R8 - 01 Microbiologia

CURSO TEÓRICO PRÁCTICO CONTROL DE CALIDAD PARA EL AGUA
DE BEBIDA
21 – 22 DE AGOSTO DEL 2007
BLGA. ROSA AMELIA REÁTEGUI ELÍA
01 ANÁLISIS MICROBIOLÓGICO
CURSO TEÓRICO PRÁCTICO CONTROL DE CALIDAD PARA EL AGUA DE BEBIDA
CURSO TEÓRICO PRÁCTICO:

CONTROL DE CALIDAD PARA EL AGUA DE
BEBIDA
ANÁLISIS MICROBIOLÓGICO DE AGUAS
San
San Isidro,
Isidro, 21
21 de
de agosto
agosto del
del 2007
2007
COORDINADORA EJECUTIVA - IAMA
www.institutodelagua.org
iama@institutodelagua.org/ iamareategui@yahoo.es
INTRODUCCIÓN
Este curso teórico demostrativo enfoca de manera práctica e integral

los aspectos teórico - prácticos de control, evaluando los parámetros
mínimos para el control de calidad del agua de bebida incluyendo
criterios para emplearse en la industria farmacéutica, alimentos,
bebidas, agua potable entre otros, compartiendo aspectos teóricos,
con experiencias, complementando con la parte experimental el uso de
equipos de campo de última generación para el desarrollo de las
corridas experimentales.
INSTITUTO DEL AGUA Y MEDIO AMBIENTE

Tradiciones 160 San Isidro Lima-27 Lima- Perú / Tel.: (51-1) 440-1734 Fax: (51-1) 440-1735
e-mail: iama@institutodelagua.org Web: www.institutodelagua.org
Revista: revista@institutodelagua.org
1
DE BEBIDA
OBJETIVO
El participante al terminar el curso conoce los criterios básicos
teórico demostrativos de las diversas metodologías estándar para el
análisis de agua de bebida y parámetros analíticos a evaluar
incluyendo criterios para la preparación del material y toma de
muestras.
TEMARIO
1. ASPECTOS DE AGUA Y SALUD

2. EL MUESTREO
6 PREPARACIÓN DEL MATERIAL PARA EL
MUESTREO
6 CRITERIOS DE TOMA DE MUESTRA

2
DE BEBIDA
TEMARIO
3. PARÁMETROS MÍNIMOS PARA EL
CONTROL DE CALIDAD DEL AGUA
A. MÉTODOS ESTÁNDAR PARA EL ANÁLISIS
MICROBIOLÓGICO DE AGUAS
6 FILTRACIÓN POR MEMBRANA (FM)

6 TUBOS MULTIPLES (NMP)
TEMARIO
A. ANÁLISIS FISICOQUÍMICO DE AGUAS

6 CLORO RESIDUAL
6 TURBIEDAD
6 pH
6 CONDUCTIVIDAD
6 O. D.

3
DE BEBIDA
1 ASPECTOS DE AGUA Y
SALUD
Ciclo Hidrológico
CONDENSACIÓ
CONDENSACIÓN
CONDENSACIÓN
PRECIPITACIÓN
EVAPORACIÓ
EVAPORACIÓN
EVAPORACIÓN
INFILTRAPORACIÓ
INFILTRAPORACIÓN
INFILTRAPORACIÓN
Adaptado de
http://earthguide.ucsd.edu

4
DE BEBIDA
El Agua en la Hidrósfera Tiempo

Promedio de Renovación
VOLUMEN TIEMPO PROMEDIO
%
(Km3) DE RENOVACIÓN
MARES Y OCÉANOS 1 457 000 000 96.811 3 100 años
ATMÓSFERA 15 000 0.001 16 000 años
CASQUETES POLARES 33 380 000 2.218 9 a 12 días
GLACIARES 230 000 0.015 16 000 años
LAGOS SALADOS 100 000 0.007 10 a 100 años
LAGOS DE AGUA DULCE 135 000 0.009 10 a 100 años
RÍOS 1 500 0.0001 12 a 20 días
HUMEDAD DEL SUELO 38 500 0.002 280 días
AGUA SUBTERRÁNEA (hasta

4 550 000 0.302 300 años
1000 m de profundidad
AGUA SUBTERRÁNEA (1000 a

9 550 000 0.635 4 600 años
2000 m de profundidad)
http://www.sagan-gea.org/hojared_AGUA/paginas/3agua.html
AGUA Y
SALUD PÚBLICA
6 Cobertura 6 Educación
6 Cantidad 6 Manejo dentro del
hogar
6 Calidad
6 Colección y transporte
6 Continuidad 6 Tratamiento
6 Costo 6 Disposición

5
DE BEBIDA
Guías de la OMS
La calidad del agua potable es una cuestión que
preocupa en países de todo el mundo en desarrollo y
desarrollados, por su repercusión en la salud de la
población.
Son factores de riesgo los agentes infecciosos, los

productos químicos tóxicos y la contaminación
radiológica. El enfoque debe hacerse en base a la
gestión de la prevención desde el recurso hasta el
consumidor
Calidad del agua potable y prevención

de enfermedades hídricas
• Virus,
• Bacterias,
• Protozoarios
• Otros
microorganismos.

6
DE BEBIDA
Calidad
Debemos recordar que la

calidad del agua está ligada
directamente a su uso
¿CALIDAD DEL AGUA?

La calidad del agua se refiere a la presencia o ausencia de
niveles nocivos de impurezas en el agua, tales como
bacterias, parásitos, virus, minerales y sustancias
orgánicas.

7
DE BEBIDA
Salud Pública y Agua
Impacto
ImpactoPrimario
Primario Impacto
Impacto
en
ensalud
salud Secundario
Secundario
Diarreas/
Diarreas/ Desnutrición
Desnutrición
Parasitismo
Parasitismo C.
C.I.I.
Capital
Capital
Pobreza
Pobreza Humano
Humano
de
deAgua
Agua
Desarrollo
Desarrollo
Fuente
Homero Silva- OPS iama@institutodelagua.org/ iamareategui@yahoo.es
Salud Perfecta
100
Nivel de Salud
50
0 1 2 3 4 5 10 20 30 40 60 80
Fuente Edad, años
Homero SILVA-OPS iama@institutodelagua.org/ iamareategui@yahoo.es

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DE BEBIDA
Años de Vida Pérdidos en Salud

100
Tiempo no Saludable
Nivel de Salud
50
Tiempo Saludable
0
1 2 3 4 5 10 20 30 40 60 80
Fuente www.institutodelagua.org
Homero SILVA-OPS iama@institutodelagua.org/ iamareategui@yahoo.es
Importancia del agua en

nuestro organismo
• El agua también es un alimento y un
nutriente líquido, porque contiene sales
minerales como sodio, potasio, flúor,
magnesio y calcio, minerales que el cuerpo
necesita para funcionar bien y recuperarse
de su desgaste diario.
• Es el compuesto más abundante en el

organismo humano, forma parte de la
sangre, la saliva, el sudor, las lágrimas, las
hormonas, las enzimas, los jugos
gástricos, la bilis, los intestinos y de todos
los músculos.

9
DE BEBIDA

nuestro organismo
• La cantidad de agua del cuerpo humano

varía según la edad, en un recién nacido
representa el 85% de su peso corporal, en
el adulto el 70% y en el anciano el 60%.
• Es indispensable para todas las funciones

vitales del organismo: digestión,
respiración, absorción y transporte de
nutrientes y eliminación de desechos del
cuerpo.

nuestro organismo
• Participa en la formación de los tejidos.

• Ayuda a mantener la temperatura
corporal por termorregulación.
• Nos ayuda a transportar los productos y
sustancias de desecho por la orina

10
DE BEBIDA

nuestro organismo
• Todos los días eliminamos grandes cantidades de agua, por

medio del sudor, la orina, durante la respiración, en el
excremento y en menor cantidad por medio de las lágrimas y
mocos, por ello es muy importante reponerla, ya que una
persona no puede vivir mucho
tiempo sin ella y cuando le llega
a faltar puede sufrir deshidrata-
ción y si esta es muy severa,
hasta la muerte.

nuestro organismo
• Parte del agua que tenemos la produce el propio cuerpo,

pero la mayoría la adquirimos a través de los alimentos y de
los líquidos como caldos o jugos, pero principalmente del
agua, que consumimos diariamente.
• La necesidad de ingestión de agua varía según la edad, el

estado de salud, la actividad física, la dieta habitual y el clima
en que se vive, sin embargo se considera que dos litros de
agua o entre 6 y 8 vasos de agua diariamente, ayudan a
reponer toda la que perdemos cada día.

