Edwards, M. (2016) - The Genetic

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La arquitectura genética del color del iris y

Variación de las características de la superficie en poblaciones de
Ascendencia diversa
Por
Melissa Edwards
Una tesis presentada de conformidad con los requisitos para obtener el

título de Doctor en Filosofía.
Departamento de Antropología
Universidad de Toronto
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La arquitectura genética del color del iris y las características de la superficie

Variación en poblaciones de ascendencia diversa
Melissa Edwards
Doctor en Filosofía
Departamento de Antropología
Universidad de Toronto
2016
Abstracto
La investigación centrada en el color del iris y las características de la superficie ha comenzado a desempeñar un papel cada vez más importante.
papel importante en los campos de la antropología, la ciencia forense y la salud pública. Aunque ambos ojos
El color y, en mucha menor medida, las características del iris se han estudiado en poblaciones de europeos.
ascendencia, muy pocos grupos de investigación han intentado investigar estos rasgos en regiones fuera de
Europa. Esto puede deberse en parte a las dificultades asociadas con la obtención de una información cuantitativa.
medición del color de ojos y falta de metodología estandarizada. Para mi tesis doctoral,
desarrolló un método novedoso para caracterizar el color del iris y la variación de características en diversos
poblaciones. Luego apliqué este método a una muestra de individuos de Asia Oriental, Europa y
Ascendencia del sur de Asia. Estaba principalmente interesado en observar la distribución fenotípica y
base genética de estos rasgos en los tres conjuntos de muestras. Encontré que: 1/ Métodos cuantitativos
proporcionar un medio ideal para caracterizar el color del iris en poblaciones de ascendencia diversa; 2/ El
Las distribuciones fenotípicas del color del iris y las características de la superficie son diferentes en Asia oriental y Europa.
y poblaciones del sur de Asia; 3/ HERC2 rs12913832 controla la variación de la pigmentación del iris en ambos
Poblaciones europeas y del sur de Asia. Sin embargo, afecta el color de ojos de manera diferente en ambos.
regiones; 4/ Las variantes responsables de controlar la pigmentación del iris en Europa son diferentes a las
ii
los responsables del control de la pigmentación del iris en el este de Asia; 5/ SEMA3A rs10235789 es
asociado significativamente con las criptas de Fuchs en poblaciones de Asia oriental, Europa y Asia meridional.
En definitiva, mi tesis es el primer trabajo de investigación que compara la pigmentación y la estructura del iris.
variación en poblaciones de diversa ascendencia. La metodología que he desarrollado proporcionará
otros investigadores con un nuevo marco que pueden utilizar para abordar el estudio del color del iris y
diversidad de características.
III
Tabla de contenido
Abstracto................................................. ................................................. .........................................ii
Tabla de contenidos................................................. ................................................. ........................ IV
Lista de tablas................................................. ................................................. ................................ vii
Lista de figuras................................................. ................................................. ................................ viii
Adelante ................................................. ................................................. ........................................ ix
Capítulo 1: ................................................. ................................................. ...................................1
Introducción
1.1 La evolución de la variación global del color del iris ........................................ ............................2
1.2 Anatomía del iris humano................................................ ................................................. ......3
1.2.1 Estructura del iris ................................................ ................................................. ...................3
1.2.2 Pigmentación del iris ................................................ ................................................. .............8
1.3 Factores que influyen en la variación de la pigmentación del iris ......................................... ...................9
1.4 Bases genéticas de la pigmentación del iris................................................ ..........................................11
1.5 Bases genéticas de las características de la superficie del iris ................................. ........................................14
1.6 Limitaciones en nuestra comprensión del color del iris y la variación de la textura ........................16
1.6.1 Caracterización del color del iris y la variación de las características de la superficie ......................... ...dieciséis
1.6.2 Caracterización de la heterocromía central ........................................ ................................17
1.6.3 Variación de la población ......................................... ................................................. ......18
1.7 Justificación y objetivos del estudio................................................. ................................................. ....20
1.8 Referencias................................................ ................................................. ........................22
Capítulo 2: ................................................. ................................................. ................................28
Medidas cuantitativas del color del iris mediante fotografías de alta resolución
2.1 Resumen ................................................. ................................................. ................................29
2.2 Introducción ................................................. ................................................. ........................30
2.3 Materiales y métodos................................................ ................................................. .........31
2.3.1 Reclutamiento ................................................ ................................................. ...................31
2.3.2 Genotipado ................................................ ................................................. .................32
2.3.3 Adquisición y Procesamiento de Fotografías de Iris.................................... ...................32
2.3.4 Adquisición de Medidas de Color................................................ ................................33
2.3.5 Análisis estadístico ................................................ ................................................. .........34
2.4 Resultados................................................ ................................................. ................................34
IV
2.5 Discusión................................................ ................................................. ........................36
2.6 Tablas................................................ ................................................. ................................42
2.7 Figuras................................................ ................................................. ................................44

2.8 Referencias................................................ ................................................. ........................47
Capítulo 3: ................................................. ................................................. ................................49
La pigmentación del iris como rasgo cuantitativo: variación en las poblaciones de Europa, Asia oriental y
Ascendencia del sur de Asia y asociación con polimorfismos de genes candidatos
3.1 Resumen ................................................. ................................................. ................................50
3.2 Introducción ................................................. ................................................. ........................51
3.3.1 Recolección de muestras ................................................ ................................................. ..........54
3.3.2 Adquisición de Fotografías ................................................ ................................................54
3.3.3 Adquisición del Color del Iris ................................................ ................................................. 55
3.3.4 Selección de marcadores y genotipado ........................................ ........................................57
3.3.5 Análisis estadístico ................................................ ................................................. .........57

3.4 Resultados................................................ ................................................. ................................59
3.5 Discusión ................................................ ................................................. ........................62
3.5.1 Color del iris en poblaciones europeas ........................................ ................................63
3.5.2 Color del iris en poblaciones del sur de Asia ......................... ...............................sesenta y cinco
3.5.3 Color del iris en poblaciones de Asia oriental ......................... ................................67

3.5.4 Heterocromía central ................................................ ................................................. ...69
3.5.5 Una visión global de las bases genéticas de la pigmentación del iris ................................. ......70
3.6 Tablas................................................ ................................................. ................................73
3.7 Figuras................................................ ................................................. ................................86

3.8 Referencias................................................ ................................................. ........................89
Capítulo 4: ................................................. ................................................. ................................94
Análisis de las características de la superficie del iris en poblaciones de ascendencia diversa
4.1 Resumen ................................................. ................................................. ................................95
4.2 Introducción ................................................. ................................................. ........................96
4.3.1 Reclutamiento de participantes................................................. ................................................. ..98
4.3.2 Genotipado ................................................ ................................................. .................98
4.3.3 Adquisición y Procesamiento de Fotografías de Iris ......................................... .................99
en
4.3.4 Análisis del iris................................................ ................................................. .................99

4.3.5 Caracterización de la estructura del iris ........................................... ................................101
4.3.6 Análisis estadístico ................................................ ................................................. ......102

4.4 Resultados................................................ ................................................. ................................103
4.5 Discusión ................................................ ................................................. ........................106
4.5.1 Criptas de Fuchs................................................ ................................................. .................106
4.5.2 Manchas de pigmento ......................................... ................................................. ................108

4.5.3 Surcos de contracción ................................................. ................................................. ....109
4.5.4 Nódulos de Wolfflin................................................. ................................................. ..........111
4.5.5 Melanosis conjuntival................................................ ................................................. 112

4.5.6 Correlaciones de las características del iris................................... ........................................113
4.5.7 Investigación futura................................................ ................................................. ............113
4.6 Tablas................................................ ................................................. ................................116
4.7 Figuras................................................ ................................................. ................................120

4.8 Referencias................................................ ................................................. ........................129
Capítulo 5: ................................................. ................................................. ................................132
Observaciones finales
5.1 Introducción ................................................. ................................................. ........................133
5.2 Resumen de hallazgos................................................ ................................................. .........133
5.2.1 Cuantificación de la pigmentación del iris ................................................ ........................................133
5.2.2 Caracterización de las características de la superficie del iris ................................. ................................134
5.2.3 Distribución fenotípica del color del iris y heterocromía central .........................135
5.2.4 Distribución fenotípica de las características de la superficie del iris ......................... .................136
5.2.5 Base genética del color del iris ........................................ ................................................136
5.2.6 Base genética de las características de la superficie del iris................................. ................................138
5.3 Limitaciones de la investigación................................................ ................................................. .........139
5.4 Conclusión................................................. ................................................. ........................140
5.5 Referencias................................................ ................................................. ........................142
Reconocimientos de derechos de autor ................................................ ................................................144
nosotros
Lista de tablas
Tabla 21 Estadísticas descriptivas generales.................................... ........................................42
Tabla 22 Resultados generales del análisis del modelo lineal.................... ................................43
Tabla 31 Resultados del análisis de confiabilidad entre e intraevaluadores.................... ..........73
Tabla 32 Estadísticas resumidas de los 1448 participantes incluidos en el estudio ........................74
Tabla 33 Resultados del metanálisis en la muestra europea (A) antes y (B) después del
acondicionamiento para los efectos de HERC2 rs12913832..... ................................................75
Tabla 34 Resultados del metanálisis en la muestra del sur de Asia (A) antes y (B) después del
acondicionamiento para los efectos de HERC2 rs12913832.... ................................................. 79
Tabla 35 Resultados del metanálisis en la muestra de Asia oriental (A) antes y (B) después del
acondicionamiento para los efectos de OCA2 rs1800414 ................... ................................................. ...83
Tabla 36 ∆E promedio, mínimo y máximo estratificado por genotipo HERC2 rs12913832 ...85
Tabla 41 Estadísticas descriptivas generales para los lirios de Asia oriental, Europa y Asia meridional .116
Tabla 42 Resultados de la regresión ordinal genética................................... ........................117
Tabla 43 Frecuencias de las características de la superficie del iris.................... ........................................118
Tabla 44 Distribución de las características de la superficie del iris ................................. ................................119
viii
Lista de Figuras
Figura 11 Características de la superficie del iris humano.................................... ........................................5
Figura 12 Sección transversal del iris humano................................. ................................................6
Figura 21 Metodología de extracción de color y coordenadas de color del iris................................44
Figura 22 Distribución de iris en el espacio de color CIELAB .................................. ...................45
Figura 23 Visualización de la heterocromía central ........................................ ................................46
Figura 31 Distribución de iris a lo largo de b* y a* (A), a* y L* (B), y b* y L* (C), coordenadas de CIE 1976 L*a*b*
(CIELAB) Espacio de color para el segundo cuerpo de la cámara....86
Figura 32 Ejemplos de cuñas de iris con valores de espacio de color correspondientes....................88
Figura 41 Cinco características superficiales que se encuentran comúnmente en el iris humano ................................. 120
Figura 42 Límites del iris................................................ ................................................. .....121
Figura 43 Cuadrantes del iris................................................ ................................................. .................122
Figura 44 Categorías de manchas pigmentarias................................. ................................................123
Figura 45 Categorías de surcos de contracción.................................... ........................................124
Figura 46 Categorías de nódulos de Wolfflin.................................... ........................................125
Figura 47 Categorías de cripta................................... ................................................. ...........126
Figura 48 Color del iris autodescrito, según lo define la escala de fototipo de Fitzpatrick ................127
Figura 49 Categorías de melanosis conjuntival.................................... ................................128
viii
Adelante
Esta tesis consta de cinco capítulos que exploran la distribución global y la base genética del color del iris y
las características de la superficie en poblaciones de ascendencia del este de Asia, Europa y el sur de Asia.
El Capítulo 1 proporciona una introducción general a la estructura y el color del ojo humano.
Proporciona información importante sobre la evolución del color del iris, la anatomía del iris, el proceso de
melanogénesis y la base genética del color de los ojos humanos y las características de la superficie. Este
capítulo también aborda algunas de las limitaciones que actualmente están presentes en este campo.
El Capítulo 2 presenta un método cuantitativo para medir la variación del color del iris que se
desarrolló utilizando una muestra piloto de 205 voluntarios de ascendencia del este de Asia, Europa y el
sur de Asia. También analiza la asociación entre HERC2 rs12913832 y medidas cuantitativas del color de
ojos en los grupos de Europa y el sur de Asia. Este trabajo ha sido publicado previamente en The American
Journal of Physical Anthropology (Edwards et al., 2012)
El Capítulo 3 mejora el método cuantitativo para medir el color del iris que se introdujo en el Capítulo 2.
También analiza la asociación entre 14 marcadores de pigmentación putativos y la variación del color de
ojos en 1.465 individuos de ascendencia de Asia Oriental, Europa y Asia Meridional. Este trabajo ha sido
publicado previamente en Pigment Cell and Melanoma Research (Edwards et al, 2015)
El capítulo 4 analiza la distribución global de cuatro características superficiales (criptas de Fuchs, surcos
de contracción, nódulos de Wolfflin y manchas pigmentarias) en el ojo humano. También investiga la base
genética de estos rasgos. Este trabajo ha sido publicado previamente en Royal Society Open Science.
(Edwards et al., 2016)
Por último, el Capítulo 5 resume las conclusiones generales de los artículos anteriores y destaca algunas
limitaciones que persisten en este campo.
ix
Capítulo 1:
Introducción
1
1.1 La evolución de la variación global del color del iris
El iris es una estructura compleja que muestra una amplia variación de color en el ser humano.
poblaciones. Algunos ojos incluso muestran heterocromía, donde se encuentran varios colores en el mismo
(heterocromía central o sectorial) o ojos diferentes (heterocromía binocular). El espectro completo
La variación del color del iris está restringida en gran medida a las poblaciones europeas, aunque la diversidad es moderada.
También se puede observar en el norte de África, Oriente Medio y partes del sur de Asia. Durante el
En el resto del mundo, sin embargo, el color del iris se limita principalmente a distintos tonos de marrón. Sin embargo,
Incluso estos marrones pueden mostrar una amplia diversidad y variar desde amarillos rojizos claros hasta oscuros.
negros parduscos.
La evolución del color de ojos claro no parece ser un simple subproducto de factores genéticos.
deriva u otras fuerzas genéticas aleatorias. Más bien, este rasgo parece haber sido sometido a fuertes
presiones de selección. Esto se ve respaldado por la frecuencia excepcionalmente alta de ojos azules en algunos
poblaciones europeas, y el hecho de que el marcador genético (HERC2 rs12913832) que controla
La diferencia entre el color de ojos azul y marrón muestra fuertes señales de selección positiva en
both modern and ancient sample sets (Eiberg et al., 2008; Mathieson et al., 2015; Nakagome et
otros, 2015; Wilde et al., 2014). Hasta ahora ha sido muy difícil fechar el origen de los ojos azules.
color. Inicialmente se creía que los ojos azules evolucionaron por primera vez hace entre 6.000 y 10.000 años, cuando los humanos
se trasladó a la región europea del Mar Báltico (Eiberg et al., 2008). Sin embargo, esta estimación ha
desde entonces se alargó considerablemente. Un estudio reciente sugirió que es poco probable que la selección en
HERC2 rs12913832 comenzó más recientemente que la expansión de la agricultura hace 12.800 años.
(Nakagome et al., 2015). Un segundo estudio, que analizó 230 muestras de esqueletos antiguos de Eurasia,
descubrió que la variante del color de ojos azules tenía una frecuencia del 100% en los cazadoresrecolectores europeos
que data de hace 7.5008.200 años (Mathieson et al., 2015). Además, la distribución HERC2
rs12913832 dentro de otros grupos esqueléticos reflejaba la distribución regional de este marcador actual.
Estos hallazgos sugieren que la selección de ojos azules ocurrió antes de este período.
Las fuerzas selectivas reales que impulsaron la evolución del color de ojos claro en Europa
Las poblaciones aún no se conocen bien. Incluso dentro de Europa, el color de ojos muestra una diferencia única.
distribución donde la frecuencia de ojos azules aumenta con la latitud (Donnelly et al., 2011).
Varios grupos de investigación han sugerido que el color de ojos azules puede haber evolucionado inicialmente como una
producto de la selección sexual dependiente de la frecuencia. Cuando los humanos penetraron en la estepatundra,
se encontraron con climas duros (Frost, 2006, 2014). El alimento se adquiría principalmente mediante la caza.
a largas distancias y esto a su vez condujo a una alta tasa de mortalidad masculina y una baja tasa de sexo operacional.
relación. Es posible que el color de ojos claro proporcionara a las mujeres una rara ventaja de color que
les ayudó a conseguir pareja. Una vez que este rasgo se estableció en las poblaciones europeas,
siguió siendo favorecido como indicador de pertenencia a un grupo (Wilde et al., 2014). Puede que tenga
También permitió a los hombres determinar mejor la confianza en la paternidad. Esta hipótesis está respaldada por una
exceso de homocigotos HERC2 rs12913832 en poblaciones modernas y antiguas (Wilde et
otros, 2014). Alternativamente, es posible que el color del iris no se haya seleccionado en absoluto. Más bien, los ojos claros pueden
han hecho autostop junto con algún otro rasgo controlado por los mismos genes (Donnelly et al.,
2011; Wilde et al., 2014). HERC2 rs12913832 es un marcador pleiotrópico que también ha sido
asociado con la pigmentación de la piel, el color del cabello y la capacidad de broncearse (Cook et al., 2008; Han et al.,
2008; Nan et al., 2009a). Además, se ha descubierto que interactúa con varios otros genes.
que desempeñan un papel en la vía de pigmentación (Branicki et al., 2009; Pospiech et al., 2011). De este modo,
La variación del color del iris puede ser simplemente producto de la selección de otros rasgos, como la piel y/o
color de pelo. Algunos investigadores incluso han señalado presiones de selección conductual. Mayoría
En particular, Sturm y Larsson (2009) sugirieron que los ojos azules pueden ayudar a mitigar algunos de los
Efectos del trastorno afectivo estacional. Es poco probable que alguna hipótesis pueda explicar completamente la
diversidad global que se observa hoy en día en el color de ojos. Más bien, la evolución de la pigmentación del iris.
La variación es probablemente el producto de muchos factores ambientales complejos que interactúan (Mathieson et al.
otros, 2015; Wilde et al., 2014).
1.2 Anatomía del iris humano

1.2.1 Estructura del iris
La embriogénesis del iris es un proceso largo y complicado (ver reseña en Oyster,
1999). Los vasos ópticos aparecen por primera vez durante la cuarta semana embrionaria. Para la sexta semana, un
Una estructura conocida como membrana pupilar crece delante del cristalino. Los diferentes componentes
y las capas del iris comienzan a diferenciarse debajo de esta membrana. Alrededor de las ocho
meses, el centro de la membrana pupilar se absorbe, formando la pupila. El tejido que
Los restos después de la reabsorción se asemejan a un anillo circular pequeño e irregular en la superficie del iris. Este
El anillo, que se conoce como collarette, divide el iris en dos regiones diferentes: la pupila.
zona y la zona ciliar (Figura 11). La región blanca que rodea el iris se conoce como
esclerótico.
El iris resultante se compone de cinco capas distintas (Eagle, 1988; Oyster, 1999) [Figura
12]. La capa más posterior se llama epitelio pigmentario del iris (IPE). Esta capa es principalmente
protector y bloquea la retina para que no absorba el exceso de luz (Wilkerson et al., 1996). Adjunto a
El IPE son dos capas musculares conocidas como músculo esfínter y músculo dilatador (Eagle,
1988). Estos músculos ayudan en la contracción y dilatación de la pupila. Por último, los dos anteriores
la mayoría de las capas son la capa estromal y la capa del borde anterior (Eagle, 1988). Ambas capas
Contienen una variedad de melanocitos, fibras de colágeno y fibroblastos. Sin embargo, la anterior
La capa fronteriza está mucho más densamente empaquetada que la capa estromal (Eagle, 1988). La mayoría de
La variación del color y la estructura del iris se puede atribuir a diferencias en el color y la composición.
de estas dos capas (Baranoski y Lam, 2007; Mackey et al., 2011; Rennie, 2012; Sturm y
Larsson, 2009). La textura de la superficie del iris también muestra una variación sustancial. Esto es en gran medida
debido a la presencia de varias características superficiales que pueden afectar la organización y el funcionamiento general.
estabilidad del ojo. Estas características incluyen criptas de Fuchs, surcos de contracción y nódulos de Wolfflin.
y manchas de pigmento (Figura 11).
Las criptas de Fuchs son lagunas en forma de diamante en el borde anterior y el estroma anterior.
capas del iris (Purtscher, 1965). Aparecen por primera vez alrededor de los 6 meses de edad y se parecen
hoyos profundos que cubren la superficie del iris (Larsson y Pedersen, 2004). Aunque hay varios
diferentes tipos de lagunas, las criptas de Fuchs son notables porque varían ampliamente en tamaño, se encuentran
en la región ciliar y con mayor frecuencia se originan en el collarete (Larsson y Pedersen, 2004;
Purtscher, 1965; Sidhartha et al., 2014a). Los factores de desarrollo que controlan la formación de
Las criptas de Fuchs no se comprenden bien. Sin embargo, se ha sugerido que pueden ser un
defecto filogenético (Purtscher, 1965). Debido a la importancia cada vez menor de las capas anteriores de
el iris a lo largo de la historia evolutiva, estas capas pueden haberse vuelto rudimentarias
Tejidos en los simios antropoides. Como resultado, son más propensos a adquirir las criptas de Fuchs y
otras formas de hipoplasia. Curiosamente, la extensión de las criptas de Fuchs en el iris parece ser
correlacionado con la edad (Larsson y Pedersen, 2004). Esto sugiere que las criptas secundarias también pueden
forma debido al empuje y tirón de la pupila a lo largo del tiempo. Sin embargo, tanto primaria como
Las criptas secundarias son, en última instancia, un producto de la estabilidad general y la fuerza de las criptas anteriores.
capas (Purtscher, 1965).

Figura 11 Características superficiales del iris humano

Esta figura muestra la superficie de un iris humano típico. El iris se puede dividir en dos zonas que están
separadas por el collar (que se muestra en blanco). La zona pupilar es la región adyacente a la pupila y la zona ciliar
engloba el resto del iris. Hay una serie de elementos texturales que se pueden observar en la superficie del iris. Las
criptas de Fuchs son lagunas en forma de diamante. Los nódulos de Wolfflin son pequeños haces de colágeno
atrofiado. Los surcos de contracción son anillos discontinuos que se extienden alrededor del borde exterior de la
zona ciliar. Las manchas de pigmento son pequeñas acumulaciones de melanina.
Figura 12 Sección transversal del iris humano

El iris humano se compone de cinco capas distintas. La capa más posterior se conoce como epitelio
pigmentario del iris (IPE). Se trata de una capa densa en melanina que no varía mucho entre individuos.
Unidas al IPE hay dos capas de músculos, conocidas como músculo esfínter y músculo dilatador. Las capas
más anteriores son la capa estromal y la capa del borde anterior. La mayor parte de la variación en la
pigmentación del iris y la textura de la superficie entre individuos se puede atribuir a diferencias en estas dos capas.
Los surcos de contracción son anillos delgados que se extienden alrededor del borde exterior del iris. Ellos
Se parecen a las "arrugas" en la superficie del ojo y se forman por la contracción y dilatación de
el alumno (Eagle, 1988; Larsson et al., 2011). Aunque los surcos de contracción pueden extenderse alrededor
En todo el iris, cada surco individual rara vez mide más de un cuadrante (Eagle, 1988).
En consecuencia, los surcos a menudo parecen una serie de líneas discontinuas y escalonadas. muy poco es
Se sabe cómo los surcos de contracción afectan la estabilidad general y la organización del iris.
Sin embargo, es interesante observar que se han asociado surcos de contracción más extensos
con un iris periférico más grueso (Sidhartha et al., 2014a).
Los nódulos de Wolfflin son depósitos redondos de colágeno de color amarillo blanquecino que se distribuyen a lo largo
el borde periférico del iris (Donaldson, 1961; Sturm y Larsson, 2009; Williams, 1981).
Se forman a partir de restos de fibras de colágeno atrofiadas en el borde anterior y
capas estromales. Los nódulos de Wolfflin están fuertemente asociados con el color del iris. esto esta ejemplificado
particularmente bien en un estudio, que encontró que los nódulos de Wolfflin tenían una incidencia del 35% en
individuos de ojos azules y sólo el 13% en individuos de ojos marrones (Donaldson, 1961). A pesar de esto
Inicialmente se creyó que los nódulos de Wolfflin no están presentes en los iris más oscuros, en realidad son solo
oscurecido por el pigmento en la capa del borde anterior (Falls, 1970). Los nódulos de Wolfflin han recibido
mucha atención a lo largo de los años debido a su aparente similitud con una estructura del iris conocida como
Manchas de Brushfield. Las manchas de Brushfield se encuentran en más del 80% de los niños diagnosticados.
con síndrome de Down (Donaldson, 1961; Falls, 1970; Kim et al., 2002; Williams, 1981). Ellos
En apariencia, se parecen mucho a los nódulos de Wolfflin. Sin embargo, tienden a ser un poco más pequeños y
de forma más variable. Además, mientras que los nódulos de Wolfflin se encuentran cerca de la periferia de
En el iris, las manchas de Brushfield se distribuyen alrededor de la zona media.
Muchos iris muestran áreas pequeñas y discretas de pigmentación marrón en la superficie del iris. Estos
Las áreas se conocen como manchas de pigmento. Hay dos tipos diferentes de manchas de pigmento que son
comúnmente encontrados en los ojos humanos: nevos y pecas (Larsson et al., 2011; Rennie, 2012; Sturm
y Larsson, 2009). Los nevos tienen una prevalencia del 46% en individuos de ascendencia europea
(Harbour et al., 2004; Schwab et al., 2015). Tienen forma nodular y distorsionan la estructura subyacente.
capa estromal. Por el contrario, las pecas tienen una prevalencia del 4870% en las poblaciones europeas y
no tienen ningún efecto sobre la arquitectura estromal (Harbour et al., 2004; Reese, 1944). Ambos tipos de
Las manchas de pigmento aparecen por primera vez alrededor de los seis años y aumentan gradualmente en frecuencia con el tiempo.
(Larsson y Pedersen, 2004). Aunque los nevos y las pecas afectan la capa estromal del iris en
diferentes maneras, son muy difíciles de distinguir topográficamente. En consecuencia, a lo largo
En este trabajo utilizaré el término "mancha de pigmento" para referirme tanto a los nevos como a las pecas. Curiosamente,
A pesar de sus diferencias estructurales, los nevos y las pecas parecen tener un efecto fisiológico similar.
origen (Harbour et al., 2004). Esto se debe a que las personas con nevos también tienen muchas más probabilidades de
tener pecas.
1.2.2 Pigmentación del iris

Los ojos se pigmentan debido a la presencia de un polímero conocido como melanina. Inhumanos,
Hay dos tipos de melanina que contribuyen a la variación normal del color: eumelanina y
feomelanina. La eumelanina es un pigmento negro parduzco oscuro que se encuentra en grandes cantidades en
piel, cabello y ojos oscuros (Hu et al., 2009; Prota et al., 1998; Wakamatsu et al., 2008). A diferencia de,
La feomelanina es un pigmento de color amarillo rojizo que se encuentra en proporciones más altas en la piel clara, el cabello y la piel.
ojos. Además de su color, existen una serie de propiedades bioquímicas que diferencian
eumelanina y feomelanina (Menon et al., 1987; Samokhvalov et al., 2005). El de Eumelan es
fotoprotector y antioxidante. Por el contrario, la feomelanina es fotorreactiva y oxidativa. Este
significa que la eumelanina protege más contra los efectos dañinos de la radiación ultravioleta.
La melanina se sintetiza en orgánulos especializados conocidos como melanosomas, que son
ubicado en células llamadas melanocitos (Eagle, 1988). Los melanocitos y los melanosomas son ambos.
Distribuido en las tres capas no musculares del iris. Sin embargo, toman una forma diferente
se forman en cada una de las capas. Los melanosomas en el epitelio pigmentario del iris son grandes, esféricos y
made up primarily of eumelanin (Imesch et al., 1996; Peles et al., 2009; Prota et al., 1998).
Curiosamente, la cantidad de melanina en el epitelio pigmentario del iris parece mostrar poca
variación entre individuos, independientemente del color de ojos (Imesch et al., 1996). En contraste, el
Los melanosomas de las capas anterior y estromal son mucho más pequeños y tienen forma ovoide (Eagle, 1988;
Peles et al., 2009).
La síntesis de feomelanina y eumelanina comienza con la hidroxilación de L
tirosina a Ldopa y la oxidación de Ldopa a Ldopaquinona (revisado en Sturm y
Frudakis, 2004). Estos pasos son catalizados por la enzima tirosinasa (TYR). Después de estos iniciales
pasos, la Ldopaquinona se puede convertir en ciclodopa (en el caso de eumelanina
producción) o cisteinildopa (en el caso de la producción de feomelanina) dependiendo de cuál de los dos
Se activan vías moleculares divergentes. Un receptor unido a membrana, conocido como MC1R, es el
interruptor de control primario entre la síntesis de feomelanina y eumelanina. Cuando MC1R se une a
agonista αMSH (la hormona estimulante de los melanocitos alfa), niveles de AMPc dentro del
Aumenta el melanosoma y se estimula la producción de eumelanina. Si MC1R se une a un antagonista
conocida como proteína de señalización agouti (ASIP), o si αMSH no está disponible, feomelanina
comienza la síntesis. Se ha sugerido que la feomelanina se crea preferentemente sobre la eumelanina.
cuando los compuestos correctos están disponibles (Peles et al., 2009). En consecuencia, la mayor parte de la melanina toma
la forma de un bipolímero con una capa eumelanica que cubre un núcleo feomelanico.
Además de las proteínas y genes que intervienen directamente en la melanogénesis
En esta vía hay muchos otros genes e interacciones gengen que desempeñan un papel en la síntesis.
de melanina (Parra, 2007; Sturm y Frudakis, 2004). Un gran número de transportadores de membrana.
(es decir, OCA2, MATP/SLC25A4 y SLC24A4) son necesarios para mantener niveles iónicos adecuados.
condiciones y transporte de sustratos hacia los melanosomas. Se necesita TYRP1 para estabilizar el TYR
proteína y mantienen la estructura del melanosoma y los factores de transcripción (es decir, IRF4, MITF) regulan
la expresión de los diferentes componentes de la vía.
1.3 Factores que influyen en la variación de la pigmentación del iris

