260-265.
ANEXOS
Xenopsylla cheopis♂ 5x
Cimex lectularius♀ 3x
72
Ctenocephalides felis♀ 4x
Ixodes dammini♂ 5x
Triatoma dimidiata♀
73
Centruroides limpidus limpidus
Latrodectus mactans
74