11
DE BEBIDA

nuestro organismo
• La falta de agua en el organismo causa deshidratación que
es la falta de líquidos corporales suficientes para que el
cuerpo lleve a cabo todas sus funciones como debe.
• Pero el agua, a pesar de ser un líquido vital, es decir que se

necesita para poder vivir, si no es potable y está limpia y
hervida, puede causar serias enfermedades, por la presencia
de microorganismos patógenos.
Proporción del agua en la composición

de los tejidos y órganos en peso
Tejido Porcentaje de Agua
Sangre 83.0
Riñones 82.7
Corazón 79.2
Pulmones 79.0
Bazo 75.8
Músculo 75.6
Encéfalo 74.8
Intestino 74.5
Piel 72.0
Hígado 68.3
Esqueleto 22.0
Tejido adiposo 10.0
Constituye alrededor del 60% del peso corporal

masculino y de 50% a 55% del cuerpo femenino.

12
DE BEBIDA

nuestro organismo
6 El beber un mínimo de 8 vasos de agua al

día disminuye el riesgo:
¾ de cáncer de colon en un 45%,
¾ de cáncer de mama en un 79% y
¾ cáncer de la vejiga en un 50%.

nuestro organismo
6 Un descenso de tan sólo un 2% de agua en

el cuerpo puede causar:
¾ pérdida momentánea de memoria,
¾ dificultad con las matemáticas básicas y
¾ problemas al enfocar la vista sobre una
pantalla de computadora o sobre una
página impresa?

13
DE BEBIDA

nuestro organismo
6 El hablar de beber agua, no se refiere al

café, té o sodas. El agua del sistema, la
embotellada y/o de manantiales es la mejor.
Acidez estomacal
• La acidez estomacal puede ser una señal de falta de

agua en la parte superior del tracto gastrointestinal. Esta
es una señal de sed importante que emite el cuerpo
humano.
• La ingestión de antiácidos o medicamentos en tabletas

contra la acidez estomacal, no corrigen la
deshidratación, y el cuerpo continúa sufriendo como
resultado de no obtener la suficiente agua.

14
DE BEBIDA
Artritis
• Dolor Reumático de las Articulaciones – La Artritis

puede ser una señal de falta de agua en las
articulaciones.
• El tomar agua aliviará éste problema.
Dolor de Espalda
• El dolor en la espalda baja y la artritis anquilosa de

la espina dorsal pueden ser signos de falta de agua
en los discos de la espina dorsal – los
amortiguadores que soportan el peso de cuerpo.
• Estas molestias se deben tratar incrementado la

cantidad de agua a beber.

15
DE BEBIDA
Colitis
• La Colitis es una señal de falta de agua en el intestino
grueso.
• Se asocia con el estreñimiento debido a la constricción de
exceso de agua que se ejerce en el excremento y que a
su vez pierde la lubricación que brinda el agua.
• Al no reconocer el dolor de la colitis como un signo de
falta de agua, provocará una condición de estreñimiento
persistente que dará como resultado una compactación
en el excremento que a sus vez puede causar vertículos,
pólipos y hemorroides, e incrementar la posibilidad de
contraer cáncer de colon y recto.
Hipertensión
• La Hipertensión es un estado de adaptación del cuerpo a
una deshidratación general cuando las células de los
vasos sanguíneos no obtienen suficiente agua.
• Como parte del mecanismo de ósmosis inversa, cuando el
agua de suero se filtra y se inyecta a las células
importantes a través de poros diminutos en sus
membranas, se requiere de una presión extra para el
“proceso de inyección”, tal como sucede cuando se inyecta
el “suero” en los hospitales para rehidratar los millones de
células.
• Beber agua, compensará la presión a la normalidad.

16
DE BEBIDA
AGUA SEGURA
AGUA DE BEBIDA SEGURA: Aquella que no representa
ningún riesgo significativo a la salud por su consumo
durante toda la vida. Los de mayor riesgo son los niños,
ancianos y personas con enfermedades prolongadas o que
viven en condiciones no sanitarias. El término se usa para
todos los propósitos domésticos incluyendo el aseo
personal.
Planeamiento para agua segura
Los objetivos primarios para asegurar el agua de bebida de

buena calidad
6 Asegurar la distribución de agua segura
6 Minimizar la contaminación de las fuentes de agua
6 Reducir o remover la contaminación en el proceso de

tratamiento
6 Prevenir la contaminación durante el almacenamiento,

distribución y manejo de agua potable.

17
DE BEBIDA
Definiciones
¾ AGENTE PELIGROSO: Agente

físico, químico o biológico que es
potencialmente peligroso.
¾ EVENTO PELIGROSO: Incidente o

situación que puede producir la
persistencia de un agente peligroso
¾ RIESGO: Probabilidad que un agente

cause daño o enfermedad en un
población expuesta
ASPECTOS DE SALUD
PÚBLICA
¾ No todos los individuos desarrollan los síntomas de la
enfermedad, muchos son portadores sanos, sin
embargo al igual que los sintomáticos contribuyen a la
dispersión de la enfermedad.

18
DE BEBIDA
El Agua como Vehículo de

Transmisión de Enfermedades
NOCIONES DE
EPIDEMIOLOGÍA
AGENTE
ENFERMEDAD
HOSPEDERO MEDIO
AMBIENTE

19
DE BEBIDA
ORGANISMOS
PATÓGENOS
SON CAPACES DE PRODUCIR UNA
ENFERMEDAD AL SER HUMANO
NOCIONES DE
EPIDEMIOLOGÍA
AGENTE
AGENTE HOSPEDERO
HOSPEDERO ENFERMEDAD
ENFERMEDAD
Bacterias Intermedio: Moluscos Sintomática o

Virus Final: Hombre Asintomática
Protozoarios
Helmintos
Elaboración propia Rosa Amelia Reátegui Elía, noviembre del 2004

20
DE BEBIDA
NOCIONES DE EPIDEMIOLOGÍA
AGENTES
AGENTES
PATÓ
PATÓGENOS
PATÓGENOS
AMBIENTALES
AMBIENTALES
FACTORES:
FACTORES:
FACTORES
FACTORES
DOSIS
DOSIS INFECCIOSA
INFECCIOSA HOSPEDERO:
HOSPEDERO:
PATOGENICIDAD
PATOGENICIDAD SUCEPTIBILIDAD
SUCEPTIBILIDAD
VIRULENCIA
VIRULENCIA
ENFERMEDAD
ENFERMEDAD
Elaboración propia Rosa Amelia Reátegui Elía, noviembre del 2004

Origen de la contaminación
hídrica
¾ Los microorganismos patógenos que
se pueden encontrar en el tracto
intestinal del hombre y animales que
son el origen de las infecciones que
pueden causar enfermedades
¾ Algunas bacterias propias del agua

son oportunistas y pueden producir
trastornos en niños, ancianos e
inmunodeficientes.

21
DE BEBIDA
Mecanismos de transmisión
Los microorganismos se pueden transmitir a través del

agua por cuatro mecanismos:
1. Por ingesta de agua contaminada con

microorganismos patógenos o sustancias químicas
tóxicas.
2. Por contacto con el agua (baño o natación).
3. Inhalación o formación de aerosoles.
4. Por escasez de agua intradomiciliar.
Vías de Transmisión de Patógenos

por el Agua
* Principalmente por contacto con aguas superficiales muy contaminadas.