El factor principal que controla la diversidad de la pigmentación del iris es la cantidad y el tipo de
melanina en el iris. Múltiples estudios han encontrado que los ojos de colores más oscuros tienen niveles mucho más altos
concentraciones de melanina que los ojos de colores más claros (Hu et al., 2009; Prota et al., 1998; Wielgus
y Sarna, 2005). La proporción de eumelanina a feomelanina también influye. La mayoría de los ojos parecen estar
principalmente de naturaleza eumelanica y contienen sólo trazas de feomelanina. De hecho,
La feomelanina muestra concentraciones aproximadamente similares tanto en ojos azules como marrones (Wielgus y
Sarna, 2005). Los ojos verdes, sin embargo, son únicos porque contienen concentraciones más altas de
feomelanina y concentraciones muy bajas de eumelanina (Prota et al., 1998).
Aunque gran parte de la pigmentación del iris puede explicarse por la composición de melanina del
iris, existen otros procesos fisiológicos, bioquímicos y demográficos que también deben ser
consideró. Esto es particularmente notable cuando se observan iris intermedios, que muestran
concentraciones de melanina que no parecen correlacionarse muy fuertemente con el color (Prota et al.,
1998; Wielgus y Sarna, 2005). Otros factores contribuyentes pueden incluir la estructura de la
10
borde anterior y capas estromales, la distribución de melanosomas en el iris, la presencia de
características de la superficie del iris y etapa de la vida.
Curiosamente, los ojos de color azul claro pueden contener hasta un 40% más de melanina que los de color azul oscuro.
ojos (Wielgus y Sarna, 2005). Hay varias explicaciones para este hallazgo. color de ojos azules
Es principalmente el producto de la luz que entra en la capa estromal del ojo pobre en melanina y rebota.
contra las fibras de colágeno (Mackey et al., 2011; Rennie, 2012; Sturm y Larsson, 2009). Por lo tanto, la
El grosor del estroma, así como el orden de las fibras de colágeno, pueden influir en la intensidad.
de azul que se refleja de vuelta. La distribución de los melanosomas a lo largo de la capa anterior del iris.
también puede desempeñar algún papel (Baranoski y Lam, 2007). Las simulaciones por computadora han encontrado que
Los ojos marrones tienden a ser más oscuros cuando la mayor parte de la melanina está presente en la capa del borde anterior (como
opuesto a la capa estromal). Por el contrario, los ojos azules tienden a ser más oscuros cuando la mayor parte de la melanina
Está presente en la capa estromal. Por lo tanto, es muy importante considerar la estructura general de la
iris al investigar la variación del color de los ojos.
La presencia o ausencia de características superficiales también influye en la diversidad de la pigmentación del iris.
Muchas personas muestran una variación sustancial de color dentro del ojo. La forma más común de
Esta es la heterocromía central, donde la zona pupilar tiene un color diferente al de la zona ciliar.
(Bond, 1913; Gladstone, 1969; Rennie, 2012). La heterocromía central puede influir mucho
Color de ojos percibido. Cuando estaba recopilando datos para esta tesis, varios participantes que
Creían que tenían ojos verdes en realidad tenían ojos azules con un anillo marrón rodeando la pupila. El
Los factores genéticos y fisiológicos que controlan la heterocromía central aún se desconocen en gran medida.
Sin embargo, esta condición puede resultar de diferencias en el grosor de las capas ciliar y pupilar.
zonas (Imesch et al., 1996). Alternativamente, puede estar controlado por variantes genéticas que determinan
donde se coloca el pigmento en el iris (Larsson et al., 2011). Aunque la heterocromía central puede ser
la característica más visible de la superficie del iris, la presencia de criptas de Fuchs, manchas de pigmento y la posición
También se ha descubierto que el color del collar influye en la percepción del color de ojos (Mackey et al., 2011).
Por último, el color del iris se ha asociado tentativamente con factores demográficos, como la edad y
sexo. Un estudio que siguió a gemelos monocigóticos y dicigóticos desde la niñez hasta la edad adulta señaló
que el 17% de los gemelos mostraron un cambio en el color del iris con la edad (Bito et al., 1997). Antes de la edad de
seis, el color de ojos era más probable que se oscureciera. Sin embargo, después de los seis años, los ojos oscuros tendían a
se volvieron más claros y los ojos claros tendieron a volverse más oscuros. Estos cambios parecen ser genéticos, ya que
era más probable que el color de ojos de los gemelos monocigóticos cambiara en la misma dirección.
11
Curiosamente, los cambios en el color de los ojos también se observan en adultos mayores (Bito et al., 1997; Taylor, 1967).
Sin embargo, en este grupo de edad, los ojos tienden a aclararse. Esto puede ser producto de factores relacionados con la edad.
degeneración de la melanina. Existe cierta evidencia de que el sexo también puede influir en el color del iris.
variación. Dos estudios de investigación recientes que utilizaron conjuntos de muestras italianos y españoles encontraron que los hombres
eran más propensos a tener ojos azules y las mujeres tenían más probabilidades de tener ojos marrones/intermedios.
ojos (MartínezCadenas et al., 2013; Pietroni et al., 2014). Sin embargo, este hallazgo no fue
replicado en muestras danesas o suecas (Pietroni et al., 2014). En consecuencia, la asociación
entre el color de ojos y el sexo puede estar restringido en gran medida a las poblaciones mediterráneas.
1.4 Base genética de la pigmentación del iris

El color de los ojos humanos tiene una heredabilidad muy alta (~98%) (Larsson y Pedersen, 2004).
Esto significa que la mayor parte de la diversidad observada en este rasgo puede explicarse por la variación en la
Genoma humano. En la actualidad, se han identificado un gran número de polimorfismos en Europa.
poblaciones que se cree que desempeñan algún papel en la determinación del color de ojos.
Sorprendentemente, la gran mayoría de la diversidad de pigmentación del iris se ha atribuido a una
locus único conocido como rs12913832 (Eiberg et al., 2008; Kayser et al., 2008; Sturm et al., 2008).
Se cree que este marcador, que se encuentra en el intrón 86 del gen HERC2, es responsable de
Determinar la diferencia entre ojos marrones y azules. Esta variante puede llevar un
alelo adenina (A) o guanina (G). El alelo 'A' está presente en frecuencias muy altas en
poblaciones de ascendencia no europea y se ha asociado con el color marrón del iris. En
Por el contrario, el alelo 'G' se encuentra con frecuencias muy altas en poblaciones europeas y ha sido
asociado con el color azul del iris. Tradicionalmente se ha creído que este marcador opera de forma
manera dominante/recesiva; Los individuos que son homocigotos para el alelo 'G' tienen ojos azules.
y los individuos que son heterocigotos u homocigotos para el alelo 'A' tienen ojos marrones. Uno
El grupo de investigación encontró que los individuos que tenían el genotipo G/G solo tenían un 1% de probabilidad de
tener ojos marrones (Sturm et al., 2008). Asimismo, los individuos que tenían el genotipo A/A tenían una
80% de probabilidad de tener ojos marrones. Un estudio similar encontró que el 98,3% de las personas con azul
los ojos eran homocigotos para el alelo derivado (MengelFrom et al., 2010).
HERC2 rs12913832 está ubicado en una región altamente conservada del genoma que contiene
sitios de unión para muchas proteínas reguladoras importantes (Sturm et al., 2008; Visser et al., 2012). El
12
El marcador en sí se encuentra en medio de un sitio de unión para el factor de transcripción similar a la helicasa.
(HLTF), que remodela la estructura de la cromatina alrededor de los genes. Como HERC2 no parece
desempeñar algún papel directo en la vía de pigmentación, es poco probable que el gen en sí se vea afectado por
la mutación. Más bien, HERC2 rs12913832 puede influir en la regulación de los alrededores
gen de pigmentación, OCA2. Cuando el alelo ancestral 'A' está presente, HLTF puede unirse a este
región y comenzar a desenrollar la estructura de la cromatina. Esto expone los sitios a otras regulaciones.
Proteínas que promueven la transcripción de OCA2. Por el contrario, cuando el alelo derivado está presente,
el sitio de unión de HLTF está alterado. Como resultado, menos proteínas reguladoras pueden acceder
esta región y la transcripción de OCA2 se reducen considerablemente. Esta hipótesis ha sido apoyada por un
estudio de investigación reciente que observó enlaces cruzados entre HERC2 rs12913832 y OCA2
(Visser et al., 2012).
Aunque HERC2 rs12913832 puede desempeñar el papel principal en el control de la diferencia
entre el color del iris azul y marrón, la falta de concordancia completa entre HERC2 y el iris
La pigmentación sugiere que muchos otros marcadores también pueden estar involucrados. Hasta el momento, una serie de
Se han identificado variantes que se cree que desempeñan un papel más sutil en la diversidad del color del iris.
Poblaciones europeas. A continuación se puede encontrar una revisión de estos marcadores:
I.ASIP . Este gen contiene un polimorfismo conocido como rs6058017 que da como resultado la
intercambio de un alelo 'G' por un alelo 'A' en la UTR 3' del exón 4. Se ha sugerido
que esta variante puede tener un impacto negativo en la estabilidad general del ARNm, provocando la
transcripción se degrade prematuramente (Kanetsky et al., 2002). El papel que juega este marcador.
en la pigmentación del iris todavía es objeto de intenso debate. Algunos estudios iniciales sobre pigmentación encontraron
que el alelo 'G' derivado se asoció significativamente con piel, ojos y cabello más oscuros
(Bonilla et al., 2005; Kanetsky et al., 2002). Sin embargo, estos resultados no han sido
replicado consistentemente (Frudakis et al., 2003; Liu et al., 2010).
II. IRF4. El marcador rs12203592 se ha asociado con la variación de la pigmentación del iris en
múltiples estudios (Han et al., 2008; Liu et al., 2010). El alelo ancestral de la citosina (C)
parece estar asociado con un color de piel, cabello y ojos más oscuros. No se sabe mucho sobre
cómo funciona este marcador. Sin embargo, el alelo derivado de timina (T) tiene una muy alta
frecuencia en las poblaciones irlandesas. Esto ha llevado a algunos investigadores a sugerir que esta variante
puede desempeñar un papel en la generación del conjunto de características de pigmentación (es decir, pelo rojo, verde
13
ojos, piel clara) que se observa comúnmente en esta región del mundo (Walsh et al.,
2012).
III. OCA2. Aunque se han identificado muchas variantes en OCA2, solo existe un marcador
que se ha asociado consistentemente con la variación de la pigmentación del iris. OCA2 rs1800407 es
una mutación no sinónima que resulta en la sustitución de una arginina por una glutamina
en la posición 419 de la proteína. Este marcador está asociado con la penetrancia de
color de ojos avellana/verde cuando HERC2 rs12913832 es heterocigoto u homocigoto
para el alelo ancestral 'A' (MengelFrom et al., 2010; Sturm et al., 2008). Notablemente,
aunque OCA2 rs1800407 tiene una frecuencia muy baja en todas las poblaciones humanas, tiene una
efecto relativamente fuerte sobre el color del iris. Este marcador es actualmente el segundo más fuerte.
predictor de la diversidad de pigmentación del iris en poblaciones europeas (Walsh et al., 2012).
IV. SLC24A4. El marcador rs12896399 se ha asociado con la variación de la pigmentación del iris.
en múltiples estudios de investigación. Un estudio encontró que esta variante estaba asociada con la
diferencia entre el color de ojos azules y verdes (Sulem et al., 2007). Un segundo lo encontró
estar asociado positivamente con el tono y la saturación del iris (Liu et al., 2010). A pesar de
No se sabe mucho sobre rs12896399, este marcador puede caer en medio de un
sitio de unión del factor de transcripción (Hart et al., 2013). Curiosamente, un estudio reciente señaló que
este marcador también puede estar asociado con heterocromía central (Larsson et al., 2011).
Por lo tanto, rs16891982 en realidad puede funcionar determinando dónde se coloca el pigmento en
el ojo.
V. SLC24A5. Actualmente se cree que el marcador rs1426654 es uno de los principales
polimorfismos responsables del aclaramiento de la pigmentación de la piel en poblaciones de
ascendencia europea (Lamason et al., 2005). Este marcador codifica para un no sinónimo
Mutación que resulta en la sustitución de una treonina por una alanina en la posición 111 del
proteína. El alelo derivado se ha fijado en gran medida en las poblaciones europeas. Por lo tanto,
Es difícil probar la asociación entre esta variante y el color del iris. Sin embargo, recientes
Los estudios en una población mixta de Cabo Verde y una población italiana sugieren que
rs1426654 puede contribuir en gran medida a la diversidad del color de ojos (Beleza et al., 2013;
Pietroni et al., 2014).
VI. SLC45A2. Se cree que un marcador en este gen conocido como rs16891982 ha desempeñado un papel importante
papel en la evolución de la pigmentación clara de la piel en poblaciones europeas (Graf et al., 2005).
14
Este es un polimorfismo no sinónimo que resulta en la sustitución de una leucina por una
fenilalanina en la posición 374 de la proteína. El alelo derivado ha sido fuertemente
asociado con el color claro de ojos y cabello en múltiples estudios de pigmentación (Graf et al.,
2005; Liu et al., 2010).
VII. TYR. Dos variantes de este gen, rs1393350 y rs1126809, se han asociado con el iris.
variación de la pigmentación en múltiples estudios de pigmentación (Liu et al., 2010; Sulem et al.,
2007). Ambos marcadores se encuentran muy juntos en el genoma y están en
fuerte desequilibrio de ligamiento. Por lo tanto, es probable que tengan el mismo efecto en los ojos.
variación de color. Lo más probable es que TYR rs1126809 sea la variante causante, ya que no es una
mutación sinónima que resulta en la sustitución de una arginina por una glutamina en
posición 402 de la proteína (Sulem et al., 2007). Curiosamente, aunque ninguno de estos
variantes muestran señales de selección positiva, se limitan en gran medida a los europeos.
poblaciones.
VIII. TYRP1. Una variante de este gen, conocida como rs1408799, se ha asociado significativamente
con variación del color del iris en varios estudios de investigación. Un estudio encontró que este marcador
se asoció con la diferencia entre ojos azules y no azules (Frudakis et al.,
2003). Un segundo descubrió que desempeñaba un papel en el control del tono y la saturación del iris.
(Liu et al., 2010). TYRP1 rs1408799 muestra fuertes señales de selección positiva en
Poblaciones europeas (Myles et al., 2006). Sin embargo, su función aún es en gran parte desconocida.
IX. Otros genes. Un estudio reciente de asociación de todo el genoma sobre el color cuantitativo del iris
La variación identificó varios marcadores nuevos que pueden contribuir a la diversidad del color de ojos (Liu
et al., 2010). Estos incluyen rs7277820 en DSCR9, rs3768056 en LYST y rs9894429 en
NPLOC4. Sin embargo, estos marcadores aún no se han replicado en ningún estudio adicional.
Curiosamente, ninguno de estos genes parece estar directamente implicado en la pigmentación.
ruta. Más bien, pueden desempeñar algún papel en la regulación de la estructura y función generales.
del iris.
1.5 Base genética de las características de la superficie del iris
La heredabilidad de las criptas de Fuchs (66%), los surcos de contracción (78%), los nódulos de Wolfflin.
(78%) y las manchas pigmentarias (58%) es moderadamente alta (Larsson y Pedersen, 2004). Sin embargo, en
15
En la actualidad, la base genética de estos rasgos aún no se conoce muy bien. Hasta el momento, sólo uno
El grupo de investigación ha intentado identificar las variantes en el genoma humano que están directamente
asociado con la diversidad de características de la superficie del iris (Larsson et al., 2011; Sturm y Larsson, 2009). Él
Parece que los marcadores que determinan la estructura del iris pueden ser muy diferentes de los que
determinar el color de ojos (Larsson et al., 2011). Mientras que la mayoría de los genes asociados con el iris
código de pigmentación para proteínas directamente involucradas en la vía de la melanogénesis, los marcadores
que se han asociado con las características de la superficie del iris son los principales responsables de la
embriogénesis y desarrollo del ojo.
Una variante conocida como rs10235789 en el gen SEMA3A ha sido la más fuerte
asociado con las criptas de Fuchs (Larsson et al., 2011). Este marcador, que fue identificado en un
La población australiana de ascendencia europea parece explicar aproximadamente el 1,5% de la
variación general en este rasgo. Se ha sugerido que el alelo 'C' derivado puede afectar negativamente
afectar la estabilidad general de las capas anteriores del iris, lo que lleva a una mayor frecuencia de
criptas. La variante rs3739070 en TRAF3IP1 se ha asociado fuertemente con la contracción
surcos (Larsson et al., 2011). Esta variante, que explica alrededor del 1,7% de la variación en
Los surcos pueden estar relacionados con el grosor y la densidad general del iris. Por último, el polimorfismo
rs11630290 en HERC1 se ha asociado con la presencia de manchas de pigmento (Larsson et al.,
2011). Aunque la función de HERC1 se desconoce en gran medida, puede desempeñar algún papel en la membrana.
transporte.
Durante mucho tiempo se ha sugerido que la Región Crítica del Síndrome de Down (DSCR) del
El genoma puede contener las variantes genéticas responsables de los nódulos de Wolfflin (Sturm y Larsson,
2009). Esto se debe en gran medida a la similitud percibida entre los nódulos de Wolfflin y
Manchas de Brushfield. Curiosamente, en un estudio reciente de asociación de todo el genoma sobre el color del iris
variación, una variante conocida como rs7277820 en DSCR9 se asoció significativamente con múltiples iris
características de color (Liu et al., 2010). Se sugirió que esta variante podría modular el iris.
pigmentación controlando la presencia y extensión de los nódulos de Wolfflin en el ojo. Sin embargo,
aún no se ha probado la relación entre DSCR9 rs7277820 y los nódulos de Wolfflin.
En la actualidad, la base genética de las características de la superficie del iris aún no se conoce muy bien. El
Los marcadores genéticos que se han identificado hasta ahora explican un porcentaje muy pequeño del total.
variación en estos rasgos. Dada la moderada heredabilidad de las cuatro características del iris, existen
Probablemente haya muchos marcadores aún no identificados involucrados.

dieciséis
1.6 Limitaciones en nuestra comprensión del color y la textura del iris

Variación
Aunque tanto el color del iris como la variación de la estructura han comenzado a recibir mucha atención
Durante la última década, todavía existen muchas lagunas y limitaciones en nuestra comprensión de estos
rasgos. La más importante de estas limitaciones surge de las dificultades asociadas con la obtención
mediciones cuantitativas del color del iris, las complejidades de caracterizar el centro
heterocromía, y los limitados grupos poblacionales que tradicionalmente se han estudiado.
1.6.1 Caracterización del color del iris y la variación de las características de la superficie
El color de la piel y el color del cabello se han medido convencionalmente utilizando una técnica conocida
como espectroscopia de reflectancia (revisada en Shriver y Parra, 2000). La espectroscopia implica
hacer brillar luz a una longitud de onda particular sobre la piel o el cabello y medir la cantidad de luz
eso se refleja de vuelta. Debido a la naturaleza del ojo, la espectroscopia no se puede utilizar en el iris.
En consecuencia, los primeros estudios sobre la pigmentación del iris optaron por caracterizar el color del iris utilizando conjuntos de
discrete categories (i.e. blue, green, brown) [Frudakis et al., 2003; Graf et al., 2005; Mengel
De et al., 2009; Rebbeck et al., 2002; Sulem et al., 2007]. Una clasificación tan categórica
Los métodos tienen severas limitaciones. El color del iris es un rasgo innatamente cuantitativo. Aunque discreto
categorías pueden capturar grandes diferencias en el color del iris (es decir, azul versus marrón), no pueden
Capture toda la gama de variaciones del color de ojos. Además, no ha habido un consenso formal sobre
¿Cuántas categorías se deben utilizar? Algunos estudios de investigación utilizan tan solo tres categorías, mientras que
otros usan hasta ocho. Por lo tanto, no es sorprendente que la confiabilidad inter e intraobservador
de métodos categóricos no es muy alto (Frudakis et al., 2003; Seddon et al., 1990).
Durante la última década, varios grupos de investigación han comenzado a desarrollar métodos cuantitativos.
Métodos para medir el color del iris. Liu y cols. (2010) diseñaron un sistema automatizado para extraer el tono.
y valores de saturación de fotografías del iris. La saturación se utilizó para representar la cantidad.
de melanina en el ojo y se utilizó el tono para representar el tipo. Beleza et al. (2013) extrajo RGB
valores de fotografías digitales del ojo. Usaron el término 'índice T' para describir el
Distribución de iris en el espacio de color RGB. Más recientemente, Andersen et al. (2013)
extrajo automáticamente una puntuación del índice de píxeles del ojo (PIE) de fotografías del ojo. Este
La puntuación, que oscila entre 1 y 1, se calcula comparando el número de píxeles etiquetados en azul.
17
con el número de píxeles etiquetados en marrón. Estos métodos cuantitativos ofrecen numerosas ventajas.
Por un lado, son capaces de detectar variaciones mucho más sutiles en la variación de la pigmentación. Como un
Como resultado, han tenido mucho éxito en la identificación de varias de las variantes genéticas que desempeñan un papel
papel menor en el control de la variación del color del iris. Además, permiten a los investigadores acercarse
el estudio del color del iris en poblaciones con ojos de colores más homogéneos.
La distribución de las características de la superficie del iris también es notablemente compleja. Las criptas de Fuchs varían
considerablemente en número, forma y tamaño. Algunos ojos muestran muchos ojos claros y bien delimitados.
criptas, mientras que otros muestran criptas indistintas y escasamente distribuidas. Tampoco es raro
que un iris esté completamente desprovisto de criptas, o que solo muestre pequeñas criptas de forma bulbosa dispersas
alrededor del cuello. Las manchas de pigmento pueden ser grandes o pequeñas. Se diferencian mucho en color y
Puede variar desde marrón amarillento claro hasta negro pardusco oscuro. Algunas manchas de pigmento se muestran claras.
límites, mientras que otros no están muy bien definidos. Los surcos de contracción pueden extenderse alrededor
todo el iris o restringirse a cuadrantes particulares del ojo. Algunos ojos muestran numerosos estratos.
de surcos, mientras que otros tienen sólo uno o dos. Los nódulos de Wolfflin difieren entre individuos en
tanto en número como en tamaño y color. Algunos iris muestran nódulos grandes, mientras que otros ojos muestran
numerosos y pequeños nódulos. En algunos ojos son de un blanco pálido, mientras que en otros parecen
naranja o amarillo.
Debido a la amplia diversidad inherente a las características de la superficie del iris, tradicionalmente se ha
Es muy difícil caracterizar estos rasgos. En consecuencia, la mayoría de los grupos de investigación han utilizado
Esquema categórico que intenta capturar las propiedades más importantes de las características de la superficie.
variación. Sin embargo, ha habido muy poca estandarización entre estos métodos. Investigación
Los estudios han utilizado entre tres y siete categorías para caracterizar la textura del iris.
(Larsson et al., 2011; Quillen et al., 2011; Sidhartha et al., 2014a). Lo que esto significa es que el
Los resultados obtenidos de diferentes grupos no son comparables. En consecuencia, la frecuencia general
y la distribución de estos rasgos aún no se comprende bien.
1.6.2 Caracterización de la heterocromía central

La heterocromía central ha sido hasta ahora una de las áreas del iris menos estudiadas.
investigación. Por lo tanto, no es sorprendente que actualmente sepamos muy poco sobre la base genética y
Distribución global de este rasgo.

18
Los primeros métodos categóricos tendían a agrupar los iris que mostraban evidencia de heterocromía.
en una amplia categoría "intermedia" (Graf et al., 2005; Rebbeck et al., 2002; Sulem et al., 2007).
Cuando la heterocromía se estudió por sí sola, se caracterizó mediante una "presencia" o "ausencia".
esquema (Larsson et al., 2011). Sin embargo, esto simplifica enormemente la variación general presente en
iris heterocromáticos. Algunos iris con heterocromía muestran una gran diferencia de color entre
las zonas ciliar y pupilar, mientras que otras muestran una diferencia mucho más sutil. igual que el iris
La variación de la pigmentación es cuantitativa, al igual que la variación heterocromática. Cuantitativo actual
Los métodos no han mejorado el estudio de la heterocromía central. Aunque tales métodos son
capaces de captar diferencias sutiles de color, tienden a utilizar un único valor "promedio" para
capturar el color de los ojos. Esto significa que un iris que sea uniformemente verde podría dar el mismo promedio
valor de color como un iris azul con un anillo heterocromático.
Las dificultades asociadas con la medición de la heterocromía central en el iris han tenido un impacto
impacto significativo en nuestra comprensión general de la variación del color del iris. En la actualidad, una serie de
grupos forenses han desarrollado algoritmos que se pueden utilizar para predecir el color de ojos a partir de pequeños
samples of DNA (Hart et al., 2013; Spichenok et al., 2011; Walsh et al., 2012). The most well
El conocido de estos algoritmos es quizás IrisPlex, que utiliza seis SNP (HERC2 rs12913832,
SLC45A2 rs16891982, IRF4 rs12203592, OCA2 rs1800407, SLC24A4 rs12896399, TYR
rs1393350) para diferenciar entre el color de ojos azul, marrón o intermedio/verde (Walsh et al.,
2012). Aunque se ha descubierto que IrisPlex funciona bien en poblaciones con una alta frecuencia de
ojos azules o marrones, le va mal en poblaciones con una alta frecuencia de ojos intermedios. en un
muestra de 803 individuos de ascendencia mixta de la ciudad de Nueva York, IrisPlex mostró 209
resultados no concluyentes y 135 errores (Pneuman et al., 2012). Está claro que necesitamos desarrollar más
métodos efectivos para caracterizar la heterocromía central.
1.6.3 Variación de la población

Una de las mayores lagunas en nuestra comprensión actual de la variación del color del iris es la falta de
atención que se ha dedicado a las poblaciones de ascendencia no europea. Aunque ojo marrón
El color puede predominar en regiones fuera del norte de Europa, todavía existe una variación sustancial.
dentro de estos marrones. De hecho, el color marrón del iris puede variar desde amarillo rojizo claro hasta oscuro.
negros parduscos. La falta de investigaciones realizadas fuera de las poblaciones europeas puede deberse
en gran parte debido a los métodos categóricos que se han utilizado tradicionalmente para caracterizar el color del iris.
19
Como estos métodos sólo pueden detectar grandes diferencias en el color de los ojos, son en gran medida ineficaces en
poblaciones con iris de colores más homogéneos. Sin embargo, incluso con la llegada de nuevos
metodologías cuantitativas, ha habido una notable falta de investigación realizada en
poblaciones de ascendencia no europea.
Esta escasez de investigación es problemática por varias razones. En primer lugar, puede haber
muchas variantes genéticas asociadas con la variación de la pigmentación del iris que no se pueden identificar en
Poblaciones europeas. Estas variantes pueden estar fijadas en Europa o no estar presentes en absoluto. En
Además, como el tamaño de la muestra de ojos marrones es moderadamente bajo en el norte de Europa, puede ser más
Es difícil detectar variantes que desempeñen un papel en el control del color marrón del iris. La falta de iris
La investigación sobre la pigmentación fuera de Europa también significa que tenemos una comprensión muy pobre de
la distribución del color del iris en estas regiones. El color del iris en poblaciones no europeas es
normalmente se describe utilizando el término general "marrón". Sin embargo, ¿es posible que la sombra y
¿La intensidad de estos marrones puede diferir de una población a otra? ¿Es el color del iris marrón?
Se encuentra en poblaciones del sur de Asia del mismo modo que el color del iris marrón se encuentra en el este de Asia.
poblaciones? ¿Las variantes genéticas que controlan la variación del color del iris marrón son las mismas en todos los casos?
poblaciones? Son preguntas que todavía no podemos responder. Finalmente, es muy difícil
rastrear la historia evolutiva de un rasgo cuando sólo conocemos la base genética de ese rasgo en un
región particular del mundo. Por el momento, los factores evolutivos que impulsaron la evolución
de color de ojos claros no se comprenden bien. Observando la distribución de variantes genéticas.
asociado con la pigmentación del iris en otras poblaciones puede proporcionar algunas ideas sobre la
evolución de este rasgo.
A diferencia de la investigación sobre el color del iris, ha habido algunos intentos de comprender el color del iris.
Diversidad estructural en diferentes poblaciones. En la actualidad se han realizado amplios estudios
realizado en poblaciones de Asia Oriental, Europa, Portugal, Brasil y Cabo Verde
(Larsson y Pedersen, 2004; Larsson et al., 2011; Quillen et al., 2011; Sidhartha et al., 2014a,
2014a). Sin embargo, todos estos estudios han limitado su trabajo a un continente en particular. Como cada
El grupo de investigación clasificó la variación de la estructura del iris de manera diferente, todavía no podemos comparar la
Distribución fenotípica de estos rasgos en diferentes regiones continentales del mundo. hay algunos
evidencia de que la distribución de las características texturales del iris puede ser específica de la población (Qiu
et al., 2005; Quillen et al., 2011). Sin embargo, hasta que se comparen diferentes grupos ancestrales utilizando
20
Con la misma metodología, no podremos comprender completamente la distribución global de estos
rasgos.
1.7 Justificación y objetivos del estudio

Desarrollar una mejor comprensión del color del iris y las características de la superficie contribuirá
en gran medida a los campos de la medicina forense, la antropología y la salud pública. En la actualidad, muchos forenses
Los grupos están desarrollando algoritmos predictores de pigmentación. El objetivo principal de estos
algoritmos es permitir a los investigadores de la escena del crimen reconstruir el color de cabello, piel y ojos de
individuos no identificados a partir de pequeñas muestras de su ADN. IrisPlex, que se analizó brevemente
en la sección anterior, es quizás el más conocido de estos sistemas (Walsh et al., 2012).
Sin embargo, también se han propuesto otros algoritmos que se basan en diferentes conjuntos de variantes genéticas.
(Hart et al., 2013; Spichenok et al., 2011). El uso de ecuaciones predictivas del color del iris se ha
alcanzando efectos fuera del campo de la medicina forense. Los antropólogos y los biólogos moleculares son
Ahora podemos reconstruir las características de pigmentación de los primeros humanos y sus antepasados.
Por ejemplo, se han utilizado variantes genéticas en el gen MC1R para demostrar que los neandertales eran más
probablemente tenía cabello rojo y piel pálida (LaluezaFox et al., 2007). Asimismo, HERC2 rs12913832, el
polimorfismo que controla la diferencia entre ojos azules y marrones, se ha utilizado para
predecir el color del iris de restos esqueléticos antiguos (Keyser et al., 2009; Olalde et al., 2014). Semejante
En última instancia, la investigación nos proporcionará información importante sobre la evolución y las primeras etapas.
Historia migratoria de las poblaciones humanas.
Aparte de los beneficios antropológicos y forenses, existe cierta evidencia de que tanto el iris
El color y la estructura pueden influir en la salud y el bienestar individual. Mucho de
Los marcadores asociados con la variación del color del iris también se han asociado con un mayor riesgo de
carcinoma de células basales, carcinoma de células escamosas y/o melanoma (Gudbjartsson et al., 2008;
Nan et al., 2009b). Comprender cómo funcionan estos marcadores puede proporcionar información importante
información sobre la distribución y prevalencia de dichos carcinomas en diferentes países del mundo.
poblaciones. De manera similar, parece haber una asociación entre varios trastornos oculares y
color de ojos. Dentro de las poblaciones, por ejemplo, los individuos con iris de colores más claros son más
probabilidades de desarrollar degeneración macular relacionada con la edad (DMAE) que las personas con color más oscuro
iris (Frank et al., 2000; Wakamatsu et al., 2008). Las características superficiales que se encuentran en el iris pueden
21
También sirven como importantes indicadores de riesgo de una serie de enfermedades y trastornos. Dos estudios recientes
en una población de Malasia que vive en Singapur encontró que los grados crecientes de las criptas de Fuchs son
asociado con un iris más delgado y un cierre de ángulo más amplio y surcos de contracción más extendidos
están asociados con un iris periférico más grueso (Sidhartha et al., 2014a, 2014b). Como el espesor del iris y
El cierre del ángulo están relacionados con una serie de trastornos oculares, el uso de fotografías para predecir
Estos rasgos pueden representar una forma rentable de evaluar la estructura general del iris.
Está claro que el color y la estructura del iris tienen el potencial de contribuir en gran medida a una serie de
de diferentes campos. Sin embargo, no podemos utilizar plenamente estos rasgos hasta que superemos algunos de los
numerosas limitaciones en estos campos. ¿Cómo medimos cuantitativamente el color del iris? Cómo podemos
¿Tiene en cuenta la heterocromía central al utilizar tales métodos cuantitativos? ¿Qué categorías
¿Caracterizar mejor la estructura del iris en las poblaciones globales? ¿En qué medida los genes implicados
¿En qué se superponen las variaciones de color y textura del iris en diferentes poblaciones? Haga las características de la superficie en
¿El iris muestra las mismas frecuencias en poblaciones de diferente ascendencia? Estas son preguntas que
Es necesario responder antes de que podamos comenzar a comprender completamente los eventos evolutivos que llevaron a
la variación del color del iris que vemos en el mundo hoy. Con eso en mente, mi investigación tiene seis
objetivos específicos:
1) Desarrollar un método cuantitativo para medir el color del iris a partir de imágenes de alta resolución.
fotografías
2) Desarrollar un método cuantitativo para investigar la heterocromía central.
3) Desarrollar un método categórico para caracterizar las criptas de Fuchs, surcos de contracción,
Nódulos de Wolfflin y manchas pigmentarias de fotografías de alta resolución del iris
4) Observar la distribución fenotípica tanto del color del iris como de las características de la superficie en
Poblaciones de ascendencia de Asia oriental, Europa y Asia meridional.
5) Observar la asociación entre supuestos marcadores genéticos y el color y la textura del iris.
variación en poblaciones de ascendencia de Asia oriental, Europa y Asia meridional
En resumen, esta investigación analizará la distribución y la base genética del color del iris y
variación de las características de la superficie en tres poblaciones diferentes. También proporcionará a otros investigadores
con una metodología que pueden utilizar para observar el color y la estructura del iris en su propia muestra
conjuntos. Esto tendrá muchos beneficios para los campos de la ciencia forense, la antropología y la salud pública.
22
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Medidas cuantitativas del color del iris utilizando alta
Fotografías en resolución
Contribuciones del autor: EJ Parra y yo diseñamos este proyecto. A. Gozdzik llevó a cabo el
reclutamiento de participantes y la recopilación de datos. J. Miles creó la macro que recortaba
automáticamente un cuadrado de cada fotografía del iris. Preparé las muestras para el genotipado con la ayuda de K.
Ross. Preparé las fotografías del iris, analicé los datos, desarrollé la metodología y escribí el manuscrito
con la ayuda de E. J Parra.
Este capítulo se publicó anteriormente como: Edwards, M., Gozdzik, A., Ross, K., Miles J. y Parra, EJ
(2012) Nota técnica: medidas cuantitativas del color del iris utilizando fotografías de alta
resolución. Soy. J. Física. Antro. 147, 141149.
Agradecimientos: Los autores agradecen a todas las personas que participaron en el estudio. Jon
Miles es el propietario de Miles Research, una empresa que diseña y construye iris especializados.
cámaras.
28
29
2.1 Resumen
Nuestra comprensión de la arquitectura genética del color del iris aún es limitada. Esto es en parte
relacionado con las dificultades asociadas con la obtención de mediciones cuantitativas del color de ojos. Aquí
Presentamos un nuevo método automatizado para medir el color del iris usando alta resolución.
fotografías. Este método extrae medidas de color en CIE 1976 L*a*b* (CIELAB)
espacio de color de un cuadrado de 256 por 256 píxeles tomado del meridiano de las 9:00 del iris. Color
se define en tres dimensiones: L* (la coordenada de luminosidad), a* (la coordenada rojoverde),
y b* (la coordenada azulamarilla). Aplicamos este método a una muestra de individuos de
ascendencia diversa (asiático oriental, europeo y asiático del sur) que fue genotipada para HERC2
Polimorfismo rs12913832, que está fuertemente asociado con el color de ojos azules. Nosotros identificamos
variación sustancial en el espacio de color CIELAB, no sólo en la muestra europea, sino también en
las muestras de Asia oriental y del sur de Asia. Como era de esperar, rs12913832 se asoció significativamente
con mediciones cuantitativas del color del iris en sujetos de ascendencia europea. Sin embargo, este SNP
También se asoció fuertemente con el color del iris en la muestra del sur de Asia, aunque no hubo
participantes con iris azul en esta muestra. La utilidad de este método no se limita sólo a
el estudio de la pigmentación del iris. Las imágenes de alta resolución del iris también permitirán
Estudiar la variación genética involucrada en los patrones de textura del iris, que muestran una heredabilidad sustancial.
en las poblaciones humanas.