Guías de la OMS

22
DE BEBIDA
Vías de transmisión de
enfermedades
Vías para la producción enfermedades y epidemias

por consumo de alimentos contaminados
AGENTE
PRESENTE EN LA CIUDAD O COMUNIDAD
SOBREVIVIR LOS TRATAMIENTOS
CONTAMINAR LOS PRODUCTOS ALIMENTICIOS
CANTIDAD SUFICIENTE CANTIDAD INSUFICIENTE

PUEDEN SER TRANSFERIDOS
PARA SOBREVIVIR Y POR MANIPULEO A OTROS
PRODUCIR ENFERMEDAD MULTIPLICARSE HASTA ALCANZAR PRODUCTOS, UTENSILIOS, ETC.
NIVELES APROPIADOS PARA
PRODUCIR ENFERMEDAD
ENFERMEDAD
EPIDEMIA

23
DE BEBIDA
ORGANISMOS PATÓGENOS
Y ENFERMEDADES LIGADAS A
LAS AGUAS
TIPOS
TIPOS DE
DE PAT ÓGENOS
PATÓGENOS
TRANSMISIBLES
TRANSMISIBLES POR
POR EL
EL AGUA
AGUA
6 Bacterias
6 Virus
6 Protozoarios
6 Helmintos

24
DE BEBIDA

Agentes patógenos presentes en el agua
que se transmiten por vía oral y su significado en el
abastecimiento de agua
Guías de la OMS iama@institutodelagua.org/ iamareategui@yahoo.es
Agentes patógenos presentes en el agua

que se transmiten por vía oral y su significado en el
abastecimiento de agua
Guías de la OMS iama@institutodelagua.org/ iamareategui@yahoo.es

25
DE BEBIDA
DOSIS INFECTIVA MÍNIMA DE ALGUNOS

PATÓGENOS Y PARÁSITOS
Agente Dosis Mín. Infectiva

BACTERIAS
Salmonella spp. 104 – 107
Shigella spp. 101 – 102
Escherichia coli 106 – 108
Vibrio cholerae 103
VIRUS
V. HEPATITIS A 1 – 10
PROTOZOARIOS
Giardia intestinalis 101 – 102 quistes
Cryptosporidium 101quistes
Entamoeba coli 101quistes
HELMINTOS
Ascaris 1 – 10 huevos
PERÍODOS DE SUPERVIVENCIA DE
PATÓGENOS EN LODOS FECALES
Período de supervivencia promedio en lodos fecales húmedos a
ORGANISMOS temperaturas ambientales1
En zonas templadas En zonas tropicales
(10-15 °C) [días] (20-30 °C)[días]
VIRUS < 100 < 20
BACTERIAS
Salmonella < 100 < 30
Vibrio colera < 30 <5
Coliformes termotolerantes2 < 150 < 50
PROTOZOARIOS
Quistes amebas < 30 < 15
HELMINTOS
Huevos de Ascaris 2-3 años 10-12 meses
Huevos de Anquilostoma 6 meses
12 meses
Huevos de Esquistosoma 1 mes
1 Los períodos de supervivencia son mucho más cortos si los lodos son expuestos al sol para
secar.
2 Los coliformes termotolerantes, que son bacterias comensales del intestino humano, son
utilizados como organismos indicadores de patógenos excretados.

26
DE BEBIDA
EL AGUA COMO VEHÍCULO DE

TRANSMISIÓN DE ENFERMEDADES
En general podemos tener una variedad de

organismos presentes en el agua que cumplen
diversos roles en la naturaleza, así como agentes
patógenos, el estudio de cada uno de ellos sería
muy tedioso, costoso y en algunos casos casi
imposible por lo que recurrimos a organismos
indicadores, el grupo más conocido es el grupo
coliformes.
ENFERMEDADES Y AGENTES
PATÓGENOS TRANSMITIDAS POR EL
AGUA
VIRUS
ENFERMEDAD AGENTES
MENINGITIS, INFECCIONES Coxsakievirus A, B

RESPIRATORIAS
POLIOMIELITIS VIRUS DE LA POLIO
HEPATITIS A VIRUS DE LA HEPATITIS A
GASTROENTERITIS ROTAVIRUS,
ASTROVIRUS

27
DE BEBIDA
ENFERMEDADES Y AGENTES PATÓGENOS

TRANSMITIDAS POR EL AGUA
BACTERIAS:
ENFERMEDAD AGENTES
FIEBRE TIFOIDEA Salmonella typhi
SALMONELOSIS OTRAS SALMONELAS
DISENTERÍA BACILAR Shigella
GASTROENTERÍTIS E. coli TOXIGÉNICO
Y. enterocolitica,
Campylobacter sp.
COLERA Vibrio cholerae
ENFERMEDADES Y AGENTES PATÓGENOS

TRANSMITIDAS POR EL AGUA
PROTOZOARIOS:
ENFERMEDAD AGENTES
AMEBIASIS Entamoeba histolytica
DISENTERÍA BALANTIDIANA Balantidium coli
GIARDIASIS Giardia intestinalis
CRIPTOSPORIDIOSIS Cryptosporidium parvum

28
DE BEBIDA
ENFERMEDADES Y AGENTES
PATÓGENOS TRANSMITIDAS POR EL
AGUA
HELMINTOS (PARÁSITOS)
ENFERMEDAD AGENTES
ASCARIASIS Ascaris lumbricoides
TRICHURIASIS Trichuris trichiura
ESQUISTOSOMIASIS Schistosoma sp.
DRACUNCULOSIS Dracunculus medinensis
IMPORTANCIA DE LOS ANÁLISIS

DEL AGUA
• Además de contaminación
microbiológica, existen otros
análisis complementarias como pH,
turbiedad, cloro residual etc.

29
DE BEBIDA
IMPORTANCIA DE LOS
ANÁLISIS DE AGUA
% El tipo de fuente, su uso, grado de

contaminación, entre otros aspectos son de
suma importancia para la selección de los
métodos de muestreo, análisis, etc.
Calidad Microbiológica del Agua
La verificación de la calidad del agua

debe incluir
• El análisis del agua de la fuente
• El análisis del agua inmediatamente

después del tratamiento
• El análisis el agua en sistemas de

distribución y/ o el agua almacenada en
las casas

30
DE BEBIDA
Verificación de Seguridad
Microbiológica y Calidad con respecto
a Patógenos
1. Los patógenos se hallan en forma discreta y no en solución.

2. Se encuentran siempre adheridos a los sólidos suspendidos
del agua.
3. La probabilidad de infección por patógenos depende de la
invasibilidad y virulencia del patógeno y de la inmunidad del
individuo.
4. Si se establece la infección, el patógeno se multiplica en el
hospedero.
5. En contraste con los agentes químicos, la dosis-respuesta
del patógeno no es acumulativa.
INDICADORES
ORGANISMOS INDICADORES E ÍNDICES
¾ Los coliformes totales no son

aceptados como indicadores de
la calidad sanitaria del agua.
¾ El agua de consumo humano no

debe contener organismos
indicadores

31
DE BEBIDA
ORGANISMOS INDICADORES E ÍNDICES
• Los patógenos mas resistentes a condiciones ambientales o

tecnologías de tratamiento pueden estar presentes en agua potable
en ausencia de E. coli
• Se recomienda estudios de alternativas de indicadores para esos
organismos: vg. Enterococos, Clostridium perfringens y colifagos
Enterococos
Fago T4
Clostridium perfringens
CRITERIOS PARA UN INDICADOR
1. Estar universalmente presente en gran número en heces humanas y

de animales
2. No multiplicarse en aguas naturales
3. Persistir en el agua en forma similar a los patógenos fecales.
4. Estar en mayor número que los patógenos fecales
5. Responder a los procesos de tratamiento en forma similar a los
patógenos fecales.
6. Ser detectados rápidamente y con métodos de bajo costo

32
DE BEBIDA
• El criterio de un organismo indicador es que puede ser

usado como índice de contaminación fecal y como un
indicador de eficacia de procesos de tratamiento, sin
embargo un indicador no puede cumplir con los dos
roles; así por ejemplo. E. coli no puede ser un indicador
de la presencia de virus ni protozoarios.
Guías OMS www.institutodelagua.org

• Organismo índice: Es el que señala la

presencia de organismos patógenos, vg.
Índice de patógenos fecales, E. coli.
• Organismo indicador: Es usado para medir la
efectividad de un proceso, vg. indicador de
eficiencia de la desinfección, B.H., C.T.T.

33
DE BEBIDA
RELACIÓN ENTRE COLIFORMES TOTALES

TERMOTOLERANTES Y E. coli
COLIFORMES
TOTALES
COLIFORMES
TERMOTOLERANTES
E. coli
COLIFORMES TOTALES
Grupo de bacterias gram negativas, no
esporuladas, forma de bastones, que
fermentan la lactosa con producción
de gas, ácido y aldehído a 35oC.
Además producen la enzima β-

galactosidasa. Pertenecen a los
géneros: Escherichia, Citrobacter,
Klebsiella, y Enterobacter y los
ambientales: Serratia y Hafnia.

34
DE BEBIDA
COLIFORMES TOTALES
VALOR COMO INDICADOR
Los coliformes totales, incluyen organismos

que pueden sobrevivir y crecer en el agua, por
lo tanto no pueden ser usados como
índices de patógenos fecales.
Pueden ser usados como Indicadores de

Efectividad de Tratamiento y para asegurar
la limpieza e integridad de los sistemas de
distribución y presencia potencial de
biopelícula.

COLIFORMES TOTALES
SIGNIFICADO EN AGUA POTABLE
Los coliformes totales deberían estar
ausentes inmediatamente después de la
desinfección, su presencia indica
tratamiento inadecuado.
En sistemas de distribución y reservorios
puede deberse a recrecimiento y posible
formación de biopelícula o contaminación
posterior con materiales extraños, incluyendo
suelos y plantas.

35
DE BEBIDA
COLIFORMES TOTALES
MF
cuando se emplea la técnica de

membrana filtrante, se definen
como aquellos que producen
colonias rojizas con brillo
metálico en un medio que MEDIO
contiene fucsina. m-ENDO
COLIFORMES FECALES
SON COLIFORMES PROPIOS DEL TRACTO

INTESTINAL DEL HOMBRE Y
VERTEBRADOS DE SANGRE CALIENTE
QUE FERMENTAN LA LACTOSA CON
PRODUCCIÓN DE GAS, ÁCIDO Y ALDEHÍDO
A 44,5oC.

36
DE BEBIDA
COLIFORMES TERMOTOLERANTES
SON COLIFORMES QUE

FERMENTAN LA LACTOSA CON
PRODUCCIÓN DE GAS, ÁCIDO Y
ALDEHÍDO A 44,5OC.
E. coli
Son bacterias coliformes que producen la
enzima β-glucoronidasa, que hidroliza el
sustrato MUG (Metil-Umbeliferil-β-D-
Glucorónido), iberando el compuesto Metil-
Umbeliferona que es fluorescente y se observa
con luz U.V. de onda larga.

37
DE BEBIDA
E.coli y
¾ Ambos fermentan la lactosa a 44,5oC

¾ Generalmente predomina el género Escherichia, pero
algunos tipos de Citrobacter, Klebsiella y
Enterobacter, también son termotolerantes. E coli,
es propia del tracto intestinal del hombre y
vertebrados.
E.coli y
E. coli, es el Índice de Contaminación Fecal

más adecuado. Coliformes termotolerantes es
un grupo menos real pero es un índice aceptable
de contaminación fecal.
Cualquiera de ellos puede ser

escogido en los Programas de
Control, Verificación y Vigilancia
del Agua Potable.


38
DE BEBIDA
E.coli y

La presencia de E. coli o coliformes
termotolerantes en agua potable
provee Evidencia de Contaminación
Fecal Reciente; su detección, debe
incluir muestras futuras e investigación
de fuentes de contaminación
potenciales, tales como un tratamiento
inadecuado o roturas en el sistema de
distribución.
Planeamiento para agua segura
Los objetivos primarios para asegurar el agua de

bebida de buena calidad
6 Asegurarar la distribución de agua segura
6 Minimizar la contaminación de las fuentes de
agua
6 Reducir la contaminación en el tratamiento
6 Prevenir la contaminación durante el
almacenamiento, distribución y manejo de agua
potable.


39
DE BEBIDA
VALORES GUÍA PARA VERIFICAR LA CALIDAD

MICROBIOLÓGICA
ORGANISMOS VALOR GUIA
Agua directamente para consumo

E. coli o coliformes termotolerantes No debe detectarse en 100 mL
de muestra
Agua tratada que entra al sistema de Distribución
de muestra
Agua tratada en el sistema de Distribución
de muestra

RECUENTO EN PLACA DE
HETERÓTROFOS (HPC)
¾ Incluye un amplio espectro de organismos

entre los que se encuentran hongos y
bacterias, incluye organismos sensibles a la
desinfección (coliformes), resistentes a la
desinfección (esporas) y organismos que
proliferan rápidamente en agua tratada en
ausencia de desinfectante residual.

40
DE BEBIDA
HETERÓTROFOS
(HPC)
¾ Son facultativos que obtienen su energía

a partir de compuestos orgánicos y
crecen a temperaturas comprendidas
entre 20oC - 35oC y tiempos de
incubación de 2 - 7 días.
HETERÓTROFOS
(HPC)
¾ Son altamente resistentes al cloro,

por lo que en los sistemas de
distribución L.M.P. * 500 ** UFC/mL.
* L.M.P.: Límite Máximo Permisible

** UFC : Unidades Formadoras de Colonias

41
DE BEBIDA
RECUENTO EN PLACA DE HETERÓTROFOS

(HPC)
VALOR COMO INDICADOR
• No tienen valor como índice de presencia de
patógenos, pero se usan en Monitoreo Operacional e
Indicadores de Desinfección. HPC, se usa para
asegurar la limpieza e integridad de los sistemas de
distribución y la presencia de biopelícula.
Los ensayos de laboratorio detectan sólo una pequeña proporción de los
microorganismos presentes en el agua.
RECUENTO EN PLACA DE HETERÓTROFOS

(HPC)
Después de la desinfección, su número es escaso. El

incremento en sistemas de distribución, indica deterioro
de la limpieza, posible estancamiento y desarrollo de
biopelícula.
El HPC puede incluir oportunistas: Acinetobacter,

Aeromonas, Flavobacterium, Klebsiella, Serratia,
Pseudomonas y Xantomonas,
no relacionados con infección
gastrointestinal.

42
DE BEBIDA
CONTAMINANTES BIOLÓGICOS
Existe un número de diversos

organismos que no tienen
significado en salud pública,
pero que son indeseables,
debido a que producen olores y
sabores. También afectan la
aceptabilidad del agua. Esto
indica que el tratamiento y/o el
estado, mantenimiento y
reparación del sistema de
distribución son insuficientes
VALORES GUÍA PARA

DESINFECTANTES EN EL AGUA
POTABLE
DESINFECTANTE VALOR OBSERVACIONES

GUIA
CLORO 5 mg/L Para desinfección efectiva

el cloro residual libre
debe ser ≥0,5 mg/L
después de 30 min. de
contacto a pH 8,0
MONOCLORAMINA 3 mg/L

43
DE BEBIDA
ORGANISMOS POTENCIALMENTE
PATÓGENOS EN AGUA POTABLE
Helicobacter
Helicobacter pylori
pylori
Tsukamurella
• Patógenos potencialmente Tsukamurella
emergentes: H. pylori, Tsukamurella,

Isospora belli y microsporidio, cuya
transmisión por el agua ha sido
reportada, pero sin confirmar.
• Bacillus cereus, especie patógena de
Bacillus
Bacillus cereus
cereus
alimentos sin evidencia de
transmisión por agua potable.
cianobacterias
cianobacterias
• Cianobacterias que producen toxinas
Escherichia coli
ENTEROPATÓGENO
• Presente en la flora intestinal del hombre y
animales, producen gastroenteritis, diarreas y
bacteremia. se han identificado: E. coli
enterotoxigénico, E. coli enteropatogénico, E.
coli enteroinvasivo, E. coli enterohemorrágico.

44
DE BEBIDA
Escherichia coli
ENTEROPATÓGENO
• Fuente: El hombre y los animales son los mayores

reservorios. Cepas de diferentes etiologías se han
reportado de diferentes tipos de agua, incluyendo
agua potable.
Escherichia coli
ENTEROPATÓGENO
• Significado en agua potable: Se han descrito
epidemias por E. coli en diferentes partes del
mundo por consumo de agua potable.

45
DE BEBIDA
2. EL MUESTREO
PREPARACIÓN DEL
MATERIAL PARA
EL MUESTREO

46
DE BEBIDA
PREPARACIÓN DE MATERIAL
DE VIDRIO
6 Seguir requisitos específicos para cada

lavado.
6 Sólo se usa agua destilada o desionizada

para el enjuague final.
DE VIDRIO
• Generalmente debe lavarse con una solución

de detergente especial, moderadamente
caliente y enjuagarse exhaustivamente
primero con agua de grifo y luego con agua
destilada mantener por separado el material
para análisis de nitrato, mercurio y plomo.

47
DE BEBIDA
DE VIDRIO
• Realizar prueba de residuos inhibidores del

crecimiento bacteriano cuando se usa un nuevo
detergente, y verificar la reacción del pH, que debe
ser neutro.
• El material de vidrio se escurre totalmente y luego se
pone a secar en un horno a 105°C/ 30 minutos.
DE VIDRIO
• Las placas Petri, se colocan en el
portaplacas y se esterilizan en horno a
170°C ± 10°C/ 2 horas
• Los tubos de ensayo para medios

líquidos, se almacenan en cajonerías
completamente limpias. Se debe limpiar
con una solución de alcohol por lo
menos una vez al mes.

48
DE BEBIDA
DE VIDRIO
• Los vasos de precipitado y erlenmeyer, se

guardan en lugares limpios donde no
acumulen polvo.
• Los tubos con medios de cultivo líquido, se

tapan con tapas flojas de plástico o acero
inoxidable. No debe usarse algodón para tal
fin.
DE VIDRIO
• Las pipetas bacteriológicas se colocan en

recipientes portapipetas y se esterilizan al
horno a 170°C ± 10°C/2 horas.
• Se debe realizar pruebas de esterilidad de
placas y frascos de vidrio, así como efecto
inhibitorio del proceso de lavado.