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2.2 Introducción
El color de ojos está determinado por el tipo de melanina presente y la densidad y distribución.
de melanosomas ubicados dentro de los melanocitos del estroma del iris (Sturm y Larsson, 2009).
La pigmentación del iris exhibe una distribución global variable. En la mayoría de las poblaciones, el color de ojos es
limitado principalmente a distintos tonos de marrón. Sin embargo, los individuos de origen europeo, y en menor medida
En cierta medida, la ascendencia del norte de África, el Medio Oriente, Asia central y el sur de Asia, expresa una amplia
Gama de colores que incluye tonos de marrón, verde y azul. En los últimos años, el uso de enlaces
Los análisis y estudios de asociación de todo el genoma han llevado a la identificación de varios de los factores clave.
genes asociados con la variación del color del iris (Frudakis et al., 2003; Duffy et al., 2007; Sulem et al.,
2007; Eiberg et al., 2008; Kayser et al., 2008; Sturm et al., 2008; Branicki et al., 2009; Mengel
De et al., 2009; Liu et al., 2010). Sin embargo, la mayoría de los esfuerzos de investigación se han centrado en
poblaciones europeas, y ha habido muy pocos estudios que exploren la variación fenotípica
y base genética de la pigmentación del iris en poblaciones de ascendencia no europea.
Uno de los principales desafíos para desentrañar la arquitectura genética de la pigmentación del iris es
obtener una medida cuantitativa del color de ojos. Los métodos tradicionales para medir la piel y
La pigmentación del cabello, que se basa en la reflectometría, no se puede utilizar en el iris. Como consecuencia,
La mayoría de los estudios que investigan la variación de la pigmentación del iris han utilizado un número limitado de
categorías discretas para caracterizar el color de ojos (para una revisión reciente sobre la clasificación del color del iris,
ver Mackey et al., 2011). Aunque estos métodos de clasificación discreta han tenido éxito
identificado algunos de los principales genes asociados con el color del iris, también tienen una serie de
debilidades. Por un lado, son subjetivos y tienen una confiabilidad limitada entre observadores e intraobservadores.
(Seddon et al., 1990; Frudakis et al., 2003). Además, no pueden dar cuenta de la
Amplia variación cuantitativa que es inherente a la pigmentación del iris.
Recientemente, varios grupos de investigación han desarrollado métodos cuantitativos para
medir el color del iris. Melgosa et al. (2000) utilizaron un espectrorradiómetro para obtener una medición de
la combinación de pupila e iris en la Commission Internationale de L'Eclairage L*a*b* (CIELAB)
espacio de color. Alemán y otros. (1998) estudiaron la respuesta a los medicamentos en el iris extrayendo manualmente un
Número de mediciones de color de fotografías tomadas del ojo humano. Estas medidas
parámetros incluidos en los espacios de color XYZ y CIELAB. Frudakis (2008) extrajo RGB y
mediciones de luminosidad a partir de fotografías del iris y condensó esta información en un solo 'iris'
índice de melanina.' Más recientemente, Liu et al. (2010) aislaron valores de tono y saturación del iris
31
fotografías; El tono se utilizó para representar el tipo de melanina, mientras que la saturación se utilizó para representar el tipo de melanina.
Representa la cantidad de melanina en el iris. El desarrollo de tales métodos cuantitativos es
creando nuevas oportunidades para estudiar la genética de la variación de la pigmentación del iris de una manera mucho más
manera objetiva.
En este artículo, presentamos un nuevo método automatizado para cuantificar el color del iris. Este método
extrae medidas de color en el espacio de color CIELAB a partir de fotografías de alta resolución de
ellos son. CIELAB es un sistema de color estandarizado internacional que fue diseñado para
Visión aproximada del color humano (CIE, 1986). El espacio de color CIELAB proporciona información cuantitativa.
mediciones en tres dimensiones diferentes: una dimensión de brillo (L*), una dimensión verde/roja
dimensión (a*) y una dimensión azul/amarilla (b*). El espacio CIELAB tiene ventajas sobre otros
sistemas de color porque es perceptualmente uniforme: la distancia entre dos puntos de color estrechamente
Corresponde a diferencias perceptuales en la visión humana. Además, el CIELAB es una métrica
espacio que tiene en cuenta la temperatura de color del iluminante, también conocido como balance de blancos de
la fuente de iluminación. Los datos de color de un espacio de color RGB no incluyen el iluminante
temperatura; Sin embargo, este factor se incluye en la conversión de RGB a CIELAB. El
La salida del flash de xenón utilizado en fotografía se aproxima a D55, es decir, luz diurna a
5.500 grados Kelvin.
Aplicamos este nuevo método a una muestra de individuos de diversa ascendencia (Asia Oriental,
Europa y el sur de Asia) que fue genotipado para el polimorfismo HERC2 rs12913832, que
muestra una fuerte asociación con el color de ojos azules (Eiberg et al., 2008; Sturm et al., 2008).
2.3 Materiales y métodos
2.3.1 Reclutamiento
Los participantes del estudio fueron reclutados en el Laboratorio de Antropología Molecular del
Universidad de Toronto Mississauga (UTM) entre 2007 y 2009. La mayoría de los participantes
Fueron estudiantes y personal de la UTM que respondieron a anuncios impresos y en línea que fueron
distribuido en toda la comunidad de la Universidad de Toronto. Para evaluar la ascendencia geográfica,
A cada participante se le pidió que completara un cuestionario que preguntaba sobre la
lugares de nacimiento de los padres y abuelos y lenguas nativas. Por ejemplo, los individuos que
afirmaron que sus antepasados eran de China, Japón y Corea, fueron agrupados como asiáticos del este, mientras que
32
aquellos que reportaron ancestros de India y Pakistán fueron agrupados como del sur de Asia. Individuos
que informaron tener múltiples ascendencias fueron colocados en un subgrupo designado como "Otros" y
no fueron incluidos en el análisis. En total, se incluyeron en el estudio 205 sujetos. De estos, 66
eran de ascendencia del este de Asia, 72 eran de ascendencia europea y 67 eran del sur de Asia.
ascendencia.
Este estudio fue aprobado por la Universidad de Toronto Health Sciences Research and
Junta de Ética. Todos los participantes dieron su consentimiento informado por escrito.
2.3.2 Genotipado
Seleccionamos el polimorfismo rs12913832 en el intrón 86 del gen HERC2 para
genotipado. El alelo 'G' derivado de este marcador se ha asociado fuertemente con el iris azul
color en poblaciones de ascendencia europea (Eiberg et al., 2008; Sturm et al., 2008). Una sangre
Se recogió una muestra de cada participante en un tubo con EDTA de 4 ml y se extrajo el ADN de
las muestras de sangre utilizando el kit EZNA Blood DNA Midi (Omega BioTek, Estados Unidos).
Luego, las muestras se enviaron a Kbioscience (Estados Unidos) para su genotipado. Kbioscience utiliza un
Método de genotipado que combina PCR específica de alelo con detección mediante fluorescencia.
Sistema de transferencia de energía por resonancia (FRET). Para evaluar la calidad del genotipado, duplicados ciegos.
se incluyeron en las placas de genotipado. La tasa de concordancia para las llamadas de genotipo de la
muestras duplicadas fue del 100%.
2.3.3 Adquisición y Procesamiento de Fotografías de Iris

Tomamos una fotografía del iris izquierdo de cada sujeto utilizando el Miles Research Professional Iris.
cámara (Miles Research, Estados Unidos). Esta cámara consta de una Fujifilm Finepix S3 Pro 12
DSLR de megapíxeles montada en un objetivo macro Nikkor de 105 mm. Un iluminador biométrico coaxial fue
se utiliza para entregar una fuente de luz constante y uniforme a cada iris a 5500 K (iluminante D55).
El rendimiento de la cámara en términos de fidelidad de grabación en color se verificó utilizando el sistema de 24 parches.
GretagMacbeth Color Checker y software Imatest Master (http://www.imatest.com). Todo
Las fotografías se tomaron con una apertura de f19 y una sensibilidad de exposición (ISO) de 200.
La velocidad de obturación se ajustó a 1/60 de segundo y todas las imágenes se grabaron en JPEG de 12 megapíxeles.
formato.
33
Tras el examen de las fotografías utilizadas para el análisis del color del iris se encontró
evidencia de subexposición. Como medida correctiva, se implementó un procedimiento de normalización de la exposición.
aplicado a las 205 imágenes utilizando un operador de brillo de color neutro, la combinación del modo de pantalla de
cada imagen consigo misma. Este filtro de compensación de exposición aleja los colores del negro y
blanco para mejorar la discriminación de pequeñas diferencias de color. El efecto es análogo al
utilizando dos proyectores de diapositivas que iluminan la misma imagen en transparencia, alineada en una pantalla, para
crear un resultado más brillante. Matemáticamente, el filtro de iluminación de mezcla de pantalla (que combina un filtro de ocho bits)
imagen por canal consigo misma) se expresa como: c′ = 255 – ((255 − c0)2/255), donde c0 representa
cada valor de canal R, G, B como un entero de ocho bits de 0 a 255, y c′ es el valor del resultado del filtro.
2.3.4 Adquisición de medidas de color

Se extrajo una única medición RGB de cada imagen del iris mediante un análisis de varios pasos.
proceso: 1/ Se creó una macro en Adobe Photoshop CS5 que recortaba cada imagen al
tercio medio de la altura de la imagen, centrado en la pupila; 2/ Se desarrolló una segunda macro que
recortó las regiones de la imagen que contienen la esclerótica; 3/ Se utilizó una macro final para recortar el
muestra hasta un cuadrado de 256 por 256 píxeles en la zona ciliar del iris (periferia media) en el
meridiano 9:00 de cada muestra; y 4/ El programa ImageJ (Institutos Nacionales de Salud, Estados Unidos)
States) se utilizó para extraer datos RGB de cada una de las muestras de imágenes recortadas. Usamos el
'RGB promedio' del cuadrado de 256 por 256 píxeles para caracterizar el color del iris.
Los valores RGB se transformaron al espacio de color CIE 1976 L*a*b* (CIELAB). El
El espacio de color CIELAB es un sistema estandarizado universal que utiliza tres dimensiones para representar
color. La primera dimensión, L*, se utiliza para representar el brillo y puede tener valores que oscilan
de 0 a 100, donde 0 es negro y 100 es blanco. Las dimensiones a* y b* corresponden a
diferencias de color, con valores negativos de a* indicando verde y valores positivos de a*
indica rojo y los valores negativos de b* indican azul y los valores positivos de b* indican
amarillo. Para transformar los valores RGB al espacio de color CIELAB, las medidas RGB
se convirtieron por primera vez en valores XYZ usando ecuaciones estándar encontradas en
http://www.easyrgb.com/index.php?X=MATH&H=02#text2. Los valores XYZ fueron entonces
transformado en mediciones L*, a* y b* usando ecuaciones estándar encontradas en
http://www.easyrgb.com/index.php?X=MATH&H=07#text7. Como el sistema biométrico coaxial

34
El iluminador entregó luz a cada iris a una temperatura de 5500 K, la conversión del espacio de color
se basó en la bombilla estándar D55. El observador se fijó en 2°.
2.3.5 Análisis estadístico

Las desviaciones de las proporciones de HardyWeinberg en cada población se evaluaron utilizando
la prueba exacta de HardyWeinberg (ver http://ihg2.helmholtzmuenchen.de/cgibin/hw/hwa1.pl).
Utilizamos análisis de modelo lineal general (GLM) para probar la asociación entre rs12913832
genotipos y valores L*, a*, b* en las muestras de Europa y el sur de Asia (en el este de Asia
muestra, 64 de 65 individuos eran homocigotos para el alelo ancestral 'A', por lo que debido a la falta
de polimorfismo en esta muestra, no realizamos el análisis estadístico). Las pruebas fueron
realizado con el programa estadístico SPSS (versión 17.0, SPSS, 2008, Estados Unidos). Asociaciones
se consideraron significativos cuando P ≤ 0,05.
2.4 Resultados
La Figura 21 muestra una representación gráfica que resume el procedimiento que se utilizó para
obtener medidas en el espacio de color CIELAB de cada iris, con una muestra representativa
incluidos dos iris azules, uno verde y tres marrones. La Figura 22 muestra las medidas.
obtenidos para la muestra completa. Existe una dispersión sustancial de los valores de L*, a* y b* en el
espacio tridimensional. Como era de esperar, la dispersión es más pronunciada en la UE
muestra, que incluye colores de ojos que van desde el azul claro al marrón oscuro. en el europeo
En la muestra, los valores de L* variaron de 17,63 a 67,08, los valores de a* de −6,56 a 25,52 y los de b*
valores de −14,34 a 37,62. También hubo una variación considerable en el este de Asia y el sur de Asia.
Muestras asiáticas. En la muestra de Asia oriental, que se compone principalmente de iris de color marrón oscuro, el
Los valores de L* fluctuaron de 10,96 a 40,92, los valores de a* de −2,67 a 24,42 y los valores de b*
del 5.73 al 11.12. En la muestra del sur de Asia, que incluye una representación más amplia de tonos
de marrón que la muestra de Asia Oriental, el L* (que oscila entre 10,18 y 44,31) y a* (que oscila entre 10,18 y 44,31).
−2,86 a 25,42) los valores mostraron una distribución que es ampliamente similar a la observada en el Este
Muestra asiática. Sin embargo, hubo una dispersión considerablemente mayor en el eje b* (0,32–31,36).
Al examinar las coordenadas CIELAB considerando clasificaciones categóricas amplias de iris
En color, los iris azules tendían a tener valores L* muy altos y valores a* y b* negativos. Verde
35
Los iris generalmente se mapeaban entre iris marrones y azules, y tenían un valor L* alto, valor ab* que
rondaba 0 y un valor a* negativo. Por el contrario, los iris marrones tendían a tener un L* bajo.
valores y valores positivos a* y b*. Los iris con tonos más claros de marrón tenían L*, a* y
valores b* que los iris con tonos más oscuros de marrón (ver Figura 21B). En conjunto, es evidente que
Las clasificaciones que utilizan categorías amplias como "marrón", "intermedio" o "azul" no
capturar satisfactoriamente la variación de la pigmentación del iris. También observamos que en muchos individuos,
particularmente aquellos de ascendencia europea, la pigmentación de la zona pupilar central es más oscura
que la pigmentación de la zona ciliar periférica (heterocromía central).
Para probar la utilidad de nuestro método para cuantificar el color del iris, evaluamos el efecto de la
Polimorfismo HERC2 rs12913832 en los valores L*, a* y b*. Este único nucleótido
El polimorfismo (SNP) se ha asociado con la pigmentación del iris en estudios previos (Eiberg et al.
otros, 2008; Sturm y otros, 2008; Liu et al., 2010). La tabla 21 muestra el genotipo y el alelo.
frecuencias en las muestras de Asia oriental, Europa y Asia meridional. No hubo importantes
desviaciones de las proporciones de HardyWeinberg en cualquiera de las muestras (Tabla 21). La frecuencia
del alelo 'G' derivado, que se ha asociado con el color azul del iris en estudios anteriores, fue
71% en la muestra europea y 13% en la muestra del sur de Asia. En la muestra de Asia Oriental, 64
de 65 individuos eran homocigotos para el alelo ancestral 'A', por lo que eliminamos esta muestra
del análisis estadístico. Empleamos un modelo genético sin restricciones, que estima
por separado los efectos de los homocigotos para el alelo 'G' derivado y los heterocigotos, utilizando
los homocigotos para el alelo ancestral 'A' como genotipo de referencia. Los resultados de estas pruebas
para la muestra de Europa y el sur de Asia se muestran en la Tabla 22. En la muestra europea,
rs12913832 se asoció significativamente con las dimensiones L*, a* y b* (P <0,001) de
espacio de color. En la dimensión de luminosidad, las estimaciones del coeficiente de regresión (beta)
indicó que L* aumentó en 12,37 U en heterocigotos AG y en 23,27 U en GG
homocigotos, respecto a los homocigotos AA. En la dimensión verde/roja, a* disminuyó en
7,19 U en heterocigotos AG y por 23,16 U en homocigotos GG, respecto a AA
homocigotos. Por el contrario, en la dimensión azul/amarillo, b* disminuyó drásticamente (22,58 U) en
los homocigotos GG, pero fue muy similar para los heterocigotos AG y los homocigotos AA.
Por lo tanto, rs12913832 parece ajustarse a un modelo dominante para la dimensión azul/amarilla (b*) del
Espacio de color CIELAB, con el alelo ancestral 'A' dominante sobre el alelo recesivo 'G' y un
Modelo codominante para las dimensiones verde/rojo (a*) y luminosidad (L*). En el sur de Asia
36
muestra, rs12913832 también se asoció significativamente con las dimensiones L*, a* y b* del
Espacio de color CIELAB (P < 0,001). En esta muestra sólo observamos un homocigoto para el
derivó el alelo 'G', por lo que no fue posible explorar en detalle los efectos de los tres rs12913832
genotipos en las coordenadas de color. Sin embargo, es interesante observar que en el sur de Asia
muestra, los heterocigotos para el alelo AG mostraron valores de L*, a* y b* más altos que los homocigotos
para el alelo ancestral 'A', lo que indica que, en promedio, tienen tonos más claros de marrón (ver
Figura 21B).
Para verificar los resultados, realizamos las mismas pruebas en una colección más pequeña de iris que fueron
fotografiado 1 año después, usando la misma cámara, pero con una velocidad de obturación ligeramente diferente.
Esta colección incluía fotografías de 27 países del este de Asia, 37 de Europa y 25 de Asia del Sur.
Estuvieron representados los participantes y todos los fenotipos principales de color de ojos (azul, marrón, verde).
Los resultados son muy consistentes con los descritos anteriormente. En la muestra europea, el
El marcador rs12913832 se asoció fuertemente (P <0,001) con las tres dimensiones de la
El espacio de color CIELAB y los parámetros del modelo sin restricciones son demasiado similares a los
de la muestra más grande. L* aumentó en 17,45 U en heterocigotos AG y en 24,79 U en GG
homocigotos, a* disminuyó en 11,24 U en heterocigotos AG y en 20,80 U en GG
homocigotos, y b* disminuyó en 20,45 U en homocigotos GG con respecto a AA
homocigotos, pero hubo diferencias muy pequeñas entre los homocigotos AA y AG
heterocigotos en la dimensión b*. En la muestra del sur de Asia, rs12913932 fue significativamente
asociado con las dimensiones L* (P < 0,001) y b* (P = 0,021), y no fue significativo para el
dimensión a* (P = 0,369). Nuevamente, los individuos heterocigotos AG mostraron, en promedio, L* más alto,
valores a* y b* que los individuos homocigotos AA.
2.5 Discusión
Introducimos un nuevo método para medir el color del iris, utilizando una serie de cultivos de alta
fotografías de resolución para obtener una estimación cuantitativa del color en las tres coordenadas del
Espacio de color CIELAB. El espacio de color CIELAB es un sistema de color universal que fue diseñado
aproximarse a la visión humana (CIE, 1986). La variación del color del iris se reporta en tres diferentes
planos: un plano de brillo (L*) y dos planos de color (a* y b*). Cuando trazamos nuestro conjunto de
205 iris humanos en el espacio de color CIELAB, la mayoría de los puntos se distribuyeron por todo el
37
espacio tridimensional de una manera bastante continua. Esto confirma que la pigmentación del iris, como
El color de la piel y del pelo es un rasgo cuantitativo. Esto es evidente en los tres grupos poblacionales estudiados.
en nuestro análisis, que incluyó dos muestras (asiáticos orientales y asiáticos del sur) que estaban compuestas
principalmente de individuos con iris "marrones". Tratar el color de ojos como un rasgo categórico en los estudios
destinado a caracterizar la base genética de la pigmentación del iris ignora una cantidad sustancial de
la variación existente y reduce el poder estadístico para identificar los efectos principales y las relaciones gengen.
interacciones.
Para validar nuestro método, probamos la asociación entre HERC2 rs12913832
Polimorfismo y nuestras mediciones del espacio de color CIELAB en Europa y el sur de Asia.
muestras. Este marcador en particular se encuentra en una región altamente conservada del intrón 86 del HERC2.
gen y se ha asociado fuertemente con el color del iris azul/marrón en estudios previos en
poblaciones de ascendencia europea (Eiberg et al., 2008; Sturm et al., 2008). Aunque el exacto
Los mecanismos de acción de este polimorfismo aún no se han determinado completamente, se supone que
desempeñan un papel en la regulación de OCA2. Eiberg et al. (2008) sugirieron que rs12913832 cae dentro
un complejo silenciador OCA2 que puede ser perturbado o estabilizado dependiendo de cuál de los dos
Los alelos rs12913832 están presentes (Eiberg et al., 2008). Por el contrario, Sturm et al. (2008) han argumentado
que este polimorfismo particular puede ser un sitio de unión para la proteína reguladora HLTF (Sturm
et al., 2008). Según este modelo alternativo, cuando el alelo ancestral 'A' está presente, HLTF se une
a esta región y promueve la transcripción de OCA2. Cuando el alelo 'G' derivado está presente,
sin embargo, HLTF no puede unirse adecuadamente al ADN y la transcripción de OCA2 se reduce. estudios en
Las cepas de melanocitos humanos han demostrado que la presencia del alelo ancestral 'A' rs12913832 es
asociado con mayores niveles de transcripción OCA2 en comparación con el alelo 'G' derivado (Cook et
otros, 2009).
Las frecuencias para el alelo 'G' derivado que observamos en nuestra muestra (asiáticos orientales
<1%, europeos = 71% y asiáticos del sur = 13%) están en general de acuerdo con
datos reportados. Por ejemplo, la frecuencia de este alelo en el Proyecto de Diversidad del Genoma Humano
(HPIB) Las muestras de Asia oriental fueron <1%, para las muestras europeas el 51% y para las muestras de CentroSur
Muestras asiáticas, 15% (http://spsmart.cesga.es/).
Como se esperaba, rs12913832 se asoció significativamente con los planos L*, a* y b* de
el espacio de color CIELAB en nuestra muestra europea. El uso de medidas cuantitativas, en lugar de
variables categóricas, destaca algunos aspectos interesantes del efecto de rs12913832 en el iris
38
color. Para la dimensión b* (azul/amarillo) del espacio de color CIELAB, rs12913832 se ajusta a
modelo dominante de herencia bastante bien, con el alelo ancestral 'A' dominante sobre el G
alelo derivado. Los individuos homocigotos GG tienen valores b* más bajos (correspondientes al color azul
regiones del espacio CIELAB) que los individuos heterocigotos AG u homocigotos GG, que
muestran valores b* similares. Sin embargo, las dimensiones L* y a* parecen ajustarse a un modelo codominante,
Los heterocigotos AG muestran valores intermedios entre los homocigotos AA y GG.
Tradicionalmente, el color de ojos se ha descrito como un rasgo que se ajusta a un modelo dominante de herencia,
con "marrón" dominante sobre "azul", aunque ha habido muchos informes que demuestran
inconsistencias con un modelo dominante de herencia (Frudakis, 2008; Sturm y Larsson,
2009). Centrándose específicamente en el polimorfismo rs12913832, Eiberg et al. (2008) demostraron que
en una muestra de aproximadamente 200 individuos daneses, este polimorfismo estaba perfectamente asociado con
color azul/marrón, apoyando firmemente un modelo en el que el color de ojos azules es causado por
Homocigosidad del alelo 'G' rs12913832. Sin embargo, Sturm et al. (2008) demostraron que el
la asociación del genotipo rs12912832 GG con el color de ojos azules no es perfecta: algunos individuos
con este genotipo tenían ojos marrones, y algunos individuos heterocigotos AG ojos azules. Estos dos
Los estudios utilizaron clasificaciones categóricas del color del iris basadas en el autoinforme (Eiberg et al., 2008), o
la calificación de un observador capacitado con validación cruzada con el autoinforme del individuo (Sturm et
otros, 2008). En nuestra muestra, también vemos evidencia clara de que, aunque fuertemente asociado con el azul
Color de ojos, rs12913832 no encaja en un modelo dominante simple de herencia. Algunos homocigotos
Los individuos GG y los individuos AG heterocigotos ocupan posiciones en el espacio CIELAB que no
no se superponen con las coordenadas observadas para la mayoría de los genotipos GG o AG. Nosotros también
observó que, contrariamente a las expectativas de un modelo dominante simple, los heterocigotos AG
muestran valores de L* y a* que son intermedios entre los característicos de AA y GG
genotipos. Esto sugiere que los heterocigotos AG tienen niveles intermedios de expresión de OCA2 ,
y esto se refleja en diferencias perceptibles en las dimensiones L* y a* del espacio de color.
Cuando realizamos el mismo análisis en la muestra del sur de Asia, rs12913832 también fue
asociado significativamente con las dimensiones L*, a* y b* del espacio de color. Como nuestro sur de Asia
La muestra se compone casi en su totalidad de iris que se habrían definido como "marrones" usando un
sistema de clasificación categórica del iris, esto muestra que rs12913832 también juega un papel en la modulación
gradaciones sutiles en el color de ojos marrones. En particular, los heterocigotos AG mostraron mayores L*, a*,
39
y valores de b* (p. ej., tonos más claros de marrón) que los homocigotos AA. De nuevo, esto fuertemente
sugiere que rs12913832 no se ajusta a un modelo dominante de herencia.
Repetimos el análisis en una muestra independiente medida un año después, y
obtuvieron resultados similares. Sin embargo, los valores de los parámetros (coeficientes beta) obtenidos en este
La muestra de replicación debe considerarse con precaución debido al pequeño tamaño de la muestra (p. ej., en el
muestra europea, sólo había tres homocigotos para el alelo ancestral).
Vale la pena señalar que, en nuestras muestras combinadas de iris, encontramos dos individuos de South
Ascendencia asiática que tenía dos copias del alelo 'G' derivado rs12913832 y marrón o
iris heterocromáticos. Además, observamos que, mientras que los heterocigotos AG muestran
Valores a* significativamente más bajos que los homocigotos para el alelo ancestral 'A' en la Unión Europea.
muestra, en la muestra del sur de Asia los heterocigotos AG tienen valores a* significativamente más altos que
Homocigotos AA. Estos hallazgos, así como la información de otros estudios descritos anteriormente,
indican claramente que el color de ojos es un rasgo poligénico con una arquitectura genética compleja, donde el
El efecto de algunos de los loci principales puede verse modificado por otros polimorfismos (gengen).
interacción). Un estudio reciente en una gran muestra de ascendencia europea ha demostrado que las interacciones
entre los genes HERC2 y OCA2, HERC2 y SLC24A5 y HERC2 y TYRP1 juegan un papel
papel en la determinación del color de ojos (Pospiech et al., 2011). De manera similar, Liu et al. (2010)
describió que las interacciones de varios polimorfismos en los genes de pigmentación son responsables de
algunas de las variaciones de tono y saturación observadas en su muestra de iris.
En este estudio, extrajimos automáticamente un cuadrado de 256 por 256 píxeles del iris para
estimar las coordenadas de color promedio en el espacio de color CIELAB. Como se muestra arriba, este
El método es una mejora con respecto a las clasificaciones categóricas utilizadas convencionalmente para estudiar la
genética del color de ojos. Sin embargo, este método no capta completamente la complejidad del color del iris.
La heterocromía central es una característica común observada en los iris humanos. En individuos con central
Heterocromía, la zona pupilar del iris tiene un color más oscuro que la zona ciliar periférica.
Se pueden utilizar métodos alternativos para cuantificar el color del iris basados en fotografías de alta resolución.
empleado para estudiar específicamente la heterocromía central. Por ejemplo, una medida que describe el color.
(p. ej., ángulo de tono, saturación o simplemente longitud de onda) se pueden obtener en una sección radial del iris,
permitiendo comparar el color de las zonas pupilar y ciliar del iris. Figura 23
ilustra dicho método utilizando fotografías de alta resolución de individuos con y sin
heterocromía central. En nuestra muestra, la heterocromía central estuvo presente en las tres poblaciones.
40
examinado. Además, se encontró en iris de todos los grupos de colores principales, aunque tiende a
ser más notorio en personas con ojos de color más claro.
Finalmente, además de la heterocromía central, existen otras estructuras iridiales.
que pueden estudiarse mediante fotografías de alta resolución, como los nevos (manchas hiperpigmentadas),
Nódulos de Wolfflin (nódulos pálidos que rodean el iris y que están compuestos principalmente de tejido de colágeno),
Criptas de Fuchs (depresiones en forma de hoyos cerca del collarete y en la zona ciliar del iris), y
surcos de contracción (pliegues circulares y radiales debido a la contracción o dilatación del iris) [Larsson y
Pedersen, 2004; Sturm y Larsson, 2009]. Estos rasgos muestran una heredabilidad sustancial en humanos.
poblaciones (entre 58 y 78%), pero la base genética de estos y otros patrones de iris permanece
en gran parte inexplorado (Larsson et al., 2003). Utilizando una estrategia de asociación de todo el genoma (GWA),
Larsson et al. (2011) informaron que las variantes dentro del gen SEMA3A están asociadas significativamente
con frecuencia de criptas, polimorfismos dentro del gen TRAF3IP1 con surcos de contracción, y
variantes cercanas al gen de pigmentación SLC24A4 con la presencia de un pigmento peripupilar
anillo. Curiosamente, los genes SEMA3A y TRAFIP1 están involucrados en vías que controlan
neurogénesis, migración neuronal y sinaptogénesis, y esto llevó a Larsson et al. (2011) para sugerir
que los genes implicados en el desarrollo normal del patrón neuronal también pueden influir en las estructuras del iris.
En conclusión, presentamos un método para medir cuantitativamente el color del iris utilizando
fotografías de resolución obtenidas con iluminación uniforme y muestran que, utilizando este enfoque en
individuos de diversa ascendencia, es posible obtener ideas interesantes sobre el papel del
Polimorfismo HERC2 rs12913832 en la pigmentación del iris. Todavía existen lagunas importantes en nuestra
Comprensión de la arquitectura genética de la pigmentación del iris. La aplicación de la cuantitativa.
Los métodos para medir el color de ojos abren nuevas vías en la investigación de la pigmentación. Como estos
Los métodos son capaces de distinguir entre gradaciones de color sutiles, será posible aumentar
el poder estadístico para identificar los principales efectos y las interacciones genéticas, y para estudiar la genética de
pigmentación del iris en poblaciones en las que los sistemas categóricos tradicionales son de uso limitado.
Además, estos métodos proporcionarán un medio para desentrañar la arquitectura genética de otros
rasgos, como la heterocromía central, y una serie de patrones del iris que muestran una variación sustancial
en las poblaciones humanas. Avanzar en nuestro conocimiento actual sobre la base genética del color del iris y
La estructura es importante desde múltiples perspectivas. Por ejemplo, desde una perspectiva forense
Será útil para predecir de manera confiable el color y la estructura del iris basándose en la información del ADN. Desde un
perspectiva antropológica y evolutiva, permitirá a los investigadores obtener nuevos conocimientos sobre
41
los principales eventos evolutivos asociados con la distribución actual de la variación del color de ojos,
que es bastante diferente de la distribución geográfica de la pigmentación de la piel. De interés es
en qué medida la selección natural o sexual, o la acción de factores demográficos (por ejemplo, deriva genética,
ampliaciones de rango) dieron forma a la distribución actual del color de ojos. Finalmente, desde el desarrollo
y perspectivas fisiológicas, descubriendo los genes asociados con el color y la estructura del iris
mejorará nuestra comprensión de las vías que determinan estos rasgos.

42
2.6 Tablas
Tabla 21 Estadísticas descriptivas generales
Frecuencias genotípicas observadas y esperadas, frecuencias alélicas y prueba exacta de HardyWeinberg para
HERC2 rs12913832 en las muestras de Asia oriental, Europa y Asia meridional
Genotipo observado y esperado Exacto de HardyWeinberg

Población Frecuencias de alelos
Frecuencias Prueba (p.)
A:A = 64 (64,00)
Una = 99%
asiático del este A:G = 1 (0,99) 1.000
G = 1%
G:G = 0 (0,00)
A:A = 9 (6,00)
Una = 29%
europeo R:G = 23 (28,99) 0,087
G = 71%
G:G = 38 (35,00)
A:A = 50 (50,09)
R = 87%
sur de asia R:G = 15 (14,81) 1.000
G = 13%
G:G = 1 (1,09)
43
Tabla 22 Resultados generales del análisis del modelo lineal

Resultados del análisis del modelo lineal general para la dimensión de brillo (L*), la dimensión verde/rojo
(a*) y la dimensión azul/amarillo (b*) del espacio de color CIELAB en las muestras de Europa y el sur de
Asia.
Población Dimensión del espacio de color valor p Genotipo Beta valor p
Automóvil club británico

L* 0.000 AG 12.368 0.000
GG 23.267 0.000

europeo a* 0.000 AG 7.187 0.003
GG 23.158 0.000

b* 0.000 AG 1.989 0.585
GG 22.584 0.000

L* 0.000
AG 8.358 0.000

sur de asia a* 0.000
AG 2.701 0.037

b* 0.000
AG 6.788 0.000
44
2.4 Cifras
Figura 21 Metodología de extracción de color y coordenadas de color del iris
(A) Una ilustración de la muestra de 256 por 256 píxeles cuadrados que se aisló del meridiano de las 9:00 de seis
iris de diferentes colores (dos azules, uno verde, tres marrones). Se determinó el RGB promedio de este
cuadrado y se transformó en valores L*, a* y b* en el espacio de color CIELAB. (B) Las coordenadas del color
general del iris de seis muestras ejemplares en el espacio de color CIELAB. Cada iris está representado
gráficamente por la región de muestra cuadrada de 256 por 256 píxeles que se utilizó para evaluar el color del
iris y sus coordenadas del espacio de color (L*, a*, b*).
45
Figura 22 Distribución de iris en el espacio de color CIELAB

(A) La distribución de la muestra completa de iris de participantes de ascendencia del este de Asia (círculos
rojos), del sur de Asia (triángulos verdes) y de Europa (cuadrados azules) en las tres coordenadas del espacio de
color CIELAB: L* (la coordenada de luminosidad ), a* (la coordenada rojoverde) y b* (la coordenada azulamarilla).
(B) Las coordenadas de los mismos iris para a* y b*, los componentes cromáticos del espacio de color CIELAB.
46
Figura 23 Visualización de heterocromía central

Un método para visualizar la heterocromía central. Las fotografías de iris de dos iris heterocromáticos y uno
homogéneo se redujeron a un ancho de 125 píxeles. Se utilizó el programa ImageJ (National Institutes of
Health, Estados Unidos) para extraer una banda horizontal (de izquierda a derecha) del meridiano de las 9:00
de cada iris en el espacio RGB y los valores RGB se transformaron en valores de saturación usando
ecuaciones estándar encontradas en http://www.easyrgb.com/index.php?X=MATH&H=18#text18.
Los iris con heterocromía sustancial mostraron cambios bruscos en la saturación a lo ancho del iris.
47
2.7 Referencias
Branicki, W., Brudnik, U. y WojasPelc, A. (2009). Las interacciones entre HERC2, OCA2 y MC1R pueden influir
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Capítulo 3:
La pigmentación del iris como rasgo cuantitativo:
variación en las poblaciones de Europa, Asia oriental y del sur.
Ascendencia asiática y asociación con el candidato
Polimorfismos genéticos
Contribuciones del autor: M. Edwards participó en el diseño del estudio, recopiló los datos, realizó el análisis de los
datos y redactó el manuscrito. D. Cha desarrolló el color del iris.
programa y ayudó con el análisis de datos. S. Krithika, M. Johnson y G. Cook ayudaron con la recopilación de datos
y el trabajo de laboratorio molecular. EJ Parra concibió el estudio, participó en su diseño, lo coordinó y ayudó a
redactar el manuscrito.
Este capítulo ha sido publicado anteriormente como: Edwards, M., Cha, D., S. Krithika.,
Johnson, M., Cook, G., Parra, EJ (2015) La pigmentación del iris como rasgo cuantitativo: variación en poblaciones
de ascendencia europea, asiática oriental y asiática meridional y asociación con polimorfismos de genes
candidatos. Melanoma de células pigmentarias Res.
Agradecimientos: Nos gustaría agradecer a todas las personas que participaron en este estudio.
ME fue financiado por un premio CGSD de 3 años del Consejo de Investigación de Ingeniería y Ciencias Naturales
(NSERC) y una Beca de Graduado de Ontario (OGS). EJP fue financiado por una subvención Discovery Grant del
NSERC.
49
50
3.1 Resumen
En este estudio, presentamos un nuevo método cuantitativo para medir el color del iris basado en alta
fotografías de resolución. Aplicamos este método para analizar la variación del color del iris en una muestra de
individuos de ascendencia del este de Asia, Europa y el sur de Asia. Mostramos que medir el iris
El color utilizando las coordenadas del espacio de color CIELAB descubre una cantidad significativa de
variación que no se captura mediante clasificaciones categóricas convencionales, como "marrón",
"azul" o "verde". Probamos la asociación de un panel seleccionado de polimorfismos con el color del iris.
en cada grupo poblacional. Seis marcadores mostraron asociaciones significativas con el color del iris en el
muestra europea, tres en la muestra del sur de Asia y dos en la muestra del este de Asia. Nosotros también
observaron que el marcador HERC2 rs12913832, que es el principal determinante de 'azul' vs.
El color del iris "marrón" en las poblaciones europeas también se asocia significativamente con la
heterocromía en la muestra europea.

51
3.2 Introducción
El color del iris en los seres humanos es un rasgo complejo que es principalmente producto de diferencias en el
Estructura y organización del ojo. El iris típico consta de cinco capas: el pigmento del iris
epitelio (IPE), el esfínter y los músculos dilatadores, la capa estromal (SL) y la capa anterior
capa fronteriza (ABL) (Eagle, 1988; Oyster, 1999; Sturm y Larsson, 2009). El IPE se deriva
Del neuroectodermo y contiene muchos melanosomas esféricos grandes y densamente empaquetados.
(Eagle, 1988; Prota et al., 1998; Wilkerson et al., 1996). La cantidad y composición de la melanina.
en esta capa es similar en todos los seres humanos sanos, ya que el objetivo principal del IPE es proteger la
retina y absorber el exceso de luz (Wilkerson et al., 1996). Como resultado, la variación en esta capa no
no contribuye significativamente a la variación normal de la pigmentación del iris. Por el contrario, los melanosomas en
el SL y el ABL, que se originan en la cresta neural, son más pequeños, de forma ovoide y se diferencian
ampliamente entre individuos (Imesch et al., 1996; Prota et al., 1998; Sturm y Larsson, 2009). Él
Actualmente se cree que la mayoría de las variaciones en la pigmentación del iris pueden estar directamente relacionadas con la
cantidad y tipo de melanina que se encuentra en estas dos capas, y los ojos más oscuros tienen más melanina
y una proporción de eumelanina/feomelanina más alta que los ojos más claros (Peles et al., 2009; Wakamatsu et al., 2009).
2008; Wielgus y Sarna, 2005). Sin embargo, hay una serie de otros factores que también pueden
influyen en el color del iris, incluida la profundidad del SL, la organización del tejido extracelular
componentes en el SL y ABL, el espesor y curvatura de la córnea, la presencia de
estructuras (por ejemplo, manchas de pigmento, nódulos de Wolfflin) en el iris y la cantidad de melanina que se encuentra en
el SL en relación con el ABL (Baranoski y Lam, 2007; Mackey et al., 2011; Prota et al., 1998;
Wielgus y Sarna, 2005).
El color del iris muestra una distribución global muy distinta. En toda Europa y en menor medida
En el norte de África, Oriente Medio y Asia central, los iris muestran una amplia variación de pigmentación.
y varían desde azules claros hasta verdes y marrones (Donnelly et al., 2012; Eiberg et al., 2008). Muchos
Los iris en estas regiones también muestran heterocromía central, donde hay una banda de color alrededor.
la pupila que se diferencia del resto del ojo. Sin embargo, en el resto del mundo, el iris
El color parece ser mucho más homogéneo y se limita principalmente a distintos tonos de
marrón. En la actualidad, la base genética del color del iris ha sido ampliamente estudiada en poblaciones de
ascendencia europea. La mayor parte de la variación entre el color de ojos azules y marrones ha sido
atribuido al marcador HERC2 rs12913832, que se encuentra en una región altamente conservada del
genoma que se cree que regula la transcripción del gen de pigmentación cercano, OCA2
52
(Eiberg et al., 2008; Kayser et al., 2008; Sturm et al., 2008). Se ha sugerido que esto
El polimorfismo se encuentra en el medio de un sitio de unión del factor de transcripción similar a la helicasa (HLTF).
(Sturm et al., 2008; Visser et al., 2012). Cuando el alelo ancestral 'A' está presente, HLTF (un
proteína remodeladora de la cromatina) es capaz de reconocer la secuencia y comenzar a desenrollar la
cromatina. Esto expone secuencias de otras proteínas reguladoras y promueve la síntesis de
OCA2. Sin embargo, cuando el alelo 'G' derivado está presente, hay un reclutamiento reducido de HLTF.
y la transcripción de OCA2 es limitada. Aunque HERC2 rs12913832 puede ser el principal
determinante de la variación global del color del iris, también se han identificado varios otros marcadores
que tienen un efecto más sutil sobre la pigmentación del iris. Estos incluyen polimorfismos en OCA2,
SLC45A2, SLC24A4, TYRP1 e IRF4 (Graf et al., 2005; Rebbeck et al., 2002; Sturm et al.,
2008; Sulem et al., 2007; Walsh et al., 2011). La identificación de marcadores asociados al iris.
El color en las poblaciones europeas ha permitido a varios grupos de ciencia forense desarrollar
algoritmos que son capaces de predecir el color del iris a partir de muestras de ADN obtenidas en la escena del crimen
y de otras personas no identificadas (Ruiz et al., 2014; Spichenok et al., 2011; Walsh et al.,
2011).
A pesar de nuestra creciente comprensión de las bases genéticas de la pigmentación del iris en los europeos
poblaciones, muy pocos grupos han intentado observar el color de ojos en poblaciones de personas no
ascendencia europea. Aunque el color de ojos marrones domina en regiones fuera de Europa,
Hay mucha variación dentro de estos marrones y pueden variar desde amarillos rojizos claros hasta
negros parduzcos oscuros. En los últimos años se han desarrollado una serie de métodos que permiten
investigadores para caracterizar cuantitativamente el color del iris. Liu y cols. (2010) obtuvieron tono y saturación.
valores de fotografías de iris, utilizándose el tono para representar el tipo de melanina y la saturación
siendo utilizado para representar la cantidad de melanina en el iris. Andersen et al. (2013) desarrollaron un PIE
(Índice de píxeles del ojo) que se calculó utilizando el número de píxeles etiquetados como marrón y
el número de píxeles etiquetados en azul en fotografías del iris. Recientemente, extrajimos un color.
medición en el espacio de color CIE 1976 L*a*b* (CIELAB) desde un cuadrado de 256 por 256 píxeles
aislado mediante fotografías de alta resolución del iris (Edwards et al., 2012). Estos métodos van
más allá de los sistemas tradicionales de clasificación categórica que se han utilizado en el pasado (es decir,
'verde' 'azul' 'marrón') y proporcionan un medio para estudiar la variación del color del iris en poblaciones con
iris de colores más homogéneos. Sin embargo, hasta el momento no se han aplicado ampliamente
a las poblaciones globales.

53
Utilizar métodos cuantitativos para estudiar la base genética del color del iris en poblaciones de animales no
La ascendencia europea contribuiría en gran medida a nuestra comprensión general del color global del iris.
variación. En la actualidad, tenemos un conocimiento limitado de los marcadores responsables de
Colores intermedios del iris. Esto se refleja en el hecho de que la mayoría de los algoritmos de predicción del color de ojos
se desempeñan de manera deficiente e inconsistente cuando se miran ojos de colores intermedios (Dembinski y
Picard, 2014; Pneuman et al., 2012; Yun et al., 2014). Además, identificar nuevas variantes
asociado con la variación del color del iris en poblaciones de ascendencia no europea proporcionaría
información valiosa sobre la base genética del color de la piel y el cabello en estas regiones, dada la
Efectos pleiotrópicos conocidos de algunos marcadores genéticos sobre los rasgos pigmentarios. Estudiar el color del iris puede
También será de interés biomédico. Se ha descubierto que el color de ojos está asociado con una serie de
trastornos oculares (Mitchell et al., 1998; Wakamatsu et al., 2008). El más conocido de ellos es
tal vez degeneración macular relacionada con la edad (DMAE). Esta enfermedad, que afecta principalmente a personas mayores.
adultos, resulta del daño a la retina y puede provocar pérdida de visión y ceguera. Relacionado con la edad
La degeneración macular se ha relacionado fuertemente con efectos genéticos específicos de la población (Frank et
otros, 2000). Sin embargo, dentro de las poblaciones, el color de ojos puede ser uno de los determinantes de la DMAE. En
En muestras europeas, se ha descubierto que las personas con ojos azules tienen un mayor riesgo de sufrir
desarrollar AMD (Frank et al., 2000; Mitchell et al., 1998). De manera similar, la incidencia de enfermedades primarias
El glaucoma de ángulo cerrado en poblaciones del este de Asia puede estar asociado con una variación en el iris marrón.
color. Un estudio reciente encontró que las personas con ojos castaños oscuros en una población de Malasia
Los que vivían en Singapur tenían un ángulo de cierre más estrecho que las personas con ojos castaños claros.
(Sidhartha et al., 2014). Por tanto, no sólo es necesario investigar los genes responsables de la
diferencia entre los fenotipos azul, marrón e intermedio en las poblaciones europeas, pero también
observar los genes que modulan la pigmentación marrón del iris también en otras regiones.
En este estudio, tenemos tres objetivos principales: 1/ Mejorar nuestro método cuantitativo de
medir el color del iris para capturar mejor la variación del color del iris en poblaciones de diversos
ascendencia; 2/ Observar la asociación entre los marcadores de pigmentación putativos y el color del iris en un
muestra de ascendencia europea, asiática oriental y asiática meridional; 3/ Para observar la asociación entre
marcadores de pigmentación y heterocromía central en las muestras de Europa y el sur de Asia.

54
3.3.1 Recogida de muestras

Entre 2012 y 2014, 1.465 voluntarios sanos de Asia Oriental, Europa y el Sur
La ascendencia asiática se ofreció como voluntaria para un estudio de investigación sobre la variación de la pigmentación humana. Todo
Los participantes tenían entre 18 y 35 años de edad y fueron reclutados mediante encuestas en línea e impresas.
anuncios dirigidos a la comunidad estudiantil de la Universidad de Toronto. Un personal
Se administró un cuestionario a cada participante para determinar su edad, sexo, ojos autodescritos.
color y si habían sido diagnosticados o no con alguna enfermedad relacionada con la pigmentación o
trastornos.
La ascendencia biogeográfica se determinó utilizando información del personal
cuestionario, que preguntaba sobre la ascendencia, el lugar de nacimiento y la primera lengua de cada
abuelos maternos y paternos del participante. Individuos que declararon que todos sus
los abuelos originarios de China, Japón, Corea o Taiwán fueron categorizados como asiáticos del este, y
personas que declararon que todos sus abuelos eran originarios de Pakistán, India, Bangladesh o
Sri Lanka fue categorizada como del sur de Asia. Los individuos eran clasificados como europeos si todos
sus abuelos eran originarios de cualquier país de Europa, excepto Turquía. Individuos mezclados
que tenían abuelos de dos regiones diferentes (es decir, Asia Oriental y Europa) fueron excluidos de
el analisis. Cuando no se conocía información sobre los abuelos, el autodenominado
La ascendencia de ambos padres se utilizó para evaluar la ascendencia biogeográfica. Además del 1465
participantes que se incluyeron en este documento, se reclutaron 308 voluntarios adicionales y
excluidos porque no podían clasificarse como asiáticos del este, europeos o del sur de Asia utilizando
este criterio.
Este estudio fue aprobado por la Junta de Ética e Investigación de la Universidad de Toronto.
(Referencia de protocolo n.º 27015), y todos los participantes debían proporcionar información escrita
consentir.
3.3.2 Adquisición de Fotografías

Se tomó una fotografía del ojo derecho de cada participante utilizando un Miles Research
Cámara Iris Profesional (Miles Research, Estados Unidos). Esta cámara consta de una Fujifilm.
Cuerpo de cámara Finepix S3 Pro DSLR de 12 megapíxeles acoplado a un objetivo Nikkor de 105 mm. A
55
Se utilizó un cable coaxial biométrico para enviar luz al iris a una temperatura de luz constante para
mantenga la fidelidad del color y el brillo y reduzca el impacto de la luz ambiental. El cuerpo de la cámara
tuvo que ser reemplazado después de los primeros 552 participantes y un cuerpo de cámara con una marca idéntica
y se adquirió el modelo. No pudimos evaluar adecuadamente si las fotografías tomadas con la primera
y los segundos cuerpos de cámara eran idénticos ya que no teníamos una muestra lo suficientemente grande de
individuos cuyos ojos habían sido fotografiados con ambas cámaras. Por lo tanto, dividimos nuestra
muestra en dos grupos. Todas las fotografías fueron tomadas con un ISO de 200, una velocidad de obturación de
1/125” y una apertura de f19.
Las fotografías se adquirieron inicialmente en formato RAW y luego se convirtieron al formato JPEG.
utilizando Adobe Camera Raw en Adobe Photoshop CS5 (Adobe Systems Incorporated, Estados Unidos
Estados). Se redimensionaron de 3043 x 2036 píxeles a 1200 x 803 píxeles para optimizar el
procesamiento del color del iris. El balance de blancos estaba configurado para parpadear, el contraste y los niveles de negros estaban
se estableció en cero y todos los demás valores predeterminados de la cámara se conservaron para cada conversión.
3.3.3 Adquisición del color del iris

Uno de los autores (DC) diseñó una aplicación web de once pasos para caracterizar
estructura del iris y adquirir el color del iris a partir de fotografías del ojo. La aplicación web puede ser
consultado en http://iris.davidcha.ca/. Se pueden configurar cuentas para usuarios interesados previa solicitud. Solo
Los primeros seis pasos son necesarios para obtener una medición del color del iris. En el primer paso, el usuario
Debe tener en cuenta si el iris está obstruido hasta el punto de afectar el color y la estructura.
mediciones. En los pasos 2 a 6, se le pide al usuario que identifique el punto central aproximado del iris,
el punto central aproximado de la pupila y luego dibuje un círculo que mejor se ajuste alrededor de la escleral,
Límites pupilares y del collarete.
Una vez definidos los límites esclerales, pupilares y del collarín, la aplicación puede
extraer automáticamente una medida del color de ojos promedio. Decidimos estimar el color del iris.
desde una cuña en un ángulo de 60˚ tomada desde el lado izquierdo del iris. Esta región fue elegida porque
En nuestra muestra, era menos probable que quedara oscurecido por los párpados, las pestañas o los reflejos. para aislar esto
cuña, el programa define un punto de inicio ubicado en el centro del iris y se mueve a un punto en
el límite escleral ubicado a 240˚ en el sentido de las agujas del reloj desde la parte superior del iris. Luego sigue un arco que
se extiende 60˚ hasta llegar al punto que está a 300˚ de la parte superior del iris. Este punto es
conectado al centro del iris, que delimita una cuña aislada. Estos pasos se repiten
56
para el límite pupilar y el límite del collarín para que la pupila pueda ser completamente
Se extirpa de la cuña y se pueden separar las zonas pupilar y ciliar. Dos imágenes son
luego se guarda en formato PNG: la porción de la cuña que representa la zona ciliar y la
porción de la cuña que representa la zona pupilar (Figura 32). Después de procesar todo el iris.
fotografías, escaneamos manualmente las cuñas en busca de cualquier evidencia de obstrucción o incorrecta
recortando.
Para obtener una medida del color medio del iris, la aplicación cuenta todos los píxeles
ubicado en la cuña (que consta de las zonas ciliar y pupilar) y determina un rojo,
Valor verde y azul (RGB) para cada píxel individual. El valor RGB promedio de todo el
La cuña se calcula sumando los valores R, G y B para cada píxel y luego dividiéndolos.
valor por el número total de píxeles contados. Elegimos describir el color del iris en CIE 1976.
Espacio de color L*a*b* (CIELAB) (McLaren, 1976). CIELAB es un sistema de color que fue diseñado
para caracterizar el color en tres coordenadas diferentes. La coordenada L* representa la
dimensión de luminosidad y varía de 0 a 100, siendo 0 negro y 100 blanco. La A*
y las coordenadas b* representan variación de color, con valores negativos de a* indicando verde y
los valores positivos de a* indican rojo y los valores negativos de b* indican azul y valores positivos
de b* indica amarillo. Para convertir nuestras medidas RGB al espacio de color CIELAB, el
La aplicación primero transformó las coordenadas RGB en coordenadas XYZ y luego en L*, a* y
b* coordenadas utilizando las ecuaciones proporcionadas por EasyRGB (Logicol Color Technology, United
Estados). Para cada conversión, el iluminante se ajustó a D55 y el observador a 2 grados.
Estas son configuraciones de conversión estándar cuando se utiliza fotografía con flash. Este proceso en última instancia
proporciona una estimación de color promedio para la zona ciliar, la zona pupilar y todo el iris en
Espacio de color CIELAB.
También estábamos interesados en cuantificar la cantidad total de heterocromía central en el iris.
Para hacer esto, utilizamos CIEDE2000 (ΔE), una métrica de color que analiza la diferencia entre dos
colores en el espacio de color CIELAB (McLaren, 1976). La aplicación web utilizó las ecuaciones.
proporcionado por EasyRGB (Logicol Color Technology, Estados Unidos) para calcular la diferencia
entre los valores de CIELAB en la zona pupilar y ciliar.
Después de adquirir estimaciones del color del iris de los 1465 iris, se utilizó la aplicación web para
generar una hoja de cálculo de Excel que contenía el color promedio de todo el iris, el promedio
color de la zona ciliar y el color promedio de la zona pupilar en RGB y CIELAB

57
espacio de color y el ΔE entre las zonas ciliar y pupilar. La hoja de cálculo también produjo
información sobre cuántos píxeles se contaron en cada ojo durante el cálculo del color del iris.
Todos los análisis de iris fueron realizados por ME.
3.3.4 Selección de marcadores y genotipado

Se obtuvo una muestra de saliva de 2 ml de cada participante utilizando el ADN Oragene (OG
500) kit de recolección (DNA Genotek, Canadá). A todos los participantes se les indicó que no comieran, bebieran ni
fume durante al menos 30 minutos antes de obtener la muestra para garantizar la máxima pureza de la muestra. ADN
se aisló de cada muestra utilizando el protocolo proporcionado por DNA Genotek y se eluyó en 500
mL de tampón TE (TrisHCl 10 mM, EDTA 1 mM, pH 8,0).
Seleccionamos catorce marcadores para el genotipado que se han asociado previamente
con el color del iris en poblaciones europeas o asociado con alguna otra pigmentación
fenotipo (es decir, color de piel) en el este o el sur de Asia (Eaton et al., 2015; Edwards et al., 2012;
Eiberg et al., 2008; Graf et al., 2005; Kayser et al., 2008; Liu et al., 2010; Rebbeck et al., 2002;
Sturm y otros, 2008; Walsh et al., 2011). Estos marcadores consistían en HERC2 rs12913832, OCA2
rs1800407, SLC24A4 rs12896399, SLC45A2 rs16891982, SLC24A5 rs1426654, TYR rs1393350,
IRF4 rs12203592, DSCR9 rs7277820, TYRP1 rs1408799, NPLOC4 rs9894429, LYST rs3768056,
ASIP rs6058017, OCA2 rs1800414 y OCA2 rs74653330. Los marcadores sólo se incluyeron para un
población si la frecuencia del alelo menor (MAF) excedía 0,05. La excepción a esto fue OCA2.
rs74653330, que tiene un MAF bajo (<0,04) en el este de Asia, pero se ha descubierto que tiene un fuerte
efecto sobre la variación de la pigmentación de la piel (Eaton et al., 2015).
Todas las muestras de ADN se enviaron a LGC Genomics (Estados Unidos) para su genotipado. LGC
Genomics utiliza un método de genotipado basado en KASP que combina amplificación específica de alelos
con tecnología FRET (transferencia de energía por resonancia fluorescente). Se enviaron veintinueve muestras.
como duplicados ciegos y 14 muestras se enviaron como blancos para validar la calidad del genotipado
resultados. La tasa de concordancia tanto para los duplicados ciegos como para los espacios en blanco fue del 100%.

A menos que se indique lo contrario, todos los análisis estadísticos se llevaron a cabo utilizando PLINK
(http://pngu.mgh.harvard.edu/~purcell/plink/), un programa de análisis del genoma diseñado para observar
la asociación entre los datos de genotipo y fenotipo. Realizamos los siguientes análisis: 1/
58
Una prueba de desviaciones de las proporciones de HardyWeinberg para cada marcador incluido en el Este
Muestra asiática, europea y del sur de Asia. 2/ Una prueba de desequilibrio de ligamiento para determinar la
cantidad de vínculos entre los marcadores. 3/ Un análisis exploratorio para observar la asociación
entre edad y sexo y las cuatro medidas del espacio de color (L*, a*, b* y ∆E). como no
Se observaron asociaciones significativas entre el color del iris y la edad o el sexo, estas variables no fueron
incluidos en los análisis estadísticos posteriores. 4/ Un análisis de regresión lineal para determinar la
Efecto de cada SNP en las dimensiones L*, a* y b* del espacio de color CIELAB. En cada
población, solo analizamos los SNP que alcanzaron un MAF de al menos 0,05 (con la excepción de
OCA2 rs74653330 en la muestra de Asia Oriental). Para cada SNP, utilizamos un modelo genotípico, que
informa un valor P y un coeficiente beta de forma independiente para el homocigoto de alelo menor y el
heterocigoto, con respecto al alelo mayor homocigoto. También exploramos si había
evidencia de desviaciones de un modelo aditivo de herencia para cualquiera de los marcadores. Desviaciones
se consideraron significativos si la desviación estadística de la aditividad (DOMDEV)
arrojó un valor de P de <0,05 para ambas cámaras. Cada población se dividió en dos grupos.
(que representa el primer cuerpo de cámara y el segundo cuerpo de cámara) y se realizó la regresión
individualmente en cada grupo para tener en cuenta las diferencias de color y brillo entre los
dos cámaras. 5/ Un análisis de regresión lineal en las muestras de Europa y el sur de Asia.
condicionamiento sobre el efecto de HERC2 rs12913832 y un análisis de regresión lineal en el Este
Acondicionamiento de muestras asiáticas sobre el efecto de OCA2 1800414. Nuevamente, este análisis se realizó
por separado en cada cuerpo de cámara. 6/ Un metaanálisis de los resultados de la regresión lineal de ambos
cuerpos de cámara. Este metanálisis se llevó a cabo antes y después del acondicionamiento en HERC2 .
rs12913832 en las muestras de Europa y el sur de Asia y OCA2 rs1800414 en las muestras de Asia oriental
muestra. Para cada marcador, informamos el valor P de la asociación, el tamaño del efecto (beta) y el
Valor p para la estadística Q de Cochran (una medida de la heterogeneidad entre los dos grupos utilizada en
el metanálisis). Después de la corrección de Bonferroni para comparaciones múltiples, las asociaciones fueron
significativo en la población de Asia oriental si P < 0,00714, en la población europea si P <
0,00454 y en la población del sur de Asia si P <0,00500. 7/ Un análisis de regresión lineal en el
Muestras europeas y del sur de Asia que analizan la asociación entre la diferencia de color.
entre las zonas pupilar y ciliar (∆E) y los supuestos SNP de pigmentación. este análisis
se llevó a cabo por separado en cada cuerpo de cámara. 8/ Un metaanálisis sobre la regresión lineal
resultados para ∆E de cada cuerpo de cámara. El valor P de la asociación, el tamaño del efecto (beta) y
59
Se informó el valor P para la estadística Q de Cochran para cada marcador. 9/ Cuatro meses después de la
clasificación inicial del color del iris, las mediciones de confiabilidad intraevaluador fueron realizadas por ME y
DC llevó a cabo mediciones de confiabilidad entre evaluadores en 40 iris aleatorios. la intraclase
El coeficiente de correlación entre las mediciones originales y repetidas del color del iris fue
calculado en IBM Statistics SPSS (versión 20.0, SPSS Incorporated, Estados Unidos) utilizando un
modelo aleatorio con concordancia absoluta para las medidas L*, a*, b* y ∆E.
3.4 Resultados
En total, 474 asiáticos orientales, 624 europeos y 367 asiáticos del sur estaban incluidos en el
estudiar. Seis asiáticos orientales, cuatro europeos y cuatro asiáticos del sur no pudieron quitarse sus
lentes de contacto para la fotografía y fueron excluidos del análisis. Dos participantes de
Los descendientes del sur de Asia fueron eliminados del estudio porque tenían una cuña del iris obstruida. No
La obstrucción del iris se pudo observar en cualquiera de los otros participantes. Un último participante del Sur
Se excluyó la ascendencia asiática porque el participante informó tener una forma de albinismo que
pigmentación ocular afectada.
Las mediciones de confiabilidad entre evaluadores e intraevaluadores fueron excelentes para los cuatro espacios de color.
mediciones (Tabla 31). Dispersión sustancial en el color CIE 1976 L*a*b* (CIELAB)
El espacio se pudo ver en las tres poblaciones (Figura 31). Los ojos azules tienden a mostrar valores altos de L*
y valores negativos de a* y b*, mientras que los ojos marrones tienen valores bajos de L* y valores altos de a* y b*.
Debido a la forma de arco en la que se distribuyen los iris en el espacio de color CIELAB, el marrón oscuro
Los ojos tienen valores L*, a* y b* más bajos que los ojos marrones más claros (Figura 31). Los ojos verdes tienden a
tienen valores a* que son intermedios entre los iris azules y marrones. La mayor cantidad de iris.
Se encontró variación de color en la muestra europea. Sin embargo, también hubo una gran variación
en los grupos del sur y del este de Asia. El promedio, mínimo y máximo L*, a*, b* y ∆E
Las mediciones de los 1448 participantes se presentan en la Tabla 32. Hay una diferencia notable
entre los dos cuerpos de la cámara en la dimensión L*, confirmando que los cuerpos tienen alguna
variación en el brillo. Como a* y b* son dimensiones de color que fueron diseñadas para ser independientes
Desde el punto de vista del brillo, no es sorprendente que haya menos variación en estas coordenadas (McLaren,
1976). Sin embargo, las tres dimensiones parecen mostrar valores algo más altos en las fotografías.
tomadas con la primera cámara en comparación con las tomadas con la segunda cámara.
60
En cada población, analizamos la asociación entre los marcadores que supuestamente desempeñan un papel
en la variación de pigmentación y las coordenadas L*, a* y b*. En Europa y el sur de Asia
poblaciones, también se examinó la asociación entre cada uno de estos marcadores y ∆E. Con el
excepción de OCA2 rs74653330 en la muestra de Asia Oriental, solo analizamos los polimorfismos que
tenía una frecuencia de alelo menor de al menos 0,05. Para la población europea, esto incluyó HERC2
rs12913832, OCA2 rs1800407, SLC24A4 rs12896399, SLC45A2 rs16891982, TYR rs1393350,
IRF4 rs12203592, DSCR9 rs7277820, TYRP1 rs1408799, NPLOC4 rs9894429, LYST rs3768056
y ASIP rs6058017. En la población de Asia Oriental, esto incluía los marcadores SLC24A4 rs12896399,
DSCR9 rs7277820, NPLOC4 rs9894429, LYST rs3768056, ASIP rs6058017, OCA2 rs1800414
y OCA2 rs74653330. Por último, en la población del sur de Asia esto incluía los marcadores HERC2
rs12913832, SLC24A4 rs12896399, SLC45A2 rs16891982, SLC24A5 rs1426654, TYR
rs1393350, IRF4 rs1126809, DSCR9 rs7277820, TYRP1 rs1408799, NPLOC4 rs9894429, LYST
rs3768056 y ASIP rs6058017. El desequilibrio de ligamiento fue bajo (r2 < 0,1) entre todos los pares de
marcadores ubicados en la región OCA2/HERC2 . La mayoría de los marcadores no mostraron desviaciones de Hardy
Equilibrio de Weinberg. Sin embargo, DSCR9 rs7277820 mostró desviaciones menores en el mercado europeo.
(P = 0,0169) y del sur de Asia (P = 0,0473) y SLC24A5 rs1426654 mostraron importantes
desviaciones (P = 1,199 x 105 ) en la muestra del sur de Asia. Veinticinco personas (cinco asiáticos orientales,
10 europeos y 10 asiáticos del sur) faltaban genotipos en más del 20% de los
polimorfismos y fueron excluidos del análisis genético.
Como los dos cuerpos de la cámara parecían mostrar alguna variación en L*, a* y b*
dimensiones, decidimos realizar un metanálisis de los dos conjuntos de datos. Una asociación lineal
El análisis se realizó primero en cada población para observar la asociación entre cada SNP y
los valores L*, a* y b* para cada cuerpo de cámara. En las poblaciones europeas y del sur de Asia, una
Se llevaron a cabo análisis adicionales para la medición de ∆E. La función del metanálisis en
Luego se utilizó PLINK, utilizando un modelo de efectos fijos, para determinar la significancia combinada y
Tamaño del efecto en cada población.
Los resultados del metanálisis en la población europea se pueden encontrar en la Tabla 33A.
HERC2 rs12913832 estaba fuertemente asociado con las dimensiones L*, a* y b* del espacio de color,
con el alelo ancestral 'A' disminuyendo L* y aumentando las coordenadas a* y b*. Para esto
marcador, las dimensiones a* y b* mostraron desviaciones significativas de la aditividad, lo que indica que
Estas dos dimensiones de color se modelan mejor utilizando un modo de herencia dominante/recesivo.
61
(por ejemplo, el alelo ancestral 'A' es dominante sobre el alelo derivado 'G'). En cambio, la L*
La coordenada no mostró desviaciones significativas de la aditividad. SLC24A4 rs12896399, SLC45A2
rs16891982 e IRF4 rs12203592 se asociaron significativamente con las dimensiones a* y b*.
Para los tres marcadores, los alelos derivados disminuyeron ambas coordenadas. Aunque no teníamos
individuos que eran homocigotos para el genotipo derivado en nuestra muestra, OCA2 rs1800407 fue
asociado significativamente con un aumento en las dimensiones b* del espacio de color. Aparte de
HERC2 rs12913832, ninguno de los marcadores mostró desviaciones significativas de un aditivo