49
DE BEBIDA
PLACAS PETRI
• Usar de vidrio borosilicato o de plástico

descartable preesterilizado
• Para mantener la esterilidad de las de vidrio
mantenerlas en una canastilla hermética de
aluminio o acero inoxidable o envueltas en
papel aluminio o kraft.
• Los paquetes abiertos de placas
descartables, deben resellarse
PIPETAS
• Para mantener la esterilidad,

mantenerlas en envases de
aluminio o acero inoxidable, o
envolverlas individualmente.
• Deben mantener las rotulaciones

legibles y no estar astilladas.

50
DE BEBIDA
PIPETAS
• Los paquetes de pipetas descartables
en uso deben resellarse.
• Las pipetas de 10mL ó menos
deben ser exactas con una
tolerancia de 2,5%.
PREPARACIÓN DEL MATERIAL

PARA EL MUESTREO
MICROBIOLÓGICO
6 El material a utilizar para la toma de

muestra de aguas para análisis
microbiológico de aguas debe estar
previamente esterilizado.
6 El proceso de esterilización dependerá

del tipo de material a utilizar.

51
DE BEBIDA

PARA EL MUESTREO
MICROBIOLÓGICO
6 Los recipientes o frascos a llevar al

campo deben tener la tapa con papel
kraft o aluminio.
6 La capacidad del frasco

debe ser la suficiente
para el (los) parámetro(s)
a analizar.

PARA EL MUESTREO MICROBIOLÓGICO
6 Existen en el mercado recipientes

previamente esterilizados.
6 Incluso con reactivos para agua potable.

52
DE BEBIDA

PARA EL MUESTREO MICROBIOLÓGICO
6 Etiquetar adecuadamente el recipiente.

6 Es importante el tiempo de transporte al
laboratorio y la preservación de las muestras.
PROCEDIMIENTO DE LAVADO DE LOS

FRASCOS DE MUESTREO
Parámetro Recipiente Procedimiento de Lavado

Recomendado
Acidez
Alcalinidad Enjuague 3 veces con agua corriente,
Cloro una vez con Ac. Clorhídrico, tres veces
POLIPRO.
Dureza con agua corriente, una vez con Ac.
Magnesio Nítrico 1:1 y luego 3 veces con agua
pH 1000mL destilada en ese orden.
Color
Turbiedad
Microbiológicos Eliminar los residuos y enjuagar con

POLIPRO. agua corriente, lavar con detergente
VIDRIO alcalino Enjuague 3 veces con agua
120mL corriente, y luego con agua destilada o
desionizada , en ese orden.
Fuente: Wastewater Sampling for Process and Quality Control Water Pollution
Control Federation.1980

53
DE BEBIDA
PREPARACIÓN DE LOS FRASCOS DE MUESTREO

PARA UN ANÁLISIS MICROBIOLÓGICO
9 Luego del lavado correspondiente se

deben esterilizar los frascos antes del
muestreo.
9 Se deben autoclavar los frascos a

121oC por 15 minutos, (de ser
necesario se le deben adicionar
previamente reactivos dependiendo del
tipo de muestra).
ADICIÓN DE REACTIVOS
A LOS FRASCOS DE MUESTREO
AGUA CON CLORO

RESIDUAL LIBRE
Para agua residual adicionar 0,1mL de Tiosulfato de

Sodio al 10% w/v por cada 100mL de muestra para
neutralizar hasta 15mg/L.
Para agua potable adicionar 0,1mL de Tiosulfato de
Sodio al 3% w/v por cada 100mL de muestra para
neutralizar hasta 5mg/L.

54
DE BEBIDA
ADICIÓN DE REACTIVOS
A LOS FRASCOS DE MUESTREO
AGUA CON METALES PESADOS
Para aguas con concentraciones mayores a 1mg/L

(incluyendo cobre y zinc) adicionar 0,3 ml de una
solución de EDTA al 15% w/v por cada 100ml de
muestra. ajustar a pH 6,5 antes del uso.
PRESERVACIÓN Y TIEMPO DE ALMACENAMIENTO

PARA DIVERSOS PARÁMETROS EN MUESTRAS DE
AGUA
Tipo de Cantidad mínima de Tiempo máximo de almacenaje
Parámetro o Analito frasco muestra Preservación
Turbiedad PoV 100 ml refrigerar a 10°C 48 horas

Alcalinidad PoV 50 ml refrigerar a 4°C 48 horas
Cloro residual PoV 500 ml Analizar inmediatamente Ninguno
Color PoV 500 ml refrigerar a 4°C 48 horas
Conductividad PoV 500 ml refrigerar a 4°C 28 días

Dureza PoV 100 ml Agregar HNO3 hasta pH < 2 6 meses
Sólidos PoV 1000 ml refrigerar a 4°C 2-7 días
Sólidos sedimentables PoV 1000ml
Cloruros PoV 100 ml refrigerar a 4°C 7 días
Fluoruros P 10 ml refrigerar a 4°C 7 días
Sulfatos PoV 100 ml refrigerar a 4°C 25 días
Cianuros PoV 500 ml refrigerar, agregar NaOH hasta pH = 12 14 días, 24 horas en presencia de sulfuros
Aceites y grasas V 1000 ml refrigerar, agregar HCl hasta pH < 2
Demanda de cloro PoV 3000 ml refrigerar a 4°C
Hidrocarburos PoV 1000 ml refrigerar, agregar HCl hasta pH < 2 7 días
Nitrógeno PoV 250 ml refrigerar, agregar H2SO4 hasta pH < 2 23 días
N. Amoniacal PoV 50 ml refrigerar, agregar H2SO4 hasta pH < 2 24 horas
N. Orgánico PoV 250 ml refrigerar, agregar H2SO4 hasta pH < 2 28 días
P = plástico
V = vidrio
B = bolsa de plástico selladawww.institutodelagua.org
iama@institutodelagua.org/
Fuente: Centro iamareategui@yahoo.es
Panamericano de Ingeniería Sanitaria y Ciencias del Ambiente - CEPIS

55
DE BEBIDA
PRESERVACIÓN Y TIEMPO DE ALMACENAMIENTO

PARA DIVERSOS PARÁMETROS EN MUESTRAS DE
AGUA
Tipo de Cantidad mínima de Tiempo máximo de
Parámetro o Analito frasco muestra Preservación almacenaje
Bacterias heterotróficas * V/P 200 ml refrigerar a 4°C 24 horas
Coliformes total (NMP) * V/P 200 ml refrigerar a 4°C 24 horas
Coliformes totales (FM) * V/P 200 ml refrigerar a 4°C 24 horas
Coliformes (fecales) Termotolerantes (NMP) *V 200 ml refrigerar a 4°C 24 horas
Coliformes fecales (termotolerantes (FM) *V 200 ml refrigerar a 4°C 24 horas
Salmonella (A/P) *V 200 ml refrigerar a 4°C 24 horas
Escherichia (A/P) *V 200 ml refrigerar a 4°C 24 horas
Escherichia (NMP) *V 200 ml refrigerar a 4°C 24 horas
Estreptococos fecales *V 200 ml refrigerar a 4°C 24 horas
Vibrio cholerae A/P *V 200 ml refrigerar a 4°C 24 horas
Vibrio cholerae NMP *V 200 ml refrigerar a 4°C 24 horas
Clorofila V opaco *** refrigerar a 4°C / oscuridad 24 horas
Enteroparásitos Agua residual cruda P 1l refrigerar en hielo 24 horas

Agua residual tratada P 5l refrigerar en hielo 24 horas
Agua de río P 5l refrigerar en hielo 24 horas
Agua potable P 10 l refrigerar en hielo 24 horas
Lodos B 200 g refrigerar en hielo 3 días
Phytoplancton** Aguas eutróficas P 1l Temperatura ambiente 24 horas
Zooplancton Aguas eutróficas P 1l Temperatura ambiente 24 horas
P = plástico * Estériles
V = vidrio www.institutodelagua.org
** "Puede preservarse en una solución buffer de 40 ml de formalina por litro muestra"
*** el volumen depende de la concentración de algas en la fuente
B = bolsa de plástico sellada
Fuente:iama@institutodelagua.org/ iamareategui@yahoo.es
Centro Panamericano de Ingeniería Sanitaria y Ciencias del Ambiente - CEPIS
PRESERVACION Y TRANSPORTE DE LA
MUESTRA PARA EL ANÁLISIS
MICROBIOLÓGICO
Se recomienda el uso de cajas térmicas o “Coolers” a
fin de garantizar las características de la muestra
original hasta el momento de procesar la muestra en el
laboratorio

56
DE BEBIDA
CRITERIOS PARA LA
TOMA DE MUESTRA
DE AGUAS
MUESTREO DE AGUAS
El muestreo de aguas
incluye una serie de criterios
que deben tomarse en
cuenta.
Tipo de fuente, parámetros a
analizar, entre otros.