modo de herencia.
Como se sabe que HERC2 rs12913832 es la variante principal responsable de controlar el
diferencia entre el color de ojos azules y marrones, realizamos el análisis nuevamente después de condicionar
este marcador (Tabla 33B). La mayoría de los polimorfismos mostraron efectos similares después del condicionamiento.
Curiosamente, aunque OCA2 rs1800407 ya no estaba asociado con la dimensión b* de
espacio de color, ahora se asoció con las dimensiones L* y a*, con el alelo derivado
aumentando la coordenada L* y disminuyendo la coordenada a*. Por último, TYR rs1393350 ahora estaba
asociado con la dimensión L* del espacio de color, con el alelo 'A' derivado disminuyendo este
coordinar.
En la muestra del sur de Asia, HERC2 rs12913832 se asoció fuertemente con L*, a*
y b* dimensiones del espacio de color (Tabla 34A). El alelo 'G' derivado se asoció con un
aumento en las dimensiones L* y b*, y una disminución en la dimensión a*. HERC2 rs12913832
mostró desviaciones significativas de la aditividad para las tres dimensiones del espacio de color, lo que indica
que se modela mejor utilizando un modo de herencia dominante/recesivo. SLC24A5 rs1426654 era
fuertemente asociado con las dimensiones L*, a* y b* del espacio de color, y cada copia del
El alelo ancestral fue responsable de una disminución en las tres coordenadas. El único otro marcador
asociado con el color del iris en la muestra del sur de Asia fue LYST rs3768056, con la 'G' derivada
alelo que aumenta las coordenadas a* y b*. Acondicionamiento en HERC2 rs12913832 en este
La población tuvo muy poco efecto tanto en los niveles de significancia como en el tamaño del efecto (Tabla 34B).
En la población del este de Asia, solo OCA2 rs1800414 y OCA2 rs74653330 fueron
asociado con la variación del color del iris (Tabla 35A). OCA2 rs1800414 tuvo un efecto significativo en
las dimensiones L*, a* y b* del espacio de color, con cada copia del alelo ancestral disminuyendo
las tres coordenadas. Aunque ningún participante era homocigoto para el alelo derivado en OCA2
rs74653330, tener una copia aumentó significativamente las coordenadas a* y b*. Después
62
Acondicionamiento para OCA2 rs1800414, el efecto de OCA2 rs74653330 se hizo más fuerte, y esto
El marcador ahora estaba asociado con las tres dimensiones del espacio de color (Tabla 35B). Para esto
marcador, el alelo 'A' derivado aumenta las coordenadas L*, a* y b*. Ninguno de los marcadores mostró
cualquier desviación significativa de un modo de herencia aditivo.
El único marcador que se asoció con ∆E en la muestra europea fue HERC2
rs12913832. Este marcador tuvo un efecto aditivo, con cada copia del alelo ancestral disminuyendo
la diferencia de color entre las zonas ciliar y pupilar (Tabla 33A). En el sur de Asia
muestra, tanto HERC2 rs12913832 como SLC24A5 rs1426654 se asociaron con ∆E. HERC2
rs12913832 mostró desviaciones significativas de la aditividad, lo que sugiere que se modela mejor
utilizando un modo de herencia dominante/recesivo. Por el contrario, SLC24A5 no mostró ningún
desviación de la aditividad. Después del acondicionamiento para los efectos de HERC2 rs12913832, SLC24A5
rs1426654 ya no estaba asociado con ∆E.
3.5 Discusión
En este estudio, presentamos un método mejorado para medir el color del iris en diversos
poblaciones y analizó la asociación entre 14 SNP que supuestamente desempeñan un papel en la
Variación de pigmentación y color de ojos en una muestra de Asia oriental, Europa y Asia meridional.
ascendencia. El espacio de color CIE 1976 L*a*b* (CIELAB) es un sistema ideal para medir el color del iris.
Este espacio de color fue diseñado para capturar diferencias perceptibles en la variación de color, lo cual es
importante cuando se observan rasgos humanos visibles que generalmente se distinguen por el color
diferencia (McLaren, 1976). Cada cambio de unidad en el espacio de color CIELAB es visible al menos para el 50%
de observadores (Kuehni y Marcus, 1979). CIELAB también caracteriza el color en tres
coordenadas que son muy paralelas a las diferencias visuales en el color de los ojos. La dimensión L* representa una
dimensión de brillo y varía de 0 a 100, siendo 0 negro y 100 blanco. La A*
y las dimensiones b* representan variación de color, con valores negativos de a* indicando verde y
los valores positivos de a* indican rojo y los valores negativos de b* indican azul y valores positivos
de b* indica amarillo. CIELAB también tiene una métrica de color, ∆E, que se puede utilizar para cuantificar la
diferencia entre dos puntos en el espacio de color (McLaren, 1976). Esto nos permite investigar
variación de color entre diferentes regiones del iris. A diferencia de estudios anteriores, seleccionamos un
cuña para representar el color del iris en lugar de todo el iris. Tomamos esta decisión porque la izquierda
63
El cuadrante del iris tenía menos probabilidades de estar obstruido en nuestra muestra. Además, si elegimos
usar todo el iris pero recortar las regiones de obstrucción, como las pestañas y los párpados, sesgaría
el color del iris hacia la región pupilar. Aunque varios métodos automatizados han
ha sido desarrollado para facilitar el aislamiento del iris de fotografías del ojo (Liu et al., 2010;
Pietroni et al., 2014), elegimos definir manualmente los límites del iris. Esto nos permitió
Separe el ojo en diferentes regiones y observe la diferencia de color entre las capas ciliares.
y zonas pupilares.
A diferencia de estudios anteriores, no encontramos ninguna asociación entre el color del iris y la edad.
o sexo en las poblaciones de muestra de Asia oriental, Europa o Asia meridional. El color del iris ha sido
asociado tentativamente con el sexo en un pequeño número de poblaciones europeas (Pietroni et al., 2014).
Se ha sugerido que esta asociación puede ser muy específica de la población. Mientras mirábamos un
amplia gama de ascendencia biogeográfica en toda Europa y tenía un pequeño número de varones
participantes, no es sorprendente que esta asociación estuviera ausente en nuestra muestra. De igual manera, la falta
de una asociación entre la edad y el color de ojos no es sorprendente, ya que tomamos muestras de una muestra relativamente
rango de edad estrecho en comparación con otros estudios que incluyeron participantes que iban desde niños
to seniors (Bito et al., 1997).
3.5.1 Color del iris en poblaciones europeas

La muestra europea mostró la mayor variación y se extendió por todo el color CIELAB.
espacio. Esto es de esperarse, dado que el color de ojos en esta población varía del azul al verde.
a marrones. Curiosamente, muy pocos individuos de ascendencia europea llegaron a la región del
espacio de color ocupado por los iris marrones más oscuros. En cambio, cuando los individuos de Europa
La ascendencia tenía ojos marrones, tendían a ser más claros. Esto sugiere que puede haber una genética fija.
marcadores en esta población que modulan la intensidad de la pigmentación marrón del iris.
En los últimos años, se han desarrollado varios modelos de predicción del color del iris.
forensic groups (Ruiz et al., 2014; Spichenok et al., 2011; Walsh et al., 2011, 2013). These
Los modelos predicen el color del iris de un individuo en función de su genotipo en un conjunto de iris establecidos.
marcadores de pigmentación. El más conocido de ellos es quizás IrisPlex, un sistema validado forense
modelo de predicción y ensayo genético que utiliza 6 polimorfismos de color del iris (HERC2 rs12913832,
OCA2 rs1800407, SLC24A4 rs129896399, SLC45A2 rs16891982, TYR rs1393350, IRF4
rs12203592) para estimar el color de ojos azul, marrón e intermedio a partir de muestras de ADN desconocidas
64
(Walsh et al., 2011, 2013). Un segundo sistema sugirió que la inclusión de marcadores adicionales
de la región HERC2OCA2 podría mejorar la predicción del color intermedio del iris
fenotipos (Ruiz et al., 2014). Un tercer sistema, conocido como 7Plex, fue diseñado para estimar tanto
color de la piel y del iris (Spichenok et al., 2011). Este sistema utiliza tres SNP (HERC2 rs12913832,
SLC45A2 rs16891982, IRF4 rs12203592) asociado con el iris y el color de la piel, tres SNP
asociado con ascendencia genética (MC1R rs885479, ASIP rs6119471 y OCA2 rs1545397) y
un SNP asociado solo con el color de la piel (SLC24A5 rs1426654) para predecir marrón, no marrón,
No color de ojos azul y verde. Aparte de los marcadores que actualmente se incorporan al iris
modelos de predicción, varios estudios han identificado polimorfismos adicionales que pueden tener un
efecto sobre el color del iris. TYRP1 rs1408799 se ha asociado con la diferencia entre 'azul
y no ojos azules en una población del norte de Europa y ASIP rs6058017 puede desempeñar algún papel
en la modulación del color marrón del iris (Kanetsky et al., 2002; Sulem et al., 2008). Además, tres
Nuevos predictores potenciales del color del iris (DSCR9 rs7277820, NPLOC4 rs9894429, LYST rs3768056)
se identificaron recientemente en un estudio de asociación de todo el genoma (Liu et al., 2010). Sin embargo, a partir de
sin embargo, ninguno de estos marcadores se ha incorporado a ningún algoritmo forense.
En nuestra muestra, HERC2 rs1291832 tuvo el efecto más fuerte en el color de ojos en los tres
Dimensiones del espacio de color. HERC2 rs12913832 se ha caracterizado tradicionalmente por tener un
modo de herencia dominante/recesivo, donde heterocigotos y homocigotos para el ancestral
El alelo tiene ojos marrones o intermedios y los homocigotos del alelo derivado tienen ojos azules.
Esto se reflejó en gran medida en nuestra muestra, ya que las dimensiones a* y b* del espacio de color
mostró desviaciones significativas de la aditividad. Por el contrario, el efecto de HERC2 rs12913832 en
la coordenada L* era en gran medida aditiva, con una copia del alelo ancestral aumentando la
brillo en el ojo en 7.143 unidades y dos copias incrementándolo en 12.586 unidades. Esta sugerencia
que la herencia de este polimorfismo en las poblaciones europeas es más compleja que
modelado tradicionalmente. Aunque este marcador puede controlar la diferencia entre azul y marrón
color de ojos, también tiene efectos más sutiles en la luminosidad general del iris. La naturaleza aditiva
de HERC2 rs12913832 está respaldado por estudios funcionales recientes (Cook et al., 2009). Culto
Las cepas de melanocitos que eran homocigotas para el alelo ancestral tenían más contenido de melanina que las cepas de melanocitos que eran homocigotas para el alelo ancestral.
los homocigotos para el alelo derivado, mientras que los heterocigotos tenían cantidades intermedias. Así,
Parece que HERC2 rs12913832 puede tener efectos tanto dominantes como aditivos sobre el color del iris.
variación, dependiendo de qué dimensiones del espacio de color se estén estudiando.

sesenta y cinco
Además de HERC2 rs12913832, nuestro estudio respalda investigaciones anteriores que muestran que
OCA2 rs1800407, SLC45A2 rs16891982, SLC24A4 rs12896399, IRF4 rs12203592 y TYR
rs1393350 son los principales determinantes del color del iris en las poblaciones europeas (Eiberg et al.,
2008; Kayser et al., 2008; Liu et al., 2010; Sturm et al., 2008; Walsh et al., 2011). All of these
Los marcadores se asociaron significativamente con el color del iris en al menos una dimensión, ya sea antes o después.
después del acondicionamiento para HERC2 rs12913832. No pudimos identificar una asociación entre
variación del color del iris y cualquiera de los otros marcadores. Sin embargo, después del acondicionamiento para HERC2
rs12913832, al tener dos copias del alelo derivado en TYRP1 rs1408799 mostró un límite
asociación significativa con L* (P = 0,054, β = 1,629) y a* (P = 0,007, β = 3,091)
dimensiones del espacio de color y tener una copia del alelo ancestral en ASIP rs6058017
mostró una asociación límite significativa (P = 0,007, β = 2,942) con la dimensión b*. Es
Es posible que el tamaño de nuestra muestra fuera demasiado pequeño para considerar estas asociaciones como significativas.
3.5.2 Color del iris en poblaciones del sur de Asia

La muestra del sur de Asia mostró una diversidad considerablemente menor en el espacio de color CIELAB
que la muestra europea, y la gran mayoría de los participantes en esta muestra tenían ojos que
Se describiría tradicionalmente como marrón. Sin embargo, todavía había un pequeño número de
participantes que cayeron en la región intermedia del espacio de color.
En la actualidad, se han dedicado muy pocas investigaciones al estudio del color del iris en poblaciones
de ascendencia del sur de Asia. HERC2 rs12913832 está presente en bajas frecuencias en el sur de Asia
(Edwards et al., 2012). En esta población, este polimorfismo parece modular la variación en
Color del iris marrón. En un estudio reciente sobre individuos de ojos marrones de ascendencia del sur de Asia, una copia
Se encontró que del alelo 'G' derivado aumenta significativamente las dimensiones L*, a* y b* de
Espacio de color CIELAB (Edwards et al., 2012). Sin embargo, sólo hubo un homocigoto para el
alelo derivado en ese estudio. Aparte de HERC2 rs12913832, el papel que desempeñan otros colores del iris
Los marcadores que se juegan en el sur de Asia aún no han sido probados. Tanto OCA2 rs1800407 como IRF4 rs12203592
tienen frecuencias de alelos menores (MAF) muy bajas en esta población y es poco probable que contribuyan a
variación normal de la pigmentación.
En nuestra muestra del sur de Asia, pudimos replicar la asociación entre HERC2
rs12913832 y variación del color del iris. Este marcador mostró desviaciones significativas de la aditividad.
en las tres dimensiones del espacio de color. Tener dos copias del alelo derivado aumentó L*
66
valores en 17.870 y disminuyeron los valores de a* en 10.856 en relación con los homocigotos ancestrales. Estos
Los efectos son similares a los observados en la muestra europea. Sin embargo, hay una clara
diferencia en el efecto de HERC2 rs12913832 en la dimensión b* del espacio de color en europeos
y asiáticos del sur. En los europeos, el homocigoto derivado se asocia con una muy fuerte
reducción de los valores de b* respecto al homocigoto ancestral (~20 unidades). En cambio, en
En la muestra del sur de Asia, el homocigoto derivado no tiene ningún efecto significativo sobre los valores de b*. De hecho,
En esta muestra, los homocigotos derivados tienen valores b* ligeramente más altos que los ancestrales.
homocigoto. En nuestra muestra del sur de Asia, sólo había 7 individuos homocigotos para el
alelo derivado de HERC2 rs12913832. Estos individuos tuvieron un valor b* promedio entre 8 y 9
(dependiendo de la cámara), indicativo de iris de color intermedio, en contraste con el promedio b*
valores observados en individuos homocigotos para el alelo derivado en Europa, que ronda 7,
dentro de la región azul del espacio de color. Además, los individuos del sur de Asia
Los homocigotos para el alelo ancestral tienen valores b* mucho más bajos (promedio 78, dependiendo de la
cámara) que los homocigotos ancestrales europeos (promedio 1315, dependiendo de la cámara).
Esto se debe principalmente al hecho de que los individuos del sur de Asia tienen el iris de color marrón más oscuro que los
los europeos, y los colores marrón oscuro tienen valores b* más bajos que los colores marrón claro. El
diferencia en el efecto del polimorfismo HERC2 rs12913832 en Europa frente al sur de Asia
sugiere fuertemente que existen otros polimorfismos que modifican el efecto de este marcador tanto en
poblaciones. Nuestra hipótesis es que el efecto de HERC2 rs12913832 puede verse modificado por otros
variantes que son comunes en Europa, pero no en el sur de Asia. Explorar esto requeriría mucho
muestras más grandes que incluyen un número sustancial de homocigotos derivados en el sur de Asia, para explorar
Posibles interacciones de HERC2 rs12913832 con otras variantes de pigmentación.
El único otro marcador que tuvo un fuerte efecto sobre la pigmentación del iris en el sur de Asia
La muestra fue SLC24A5 rs1426654. SLC24A5 rs1426654 es un polimorfismo no sinónimo
(A111T) que da como resultado la sustitución de una guanina por una adenina en el exón tres de SLC24A5.
Este marcador muestra fuertes señales de selección positiva en Europa y el sur de Asia, y ha sido
asociado con la variación de la pigmentación de la piel en los asiáticos del sur y también en individuos mezclados de
ascendencia afroeuropea (Lamason et al., 2005; Stokowski et al., 2007). Análisis funcionales
han descubierto que los homocigotos para el alelo ancestral 'G' tienen un contenido de melanina 2,2 veces mayor
y una actividad TYR 1,7 mayor que los homocigotos para el alelo 'A' derivado (Cook et al., 2009).
Este no es el primer estudio que sugiere que este marcador puede desempeñar algún papel en la pigmentación del iris.
67
variación. Beleza et al. (2013) encontraron que este marcador estaba fuertemente asociado con el color del iris en
una población mixta de ascendencia africanaeuropea. En nuestro estudio, SLC24A5 rs1426654 fue uno
de los principales determinantes del color del iris en los asiáticos del sur. Este marcador mostró un modo aditivo de
herencia para las tres dimensiones del espacio de color, con una copia del alelo ancestral
disminuyendo los valores L*, a* y b* en 2.337, 2.118 y 3.512 respectivamente y una segunda copia
disminuyendo los valores en 3.673, 3.905 y 5.882 en relación con el genotipo derivado homocigótico.
Esto sugiere que el alelo ancestral 'G' es responsable del oscurecimiento del color marrón del iris en este
población. Es importante señalar que en nuestra muestra del sur de Asia, SLC24A5 rs1426654 mostró
desviaciones significativas de las proporciones de HardyWeinberg. Esto no es sorprendente ya que hay bien
estratificación de la población documentada en el sur de Asia y este marcador está bajo una fuerte presión global.
selección (Izagirre et al., 2006; McEvoy et al., 2006; Stokowski et al., 2007). Aunque es
Es posible que la asociación entre este marcador y el color del iris sea un efecto secundario resultante
a partir de la estratificación de la población, no es probable. SLC24A5 rs1426654 tiene una reputación bien establecida.
efectos funcionales sobre la síntesis de melanina y fue el único marcador que mostró mayor
desviaciones de las proporciones de HardyWeinberg en este grupo.
Aunque SLC24A5 rs1426654 y HERC2 rs12913832 fueron los principales determinantes de
color del iris en la muestra del sur de Asia, LYST rs3768056 también mostró una asociación mucho menor
con las dimensiones a* y b* del espacio de color CIELAB, con el alelo 'G' derivado aumentando
ambas coordenadas. La asociación entre LYST rs3768056 y la pigmentación del iris en el Sur
La población asiática es interesante, ya que este es uno de los nuevos marcadores putativos de pigmentación que fue
sugerido para la población europea (Liu et al., 2010). Este marcador puede ser más fuerte
predictor del color del iris en poblaciones de ascendencia no europea. Además, tener una copia de
el alelo 'T' derivado en TYRP1 rs1408799 mostró un efecto límite significativo en a* y
b* dimensiones del espacio de color, con el alelo 'C' derivado aumentando ambas coordenadas.
3.5.3 Color del iris en poblaciones de Asia oriental

El color del iris mostró la distribución más limitada en la muestra de Asia Oriental. Color del iris azul
estaba completamente ausente en este grupo, y sólo un pequeño número de ojos tenía un nivel intermedio o
fenotipo verde. La mayoría de los iris caían en la región del espacio de color asociado con
varios tonos de marrón. El color promedio del iris fue comparable al de la muestra del sur de Asia.
68
Se sabe muy poco sobre los fenotipos de pigmentación en el este de Asia. pigmentación de la piel clara
parece haber evolucionado de forma independiente en Europa y Asia oriental, y hay muy poca superposición en
los marcadores responsables de la diversidad de pigmentación entre estas dos poblaciones (Eaton et al.,
2015; Edwards y otros, 2010; McEvoy et al., 2006; Norton et al., 2007). La mayoría de
Los polimorfismos asociados con la pigmentación clara de la piel en Europa y el sur de Asia están ausentes en
Este de Asia. Además, los únicos marcadores putativos de pigmentación del iris que tienen un alelo MAF
frecuencia superior a 0,05 son SLC24A4 rs129896399, DSCR9 rs7277820, NPLOC4 rs9894429,
LYST 3768056 y ASIP rs6058017. Por tanto, la base genética de la pigmentación del iris en el este de Asia
Es probable que las poblaciones sean muy diferentes a las de otros grupos.
Los determinantes más fuertes de la diversidad de la pigmentación del iris en nuestra muestra fueron OCA2
rs1800414 y OCA2 rs74653330. OCA2 rs1800414 tuvo un efecto aditivo en los tres
Dimensiones del espacio de color CIELAB. Una copia del alelo ancestral 'A' disminuyó el valor de
L*, a* y b* por 1.460, 1.318 y 1.757 respectivamente, y dos copias del alelo ancestral 'A'
disminuyó el valor en 2.793, 2.831 y 4.024. Esto sugiere que el alelo ancestral de este
El marcador juega un papel en el oscurecimiento del color del iris. Aunque no tuvimos ningún participante que
eran homocigotos para el alelo 'A' derivado de OCA2 rs74653330 y tenían una copia del
El alelo derivado aumentó los valores de a* y b*. Después del acondicionamiento para OCA2 rs1800414, el
El efecto de OCA2 rs74653330 se hizo aún más fuerte, y los heterocigotos tenían L*, a* y b*.
valores que eran 2.1509, 2.6713, 3.9180 más altos respectivamente que los homocigotos ancestrales
genotipo.
OCA2 rs1800414 es un polimorfismo no sinónimo (His615Arg) que está presente en
frecuencias muy altas en el este de Asia (Donnelly et al., 2012; Yuasa et al., 2007). La 'G' derivada
El alelo está fuertemente asociado con niveles más bajos de melanina en la piel, con cada copia del alelo 'G'
disminuyendo el índice de melanina de la piel en aproximadamente 0,9 unidades (Edwards et al., 2010). OCA2
rs74653330 es otro polimorfismo no sinónimo (Ala481Thr) que se limita en gran medida a
Asia Oriental (Eaton et al., 2015). El alelo 'T' derivado tiene una frecuencia baja en esta región. Cada
Se ha descubierto que una copia del alelo 'T' derivado reduce el índice de melanina de la piel en aproximadamente
1,9 unidades (Eaton et al., 2015). El gen OCA2 parece estar bajo una fuerte presión selectiva en
East Asia (Donnelly et al., 2012; Eaton et al., 2015; Edwards et al., 2010; Lao et al., 2007).
Dado el papel que desempeña el alelo derivado en aclarar la pigmentación de la piel para ambos
marcadores, es probable que su influencia en el color del iris sea sólo secundaria.
69
3.5.4 Heterocromía central

La heterocromía central es un rasgo que prevalece en poblaciones con colores más claros.
iris (Larsson et al., 2011). Generalmente toma la forma de un iris azul/verde con un anillo de color más oscuro.
pigmento alrededor de la pupila. Cuando hay heterocromía central en el iris, el color más oscuro es
típicamente restringido a la zona pupilar del iris, aunque ocasionalmente se extiende hasta la
zona ciliar. Para caracterizar la magnitud de la heterocromía central en el iris, observamos la
diferencia en el color del iris entre las zonas ciliar y pupilar. Usamos la métrica ∆E para
cuantificar este rasgo, ya que fue diseñado para capturar diferencias perceptibles de color en CIELAB
espacio de color (Kuehni y Marcus, 1979).
En nuestra muestra, el grado de heterocromía central dependía en gran medida de la población,
siendo el grupo europeo el que muestra la mayor prevalencia de este rasgo (Tabla 32). Había
cierta heterocromía en la muestra del sur de Asia; sin embargo, la mayoría de los iris tenían valores de ∆E muy bajos.
El grupo de Asia Oriental mostró la menor diferencia de color. Como la heterocromía estuvo en gran medida ausente en
En nuestra muestra de Asia oriental, solo observamos la asociación entre la pigmentación putativa
marcadores y heterocromía en las muestras de Europa y el sur de Asia.
El único polimorfismo asociado con la heterocromía central en Europa
la muestra fue HERC2 rs12913832. El efecto de este marcador pareció ser aditivo, con uno
copia del alelo ancestral disminuyendo la diferencia de color en 1.220, y dos copias del
alelo ancestral que reduce la diferencia de color en 3.828 en relación con el derivado homocigoto
genotipo. HERC2 rs12913832 también se asoció con heterocromía central en el sur
Población asiática. Sin embargo, en este grupo, parece modelarse mejor utilizando un
modo de herencia dominante/recesivo, con una copia del alelo derivado que aumenta el color
diferencia en 1.305 y dos copias aumentando la diferencia de color en 7.520 en relación con el
Genotipo ancestral homocigoto. Es interesante observar que los heterocigotos para este marcador en
La población europea y del sur de Asia muestran cantidades muy diferentes de diferencia de color.
(Tabla 36). En la muestra europea, el ∆E promedio osciló entre 6,668 y 8,128 cuando
HERC2 rs12913832 se encuentra en estado heterocigoto. Sin embargo, en la muestra del sur de Asia, el
el ∆E promedio solo osciló entre 3,634 y 3,722. Por el contrario, cuando este marcador se encuentra en el
En el estado homocigótico derivado, ambos grupos mostraron cantidades más cercanas de diferencia de color. Está bien
Se sabe que HERC2 rs12913832 puede tener un efecto sobre los fenotipos intermedios. (Spichenok y
otros, 2011; Walsh et al., 2011, 2012). En particular, los individuos que son heterocigotos para este
70
Los marcadores suelen tener colores de iris que van desde azules hasta verdes y marrones. Sin embargo lo és
Es probable que existan otros polimorfismos que interactúen con HERC2 rs12913832 para producir
variación en la heterocromía central. Esto es particularmente evidente cuando se observa el ∆E promedio
en heterocigotos para este marcador en los grupos de Europa y el sur de Asia. A pesar de
Los heterocigotos en la muestra europea muestran cantidades sustanciales de heterocromía central, esto es
no es el caso en la muestra del sur de Asia. Por lo tanto, es probable que existan otros polimorfismos.
modulando el efecto de este marcador en ambos grupos.
Larsson et al. (2011) identificaron una asociación entre SLC24A4 rs12896399 y
variación heterocromática en un estudio de asociación de todo el genoma realizado en una muestra de
Ascendencia europea que vive en Australia. Sin embargo, no pudimos replicar este hallazgo en nuestro
estudiar. Esto puede deberse a que observaron tanto el alcance como la propagación de la heterocromía central,
y solo miramos la diferencia de color. Curiosamente, encontramos un efecto casi significativo
entre ∆E y TYR rs1393350 después del acondicionamiento para HERC2 rs12913832 en el mercado europeo
muestra, con el alelo 'A' derivado aumentando la cantidad de heterocromía en el ojo. TYR
rs1393350 se ha asociado previamente con la diferencia entre ojos azules y verdes.
(Sulem et al., 2008). Asimismo, en la muestra del sur de Asia, SLC24A5 rs1426654 se asoció
con ∆E antes del acondicionamiento para HERC2 rs12913832. Sin embargo, después del condicionamiento, este marcador
ya no era significativo.
Hay una serie de diferencias estructurales entre las zonas pupilar y ciliar,
incluido el grosor y la opacidad de estas regiones (Mackey et al., 2011; Oyster, 1999). Es
Es posible que los marcadores asociados con la estructura del iris también puedan ser determinantes de la función central.
heterocromía.
3.5.5 Una visión global de la base genética de la pigmentación del iris

Aunque la evolución y base genética del color del iris en las poblaciones europeas ha sido
bien estudiado durante la última década, muy pocos grupos de investigación han intentado explorar
Base genética de la variación de la pigmentación del iris en poblaciones de ascendencia no europea. A pesar de
Las poblaciones europeas pueden mostrar la mayor diversidad en fenotipos de color de ojos y color de iris.
La variación se extiende mucho más allá de la diferencia entre azul y marrón. Esto es especialmente evidente
al observar la distribución de la pigmentación del iris en muestras de Asia oriental y meridional en toda la CIE
1976 Espacio de color L*a*b (CIELAB). Aunque la mayoría de los lirios en estas poblaciones
71
tradicionalmente se describiría como marrón, estos marrones mostraron mucha diversidad y variaron desde
de color muy claro a muy oscuro. Así, estudiar el color del iris en poblaciones con más
iris de colores homogéneos nos permitirá abordar el estudio del color del iris desde una serie de
nuevas direcciones y comprender mejor la diversidad global de este rasgo.
Es interesante observar que los marcadores asociados con la variación del color del iris en los tres
Los grupos se han asociado en gran medida con otros rasgos pigmentarios. SLC45A2 rs16891982,
SLC24A5 rs1426654, OCA2 rs1800414 y OCA2 rs7465330 son responsables de las principales
diferencias en la diversidad global de pigmentación de la piel (Eaton et al., 2015; Edwards et al., 2010; Graf
et al., 2005; Lamason et al., 2005; Stokowski et al., 2007). Además, SLC24A4 rs12896399 y
HERC2 rs12913832 se ha asociado con la variación del color del cabello y IRF4 rs12203592 se ha asociado con
se ha asociado con la pigmentación tanto del cabello como de la piel (Han et al., 2008; Sulem et al., 2007). TYR
rs1126809, que está en fuerte desequilibrio de vinculación con TYR rs1393350, también ha sido
asociado tanto con el color de la piel como del cabello (Nan et al., 2009; Sulem et al., 2008). Así, es muy
Probablemente muchos de los marcadores de pigmentación del iris fueron seleccionados por el efecto que tienen.
tenía sobre otras características pigmentarias, y no por su efecto sobre la variación del color del iris. HERC2
rs12913832, que muestra evidencia de una fuerte selección positiva en regiones donde los ojos azules
dominar, puede ser la excepción (Donnelly et al., 2012).
También es interesante observar que los marcadores que modulan la variación del color del iris en cada
región parecen ser muy diferentes. Los seis marcadores comúnmente utilizados como predictores en Europa
todas las poblaciones fueron significativas en nuestra muestra europea. Sin embargo, sólo HERC2 rs12913832 fue
asociado con el color de ojos en la muestra del sur de Asia y ninguno de los marcadores se asoció
con color de ojos en el este de Asia. Más bien, los marcadores que se asociaron significativamente con el iris
La variación de color en las poblaciones del este y sur de Asia fueron en gran medida polimorfismos que jugaron
un papel en la variación de la pigmentación de la piel y el cabello en esas regiones. Estos incluyen SLC24A5
rs1426654 en la muestra del sur de Asia, y OCA2 rs1800414 y OCA2 rs7465330 en el este
Muestra asiática.
Continuar desarrollando una mejor comprensión de la distribución global del color del iris.
La variación tendrá una serie de ventajas. En la actualidad, los marcadores asociados con el nivel intermedio
Los colores de ojos son en gran medida desconocidos. Como resultado, se han desarrollado modelos forenses de predicción del color de ojos.
Se encontró que funciona mal cuando se aplica a poblaciones con una gran proporción de verdes o
ojos intermedios (Dembinski y Picard, 2014; Pneuman et al., 2012; Yun et al., 2014). como el
72
La base genética del color del iris parece ser altamente específica de la población, es fundamental estudiar los ojos.
color en poblaciones fuera de Europa para comprender mejor la arquitectura genética
de este rasgo. Determinar las variantes responsables de la variación del color marrón del iris puede permitir
futuros sistemas de predicción del iris para distinguir entre ojos marrones oscuros y claros en poblaciones
con iris más homogéneos. Esto ampliaría su uso más allá de las poblaciones europeas.
Por último, dado que los marcadores asociados con la pigmentación del iris parecen estar fuertemente asociados
con variación de pigmentación de la piel y el cabello, identificando nuevas variantes asociadas con el color del iris
La variación en las poblaciones de ascendencia no europea puede proporcionar información valiosa sobre la
Base genética del color de la piel y el cabello en estas regiones.
El desarrollo de métodos cuantitativos para medir el color del iris ha abierto muchas
Puertas en la investigación de la pigmentación. Sin embargo, estos métodos aún no se han aplicado ampliamente a
poblaciones de ascendencia no europea. En este estudio, presentamos un nuevo método para estimar el iris.
Color y heterocromía a partir de fotografías de alta resolución. Este método ha sido
implementado en una aplicación web a la que se puede acceder en http://iris.davidcha.ca/. Las cuentas pueden
configurarse para los usuarios interesados previa solicitud. Utilizando este enfoque cuantitativo, identificamos una
variante novedosa asociada con el color del iris en una muestra del sur de Asia y dos variantes novedosas en una
Muestra de Asia oriental. Sugerimos que futuras investigaciones deberían aplicar tales métodos cuantitativos para
otras poblaciones globales, como los grupos afroamericanos e hispanos. Además, como el
La base genética de la heterocromía central y del iris intermedio sigue siendo poco conocida.
sugerimos que el uso de métodos cuantitativos que permitan a los investigadores dividir el iris en
Las regiones pueden proporcionar un nuevo enfoque para estudiar estos rasgos.
73
3.6 Tablas
Tabla 31 Resultados del análisis de confiabilidad intra e interevaluadores

Informamos el coeficiente de intracorrelación para un modelo mixto de dos vías tanto para el evaluador intraevaluador como para el interevaluador.
mediciones del evaluador.
Coeficiente de intracorrelación intraevaluador Coeficiente de intracorrelación entre evaluadores
L* 0,999 0,999
a* 0,999 0,997
b* 0,997 0,992
∆E 0.985 0.985
74
Tabla 32 Estadísticas resumidas de los 1448 participantes incluidos en el estudio

Mostramos el sexo, la edad promedio, mínima y máxima, los valores L*, a*, b* y ∆E de los 1448 participantes incluidos en el análisis (los individuos excluidos
se han omitido de esta tabla) para cada uno de los dos cuerpos de cámara. Los participantes se dividen tanto por ascendencia amplia (asiático oriental,
europeo y del sur de Asia) como por ascendencia regional. Los participantes europeos se dividen en regiones utilizando el geoesquema de las Naciones Unidas
para Europa (http://unstats.un.org/unsd/methods/m49/m49regin.htm). Los participantes de Asia oriental y del sur de Asia se dividen por país de origen.
Cámara Total Edad promedio Machos Promedio L* Promedio a* Promedio b* ∆E promedio
Regional
Ascendencia Cuerpo Número (Mínimo máximo) (Mujeres) (Mín., Máx.) (Mínimo máximo) (Mín., Máx.) (Mínimo máximo)
1 87 21 (18,34) 26 (61) 26.914 (19.525,36.683) 13.674 (8.832,20.391) 12.9 8,158 (0,982,17,891) 2,476 (0,638,4,748)
Porcelana
2 274 22 (18,35) 78 (196) 22.182 (14.239,36.669) (7.299,20.010) 14.311 7,289 (0,3,18,203) 2,109 (0,063,5,705)
1 2 21 (19,23) 1 (1) 27.372 (24.384,30.36) (13.202,15.419) 13.563 7,329 (6,544,8,115) 1,762 (1,605,1,918)
Japón
2 6 24 (18,29) 1 (5) 21.846 (15.43,26.468) (9.845,15.087) 13.732 8,714 (5,543,11,411) 2,006 (0,657,2,788)
Este 1 21 24 (18,29) 10 (11) 27.055 (22.65,38.532) (8.399,17.410) 12.56 8,728 (0,932,16,177) 2,251 (0,399,6,519)
Corea
asiático 2 52 22 (18,31) 24 (28) 21.034 (15.814, 28,17) (6.594,18.14 7) 12.524 7,136 (0,098,18,372) 2,203 (0,523,5,199)
1 2 21 (20,22) 1 (1) 27,08 (23,85,30,31) (10.539,14.509) 10.961 6,53 1 (3.354,9.708) 2,607 (2,046,3,168)
Taiwán
2 7 20 (19,23) 2 (5) 19,798 (16,502,23,522) (7.709,13.119) 13.437 4.635 (1.36,6.767) 1.881 (1.329,2.868)
1 4 21 ( 19,25) 0 (4) 27,43 ( 24.298.30.477) ( 10.063,16.724) 11.949 7.911 ( 3,51,12,166) 6 2.992 (2.311,3.861)
Otro
2 13 21 (18,26) 5 (8) 20.44 (14.685.26.547) (7.921,16.724) 1.055 (0,664,11,902) 2,252 1,999 (0,748,3,203)
Oriental 1 53 21 (18,35) 24 (29) 45.002 (30.834.62.23) (8.444,18.733) 1.663 (15,797,20,44) 1,795 9,277 (1,114,16,684)
Europa 2 67 23 (18,35) 25 (42) 38.229 (18.899.53.004) (7.734,19.962) 0.43 (17,65,21,611) 1,828 7,671 (0,683,16,153)
Del Norte 1 33 23 (19,35) 11 ( 22) 45.279 (30.857.57.16) (8.225,16.027) 1.5 (18,61,21,473) 3,406 9.129 (3.508,17.378)
Europa 2 74 24 (18,35) 33 (41) 37.97 (25.269.49.584) (6.961,17.543) 10.8 94 (15,832,22,095) 12,512 6.832 (1.702,14.721)
Del Sur 1 47 21 (18,27) 16 (31) 38.821 (26.084,55.444) (6.601,22.009) 8.942 (14,18,22,418) 10,045 ( 6,451 (0,796,14,674)
europeo
Europa 2 52 22 (18,35) 22 (30) 33.813 (21.294,52.467) (6.713 ,21,318) 3,663 12.828,19.776) 2.576 6,4 (0,657,15,402)
occidental 1 3 20 (18, 23) 0 (3) 47.903 (41.213, 52.606) (6,977,1,149) 4,705 (1.76,4.923) 5.376 12.418 (10.731,13.312)
Europa 2 5 24 (19,32) 2 (3) 35.911 (28.341,43.317) (5,882,13,278) 1,611 (17.356,13.636) 1.911 6.456 (1.515,10.712)
1 99 22 (18,31) 36 (63) 44.622 (27.588,61.609) (8,035,21,032) 0,436 (18.957,24.087) 0.328 8,447 (1,343,19,264)
Otro
2 187 23 (18,35) 76 (110) 38.191 (19.674,52.872) (7,315,19,87) 12,977 (18.475,22.067) 6.099 7,239 (0,509,16,921)
1 5 24 (18,33) 1 (4) 27.792 (22.245,30.599) (7,632,15,868) 13,419 (1 (0.481,9.061) 8. 679 3.257 (2.339,4.588)
Bangladesh
2 12 21 (18,32) 5 (7) 25.107 (19.351,31.789) 29. 1.086,16.25) 13.81 (0.912, (3.468,17.146) 8.564 2,663 (0,416,8,207)
1 93 21 (18,32) 32 (61) 56 (19.918.50.209) 25.105 22.671) 14.16 (6.26,21.256) (1.732,20.147 ) 8.134 2,807 (0,908,10,391)
India
2 88 21 (18,35) 38 (50) (15.533.37.93) 30.401 14.665 (0.429,25.925) (1.427.19.367) 9.595 2,117 (0,156,7,782)
Sur 1 48 20 (18,24) 15 (33) (21.266.50.995) 27,53 14.028 (1.643,19.802) (1.2.26.796) 9.148 3,204 (0,451,13,486)
Pakistán
asiático 2 36 20 (18,31) 9 (27) (18.311,48.769) 27.698 12.049 (7.101,18.796) 11.5 (1.955.18.111) 6.001 2,99 (0,561,11,616)
1 23 20 (18,21) 5 (18) (18.31,42.544) 23.467 (1.746,21.599) 13.747 (0.198.15.982) 4.772 2,343 (0,247,7,118)
Sri Lanka
2 26 20 (18,26) 5 (21) (16.704,40.457) 32.627 (2.94 ,18.521) 14.169 (1.493.17.479) 9.735 2,317 (0,926,9,633)
1 19 20 (18,23) 6 (13) (25.853,47.392) 24.451 (10.034,19.247) (2.136.21.9 73) 8.212 3,437 (0,378,10,773)
Otro
2 10 20 (18,27) 2 (8) (18.644,30.629) (3.967,16.983) 2,577 (1,003,5,219)
75
Tabla 33 Resultados del metanálisis en la muestra europea (A) antes y (B) después del acondicionamiento
para los efectos de HERC2 rs12913832
Informamos el valor P de la asociación, el tamaño del efecto (beta) y el valor P para la estadística Q de Cochran para
cada copia adicional del alelo menor en relación con el genotipo de referencia. Después de la corrección de Bonferroni
para comparaciones múltiples, las asociaciones fueron significativas si P <0,00454. Los genotipos de referencia
marcados con un asterisco (*) representan el estado ancestral homocigoto. Las asociaciones importantes
están en negrita y cursiva.
Referencia Color Significado Heterogeneidad

Gene Marcador Genotipo Beta
Genotipo Métrico (PAG) (PAG)
(A)
Georgia 3,907x1054 _ 7.143 0.041
L*
Automóvil club británico 1.023x1056 _ 12.586 0.023
Georgia 4,641 x 10216 12.971 0.031
a*
Automóvil club británico 5,203 x 10137 17.985 0.039
HERC2 rs12913832 GG
Georgia 1,872 x 10223 18.343 0,071
b*
Automóvil club británico 1,863 x 1096 20.659 0.271
Georgia 1.098x1005 _ 1.236 0.443
∆E
Automóvil club británico 3.667x1015 _ 3.846 0,088
Georgia 0,796 0.221 0.252
L*

Georgia 0.150 1.542 0,748
a*

OCA2 rs1800407 GG*
Georgia 0.003 4.297 0,887
b*

Georgia 0,852 0.080 0,431
∆E

GT 0.066 1.121 0.556
L*
TT 0.325 0,789 0,648
GT 0.004 2.202 0,759
a*
TT 0.080 1.759 0,596
SLC24A4 rs12896399 GG*
GT 7.191x1004 _ 3.446 0.470
b*
TT 1.758x1004 _ 5.018 0.707
GT 0,949 0.019 0,718
∆E
TT 0,071 0,725 0.060
GC 0,059 1.610 0,085
L*
CC 0.230 3.818 0.026
GC 9.655x1007 _ 5.139 0.170
a*
CC 0.050 7.714 0,047
SLC45A2 rs16891982 GG
GC 2.069x1006 _ 6.740 0,666
b*
CC 0.244 6.100 0.116
GC 0.150 0,621 0,659
∆E
CC 0.209 2.039 0.422
Georgia 0.543 0,349 0.022
L*
Automóvil club británico 0,029 2.604 0,077
Georgia 0.443 0,556 0.356
a*
Automóvil club británico 0.261 1.694 0,725
TYR rs1393350 GG*
Georgia 0,077 1.721 0.308
b*
Automóvil club británico 0.261 2.258 0.883
Georgia 0.896 0,038 0.247
∆E
76
Referencia Color Significancia Heterogeneidad

Genotipo Métrico (P) (P)
Connecticut 0,206 0.802 0,791
L*
TT 0.033 3.381 0.921
Connecticut 0.008 2.077 0.473
a*
TT 0.003 5.917 0.464
IRF4 rs12203592 CC*
Connecticut 0.013 2.624 0.167
b*
TT 1.072x1004 _ 10.058 0.523
Connecticut 0.041 0,652 0.967
∆E
TT 0.704 0.305 0,634
Connecticut 0,79 0 0,156 0.238
L*
TT 0.041 1.857 0.409
Connecticut 0,24 5 0,858 0.425
a*
TT 0.007 3.091 0,89 0
TYRP1 rs1408799 CC
Connecticut 0.248 1.151 0,739
b*
TT 0.083 2.669 0,447
Connecticut 0.154 0,42 0 0.381
∆E
TT 0.096 0,763 0,134
Connecticut 0.109 1.035 0.305
L*
TT 0,686 0.321 0,359
Connecticut 0,89 0 0.112 0.623
a*
TT 0.117 1.564 0.518
NPLOC4 rs9894429 CC*
Connecticut 0.845 0,213 0.252
b*
TT 0.04 0 2.755 0.549
Connecticut 0,489 0.225 0.245
∆E
TT 0.167 0.554 0,53 0
AG 0,151 0.842 0,762
L*
GG 0.438 1.01 0 0,015
AG 0,097 1.226 0.354
a*
GG 0.814 0.387 0,14 2
LUZ rs3768056 AUTOMÓVIL CLUB BRITÁNICO*
AG 0.056 1.89 0 0,594

b*
GG 0.904 0,267 0.095
AG 0.165 0.408 0.462
∆E
GG 0,875 0,103 0.006
AG 0,185 0.906 0,296
L*
GG 0,67 0 0,951 0,391
AG 0,047 1.695 0,448
a*
GG 0,393 2.396 0,48 0
UN SORBO rs6058017 AA
AG 0.012 2.887 0.536
b*
GG 0.309 3.789 0.248
AG 0,391 0,294 0.023
∆E
GG 0.065 2.079 0.551
(B )
Georgia 1.767x1007 _ 3.552 0,498
L*

Georgia 2.203x1009 _ 3.835 0,872
a*

OCA2 rs1800407 GG*
Georgia 0.013 2.389 0,624
b*

Georgia 0.082 0,736 0,772
∆E

77

GT 0,111 0.909 0,200
L*
TT 0,457 0.555 0,52 0
GT 0.007 1.902 0.311
a*
TT 0,115 1.453 0.464
SLC24A4 rs12896399GG*
GT 0.001 3.205 0.201
b*
TT 2.134x1004 _ 4.725 0,617
GT 0,691 0,118 0,439
∆E
TT 0.039 0.803 0.039
GC 0,687 0,327 0,176
L*
CC 0,876 0,458 0.000
GC 2.278x1004 _ 3.675 0,34 0
a*
CC 0,25 8 4.105 0.001
SLC45A2 rs16891982GG
GC 9.493x1005 _ 5.458 0.968
b*
CC 0.602 2.625 0,017
GC 0,647 0,197 0.946
∆E
CC 0.542 0.961 0.106
Georgia 0.907 0.062 0.005
L*
Georgia 0.214 0,828 0,192
a*
Automóvil club británico 0.086 2.367 0,99 9
TYR rs1393350 GG*
Georgia 0.034 1.974 0.201
b*
Georgia 0.845 0.055 0,158
∆E
Connecticut 0.332 0.575 0.862
L*
TT 0,027 3.22 0 0,688
Connecticut 0,016 1.745 0.561
a*
TT 0.001 5.809 0,617
IRF4 rs12203592 CC*
Connecticut 0.024 2.282 0,651
b*
TT 5.917x1005 _ 9.916 0,997
Connecticut 0,058 0,588 0.951
∆E
TT 0,628 0,375 0,487
Connecticut 0,839 0,111 0.506
L*
TT 0.054 1.629 0.363
Connecticut 0.254 0,776 0,82 0
a*
TT 0.008 2.811 0.864
TYRP1 rs1408799 CC
Connecticut 0,289 1.011 0,892
b*
TT 0.106 2.372 0.405
Connecticut 0,149 0,415 0.613
∆E
TT 0,124 0,684 0.111
Connecticut 0,124 0,925 0,179
L*
TT 0,698 0,287 0,291
Connecticut 0.844 0,147 0,795
a*
TT 0.081 1.608 0.465
NPLOC4 rs9894429 CC*
Connecticut 0,637 0,494 0,349
b*
TT 0,029 2.808 0.539
Connecticut 0,399 0.267 0,194
∆E
TT 0.155 0.553 0,477
78

AG 0,166 0,755 0,909
L*
GG 0,589 0.655 0.006
AG 0,098 1.12 2 0,395
a*
GG 0,636 0,712 0.094
BRILLANTE rs3768056 AA*
AG 0.061 1.773 0.631
b*
GG 0.985 0.04 0 0,071
AG 0,198 0,367 0.328
∆E
GG 0,718 0,228 0.004
AG 0.143 0,923 0,298
L*
GG 0.964 0.093 0.404
AG 0,027 1.737 0,479
a*
GG 0,682 1.053 0.528
AG 0.007 2.942 0,589
b*
GG 0,491 2.444 0,277
AG 0,38 0 0,29 0 0.02 0
∆E
GG 0.024 2.444 0,56 0
79
Tabla 34 Resultados del metanálisis en la muestra del sur de Asia (A) antes y (B) después del acondicionamiento
para los efectos de HERC2 rs12913832
Informamos el valor P de la asociación, el tamaño del efecto (beta) y el valor P para la estadística Q de Cochran para cada
copia adicional del alelo menor en relación con el genotipo de referencia. Después de la corrección de Bonferroni
para comparaciones múltiples, las asociaciones fueron significativas si P <0,00500. Los genotipos de referencia marcados
con un asterisco (*) representan el estado ancestral homocigoto. Las asociaciones importantes están en negrita
y cursiva.

(A)
AG 5.042 x 1014 4.652 0.530
L*
GG 7.535 x 1026 17.867 0,879
AG 7.571 x 1004 1.601 0,885
a*
GG 9,703x1017 _ 10.856 0,897
HERC2 rs12913832AA*
AG 7.073x1011 _ 4.165 0,669
b*
GG 0.390 1.510 0.770
AG 8,583 x 1010 1.305 0,074
∆E
GG 6,443 x 1038 7.520 0.916
AG 8,901 x 1004 2.337 0,948
L*
GG 0.002 3.673 0,689
AG 1.400x1005 _ 2.118 0.710
a*
GG 1.538x1006 _ 3.905 0.956
SLC24A5 rs1426654AA
AG 6.703x1009 _ 3.512 0,789
b*
GG 5.271x1009 _ 5.881 0.921
AG 0.002 0,775 0.527
∆E
GG 0.261 0,476 0,379
GT 0.807 0.147 0.414
L*
TT 0,793 0,299 0,871
GT 0.147 0,615 0.133
a*
TT 0.343 0,763 0.186
SLC24A4 GG*
rs12896399 GT 0,172 0.741 0.200
b*
TT 0.523 0,657 0.470
GT 0.325 0.210 0,874
∆E
TT 0.210 0.507 0.542
CG 0.943 0.050 0.094
L*
GG 0.607 1.597 0,427
CG 0.409 0.408 0.225
a*
GG 0.701 0,849 0,431
SLC45A2 rs16891982 CC*
CG 0.964 0,028 0.114
b*
GG 0,398 2.385 0.365
CG 0.609 0,127 0,759
∆E
GG 0.964 0.050 0,639
Georgia 0.534 0.510 0.321
L*
Automóvil club británico 0.907 0,280 0.241
Georgia 0,715 0,213 0.807
a*
TYR rs1393350 GG*
Georgia 0,752 0.233 0,135
b*
Georgia 0,448 0.222 0,174
∆E
80

TC 0,116 0.946 0,17 0
L*
CC 0,795 0.252 0,857
TC 0.009 1.106 0.226
a*
CC 0.014 1.674 0,28 0
TYRP1 rs1408799 TT*
TC 0.024 1.224 0.606
b*
CC 0.007 2.366 0,671
TC 0.109 0,344 0,027
∆E
CC 0.509 0,229 0.94 0
TC 0.615 0,315 0.382
L*
CC 0.802 0,213 0.891
TC 0,297 0,464 0.412
a*
CC 0,636 0,284 0,877
NPLOC4 rs9894429 TT
TC 0,148 0.819 0,696
b*
CC 0.163 1.068 0.717
TC 0,198 0.283 0,097
∆E
CC 0,839 0.061 0,359
AG 0.091 1.012 0.933
L*
GG 0,292 1.145 0.603
AG 0.002 1.308 0,475
a*
GG 0,046 1.544 0,168
BRILLANTE rs3768056 AA*
AG 0.002 1.696 0.808
b*
GG 0.064 1.836 0.241
AG 0,73 0 0,074 0.655
∆E
GG 0.331 0,38 0 0,63 0
Georgia 0.961 0.031 0.844
L*
Automóvil club británico 0,628 0,45 0 0,174
Georgia 0.321 0.441 0.228
a*
DSCR9 rs7277820 GG*
Georgia 0.356 0.524 0.271
b*
Automóvil club británico 0.507 0,556 0.05 0
Georgia 0.311 0,228 0.907
∆E
Automóvil club británico 0.556 0,195 0,988
AG 0.204 0,797 0,895
L*
GG 0.763 0,356 0.655
AG 0,472 0.318 0,027
a*
GG 0.661 0,367 0.523
AG 0.248 0.655 0.171
b*
GG 0.733 0.366 0.505
AG 0.406 0,185 0,168
∆E
GG 0,75 0 0,134 0,349
(B )
AG 0.003 1.918 0,979
L*
GG 0.002 3.255 0,637
AG 1.651x1008 _ 2.461 0,759
a*
GG 4.900x1009 _ 4.233 0,997
SLC24A5 rs1426654AA
AG 5.237x1009 _ 3.56 0 0.823
b*
GG 4.738x1009 _ 5,922 0.902
AG 0.007 0,586 0,499
∆E
GG 0.417 0,292 0.283
81

GT 0,896 0,071 0,093
L*
TT 0,45 0 0,778 0,329
GT 0,157 0,554 0.337
a*
TT 0.547 0,447 0,471
SLC24A4 GG*
rs12896399 GT 0.167 0,757 0,196
b*
TT 0.501 0,699 0.461
GT 0.362 0.166 0.261
∆E
TT 0,399 0,291 0,782
CG 0.386 0.542 0.019
L*
GG 0.633 1.32 0 0.381
CG 0,766 0,135 0.328
a*
GG 0.744 0,662 0,389
SLC45A2 rs16891982 CC*
CG 0.903 0,078 0,097
b*
GG 0.404 2.365 0,37 0
CG 0,781 0,059 0.357
∆E
GG 0,957 0.051 0.572
Georgia 0,492 0.507 0.568
L*
Georgia 0,653 0.24 0 0,474
a*
TYR rs1393350 GG*
Georgia 0,788 0.200 0,151
b*
Georgia 0.358 0.228 0.347
∆E
TC 0.025 1.215 0.382
L*
CC 0.407 0,719 0,729
TC 0.021 0.905 0.405
a*
CC 0.032 1.343 0.269
TYRP1 rs1408799 TT*
TC 0,028 1.208 0,68 0
b*
CC 0.007 2.362 0,643
TC 0.225 0,224 0,069
∆E
CC 0.926 0,027 0,945
TC 0.601 0,296 0,682
L*
CC 0.864 0.13 0 0,751
TC 0.29 0 0,432 0,63 0
a*
CC 0.532 0.343 0.986
NPLOC4 rs9894429 TT
TC 0,177 0,771 0.623
b*
CC 0.165 1.066 0,715
TC 0,135 0,28 0 0.205
∆E
CC 0.93 0 0.022 0.383
AG 0.041 1.093 0,828
L*
GG 0.369 0,87 0 0.231
AG 0.001 1.299 0.319
a*
GG 0.014 1.732 0.325
LUZ rs3768056 AUTOMÓVIL CLUB BRITÁNICO*
AG 0.002 1.744 0.743

b*
GG 0,069 1.808 0.227
AG 0.813 0.042 0.713
∆E
GG 0.137 0,486 0,848
82

Georgia 0,948 0.037 0,658
L*
Georgia 0,287 0,437 0,484
a*
DSCR9 rs7277820 GG*
Georgia 0,378 0.506 0.273
b*
Georgia 0.204 0,242 0.337
∆E
AG 0,168 0,778 0.307
L*
GG 0,429 0,84 0 0,882
AG 0,476 0,291 0,089
a*
GG 0,884 0,112 0,871
AG 0,278 0.621 0.145
b*
GG 0,79 0 0,288 0.549
AG 0.315 0.191 0,58 0
∆E
GG 0,885 0,052 0,759
83
Tabla 35 Resultados del metanálisis en la muestra de Asia oriental (A) antes y (B) después del
acondicionamiento para los efectos de OCA2 rs1800414
Informamos el valor P de la asociación, el tamaño del efecto (beta) y el valor P para la estadística Q de Cochran para
cada copia adicional del alelo menor en relación con el genotipo de referencia. Después de la corrección de Bonferroni
para comparaciones múltiples, las asociaciones fueron significativas si P <0,00714. Los genotipos de referencia
marcados con un asterisco (*) representan el estado ancestral homocigoto. Las asociaciones importantes
están en negrita y cursiva.