57
DE BEBIDA
CRITERIOS PARA REALIZAR

UN MUESTREO
Tipo de fuente
Parámetros analíticos programados
Selección de los puntos de muestreo
Personal debidamente entrenado.
Adecuado etiquetados
Siempre se recomienda una libreta de campo
Nota : Uso de vestimenta adecuada.

ASPECTOS PRINCIPALES
T El muestreo debe ser seriado

significativo y representativo del
ambiente a analizar.
T Un adecuado procedimiento de
la toma de muestra,
almacenamiento y preservación
de éstas previo al análisis en el
laboratorio.

58
DE BEBIDA
ASPECTOS PRINCIPALES
TPor último el reporte final está basado en

los datos obtenidos previamente del campo
y los resultados de laboratorio.
EL MUESTREO
6 El muestreo es uno de los pasos

más importantes para un análisis
de aguas.
6 El personal que se va a dedicar a
programas de muestreo debe
estar debidamente entrenado.

59
DE BEBIDA
EL MUESTREO
Í Se debe evitar contaminaciones

cruzadas durante el muestreo,
transporte o procesamiento de las
muestras.
Í El punto de muestreo debe ser
seleccionado por personal
competente y representativo de la
fuente.
EL MONITOREO
Es un programa elaborado con la finalidad de

realizar un seguimiento o vigilancia de una fuente
de agua, sistema de distribución o un ambiente
acuático con fines de estudio y/o investigación.

60
DE BEBIDA
EJEMPLO DE
ETIQUETA O TARJETA
Pto. de muestreo : Río Rímac

Identificación del pto. de Muestreo : Puente Ricardo Palma
Tipo de Muestra : Río ( cruda ) Código: R-05
Fecha : 4/08/96 Hora : 10:35a.m
Profundidad : 50cms. Superficial
Tipo de Análisis : Coliformes Totales, Termotolerantes, Bacterias
Heterótrofas, Vibrio cholerae
Volumen : 500mL
Muestreado por : Técnico Javier Maldonado Rueda
Firma : Javier Maldonado Rueda.
Observaciones : Se observó la presencia de personas lavando en la
rivera del río cerca al punto de muestreo.
MÉTODOS DE MUESTREO*
¾ PARA MUESTRAS DE LAGOS Y/O

LAGUNAS (sin tratamiento previo)
¾ PARA MUESTRAS DE SISTEMA DE

DISTRIBUCIÓN DE AGUA (agua
clorada )
* Las muestras para análisis microbiológicos deben

ser las primeras siempre.

61
DE BEBIDA
TOMA DE MUESTRA PARA EL

ANÁLISIS MICROBIOLÓGICO
¾ Si el agua es de pozo, con una bomba

manual, bombear agua por unos 5 - 10
minutos o hasta que se estabilice la
temperatura del agua antes de la toma de
muestra.
¾ Si el pozo no tiene bomba tomar la muestra
directamente utilizando un frasco estéril.
TOMA DE MUESTRA PARA EL

ANÁLISIS MICROBIOLÓGICO
AGUA CON CLORO RESIDUAL LIBRE
Para la toma de muestra de agua

potable con cloro residual
existen en el mercado bolsas
estériles preparadas con
Tiosulfato de Sodio.

62
DE BEBIDA
TIPOS DE MUESTRAS*
¾ MUESTRAS PUNTUALES
¾ MUESTRAS POR TIEMPO
¾ MUESTRAS PROPORCIONALES
AL CAUDAL
* El muestreo puede ser manual o automático.

FLUJOGRAMA DE TRATAMIENTO DE
MUESTRAS
EXTRACCIÓN
INGRESO AL
DE MUESTRA LABORATORIO
REGISTRO EN ALMACENAMIENTO
LIBRO PARA (previo al análsis)
MUESTRAS
REGISTRO DE
ENSAYOS DE DATOS
LABORATORIO: Fórmulas para cada
de acuerdo a ensayo
técnicas estándar
ELIMINACIÓ
ELIMINACIÓN DE
RESIDUOS

63
DE BEBIDA
3. MÉTODOS ESTÁNDAR
PARA EL ANÁLISIS
MICROBIOLÓGICO
DE AGUAS
MÉTODOS ANALÍTICOSEN EL
ANÁLISIS MICROBIOLÓGICO DE AGUAS
Cómo determinar cuál es la

metodología adecuada para un
análisis de aguas.

64
DE BEBIDA
MÉTODOS ANALÍTICOS
TU
BO
P OR SM
AC IÓ N N A (NMULT
R RA P) IPLE
FILTMEMB M) S
(F
OP HIC
R
TE ROT OUNT
HE TE C )
P L A
PRESENCIA AUSENCIA (HPC
(P / A)
MÉTODOS DE ANÁLISIS
MÉTODO DE ANÁLISIS PARÁMETROS
FILTRACIÓN • COLIFORMES TOTALES

POR • COLIFORMES TERMOTOLERANTES
MEMBRANA • E. coli
• BACTS. HETEROTRÓFICAS
TUBOS • COLIFORMES TOTALES

MÚLTIPLES • COLIFORMES TERMOTOLERANTES
• E. coli
P-A • COLIFORMES TOTALES

• E. coli

65
DE BEBIDA
KIT PARA MUESTREO
PRINCIPALES MÉTODOS
ANALÍTICOS PARA COLIFORMES
I. MÉTODO DE FILTRACIÓN POR

MEMBRANA (FM).
II. MÉTODO DE LOS TUBOS

MÚLTIPLES (NMP).
III. PRESENCIA AUSENCIA (PA)

66
DE BEBIDA
MÉTODO DE FILTRACIÓN
POR MEMBRANA (FM).
MÉTODO DE FILTRACIÓN POR MEMBRANA (FM)

EQUIPOS E INSTRUMENTOS
SISTEMA DE FILTRACIÓN PARA LABORATORIOS

Manifold + Embudo de Filtración + Bomba de Vacío
Bomba
de Vacío
Manifold
Descartable
Embudos
de
Filtración
Autoclavables

67
DE BEBIDA
EMBUDO DE FILTRACIÓN
MAGNÉTICO
6 Ideal para el análisis de Material Particulado
y Análisis Microbiológicos.

EQUIPOS E INSTRUMENTOS
Embudo
Embudo
de
de SISTEMA DE
Filtració
Filtración
Filtración
FILTRACIÓN PARA
CAMPO
Kitasato
Kitasato Kitasato + Embudo de
Filtración + Bomba de
Vacío Manual
Bomba
de Vacío
Manual

68
DE BEBIDA

MATERIALES Y MEDIOS
PLACAS PETRI + PADS + MEMBRANA + PINZA

+ MEDIOS DE CULTIVO
Pinza
Medios de Cultivo
Placas
Petri
Pads
Membrana
GN-6 METRICEL®
MEZCLA DE ESTERES DE CELULOSA HIDRÓFILA
Cuadriculada
Cuadricula a base de una línea punteada

NO INHIBE EL CRECIMIENTO BACTERIANO

69
DE BEBIDA
PINZA DE ACERO INOXIDABLE

IDEAL PARA LA MANIPULACIÓN Y TRANSPORTE DE LA
MEMBRANA A Y DESDE LOS EMBUDOS Y/O DISPOSITIVOS
DE FILTRACIÓN.
9 Punta de superficie plana y suave

para evitar dañar la membrana.
9 Zona de polipropileno diseñada para

un mejor manipuleo de la membrana,
más seguro y cómodo.
MEDIOS SELECTIVOS
¾ CALDO m-ENDO (m-ENDO LES) para el aislamiento de
Coliformes Totales.
¾ CALDO m-FC y m-FC + Ácido Rosólico para el aislamiento
de Coliformes Termotolerantes.
¾ m-COLIBLUE 24 para el aislamiento de E. coli y Coliformes
Totales.
¾ CALDO R2-A para el recuento en placa de Bacterias
Heterótrofas.
¾ CALDO m-TGE / m-TGE/TTC para el recuento en placa de
Bacterias Heterótrofas.