(A)
Georgia 1.434x1005 _ 1.460 0.503
L*
Georgia 5.187x1008 _ 1.319 0,493
OCA2 rs1800414GG a*
Automóvil club británico 1,704x1016 _ 2.831 0.926
Georgia 1.137x1007 _ 1.757 0.510
b*
Georgia 0,069 1.201 0,177
L*

Georgia 4.310x1004 _ 1.700 0.153
OCA2 rs74653330 GG* a*

Georgia 1.141x1004 _ 2.556 0.063
b*

GT 0.273 0,375 0,432
L*
TT 0.902 0,067 0.267
GT 0,088 0,429 0.263
SLC24A4 GG* a*
rs12896399 TT 0.161 0,562 0.190
GT 0,027 0,761 0,129
b*
TT 0,018 1.294 0.057
Georgia 0.186 0,477 0,296
L*
Georgia 0.140 0,395 0.984
DSCR9 rs7277820 GG* a*
Automóvil club británico 0,087 0,577 0.468
Georgia 0,042 0.745 0.734
b*
TC 0,634 0,161 0.506
L*
CC 0.844 0.170 0,089
TC 0,782 0,069 0,648
NPLOC4 rs9894429 TT a*
CC 0.990 0.008 0.154
TC 0,442 0,265 0,739
b*
CC 0.590 0,474 0.337
AG 0.306 0,359 0.323
L*
GG 0,379 0,879 0.001
AG 0,168 0.364 0,471
LUZ rs3768056 AUTOMÓVIL CLUB BRITÁNICO* a*
GG 0.703 0,288 0,748
AG 0.161 0.505 0.388
b*
GG 0,397 0,873 0.032
84

AG 0,338 0.332 0,796
L*
GG 0,434 0.582 0.081
AG 0,67 0 0.109 0,754
UN SORBO rs6058017 AA a*
GG 0,725 0,195 0.093
AG 0.921 0.035 0,682
b*
GG 0.707 0.283 0.003
(B)
Georgia 8.781x1004 _ 2.151 0,298
L*

Georgia 3.071x1009 _ 2.671 0.31 0
OCA2 rs74653330 GG* a*

Georgia 1.847x1010 _ 3.918 0.143
b*

GT 0.304 0,347 0.315
L*
TT 0.984 0.011 0.373
GT 0,085 0,42 0 0.138
SLC24A4 GG* a*
rs12896399 TT 0,189 0,509 0.229
GT 0.023 0,754 0.052
b*
TT 0.021 1.213 0.112
Georgia 0.275 0.388 0.321
L*
Automóvil club británico 0,495 0.306 0.468
Georgia 0.255 0,294 0,888
DSCR9 rs7277820 GG* a*
Automóvil club británico 0,282 0.352 0.416
Georgia 0.09 0 0,599 0.808
b*
TC 0,712 0,123 0,274
L*
CC 0,796 0,22 0 0,132
TC 0.812 0,058 0,259
NPLOC4 rs9894429 TT a*
CC 0.908 0,071 0.255
TC 0.451 0,25 0 0,726
b*
CC 0.645 0,388 0.525
AG 0,293 0.363 0,298
L*
GG 0.445 0,749 0.002
AG 0,146 0.369 0,41 0
LUZ rs3768056 AUTOMÓVIL CLUB BRITÁNICO* a*
GG 0.819 0.167 0.814
AG 0.138 0,51 0 0.324
b*
GG 0,474 0.706 0.032
AG 0,491 0.235 0.802
L*
GG 0,48 0 0.519 0.117
AG 0.971 0.009 0,751
UN SORBO rs6058017 AA a*
GG 0.816 0,124 0,157
AG 0.744 0.11 0 0,681
b*
GG 0.805 0,178 0.006
85
Tabla 36 ∆E promedio, mínimo y máximo estratificado por genotipo HERC2 rs12913832
Informamos los valores promedio, mínimo y máximo de ∆E para los tres posibles genotipos HERC2
rs12913832 para las poblaciones europea y del sur de Asia. Se utiliza un * para representar el estado
ancestral homocigoto. La muestra de Asia oriental era monomórfica para este marcador y no se incluyó
en la tabla. Obsérvese la diferencia sustancial en el ∆E promedio entre las muestras heterocigotas europeas
y del sur de Asia.
Genotipo HERC2 Cámara ∆E promedio ∆E mínimo ∆E máximo
Cámara 1 4.806 0.823 11.503

AUTOMÓVIL CLUB BRITÁNICO*
Cámara 2 4.578 0.509 9.936
Cámara 1 8.128 1.394 16.527

europeo AG
Cámara 2 6.668 0,683 16.153
Cámara 1 9.669 1.515 19.264

GG
Cámara 2 7.751 1.605 16.921
Cámara 1 2.589 0.247 9.433

Cámara 2 2.015 0,156 5.655
Cámara 1 3.634 0,957 10.391

Sur
AG
asiático Cámara 2 3.722 0.511 9.918
Cámara 1 10.043 5.328 13.486

GG
Cámara 2 9.598 7.545 11.616
86
3.7 Cifras
Figura 31 Distribución de iris a lo largo de b* y a* (A), a* y L* (B), y b* y L* (C), coordenadas de CIE 1976 L*a*b*
(CIELAB ) Espacio de color para el segundo cuerpo de la cámara
Los participantes de Asia oriental están representados por triángulos, los participantes europeos están representados por
cuadrados y los participantes de Asia meridional están representados por círculos. El color interior de cada forma es
equivalente al color promedio del iris de la cuña del participante en el espacio de color CIELAB. Se puede observar una
amplia dispersión en el espacio de color en las tres poblaciones. Ambas cámaras muestran distribuciones muy similares en
todo el espacio de color. Sin embargo, los valores promedio de L*, a* y b* de la primera cámara son más altos que los
de la segunda cámara.
87
88
Figura 32 Ejemplos de cuñas de iris con valores de espacio de color correspondientes
Se recorta una cuña con un ángulo de 60 grados desde el lado izquierdo del iris en función de los límites esclerales y
pupilares que el usuario define manualmente durante la categorización del iris. Para obtener una medición del color
promedio del iris, la aplicación determina el valor rojo, verde y azul (RGB) de cada píxel ubicado en la cuña y
divide la suma de los valores RGB por el número total de píxeles contados. Luego, los valores RGB se transforman al
espacio de color CIE 1976 L*a*b* (CIELAB) utilizando un iluminante de D55 y un ángulo de observador de 2
grados. La aplicación web también divide el iris en una zona ciliar y pupilar según el collar definido por el usuario.
En la imagen siguiente, mostramos las cuñas pupilares y ciliares de seis iris de diferentes colores. Los valores L*, a*,
b* y ∆E están escritos a la derecha de cada iris.
89
3.8 Referencias
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Capítulo 4:
Análisis de las características de la superficie del iris en poblaciones de
Ascendencia diversa
Contribuciones del autor: M. Edwards participó en el diseño del estudio, recopiló los datos, realizó el análisis de los
datos y redactó el manuscrito. D. Cha desarrolló el programa de estructura del iris y ayudó con el análisis de
datos. S. Krithika y M. Johnson ayudaron con la recopilación de datos y el trabajo de laboratorio molecular. EJ
Parra concibió el estudio, participó en su diseño, lo coordinó y ayudó a redactar el manuscrito.
Este capítulo se publicó anteriormente como: Edwards, M., Cha, D., S. Krithika., Johnson, M., Parra, EJ (2016)
Análisis de las características de la superficie del iris en poblaciones de ascendencia diversa. R. Soc. Ciencia abierta. 3,
150424.
94
95
4.1 Resumen
Hay muchos elementos texturales que se pueden encontrar en el ojo humano, incluido el de Fuchs.
criptas, nódulos de Wolfflin, manchas pigmentarias, surcos de contracción y melanosis conjuntival.
Aunque las características de la superficie del iris han sido bien estudiadas en poblaciones de ascendencia europea, la
La distribución mundial de estos rasgos no se comprende bien. En este trabajo desarrollamos una nueva
Método para caracterizar las características del iris a partir de fotografías del iris. Luego aplicamos este método a
una muestra diversa de ascendencia del este de Asia, Europa y el sur de Asia. Se mostraron las cinco características del iris.
diferencias significativas en la frecuencia entre las tres poblaciones, lo que indica que las características del iris
dependen en gran medida de la población. Aunque ninguna de las características estaba correlacionada entre sí.
en los grupos del este y sur de Asia, las criptas de Fuchs se correlacionaron significativamente con la contracción
Los surcos y las manchas de pigmentación y los surcos de contracción se asociaron significativamente con la pigmentación.
puestos en el grupo europeo. El marcador genético SEMA3A rs10235789 fue significativamente
asociado con el grado de cripta de Fuchs en las muestras de Europa, Asia oriental y del sur de Asia y un
Se encontró una asociación límite entre TRAF3IP1 rs3739070 y el grado del surco de contracción en
la muestra europea. El estudio de las características de la superficie del iris en diversas poblaciones puede proporcionar
valiosa información de interés forense, biomédico y oftalmológico

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4.2 Introducción
El iris humano es un tejido complejo que consta de muchas regiones y estratos diferentes. A
El ojo humano sano suele tener cinco capas diferentes. La capa más posterior se llama iris.
epitelio pigmentario (EIP). Esta capa está repleta de melanocitos cúbicos ricos en melanina en
todos los individuos sanos y no contribuye significativamente a la variación en el color o la estructura del iris
(Eagle, 1988; Peles et al., 2009; Wilkerson et al., 1996). Justo encima del IPE hay dos músculos.
capas, conocidas como músculo esfínter y músculo dilatador (Eagle, 1988). Las dos capas que
son responsables de la mayor parte de la variación entre individuos son la capa del borde anterior y la
capa estromal. La capa del borde anterior está formada principalmente por fibroblastos y melanocitos.
(Eagle, 1988; Imesch et al., 1996; Oyster, 1999). Por el contrario, el estroma es una malla suelta de
fibras de colágeno, melanocitos, fibroblastos y células agrupadas. La superficie del ojo también puede ser
dividida en dos regiones: la zona pupilar y la zona ciliar (Oyster, 1999). Estas regiones son
delimitado por un anillo de tejido conocido como collarette, que es producto de la reabsorción del
membrana pupilar durante el desarrollo. Hay diferencias de espesor entre estos dos.
zonas, lo que conduce a variaciones en color y estructura (Oyster, 1999).
Hay muchos elementos texturales que se pueden encontrar en el ojo humano sano. Estos
incluyen criptas de Fuchs, nódulos de Wolfflin, manchas pigmentarias, surcos de contracción y
melanosis (Figura 41). Las criptas de Fuchs son lagunas en forma de diamante en la capa del borde anterior de
el iris, que surgen por primera vez durante la reabsorción de la membrana pupilar (Purtscher, 1965).
Los nódulos de Wolfflin son pequeños haces de colágeno que se acumulan a lo largo del borde exterior del iris.
(Donaldson, 1961; Williams, 1981). Las manchas de pigmento son pequeñas regiones de hiperpigmentación en
la capa del borde anterior. Pueden ser superficiales (pecas) o distorsionar el estroma subyacente.
capa (nevos) [Eagle, 1988; Harbour y otros, 2004; Rennie, 2012]. Por último, los surcos de contracción son
pliegues que caen en anillos alrededor del borde exterior del iris (Eagle, 1988). Se cree que son los
Producto de la dilatación y la contracción de la pupila. Algunos iris también pueden mostrar conjuntival.
melanosis, que es una mancha de pigmento que se puede encontrar en la esclerótica que rodea el iris
(Damato y Coupland, 2008). Esto tiende a ser más común en poblaciones con iris más oscuros.
Se han dedicado considerables investigaciones a la variación de la pigmentación del iris (Eiberg et al.,
2008; Liu y otros, 2010; Sturm et al., 2008). Sin embargo, muy pocos estudios han intentado analizar
variación global en las características de la superficie del iris. Aunque las consecuencias funcionales de estas características
siguen siendo en gran medida desconocidos, se han convertido en un tema de importante interés forense, biomédico y
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interés oftalmológico. Desde una perspectiva forense, se han identificado varios marcadores.
identificados en los últimos 10 años que son capaces de predecir características de pigmentación, como
como el color del cabello, la piel y el iris, a partir de muestras de ADN de la escena del crimen (Walsh et al., 2011). Ha sido
sugirió que algunas de las características de la superficie del iris, como los nódulos de Wolfflin y las manchas de pigmento, pueden
tienen influencia en la percepción del color general del iris (Liu et al., 2010; Mackey et al., 2011).
Por lo tanto, una mejor comprensión de la base genética de las características de la superficie del iris puede conducir a
Algoritmos mejorados de predicción del color de ojos. Las fotografías del iris también pueden representar un costo.
alternativa eficaz a los procedimientos oftalmológicos más caros. Sidhartha et al. (2014a,
2014b) caracterizó recientemente el surco de contracción y el grado de cripta de Fuchs en un
población que vive en Singapur. Descubrieron que ambas características estaban asociadas con el grosor del iris.
y/o el grado de cierre del ángulo del iris. Por lo tanto, puede ser posible predecir el riesgo de enfermedad del paciente.
a partir de características de superficie iridiales. Por último, aunque se sabe muy poco sobre la patología del iris
textura, existe cierta evidencia de que estas características pueden influir en la salud y el bienestar individual.
ser. En particular, los nevos y las manchas pigmentarias pueden ser un marcador de riesgo de melanoma uveal (Holly et al.
al., 1990; Horn et al., 1994).
Como los elementos texturales del iris tienen el potencial de ser de interés para muchos
disciplinas, se ha vuelto imperativo desarrollar una mejor comprensión de la situación mundial
frecuencia y base genética de estos rasgos. En la actualidad, las características del iris se han estudiado principalmente en
poblaciones de ascendencia europea (Larsson y Pedersen, 2004; Larsson et al., 2011; Sturm y
Larsson, 2009). Muy pocos estudios se han centrado en poblaciones no europeas, y estos estudios
han indicado que existen diferencias en la distribución de las características del iris entre los principales
grupos de población (Qiu et al., 2005; Quillen et al., 2011). Cuando se examinó la textura del iris en
Por ejemplo, las poblaciones portuguesas, caboverdianas y brasileñas aumentan
la ascendencia biogeográfica se asoció significativamente con un mayor número de manchas pigmentarias,
Criptas de Fuchs y surcos de contracción (Quillen et al., 2011).
Este artículo tiene cuatro objetivos principales: 1/ Desarrollar un método para describir la superficie del iris.
características en poblaciones de diversa ascendencia; 2/ Caracterizar las diferencias globales en las características del iris.
entre las poblaciones de Europa, Asia oriental y Asia meridional; 3/ Para observar las correlaciones entre las
elementos estructurales dentro de cada una de las poblaciones; 4/ Para observar la asociación entre genética
marcadores que se han asociado con características de la superficie del iris en poblaciones europeas y nuestro iris
medidas de características.
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4.3.1 Reclutamiento de participantes

Entre 2012 y 2014, 1.773 voluntarios sanos de Asia Oriental, Europa y el Sur
La Universidad de Toronto reclutó a personas de ascendencia asiática para participar en un estudio que analizaba
Diversidad global de pigmentación. Todos los participantes tenían edades comprendidas entre 18 y 35 años, y
reclutados mediante anuncios impresos y en línea dirigidos a miembros de la Universidad de
Comunidad estudiantil de Toronto. Un cuestionario personal que pregunta sobre la condición materna de cada participante.
y abuelos paternos para evaluar la ascendencia geográfica. Individuos
quienes afirmaron que todos sus abuelos procedían de Japón, Corea, China o Taiwán eran
categorizados como asiáticos del este, y personas que declararon que sus abuelos eran originarios de
Bangladesh, Pakistán, Sri Lanka o la India fueron clasificados como países del sur de Asia. Los participantes fueron
Se definen como europeos si sus abuelos procedían de cualquier región de Europa distinta de Turquía.
Sólo personas que declararon que todos sus familiares procedían de la misma región geográfica general
(es decir, Asia Oriental) se incluyeron en el análisis. Participantes mixtos que provenían de dos diferentes
Se eliminaron las regiones (es decir, Asia Oriental y Europa). Cuando la información sobre los abuelos.
se desconocía, se utilizó la ascendencia autoinformada de ambos padres para evaluar la ubicación geográfica.
ascendencia. En total, nuestro estudio incluyó 623 participantes de ascendencia europea, 475 participantes de
ascendencia del este de Asia y 367 participantes de ascendencia del sur de Asia. Los 308 restantes
los participantes fueron excluidos del análisis. Además de determinar la ascendencia, el personal
También se utilizó un cuestionario para garantizar que cada participante estuviera sano y no hubiera sido
previamente diagnosticado con algún trastorno relacionado con la pigmentación ocular. Por último, los participantes fueron
Se le pidió que proporcionara una autoevaluación del color de su iris utilizando la escala de fototipo de Fitzpatrick.
(Fitzpatrick, 1975).
4.3.2 Genotipado
Se tomó una muestra de saliva de 2 ml de cada participante utilizando el ADN Oragene (OG
500) kit de recolección (DNA Genotek, Canadá). A todos los participantes se les indicó que no comieran, bebieran ni
fume durante al menos 30 minutos antes de su cita para garantizar la máxima pureza de la muestra.
Luego se aisló el ADN de cada muestra utilizando el protocolo proporcionado por el fabricante.
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Seleccionamos cuatro marcadores para el genotipado que se han asociado directamente o
se supone que están asociados con la textura del iris en poblaciones europeas (Larsson et al., 2011;
Liu et al., 2010). Estos incluyen TRAF3IP1 rs3739070 (surcos de contracción), SEMA3A
rs10235789 (criptas), DSCR9 rs7277820 (nódulos de Wolffflin) y HERC1 rs11630290 (pigmento
lugares).
Todas las muestras de ADN se enviaron a LGC Genomics (Estados Unidos) para su genotipado. LGC
Genomics utiliza un método de genotipado basado en KASP que combina amplificación específica de alelos
con tecnología FRET (transferencia de energía por resonancia fluorescente). Se obtuvieron veintinueve muestras.
Se incluyeron como duplicados ciegos y 14 muestras se incluyeron como espacios en blanco para verificar la calidad.
de los resultados del genotipado. La tasa de concordancia tanto para los duplicados ciegos como para los espacios en blanco fue del 100%.
4.3.3 Adquisición y Procesamiento de Fotografías de Iris

Se adquirió una fotografía del iris derecho de cada participante utilizando un equipo de Miles Research.
Cámara Iris Profesional (Miles Research, Estados Unidos). Esta cámara consta de una FujiFilm
DSLR Finepix S3 Pro de 12 megapíxeles montada en un objetivo macro Nikkor de 105 mm. Todas las fotografías
Fueron tomadas en formato RAW con una apertura de f19, una velocidad de obturación de 1/125” y un ISO de 200.
Se utilizó un cable coaxial biométrico para enviar luz al iris a una temperatura constante para
para mantener la fidelidad del color y el brillo y reducir el impacto de la luz ambiental. Un criptón
Se utilizó una bombilla de 2,33 V como luz de enfoque, lo que permitió a los alumnos de los participantes
ajustado a una fuente de luz estandarizada. Se utilizó una mentonera y un soporte para cámara para garantizar que
cada fotografía fue tomada desde una distancia y un ángulo estándar.
Las fotografías se convirtieron al formato JPEG y se redimensionaron de 3043 para 2036 a 1200 para
803 píxeles utilizando Adobe Camera Raw en Adobe Photoshop CS5 (Adobe Systems Incorporated,
Estados Unidos). El balance de blancos se configuró para parpadear, los niveles de contraste y negros se establecieron en cero,
y los valores predeterminados se mantuvieron para todas las configuraciones restantes.
4.3.4 Análisis del iris

Uno de los autores (DC) diseñó una aplicación basada en web para poder realizar de forma precisa y
caracterizar de forma fiable la textura del iris. Se puede acceder a la aplicación web en http://iris.davidcha.ca/.
Se pueden configurar cuentas para usuarios interesados previa solicitud. Este programa consta de 11 pasos, que
tardar aproximadamente 2 minutos en completarse para cada iris. En el primer paso, el usuario debe tener en cuenta
100
si el iris está significativamente obstruido por párpados, pestañas o reflejos (hasta el
medida que cualquiera de las cinco estructuras de interés no pueda caracterizarse con precisión). Pasos 2 a 6
Haga que el usuario identifique el punto central aproximado del iris, el punto central aproximado del
pupila y luego dibuje un círculo que mejor se ajuste alrededor del límite escleral, el collarín y la pupila.
Perímetro. Esto permite que el programa separe el iris en una zona ciliar y una zona pupilar.
(Figura 42) y divida el iris en cuatro cuadrantes diferentes según el centro del iris.
(Figura 43).
En el Paso 7, el usuario debe hacer clic en todas las manchas de pigmento presentes en el iris. El iris es
Ampliado 1,5 veces para este paso, para distinguir más fácilmente entre las manchas de pigmento.
y otros elementos texturales iridiscentes. Para cada iris, el programa registra la cantidad de pigmento
manchas, así como el cuadrante en el que se encuentra cada mancha pigmentaria.
En el paso 8, el usuario nota la presencia y extensión de los surcos de contracción. Una rotación
La línea, fijada en el punto central del iris, se utiliza para ayudar al usuario a determinar si el
los surcos cubren más de 180˚ del iris. Para facilitar la identificación de surcos, el
El iris se magnifica 1,5× para este paso. El usuario también anota en qué cuadrantes, si los hay, se encuentran los surcos.
se encuentran.
Los nódulos de Wolfflin se caracterizan de manera similar a los surcos de contracción. En el paso 9, un
La línea giratoria se fija en el punto central del iris y el usuario debe determinar si hay nódulos.
están presentes y, de ser así, si se extienden o no alrededor de más de 180˚ del iris. Al igual que con
surcos de contracción, el usuario también debe tener en cuenta en qué cuadrantes se pueden ubicar los nódulos de Wolfflin.
encontró.
En el paso 10, el usuario hace clic en el borde más externo de todas las criptas que se encuentran en el iris.
Las criptas que se originan en el collarette se caracterizan como "pequeñas" o "grandes". Grande
Las criptas se definen como aquellas que se extienden desde el collarete hasta más del 50% de la zona ciliar.
Las criptas pequeñas se definen como aquellas que no se extienden a más del 50% de la zona ciliar. Este
El programa lo calcula automáticamente. El programa también registra el cuadrante en el que cada
Se encuentra la cripta. Las criptas que no se originan en el collarette se definen manualmente como pequeñas. El
El iris se magnifica 1,5× en este paso para aumentar la visibilidad de las criptas en los iris más oscuros.
Para el último paso, el usuario debe observar si hay o no anillos de pigmento o
Manchas de pigmento en la región escleral visible del ojo. El iris se oscurece para este paso y
sólo la esclerótica es visible.

101
Después del análisis de los 1465 iris, el programa se utilizó para generar una hoja de cálculo de Excel.
que contenía la categoría para cada una de las cinco características de la superficie, los cuadrantes en los que estas
Se encontraron características y el diámetro del iris en píxeles. Información detallada sobre el puesto.
También se pudo recuperar cada una de las criptas y las manchas pigmentarias identificadas. Todo iris inicial
Las categorizaciones fueron realizadas por ME.
4.3.5 Caracterización de la estructura del iris

Desarrollamos categorías de características del iris que podrían capturar la variación en diversas poblaciones.
con diferentes frecuencias de color del iris. Estos se basaron principalmente en sistemas de categorización.
que se había desarrollado en estudios previos (Larsson y Pedersen, 2004; Larsson et al., 2011;
Sidhartha et al., 2014a, 2014b; Sturm y Larsson, 2009). Sin embargo, fueron modificados para
cuenta la diversidad de pigmentación presente en nuestro conjunto de muestras. Las manchas de pigmento fueron inicialmente
medido usando 4 grados: 1, sin manchas de pigmento; 2, entre una y dos manchas pigmentarias; 3, entre
tres y cinco manchas de pigmento; 4, más de cinco manchas de pigmento. Sin embargo, los grados 3 y 4 fueron
luego colapsó en un solo grado para explicar la menor frecuencia de manchas de pigmento en el Este
y los grupos del sur de Asia en comparación con el grupo europeo (Figura 44). Como no es posible
Para diferenciar de forma fiable entre manchas de pigmento y nevos en las fotografías, elegimos la mancha de pigmento.
categorías que intentaron capturar la magnitud general de las manchas en el iris. Ambas contracciones
Los surcos y los nódulos de Wolfflin se midieron utilizando un sistema de clasificación que tuvo en cuenta la
extensión de estas estructuras alrededor del iris. Se midieron surcos de contracción en tres
grados: 1, sin surcos de contracción; 2, surcos de contracción que se extienden menos de 180° alrededor del
iris y 3, surcos de contracción que se extienden más de 180° alrededor del iris (Figura 45). Lobo lobo
Los nódulos también se midieron utilizando tres grados: 1, sin nódulos de Wolfflin; 2, nódulos de Wolfflin que
se extienden menos de 180° alrededor del iris y 3, nódulos de Wolfflin que se extienden más de 180° alrededor del iris.
el iris (Figura 46). Las criptas se midieron a través de un sistema de cuatro grados que intentó capturar
el tamaño y grado general de las criptas en el iris: 1, sin criptas; 2, sólo pequeñas criptas centradas alrededor
el collar; 3, al menos una gran cripta ubicada en menos de tres cuadrantes del iris y 4, en
al menos tres criptas grandes ubicadas en tres o más cuadrantes del iris (Figura 47). autodescrito
El color del iris se midió utilizando las categorías desarrolladas para la Escala de Fototipo Fitzpatrick.
(Figura 48) [Fitzpatrick, 1975]. Estas categorías enfatizan la intensidad, más que la sombra,
del ojo: 1, azul claro, verde o gris; 2, azul, verde o gris; 3, avellana o marrón claro; 4, oscuro
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marrón y 5, negro parduzco. Por último, la melanosis conjuntival se caracterizó mediante una presencia
o esquema de ausencia (Figura 49).

A menos que se indique lo contrario, los análisis estadísticos se llevaron a cabo utilizando IBM Statistics SPSS.
(v. 20.0, SPSS Incorporated, Estados Unidos). Correlaciones entre la característica del iris ordinal.
Las categorías y el color del iris se probaron utilizando la estadística gamma de Goodman y Kruskal, una medida
de correlación de rangos típicamente utilizado para rasgos ordinales. Informamos tanto el valor G como el valor p para
cada una de las correlaciones. Se consideró que las características de la superficie estaban significativamente correlacionadas con cada
otro o con color de iris si p<0.05. Las relaciones entre la característica del iris y el sexo, la edad y el iris.
El ancho (el diámetro del círculo que mejor se ajusta alrededor del borde exterior del iris) se examinó utilizando
regresión ordinal. Se probaron los supuestos de probabilidades proporcionales y bondad de ajuste.
Las diferencias en la frecuencia de las características del iris entre los tres conjuntos de muestras se probaron utilizando el método chi
prueba del cuadrado. Para características que eran significativamente diferentes, comparaciones adicionales por pares
entre poblaciones se realizaron utilizando una prueba t de muestras independientes con un Bonferonni
Corrección para comparaciones múltiples. Después de la corrección, las diferencias entre las muestras fueron
significativo si p<0,0167. Las diferencias en el ancho del iris entre las tres poblaciones fueron
probado utilizando un ANOVA unidireccional. La normalidad se probó utilizando gráficos QQ y la estadística de Levene.
fue verificado antes de ejecutar el análisis.
Asociaciones entre los cuatro polimorfismos de interés y las categorías de características del iris.
se evaluaron mediante regresión ordinal en cada población, incluidas otras covariables relevantes en
los análisis (por ejemplo, otras estructuras del iris, ancho del iris o sexo). Los supuestos de las probabilidades proporcionales.
y la bondad de ajuste se probaron antes de ejecutar el análisis. Desviaciones del genotipo de Hardy–
Las proporciones de Weinberg se evaluaron utilizando la Court Lab Calculator (Court, 2008).
Cuatro meses después de la clasificación inicial del iris, se evaluó la confiabilidad intraevaluador en 40
iris por ME y la confiabilidad entre evaluadores se evaluó en 40 iris por DC usando el método lineal
Estadístico kappa ponderado. Esto se hizo usando la aplicación web proporcionada por GraphPad.
software (GraphPad, Estados Unidos).

103
4.4 Resultados
Se evaluaron un total de 475 lirios de Asia oriental, 623 europeos y 367 del sur de Asia utilizando
el programa de estructura del iris (Tabla 41). De estos, 14 lirios (ocho de Asia oriental, cuatro europeos y
dos del sur de Asia) se consideraron demasiado oscurecidos o borrosos para caracterizarlos con precisión, y fueron
excluidos del análisis. Un participante adicional de ascendencia del sur de Asia con un
El trastorno ocular relacionado con la pigmentación (albinismo) también se eliminó del estudio. Ninguno de los
Los participantes restantes informaron trastornos oculares. Sin embargo, como el historial médico fue informado por uno mismo,
Es posible que se hayan incorporado participantes adicionales con trastornos oculares a
el estudio. La confiabilidad intra e interevaluadores se evaluó utilizando la estadística kappa (para
información adicional, ver sección Material y Métodos) [Viera y Garrett, 2005]. El intra
y las confiabilidades entre evaluadores fueron buenas para las cinco estructuras (valores kappa intraevaluadores; cripta
κ=0.881, surco κ=0.835, nódulo κ=0.884, mancha pigmentaria κ=0.889, melanosis κ=0.827; entre evaluadores
valores kappa? cripta κ=0,809, surco κ=0,857, nódulo κ=1.000, mancha pigmentaria κ=0,898, melanosis
k=0,867).
El ancho del iris fue significativamente diferente en los tres conjuntos de muestras (F = 200,161,
p<0,001), siendo los asiáticos orientales los que tienen los anchos de iris más pequeños (media=376,72 píxeles), seguidos por
Los asiáticos del sur (media = 384,92) y luego los europeos (media = 394,45 píxeles).
Dentro del conjunto de muestras europeo, hubo una correlación negativa significativa entre la
grado de las criptas de Fuchs y la extensión de los surcos de contracción (G=−0.474, p<0.001) y un
correlación negativa significativa, pero más débil, entre el grado de las criptas de Fuchs y el número
de manchas de pigmento (G = −0,238, p <0,001). También hubo una correlación positiva significativa entre
la extensión de surcos y el número de manchas pigmentarias (G=0.218, p=0.007). No significativo
Se encontraron correlaciones entre las cinco estructuras iridiales en el sur o el este de Asia.
conjuntos de muestra. En el conjunto de muestras europeo, el color del iris más oscuro autoinformado mostró una significativa
correlación positiva con la extensión de los surcos de contracción (G=0.461, p<0.001) y una
correlación negativa significativa con los nódulos de Wolfflin (G = −0,409, p <0,001). En el sur de Asia
conjunto de muestra, en contraste con lo observado en el conjunto de muestra europeo, color de iris más oscuro
mostró una correlación negativa significativa con la extensión de los surcos de contracción (G = −0,233,
p=0,041).
El sexo se asoció significativamente con el grado de la cripta en Asia Oriental (Nagelkerke R 2=0,013,
p=0,019), Europa (Nagelkerke R 2=0,022, p<0,001) y Asia Meridional (Nagelkerke

104
R2 =0,037, p<0,001) muestras. En los tres grupos, los machos tenían un grado de cripta significativamente mayor.
que las mujeres (hombre/mujer de Asia oriental OR=1,54, hombre/mujer europeo OR=1,72,
hombre/mujer OR=2,07). El sexo no se asoció con ninguna de las otras cuatro estructuras iridiales. Iris
El diámetro se asoció significativamente con un mayor número de manchas de pigmento en los conjuntos de muestras
de Europa (Nagelkerke R 2 = 0,012, p = 0,009) y del sur de Asia (Nagelkerke R 2 = 0,018, p = 0,041).
El diámetro del iris también se asoció significativamente con nódulos de Wolfflin más extendidos en
Europeos (Nagelkerke R 2=0,021, p=0,001). No se encontraron asociaciones entre la edad y el iris.
estructura en cualquiera de los tres grupos.
Las cinco estructuras examinadas mostraron diferencias significativas en la frecuencia entre las
tres conjuntos de muestras (criptas de Fuchs: χ 2=67.388, p<0.001; surcos de contracción: χ 2=186.819, p<0.001; manchas
pigmentarias: χ 2=260.587, p<0.001; nódulos de Wolfflin: χ 2=350.627, p <0,001; melanosis conjuntival: χ 2=273,177,
p<0,001). Pruebas T adicionales para muestras independientes por pares con
Se realizaron correcciones de Bonferonni para determinar el origen de estas diferencias. europeos
tenían un grado significativamente mayor de criptas de Fuchs (T=8,333, p<0,001), contracción más extendida
surcos (T=10.802, p<0.001), más manchas pigmentarias (T=14.686, p<0.001) y más extendidas
Nódulos de Wolfflin (T = 18,028, p <0,001) que los individuos de ascendencia de Asia oriental y una significativa
mayor grado de criptas (T=2.961, p=0.003), mayor número de manchas pigmentarias (T=15.571, p<0.000)
y nódulos de Wolfflin más extendidos (T=16,345, p<0,001) que los individuos del sur de Asia.
ascendencia. Las muestras de Asia meridional y oriental tenían una mayor proporción de individuos con
melanosis conjuntival que la muestra europea (sur de Asia: T=15,954, p<0,001; este de Asia:
T=6,674, p<0,001). No hubo diferencias significativas en la extensión del surco de contracción entre
los grupos de Europa y del sur de Asia (T = −0,306, p = 0,759). Individuos de ascendencia del sur de Asia
tenían un grado de criptas significativamente mayor (T=4,231, p<0,001), contracción más extendida
surcos (T=10,474, p<0,001) y una mayor frecuencia de melanosis conjuntival (T=6,674,
p<0,001) que los individuos de ascendencia del este de Asia. Sin embargo, no hubo diferencias significativas
en el número de manchas pigmentarias (T=−1.527, p=0.127) y la presencia de nódulos de Wolfflin
(T=2,372, p=0,018) entre estos dos grupos. El color del iris autodescrito fue significativamente diferente (χ 2 =
892,674, p <0,001) en las tres muestras. Los individuos de ascendencia del este de Asia tenían
ojos significativamente más oscuros que los individuos del sur de Asia (T = 4,327, p <0,001) y europeos.
(T=40,776, p<0,001) la ascendencia y los individuos de ascendencia del sur de Asia tenían significativamente más oscuros
ojos (T=32,724, p<0,001) que los individuos de ascendencia europea.