70
DE BEBIDA
FILTRACIÓN POR MEMBRANA

MARCHA
MARCHA ANALÍTICA EN
ANALÍTICA EN GENERAL
GENERAL
MUESTRA O
DILUCIÓN
MEDIO SELECTIVO
PROCESO DE
FILTRACIÓN
INCUBAR
Elaboración propia
Rosa Amelia Reátegui Elía,
LECTURA
2004 www.institutodelagua.org
COLIFORMES

71
DE BEBIDA
MÉTODOS ESTÁNDAR
CURSO TEÓRICO PRÁCTICO CONTROLPARA
DE LOS ANÁLISIS
CALIDAD PARAMICROBIOLÓGICO DE AGUAS
EL AGUA DE BEBIDA

SELECCIÓN
SELECCIÓN DEL
DEL MEDIO
MEDIO DE
DE CULTIVO
CULTIVO
PARA
PARA ANÁLISIS
ANÁLISIS DE
DE COLIFORMES
COLIFORMES
MUESTRA
MEDIO SELECTIVO
COLIFORMES COLIFORMES COLIFORMES

COLIFORMES
TOTALES (C.T.) Y TOTALES TERMOTOLERANTES
TERMOTOLERANTES
(C.TT.)
(C.TT.)
E. coli
m-COLIBLUE 24®
®
m-ENDO m-FC
Elaboración propia Rosa Amelia Reátegui Elía, 2004

MARCHA
MARCHA ANALÍTICA
ANALÍTICA PARA
PARA COLIFORMES
COLIFORMES
MUESTRA
MEDIO SELECTIVO
m-COLIBLUE 24®® COLIFORMES

m-COLIBLUE 24 COLIFORMES m-ENDO m-FC
m-FC COLIFORMES
COLIFORMES
TOTALES
TOTALES (C.T.)
(C.T.) YY E.
E. coli
coli COLIFORMES TERMOTOLERANTES
TERMOTOLERANTES
TOTALES
PROCESO DE FILTRACIÓN
Incubación
Incubación Incubación Incubació
Incubación **
Incubación • Preincub.
Temp.:
Temp.: 35
35ooCC Temp.: 35oC Temp.: 44,5ooCC
Temp.:44,5 To: 35,5oC
Tiempo:
Tiempo: 24
24 horas
horas Tiempo: 24 horas Tiempo:
Tiempo: 2424horas
horas T : 3 horas
Lectura
Lectura Lectura Lectura
Lectura
Col.
Col. Azules
Azules yy Rojas
Rojas C.T.
C.T..
C.T Col. con brillo metálico Col.
Col.Azules
Azules
Col.
Col. Azules
Azules E.
E. coli
coli
Elaboración propia Rosa Ameliaiamareategui@yahoo.es
iama@institutodelagua.org/ Reátegui Elía, 2004

72
DE BEBIDA
TÉCNICA DE FILTRACIÓN
POR MEMBRANA (FM)
Para Agua Muy Contaminada

10 mL
10 mL 10mL
Llenar Línea
Whirl-PaK
90 90 90
mL mL mL
#1 #2 #3
Series de Dilución
TECNICA DE FILTRACION
POR MEMBRANA (FM)
Para Agua Potable y/o Muy Contaminada*
Llenar Línea
Dilución
Whirl-PaK
Adicionar medio a la placa
*
Filtrar Muestra o
Dilución *
Dilución
Lle
*
nar
Whi
Lín
rl-P
ea
aK
Poner el Filtro 100 mL

sobre el medio
Poner la placa
en la Petri Placa
en la Incubadora

73
DE BEBIDA
Caldo m -ColiBlue 24
m-ColiBlue
9 Nuevo medio de Cultivo que permite realizar en
24 horas el análisis de Coliformes Totales y E.
coli simultáneamente usando la técnica de la
membrana filtrante
9 Aprobado por la USEPA para el reporte de
Coliformes y E. Coli en Agua Potable
EJEMPLO
DE RESULTADOS

74
DE BEBIDA
COLIFORMES TOTALES
COLIFORMES TOTALES

75
DE BEBIDA
COLIFORMES TOTALES
COLIFORMES TOTALES

76
DE BEBIDA
m-FC
m-FC

77
DE BEBIDA
m-FC
m-COLIBLUE 24

78
DE BEBIDA
m -ColiBlue 24
m-ColiBlue
Coliformes
Totales • Colonias Fácilmente
diferenciables:
E.coli
– AZULES son E. Coli
– AZULES Y ROJAS
Coliformes Totales
• No necesita usar luz UV
MÉTODO TUBOS
MÉTODO
MULTIPLES

79
DE BEBIDA
MÉTODO DE LOS
TUBOS MULTIPLES
NMP = FTM
Número Más Probable = Fermentación en Tubos Múltiples
MÉTODO DEL NMP
ª RECOMENDADO PARA AGUAS

ª RESIDUALES
ª MARINA
ª SUPERFICIAL
ª RECREATIVA
ª AGUA POTABLE

80
DE BEBIDA
TUBOS MÚLTIPLES
MARCHA
MARCHA ANALÍTICA
ANALÍTICA GENERAL
GENERAL
MUESTRA
PREPARAR DILUCIONES
MEDIO SELECTIVO
SIEMBRA
INCUBAR
Elaboración propia, LECTURAS

Rosa Amelia Reátegui Elía, 2003
MÉTODO DE LOS TUBOS

MÚLTIPLES
• PARA COLIFORMES TOTALES Y TERMOTOLERANTES:

– PRUEBA PRESUNTIVA
– PRUEBA CONFIRMATIVA
– PRUEBA COMPLETA (CT, Endo,
Endo, Gram)
• PARA COLIFORMES TERMOTOLERANTES

– PRUEBA DIRECTA USANDO EL MEDIO A-
A-1
A-1

81
DE BEBIDA
TUBOS MULTIPLES
PREPARACIÓN DE DILUCIONES
(dil 1/10) (dil 1/10) (dil 1/10)

10mL
10mL 10mL 10mL
MUESTRA
90
mL
90
mL
90
mL ... 90
mL
SIEMBRA
Adaptado de Coliforms Most Probable Number HACH,

TUBOS MULTIPLES
SELECCIÓN DEL MEDIO DE CULTIVO PARA ANÁLISIS
DE COLIFORMES Y E. coli
DILUCIONES
MEDIO SELECTIVO
COLIFORMES
TOTALES (C.T
C.T)) Y E.
((C.T)
Coli
CALDO LAURIL
TRIPTOSA CON MUG
Elaboración propia,
Rosa Amelia Reátegui Elía,
2003 www.institutodelagua.org

82
DE BEBIDA
TUBOS MULTIPLES
SIEMBRA
(dil 1/10) (dil 1/10) (dil 1/10)
10mL 10mL 10mL 10mL
MUESTRA
90
mL
90
mL
90
mL ... 90
mL
10 –1 10 –2 10 –3 10 -n
Siembra
Siembra en en
33 series
series de
de
55tubos
tubos
INCUBACIÓN
Adaptado de Coliforms Most
Probable Number HACH, Rosa
Amelia Reátegui Elía, 2003 www.institutodelagua.org
TUBOS MÚLTIPLES
MÚLTIPLES
LAURIL
LAURIL TRIPTOSA
TRIPTOSA CON
CON MUG
MUG
MUESTRA
PREPARAR DILUCIONES
MEDIO SELECTIVO
CALDO
CALDO LAURIL
LAURIL TRIPTOSA
TRIPTOSA CON
CON MUG
MUG
COLIFORMES
COLIFORMES TOTALES
TOTALES YY E.
E. Coli
Coli
Incubación
Incubación
Temp.: 35,5ooCC
Temp.: 35,5
Tiempo:
Tiempo: 24
24 –– 48
48 horas
horas
Lectura
Lectura ** Lámpara
Lámpara de
de luz
luz UV
UV
Turbidez
Turbidez yy gas
gas :: C.T.
C.T. Onda
Onda larga
larga
Flourescencia:
Flourescencia:: E.
Flourescencia E. coli
coli **
Rosa Amelia Reátegui Elía, www.institutodelagua.org
2003 iama@institutodelagua.org/ iamareategui@yahoo.es

83
DE BEBIDA
INCUBAR
Incubar todos los

tubos a 35oC ± 0.5°C
por 24 - 48 horas
Muestra + Medio Lauril Triptosa

Si se produce gas, entonces la
prueba es positiva
NMP PARA AGUA

MUY CONTAMINADA
Dilución #1
=5+
Dilución #2 =3+
Dilución #3 =3+

84
DE BEBIDA
TABLA DE NMP PARA AGUA

MUY CONTAMINADA
PARTE DE LA TABLA DE NMP
(CONSULTAR LOS MÉTODOSESTANDAR O MANUAL DE ANÁLISIS DE AGUA DE HACH)
Número de Tubos Positivos MPN
5 3 2 140
5 3 3 170
5 4 0 130
5 4 1 170
5 4 2 220
MPN x Factor de Menor Dilución = Coliformes / 100 mL

Ejemplo: 170 x 10 = 1700 Coliformes / 100 mL
TUBOS MÚLTIPLES
TUBOS + DE LAURIL TRIPTOSA
• Prueba Confirmativa del NMMP

– Coliformes Totales = CVBB (Caldo
Verde Brillante Bilis)
• 24-48 horas
• 35,5 °C
• Producción de Gas

85
DE BEBIDA
NMP PARA AGUA RESIDUAL

TUBOS + DE LAURIL TRIPTOSA
• Prueba de Confirmación del MPN
– Coliformes Termotolerantes= Medio EC
• 24 horas
• 44,5 °C
• Producción de Gas
– E. coli = Medio EC con MUG
• 24 horas
• 44,5 °C
• Producción de Gas y Fluorescencia.
NMP PARA AGUA RESIDUAL
• Medios Especiales como Alternativos

– A-1 para Coliformes Termotolerantes
– Lauryl TrIptosa con MUG
• Ventaja del Medio A -1 = 24 horas de prueba,
no requiere confirmación
• Desventaja del Medio A -1 = Dos temperaturas
35 y 44.5 °C
• Ventaja del Medio L.T./MUG = 24-48 horas
no requiere confirmación

86
DE BEBIDA
EJEMPLO DE
RESULTADOS
NMP

87
DE BEBIDA
NMP
NMP

88
DE BEBIDA
NMP
NMP

89
DE BEBIDA
Prueba Presuntiva CLT
NMP Prueba Confirmativa

CVBB

90
DE BEBIDA
NMP
NMP C.T.T.

91
DE BEBIDA
NMP C.T.T.
BACTERIAS
HETERÓTROFAS

92
DE BEBIDA
AISLAMIENTO E
IDENTIFICACIÓN DE BACTERIAS
HETERÓTROFAS (HPC)
Son bacterias más resistentes al cloro, por lo
que son excelentes indicadoras de los
procesos de desinfección.
Se reportan como UFC/mL.
PRINCIPALES MÉTODOS ANALÍTICOS

PARA BACTERIAS HETEROTRÓFICAS
1. MÉTODO DE FILTRACIÓ
(FM).
2. MÉTODO DE INCORPORACIÓ
INCORPORACIÓN (POUR PLATE)
3. MÉTODO DE SIEMBRA EN SUPERFICIE (SPREAD
PLATE).

93
DE BEBIDA
FILTRACIÓN
FILTRACIÓN POR
POR MEMBRANA
MEMBRANA
SELECCIÓN
SELECCIÓN DEL
DEL MEDIO
MEDIO DE
DE CULTIVO
CULTIVO PARA
PARA ANÁLISIS
ANÁLISIS DE
DE
BACTERIAS
BACTERIAS HETERÓTROFAS
HETERÓTROFAS
MUESTRA O DILUCIONES
MEDIO DE CULTIVO
BACTERIAS
HETERÓTROFAS
HETERÓTROFAS
R-2A
R-2A

FILTRACIÓN
MARCHA ANALÍTICA PARA BACTERIAS HETERÓTROFAS

MUESTRA O DILUCIONES
MEDIO SELECTIVO
R-2A
R-2A
BACTERIAS
BACTERIAS HETERÓ
HETERÓTROFAS
HETERÓTROFAS
PROCESO DE FILTRACIÓN
Incubación
Incubación
Temp.
Temp. 35.5
35.5OOcc
Tiempo:
Tiempo: 48
48 horas
horas
Elaboración propia Lectura

Lectura

94
DE BEBIDA

SIEMBRA
(dil 1/10) (dil 1/10)
10mL
10mL 10mL
MUESTRA 90
mL
90
mL ... 90
mL
10 –1 10 –2 10 -n
INCUBACIÓN
TÉCNICA DE INCORPORACIÓN
(POUR PLATE)
1mL Adicionar medio a la placa

Llenar Línea
10-12mL
Whirl-PaK
Dilución
*
Homogenizar en
la superficie de
Incubar a 35 x 48 oC
la mesa de
+ 3 horas.
trabajo
Dejar reposar 15 min.
Elaboración propia, Rosa Amelia Reátegui Elía, 2003

95
DE BEBIDA
TÉCNICA DE SIEMBRA EN
SUPERFICIE (SPREAD PLATE)
Preparar el día anterior
Adicionar medio a la placa
10-12mL dejar secar las placas
a 41.5 oC x 24 Horas
Llenar Línea
0.1mL - 0.5mL
Whirl-PaK
Dilución
*
Homogenizar el
inóculo en la
Incubar a 35 + 5
oC
superficie del
x 48 horas. medio
Dejar que el inóculo sea
absorbido x 15 min.
Rosa Amelia Reátegui Elía, www.institutodelagua.org
2003 iama@institutodelagua.org/ iamareategui@yahoo.es
MÉTODO DE FILTRACIÓN
POR MEMBRANA
BACTERIAS HETERÓTROFAS
SE RECOMIENDA EL USO DE UNA MEMBRANA

DE CONTRASTE A FIN DE PODER TENER UNA
MEJOR LECTURA .

96
DE BEBIDA
METRICEL BLACK®
9 MATERIAL FILTRANTE: POLIETERSULFONA HIDRÓFILA

9 TAMAÑO DE PORO : 0,45 mm , 0,8 mm
9 DIAMETRO : 47mm
9 APLICACIONES: CERTIFICADA PARA EL ANÁLISIS
MICROBIOLÓGICO CUMPLE LAS ESPECIFICACIONES DE LA EPA.
9 IDEAL PARA EL AISLAMIENTO DE BACTERIAS
HETERÓTROFAS, HONGOS Y LEVADURAS
EJEMPLO
DE RESULTADOS

97
DE BEBIDA
HPC

98
DE BEBIDA
HPC
HPC

99
DE BEBIDA
HPC
HPC
POUR PLATE
SPREAD PLATE

100
DE BEBIDA
MÉTODO PRESENCIA
MÉTODO
AUSENCIA (P -A)
(P-A)
PRESENCIA AUSENCIA (P-A)
MARCHA ANAL ÍTICA GRAL.

ANALÍTICA
COLIFORMES TOTALES Y E.coli
MUESTRA
FRASCO CON MEDIO

SELECTIVO
INCUBAR
LECTURA
ELABORACIÓN PROPIA, ROSA AMELIA REÁTEGUI ELÍA, 2003

101
DE BEBIDA
PRESENCIA AUSENCIA ((P-A)

P-A)
MEDIO
MEDIO DE
DE CULTIVO
CULTIVO SELECTIVO
SELECTIVO PARA
PARA ANÁLISIS
ANÁLISIS DE
DE
COLIFORMES
COLIFORMES TOTALES
TOTALES YY E.
E. coli
coli
MUESTRA
COLIFORMES TOTALES (C.T) Y

E. coli
Medio PRESENCIA
AUSENCIA + MUG
ELABORACIÓN PROPIA, ROSA AMELIA REÁTEGUI ELÍA, 2003
PRESENCIA AUSENCIA ((P-A)

P-A)
MEDIO
MEDIO DE
DE CULTIVO
CULTIVO SELECTIVO
SELECTIVO PARA
PARA ANÁLISIS
ANÁLISIS DE
DE
COLIFORMES
COLIFORMES TOTALES
TOTALES YY E.
E. coli
coli
TOMA DE MUESTRA

102
DE BEBIDA
MÉTODO CROMOGÉNICO
PRESENCIA-AUSENCIA (P-A)
PÚRPURA DE BROMOCRESOL
AMARILLO
POSITIVO
ADICIONAR
100 mL de
Muestra
INCUBAR 35 ± 0.5 °C
24-48 HORAS
NEGATIVO NO
CAMBIA EL COLOR
EJEMPLO
DE RESULTADOS

103
DE BEBIDA
Consultas:
iama@institutodelagua.org
capacitacion@institutodelagua.org
Blga. Rosa Amelia Reátegui Elía

Coordinadora Ejecutiva

104

R8 - 01 Microbiologia

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GLACIARES 230 000 0.015 16 000 años

LAGOS SALADOS 100 000 0.007 10 a 100 años

LAGOS DE AGUA DULCE 135 000 0.009 10 a 100 años

RÍOS 1 500 0.0001 12 a 20 días

HUMEDAD DEL SUELO 38 500 0.002 280 días

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