105
Las proporciones del genotipo coincidieron con las proporciones esperadas de HardyWeinberg,
con la excepción de las desviaciones moderadas observadas para DSCR9 rs7277820 en los conjuntos de muestras
de Europa (χ 2 = 5,373, p = 0,020) y del sur de Asia (χ 2 = 3,930, p = 0,047) y HERC1 rs11630290 en el conjunto de
muestras del sur de Asia (χ 2 =5,224, p=0,022). Observamos la asociación entre
SEMA3A rs10235789 y criptas de Fuchs, TRAF3IP1 rs3739070 y surcos de contracción, DSCR9
rs7277820 y nódulos de Wolfflin, y HERC1 rs11630290 y manchas pigmentarias. en lo estadístico
pruebas, incluimos como covariables las variables que se asociaron significativamente con cada iris
estructura en nuestros análisis exploratorios (por ejemplo, otras estructuras del iris, ancho del iris, color del iris autoinformado).
y sexo).
El grado de la cripta de Fuchs se asoció significativamente con SEMA3A rs10235789 en los tres
conjuntos de muestra (Tabla 42). En el conjunto de muestras europeo, tener una copia del alelo 'C' derivado
aumentó significativamente las probabilidades de tener un mayor grado de criptas en 1.507 (p=0.023) y
tener dos copias del alelo 'C' derivado aumentó significativamente las probabilidades de tener una mayor
grado de criptas en 2.203 (p<0.001). En la muestra del sur de Asia, tener una copia del derivado
El alelo 'C' aumentó significativamente las probabilidades de tener un grado más alto de criptas en 2,206 (p<0,001)
y tener dos copias del alelo 'C' derivado aumentó significativamente las probabilidades de tener un
mayor grado de criptas en 2.721 (p=0.011). En el conjunto de muestras de Asia Oriental, tener una copia del
El alelo 'C' derivado aumentó significativamente las probabilidades de tener un grado más alto de criptas en 1,679
(p=0,018). Como había menos de cinco individuos con dos copias del alelo 'C' derivado,
fueron eliminados de este análisis.
La asociación entre el grado del surco de contracción y TRAF3IP1 rs3739070 fue
casi significativo en el grupo europeo, pero no en los conjuntos de muestras de Asia oriental y meridional
(Tabla 42). Tener dos copias del alelo 'A' derivado aumentó las probabilidades de tener más
surcos de contracción extendidos en 6.385 (p=0.051). Sin embargo, tener sólo una copia de la 'A'
El alelo no aumentó significativamente (p=0,333) las probabilidades. Tanto el grado de punto de pigmento como Wolfflin
El grado del nódulo no se asoció significativamente con sus respectivos marcadores en ninguno de los tres.
grupos examinados.
106
4.5 Discusión
El uso de un programa para caracterizar las características de la superficie del iris tiene una serie de ventajas sobre
Evaluaciones cualitativas tradicionales de fotografías de iris. Por un lado, permite el almacenamiento y
recuperación de una cantidad sustancial de información que no sería fácil de obtener utilizando
métodos descriptivos. Esto incluye el tamaño del iris, la posición en la que se encuentra cada mancha de pigmento.
y cripta, y la distribución de rasgos en los diferentes cuadrantes del iris. En
Además, el programa muestra los iris en orden aleatorio para limitar el sesgo, puede manejar grandes cantidades de
datos y es relativamente rápido. También es sencillo configurar usuarios replicados para lograr confiabilidad intra e intercontable.
estimados. Las estimaciones de confiabilidad entre evaluadores e intraevaluadores fueron buenas para las cinco estructuras del iris.
examinado, lo que subraya la capacidad del programa para devolver resultados consistentes y repetibles.
resultados.
Las categorías de estructura del iris que desarrollamos fueron diseñadas para tener en cuenta la extensión del iris.
variación de textura que es inherente a las poblaciones globales. Intentos anteriores de estudiar la estructura del iris.
se han dirigido principalmente a poblaciones únicas y más homogéneas (Larsson y Pedersen,
2004; Larsson y otros, 2011; Sidhartha et al., 2014a, 2014b; Sturm y Larsson, 2009). En esto
En el artículo, hemos intentado ampliar estos métodos y desarrollar categorías que puedan capturar
Variación de la estructura del iris en poblaciones globales con diferentes características del iris.
4.5.1 Criptas de Fuchs

Se pueden desarrollar cantidades sustanciales de hipoplasia en el iris después de la absorción del
membrana pupilar. Los vasos ópticos aparecen por primera vez alrededor de la cuarta semana de vida fetal y el
La capa anterior comienza a crecer delante del cristalino alrededor del segundo mes embrionario (Eagle,
1988; Eriksson y otros, 1965; Ostra, 1999). Esto finalmente forma la membrana iridopupilar,
que cubre todo el iris. Hacia el sexto mes, esta membrana comienza a atrofiarse y es
se reabsorbe gradualmente hasta que la pupila queda completamente libre de tejido mesodérmico. Ha sido
sugirió que la capa anterior que queda es un tejido rudimentario que no tiene ninguna función importante en
humanos (Purtscher, 1965). Como resultado, hay escasez de tejido en esta capa. La mayoría de los iris tienen un
Cantidad moderada de hipoplasia alrededor del collar. Sin embargo, en algunos ojos, esta hipoplasia
Puede extenderse ampliamente hacia la zona ciliar. Esto conduce a la formación de lagunas en forma de diamante.
conocidas como criptas de Fuchs. Se cree principalmente que estas lagunas son un defecto filogenético que
107
resulta de la importancia cada vez menor de la capa anterior a lo largo de la historia evolutiva (Purtscher,
1965). Sin embargo, también pueden formarse lagunas secundarias debido al empuje y tirón.
Efectos de la pupila sobre la capa anterior cuando se dilata y se contrae. Así, no es de extrañar
esa edad se ha asociado con un mayor número de criptas en estudios previos (Larsson y
Pedersen, 2004). Para las criptas de Fuchs, intentamos desarrollar un sistema categórico que pudiera
capturar la cantidad total de hipoplasia en el iris. Iris que contenían muy poca hipoplasia, o
La hipoplasia centrada únicamente a lo largo del collarín se colocó en las dos primeras categorías. Iris que
tenían una mayor cantidad de hipoplasia que se extendía hasta al menos el 50% de la zona ciliar.
colocados en las dos últimas categorías.
En los tres conjuntos de muestra, el mayor número de participantes cayó en la segunda categoría (pequeños
criptas alrededor del collarín en al menos tres cuadrantes del iris). Sin embargo, individuos de
La ascendencia europea tenía una mayor probabilidad de tener un grado de cripta más alto que los individuos de
ascendencia del sur de Asia, y los individuos de ascendencia del sur de Asia tenían una mayor probabilidad de tener
un grado de cripta más alto que los individuos de ascendencia de Asia oriental (Tabla 43). Entre los asiáticos orientales,
sólo el 29,8% de los participantes tenía criptas que se extendían hasta la zona ciliar, en comparación con el 52,9%
de los europeos y el 43,4% de los asiáticos del sur. Puede haber varias explicaciones para este hallazgo.
Los individuos de ascendencia del este de Asia tienen iris significativamente más oscuros que los del sur de Asia.
ascendencia o ascendencia europea. Es posible que la presencia de mayores cantidades de melanina en
la capa estromal anterior puede hacer que el iris sea menos propenso al desarrollo tanto primario como
criptas secundarias. Sin embargo, esto es poco probable ya que la frecuencia de las criptas parece ser independiente.
del color del iris dentro de las poblaciones (Larsson y Pedersen, 2004). El ancho del iris puede ser otra
explicación, ya que notamos que los individuos de ascendencia del este de Asia tenían iris significativamente más pequeños
que los de ascendencia del sur de Asia y Europa. Sin embargo, no pudimos encontrar una
asociación entre el ancho del iris y el grado de la cripta dentro de las poblaciones. Como la frecuencia de Fuchs
Se cree que las criptas están asociadas con la estabilidad general de la capa del borde anterior, es
Es posible que existan otras diferencias genéticas y de desarrollo en la población que afecten la
estabilidad de esta capa.
En los tres grupos, el sexo estuvo débilmente asociado con las criptas de Fuchs. En particular, los hombres
consistentemente tenían mayores probabilidades de tener un grado de cripta más alto que las mujeres. No pudimos
replicar una asociación entre las criptas de Fuchs y la edad (Larsson y Pedersen, 2004). Sin embargo,
108
Esto probablemente se debió al rango de edad relativamente estrecho utilizado en nuestro estudio, en comparación con
estudios anteriores en los que los participantes tenían edades comprendidas entre niños y personas mayores.
SEMA3A rs10235789 es un marcador que parece estar asociado con la variación en Fuchs
criptas (Larsson et al., 2011). Este marcador, que se cree que desempeña un papel en la inicial
desarrollo de la membrana pupilar, se ha asociado previamente con aproximadamente
1,5% de la variación en las criptas de Fuchs en una muestra australiana de ascendencia europea. Cuando nosotros
analizó la asociación entre SEMA3A rs10235789 y el grado de cripta de Fuchs en nuestra Europa,
En muestras de Asia oriental y del sur de Asia, encontramos asociaciones significativas en los tres grupos. El
Los efectos de SEMA3A rs10235789 parecen ser aditivos, con dos copias del alelo 'C' derivado.
teniendo un efecto mayor que una copia. La distribución geográfica del SEMA3A rs10235789
El polimorfismo puede ayudar a explicar algunas de las diferencias observadas en la frecuencia de las criptas.
en los tres grupos. El alelo 'C' derivado se encuentra con una frecuencia muy alta en nuestro país europeo.
muestra (0,48), mientras que se encuentra en frecuencias mucho más bajas en el este de Asia (0,08) y el sur de Asia.
Grupos asiáticos (0,28). Por lo tanto, esperaríamos que las criptas se encontraran con una frecuencia más baja en el
últimos grupos. Dado el papel de SEMA3A rs10235789 en la absorción de la pupila
membrana, es posible que existan diferencias poblacionales en la estabilidad de la membrana anterior
capa fronteriza tras la reabsorción pupilar en los diferentes grupos poblacionales.
4.5.2 Manchas de pigmento
Las manchas pigmentarias son áreas discretas de pigmentación oscura que se encuentran en el borde anterior.
capa del iris (Rennie, 2012). Hay muchos tipos diferentes de manchas, las más comunes de
que son pecas y nevos del iris. Ambas variantes de manchas de pigmento son similares topográficamente, pero
son muy diferentes ultraestructuralmente (Eagle, 1988; Harbor et al., 2004). Pecas, que varían
De color claro a oscuro, se encuentran en el 5060% de los adultos sanos (Reese, 1944; Rennie, 2012).
Se encuentran planos sobre la superficie del iris y no distorsionan el estroma del iris. Por el contrario, los nevos son
Se encuentran solo en el 46% de los adultos y parecen lesiones nodulares bien delimitadas (Rennie, 2012).
Suelen ser más comunes en la mitad inferior del iris y pueden aumentar de tamaño con el tiempo.
(Horn et al., 1994). A diferencia de las pecas, los nevos distorsionan la capa estromal subyacente. aunque mayor
Las personas tienen predisposición a ambos tipos de manchas pigmentarias, se pueden encontrar en todas las edades.
(Reese, 1944; Sturm y Larsson, 2009).

109
Las manchas de pigmento fueron significativamente más comunes en individuos de ascendencia europea que en
individuos de ascendencia del este o sur de Asia (Tabla 43). Más de la mitad de nuestra muestra europea
(57,9%) mostraron algún grado de manchado iridial, en comparación con sólo el 22,1% de los asiáticos orientales y
16,7% de los asiáticos del sur. Este hallazgo no es sorprendente. Como las manchas pigmentarias son regiones discretas de
pigmento marrón o negro, esperaríamos ver menos manchas en poblaciones con predisposición
para colores de iris más oscuros dado que las regiones de hipermelanina pueden ser difíciles de distinguir en
ojos más oscuros. Curiosamente, en los tres grupos, las manchas de pigmento eran más probables de encontrar en el
cuadrante temporal inferior del iris (Tabla 44). Varios estudios anteriores han observado que el pigmento
Las manchas aparecen preferentemente en la mitad inferior del iris (Schwab et al., 2014). Esto se debe a que el sol
La exposición parece ser un factor de riesgo para el desarrollo de manchas iridiales, y la mitad inferior de la
El iris está menos protegido por los párpados. Sin embargo, sólo notamos esta preferencia en la parte inferior
cuadrante temporal, no en el cuadrante nasal inferior. De hecho, el segundo cuadrante más común
para las manchas pigmentarias fue el cuadrante temporal superior. Es posible que el temporal superior
El cuadrante nasal inferior puede estar menos protegido por los párpados que el cuadrante nasal inferior, lo que lleva a esta
discrepancia.
No encontramos una correlación entre las manchas pigmentarias y el sexo o la edad en ninguno de los tres
grupos. Sin embargo, observamos una asociación entre el ancho del iris y el grado de la mancha pigmentaria en el
Conjuntos de muestras de Europa y el sur de Asia. Dado el vínculo bien establecido entre la exposición al sol
y manchas de pigmento del iris, simplemente puede ser que un iris más ancho tenga más contacto con el sol.
que un iris más pequeño. Tampoco pudimos identificar una asociación entre HERC1 rs11630290
y manchas pigmentarias en cualquiera de las tres muestras. Esto no es sorprendente, ya que HERC1 rs11630290 fue
la asociación más débil reportada en estudios anteriores. Es posible que el tamaño de nuestra muestra fuera demasiado pequeño.
para replicar esta asociación.
4.5.3 Surcos de contracción

Los surcos de contracción, que se producen por la contracción y dilatación de la pupila, son
depresiones profundas que se encuentran alrededor de la periferia exterior del iris (Eagle, 1988; Reese, 1944).
Aunque cada surco de contracción rara vez se extiende más allá de un cuadrante del iris, existen
Por lo general, hay muchos surcos escalonados alrededor del ojo. Se ha sugerido que el espesor total
y la densidad del iris juegan un papel importante en su formación y apariencia general (Larsson
y Pedersen, 2004; Larsson et al., 2011). Aunque estudios anteriores han utilizado varios tipos diferentes
110
sistemas para describir surcos de contracción, estábamos interesados principalmente en observar sus
extensión general alrededor del iris. Esto se debe a que la extensión de los surcos es más fácil de cuantificar que
profundidad del surco o número de surcos cuando se miran iris de diferentes tonos.
En las tres muestras, hubo muy pocos individuos con el grado más bajo de contracción.
surcos (15,2% de los asiáticos orientales, 6,6% de los europeos, 3,8% de los asiáticos del sur). Individuos del sur
La ascendencia asiática y europea tuvo distribuciones similares del grado de surco de contracción (Tabla 43).
Sin embargo, los participantes de ascendencia del este de Asia tenían un grado de surco significativamente más bajo que cualquiera de los dos.
Asiáticos del sur o europeos. En varios estudios previos, el grado de surco de contracción ha sido
asociado con iris más oscuros y un iris periférico más grueso dentro de las poblaciones (Larsson y
Pedersen, 2004; Quillen et al., 2011; Sidhartha et al., 2014a). Por lo tanto, es inesperado ver una
grado general más bajo de surcos de contracción en la muestra de Asia Oriental, dado que este grupo tiene la
color de ojos más oscuro que uno mismo describe y el hecho de que también se ha descubierto que los individuos de Asia oriental
tienen un iris periférico más grueso que los individuos de ascendencia europea (Lee et al., 2013). Este
sugiere que algún factor distinto del color del iris o la profundidad del iris es responsable de generar
diferencias en el grado de surco de contracción entre poblaciones. Una explicación puede ser el ancho del iris.
y zona del iris. Existe cierta evidencia de que un área general del iris más alta (independientemente de la profundidad del iris)
puede estar asociado con un mayor grado de surcos de contracción (Sidhartha et al., 2014a). En nuestro
muestra, los individuos de ascendencia del este de Asia tenían un ancho de iris significativamente menor que los individuos
de ascendencia europea o del sur de Asia. Asimismo, estudios previos han encontrado que los individuos de Oriente
La ascendencia asiática tiene un área del iris en general más pequeña que los individuos de otros grupos de población.
(Alberto et al., 2003). Aunque no pudimos encontrar una asociación significativa entre
grado de surco de contracción y ancho del iris en cualquiera de los grupos poblacionales, esta asociación fue
cercano al valor de significancia establecido de p<0,05 en Asia Oriental (p=0,096) y Europa.
(p=0,073) grupos.
TRAF3IP1 rs3739070 se ha asociado con aproximadamente el 1,7% de la variación en
surcos de contracción en individuos australianos de ascendencia europea (Larsson et al., 2011). Tiene
Se ha sugerido que este marcador puede desempeñar un papel en la determinación del espesor y la densidad generales.
del iris. Pudimos detectar una asociación límite significativa (p = 0,051) entre
TRAF3IP1 rs3739070 y surcos de contracción en nuestra muestra europea. El alelo derivado
parece tener un efecto recesivo, ya que una copia del alelo derivado no aumenta las probabilidades de
tener surcos de contracción más extendidos. Estimamos que tener dos copias del derivado
111
El alelo 'A' aumenta las probabilidades en 6,385. Sin embargo, es importante señalar que sólo teníamos cinco
individuos que eran homocigotos para el alelo ancestral. Tanto en el este como en el sur de Asia, la
El alelo ancestral TRAF3IP1 rs3739070 también tiene una frecuencia muy baja. No hay participantes del Sur
de ascendencia asiática, y sólo un individuo de ascendencia de Asia oriental, eran homocigotos para la raza ancestral.
Alelo 'A'. Además, la frecuencia de heterocigotos también fue muy baja en ambas poblaciones.
Por lo tanto, no es sorprendente que no hayamos podido encontrar una asociación entre TRAF3IP1 y
grado de surco en cualquiera de los grupos. Es probable que otros marcadores además de TRAF3IP1 rs3739070 desempeñen un papel
en el desarrollo de surcos de contracción en poblaciones de ascendencia no europea. asiático del este
Las poblaciones pueden ser un grupo ideal para estudiar las bases genéticas de los surcos de contracción. A diferencia de
las muestras europeas y del sur de Asia, donde hay poca variación de rasgos y la gran mayoría
de los individuos tienen surcos muy extendidos, los participantes de ascendencia del este de Asia eran más
Es probable que caiga en los grados de surco más bajos.
4.5.4 Nódulos de Wolfflin

Los nódulos de Wolfflin son pequeñas lesiones circulares (0,10,2 mm) que se distribuyen uniformemente a lo largo
el borde exterior de la zona ciliar (Sturm y Larsson, 2009; Williams, 1981). Ellos principalmente
Se componen de colágeno atrofiado del borde anterior y de las capas estromales. Los nódulos de Wolfflin son
altamente asociados con el color del iris, y son mucho más comunes en personas de ojos claros que en
individuos de ojos oscuros. Por ejemplo, en un estudio de 123 niños de Asia oriental con ojos marrones,
Los nódulos de Wolfflin estuvieron ausentes en todos los participantes (Kim et al., 2002). Se ha prestado mucha atención
dedicado a los nódulos de Wolfflin durante los últimos 50 años debido a su similitud estructural con
Las manchas de Brushfield, una característica del iris que se encuentra en el 8590% de los pacientes con síndrome de Down (Skeller y
Øster, 1951; Williams, 1981). Aunque la base genética de las manchas de Brushfield sigue siendo en gran medida
desconocidos, se parecen mucho a los nódulos de Wolfflin y también parecen estar restringidos a individuos
con ojos de color claro. Sin embargo, tienden a ser más grandes, menos uniformes y ubicados más cerca de la
zona media del iris.
Decidimos caracterizar los nódulos de Wolfflin en función de su extensión general alrededor del iris.
Los individuos que tenían nódulos de Wolfflin que se extendían más de 180° alrededor del iris fueron sometidos a
el grado más alto, y los individuos que tenían nódulos de Wolfflin que se extendían menos de 180° fueron
colocado en segundo grado. Los individuos sin nódulos de Wolfflin discernibles fueron colocados en el
grado más bajo. Curiosamente, muy pocos individuos cayeron en la segunda categoría y los participantes
112
eran más propensos a no tener nódulos de Wolfflin, o nódulos de Wolfflin que se extendían alrededor de la
iris completo (Tabla 43).
Como era de esperar, los nódulos de Wolfflin fueron significativamente más comunes en la muestra europea,
El 25,8% de este grupo tenía nódulos de Wolflin que se extendían más de 180˚ alrededor del iris.
en comparación con el 0% de los asiáticos orientales y el 0,8% de los asiáticos del sur. Dada la fuerte asociación entre
nódulos de Wolfflin y el color del iris, esperaríamos ver menos nódulos de Wolfflin en la zona principalmente
poblaciones de ojos marrones del este y sur de Asia. Se ha sugerido que ambos nódulos de Wolfflin
y las manchas de Brushfield no están realmente ausentes en los iris marrones, sino que simplemente están oscurecidas por el
abundancia de partículas de melanina en la capa fronteriza anterior (Falls, 1970). Por lo tanto, es posible
que pueden ser necesarios métodos distintos a la fotografía en color para caracterizar con precisión a Wolfflin
nódulos en poblaciones de diversa ascendencia. Curiosamente, encontramos una asociación entre
mayor ancho del iris y nódulos de Wolfflin más extendidos en la población europea. como lobo lobo
Los nódulos están compuestos de colágeno atrofiado de la capa estromal, es posible que los iris sean más grandes.
puede ser más propenso a la acumulación de nódulos en la capa estromal anterior.
En un estudio reciente de asociación de todo el genoma sobre el color del iris en una población de ascendencia danesa,
Se encontró que DSCR9 rs7277820 estaba asociado con la variación del color del iris (Liu et al., 2010). Fue
sugirió que este marcador en realidad puede estar correlacionado con los nódulos de Wolfflin, debido a su presencia
en la Región Crítica del Síndrome de Down. Cuando analizamos la asociación entre DSCR9
rs7277820 y nódulos de Wolfflin en la muestra europea, no pudimos encontrar una diferencia significativa
relación.
4.5.5 Melanosis conjuntival

Finalmente, el último rasgo que analizamos fue la melanosis conjuntival. En algunos iris, hay
son áreas de manchas de pigmento en la región escleral que rodea el iris (Damato y Coupland,
2008). Estos puntos pueden comprender regiones discretas o anillos que rodean el iris.
La melanosis conjuntival aún no se ha explorado ampliamente. Sin embargo, parece encontrarse
más comúnmente en poblaciones con iris más oscuros. Esto se reflejó en gran medida en nuestra muestra. Aquí,
casi la mitad de nuestros participantes del sur de Asia mostraron algún tipo de melanosis conjuntival,
en comparación con sólo el 23,3% de los asiáticos orientales y el 2,1% de los europeos (Tabla 43). Es importante
Tenga en cuenta, sin embargo, que estos resultados pueden estar subestimados dado que los niveles superior e inferior
porciones de la esclerótica no eran completamente visibles en nuestra muestra. Curiosamente, la presencia de

113
La melanosis conjuntival no parece estar completamente relacionada con el color del iris, ya que la distribución de
este rasgo es muy diferente entre los participantes de Asia oriental y meridional.
4.5.6 Correlaciones de las características del iris
En los tres se examinaron las correlaciones entre las características del iris y el sexo, la edad y el ancho del iris.
grupos de población. Dentro de la población europea pudimos replicar varios de los
correlaciones que han sido identificadas en estudios anteriores. Estos incluyen: 1/ Un grado superior de criptas.
se correlaciona con surcos de contracción menos extendidos (Larsson y Pedersen, 2004); 2/ Un mayor
el grado de las criptas se correlaciona con menos manchas de pigmentación (Quillen et al., 2011); 3/ Más extendido
Los surcos de contracción se correlacionan con una mayor cantidad de manchas de pigmento (Larsson y
Pedersen, 2004). Inicialmente no pudimos replicar la asociación entre el grado de la cripta y
Grado del nódulo de Wolfflin (Larsson y Pedersen, 2004). Sin embargo, estábamos interesados en
determinar si esto se debió simplemente a la mayor frecuencia de europeos de ojos marrones en nuestro país.
muestra, en comparación con los estudios anteriores que informaron la correlación. cuando restringimos
nuestra muestra a individuos que describieron el color de su iris como "azul claro, verde o gris"
o 'azul, verde o gris', un mayor grado de criptas (p<0,044, G=0,142) y más extendidas
Los surcos de contracción (p = 0,001, G = 0,343) se correlacionaron con una mayor extensión de Wolfflin.
nódulos. Esto enfatiza los efectos que el color del iris puede tener en el estudio de Wolfflin global.
variación de nódulos. En contraste con las correlaciones significativas observadas en la muestra europea,
Ninguno de los cinco rasgos se correlacionó significativamente ni en las poblaciones del este ni del sur de Asia.
Hay varias explicaciones potenciales para esto: 1/ El color del iris puede estar oscureciendo algunas de las
asociaciones; 2/ Puede haber diferencias poblacionales responsables de la falta de correlaciones; o
3/ Nuestra capacidad para identificar correlaciones significativas en las muestras de Asia oriental y del sur de Asia fue
obstaculizado debido a tamaños de muestra más pequeños.
4.5.7 Investigación futura
Varios estudios previos han sugerido que la distribución de las características del iris puede variar según la población.
dependiente (Qiu et al., 2005; Quillen et al., 2011). En este artículo analizamos la situación mundial.
distribución de criptas de Fuchs, nódulos de Wolfflin, surcos de contracción, manchas pigmentarias y
melanosis conjuntival en participantes de ascendencia del este de Asia, Europa y el sur de Asia. Nosotros
encontró que los cinco rasgos mostraban diferencias significativas en la frecuencia entre los tres grupos. Nosotros
114
También mostró que SEMA3A rs10235789 está significativamente asociado con criptas no solo en el
muestra europea, pero también en las muestras de Asia oriental y del sur de Asia. Por el contrario, TRAF3IP1
rs3739070 solo se correlaciona con surcos de contracción en los europeos. Por último, pudimos
replicar todas las correlaciones de características del iris que se habían identificado en estudios anteriores en nuestro
Muestra europea. Sin embargo, no pudimos identificar ninguna correlación en el Este y el Sur.
Grupos asiáticos. Se necesitarán investigaciones futuras para explorar la frecuencia de estas características en
otras poblaciones, como los grupos africanos e hispanos.
Todavía existen muchas lagunas en nuestra comprensión de las características de la superficie del iris. En la actualidad, muy poco
Se conoce la base genética y la distribución global de los nódulos de Wolfflin. Esto es principalmente
porque es difícil estudiar este rasgo en poblaciones que están compuestas principalmente por individuos
con ojos marrones. Si bien inicialmente se sugirió que estos haces de colágeno estaban ausentes en
iris más oscuros, desde entonces se ha establecido que lo más probable es que queden enmascarados cuando hay grandes
cantidades de partículas de melanina en la capa estromal anterior. En la actualidad, la única manera de determinar con precisión
caracterizar los nódulos de Wolfflin es mediante magnificación (Falls, 1970). Las manchas de pigmento son similares
muy difícil de estudiar. En particular, no tenemos una forma de diferenciar con seguridad
entre pecas pigmentadas y nevos de fotografías del iris. Los nevos y las pecas parecen
tienen una relación diferente con el desarrollo de trastornos oculares como el melanoma uveal
(Holly et al., 1990; Horn et al., 1994). Por lo tanto, sería extremadamente útil desarrollar formas
de distinguir estos rasgos en las fotografías.
Sugerimos que la fotografía infrarroja puede proporcionar una posible solución a estos problemas. Como
La luz infrarroja no es absorbida ni reflejada por la melanina, puede proporcionar una forma de visualizar
rasgos, como los nódulos de Wolfflin, que se encuentran debajo de los gránulos de melanina en la capa del borde anterior.
Además, como la principal diferencia entre nevos y pecas es si la raíz subyacente o no
La capa estromal está distorsionada, la fotografía infrarroja puede proporcionar un medio para identificar los puntos que
tener un efecto sobre esta capa. El campo del reconocimiento del iris ya depende en gran medida del uso de
fotografía infrarroja. Sin embargo, también amalgama todas las estructuras del iris en una sola
código (Acharya y Kasprzycki, 2010). Mirando fotografías infrarrojas desde un punto de vista cualitativo.
La perspectiva puede proporcionar información valiosa sobre la distribución tanto de las manchas pigmentarias como de las
Nódulos de Wolfflin en poblaciones globales.
Las características del iris están empezando a desempeñar un papel cada vez más importante en muchos campos diferentes.
Sin embargo, todavía existen muchas lagunas en nuestro conocimiento sobre estos rasgos. Las investigaciones futuras serán
115
necesario para determinar las diferencias funcionales en estos rasgos en las poblaciones globales, como
así como los efectos que estos rasgos pueden tener en enfermedades y trastornos oculares específicos de la población.
116
4.6 Tablas
Tabla 41 Estadísticas descriptivas generales para los lirios de Asia oriental, Europa y Asia meridional
Población Iris incluidos Hembras Machos Edad promedio Ancho promedio del iris
asiático del este 467 320 147 21.61 376,72
europeo 619 376 243 22,65 394,45
sur de asia 364 246 118 20.67 384,92

117
Tabla 42 Resultados de la regresión ordinal genética.

Se presentan valores de significancia y odds ratios para cada genotipo para cada población. Los genotipos
etiquetados con una 'a' se refieren al genotipo ancestral.
Polimorfismo Población Genotipos Significado Razones impares
CC
asiático del este Connecticut 0,018 1.679
TT a a
CC < 0,001 2.203

rs10235789
europeo Connecticut 0.023 1.507
(Criptas de Fuchs)
TT a a
CC 0.011 2.721
sur de asia Connecticut < 0,001 2.206
TT a a

asiático del este ESO 0.956 0.980
CC a a
Automóvil club británico 0.051 6.385

rs3739070
europeo ESO 0.333 2.601
(Surcos de Contracción)
CC a a

sur de asia ESO 0,168 0.360
CC a a
TT
asiático del este Connecticut 0,173 0.241
CC a a
TT 0,187 1.685
rs11630290
europeo Connecticut 0,998 1.000
(Manchas de pigmento)
CC a a
TT
sur de asia Connecticut 0,136 0.536
CC a a
Automóvil club británico 0.375 0,758

rs7277820
europeo Georgia 0.345 0,794
(Nódulos de Wolflin)
GG a a
118
Tabla 43 Frecuencias de las características de la superficie del iris

El porcentaje (y número) de individuos con cada categoría de criptas de Fuchs, surcos de contracción, manchas
de pigmento, nódulos de Wolfflin, melanosis y color del iris en las tres poblaciones.
Rasgo Categoría asiático del este europeo sur de asia
0 20,3% (95) 9,2% (57) 15,1% (55)
Fuchs 1 49,9% (233) 38,0% (235) 41,5% (151)

criptas 2 19,7% (92) 30,9% (191) 25,0% (91)
3 10,1% (47) 22,0% (136) 18,4% (67)
0 15,2% (71) 6,6% (41) 3,8% (14)
Contracción
1 37,7% (176) 11,1% (69) 15,4% (56)
Surcos
2 47,1% (220) 82,2% (509) 80,8% (294)
0 77,9% (364) 42,1% (260) 83,2% (303)
Pigmento 1 20,6% (96) 38,4% (238) 14,8% (54)
Lugares
2 1,5% (7) 19,5% (121) 1,9% (7)
0 100% (467) 62,7% (388) 98,6% (359)
Lobo lobo
1 0% (0) 12,0% (74) 0,5% (2)
Nódulos
2 0% (0) 25,4% (157) 0,8% (3)
0 76,7% (358) 97,9% (606) 54,9% (200)
Melanosis
1 23,3% (109) 2,1% (13) 45,1% (164)
0 0% (0) 11,8% (73) 0% (0)
1 0% (0) 45,1% (279) 1,6% (6)
Ojo 2
Color 4,5% (21) 23,1% (143) 8,2% (30)
3 45,4% (212) 19,1% (118) 51,9% (189)
4 50,1% (234) 1,0% (6) 38,2% (139)
119
Tabla 44 Distribución de las características de la superficie del iris
El porcentaje (y número) de iris con criptas grandes, surcos de contracción, manchas pigmentarias y nódulos de Wolfflin en cada uno de los
cuatro cuadrantes del iris.
Rasgo Población Cuadrante 1 Cuadrante 2 Cuadrante 3 Cuadrante 4
asiático del este 10,9% (51) 15,8% (74) 14,3% (67) 18,4% (86)
Grandes criptas europeo 31,5% (195) 35,5% (220) 25,8% (160) 29,2% (181)
sur de asia 23,6% (86) 29,9% (109) 22,5% (82) 22,3% (81)
Surcos europeo 82,1% (508) 84,8% (525) 89,2% (552) 84,3% (522)
sur de asia 70,6% (257) 91,2% (332) 95,1% (346) 84,1% (306)
Manchas de pigmento europeo 17,3% (107) 18,6% (115) 31,7% (196) 31,2% (193)
sur de asia 2,7% (10) 4,9% (18) 6,3% (23) 6,6% (24)
asiático del este 0% (0) 0%(0) 0% (0) 0% (0)
Nódulos europeo 23,7% (147) 28,6% (177) 34,9% (216) 31,2% (193)
sur de asia 0,8% (3) 1,1% (4) 1,4% (5) 1,4% (5)
120
4.7 Cifras
Figura 41 Cinco características superficiales que se encuentran comúnmente en el iris humano
Las flechas apuntan a las características de las imágenes b, cy e. Las criptas de Fuchs (a) son lagunas en el borde anterior del iris
que surgen durante la reabsorción de la membrana pupilar. Pueden ser grandes o pequeños y se parecen mucho a las ventanas.
En la siguiente imagen se describen cuatro criptas de muestra. Los nódulos de Wolfflin (b) son pequeños haces de colágeno
que son consecuencia de la atrofia en la capa estromal del iris. Las manchas de pigmentación (c) son áreas discretas de pigmentación
que se pueden observar en la superficie del iris.
Las manchas que distorsionan la capa estromal se denominan nevos y las manchas que no distorsionan la capa estromal se denominan
pecas. Los surcos de contracción (d) son anillos que se extienden alrededor del borde exterior del iris.
Se parecen mucho a las arrugas y son producto de la contracción y dilatación de la pupila. Los surcos suelen ser discontinuos y
escalonados a lo largo del iris. En la imagen de abajo, la línea negra sigue el recorrido de los surcos alrededor del ojo. La melanosis
conjuntival (e) es un manchado que se puede observar en la región escleral que rodea el iris. Suele ser benigno y se encuentra
más comúnmente en algunos ancestros que en otros.
121
Figura 42 Límites del iris

En los pasos 2 a 6 de la aplicación basada en web, el usuario dibuja el círculo que mejor se ajusta alrededor de la
gorguera pupilar (círculo morado), el collarín (círculo azul) y el iris (círculo rojo). Esto permite que el programa identifique
la zona pupilar (delimitada por los círculos azules y morados) y la zona ciliar (delimitada por los círculos azules y rojos).
122
Figura 43 Cuadrantes del iris

El programa divide el iris en cuatro cuadrantes diferentes según el centro del iris definido por el usuario.
El cuadrante 1 es el cuadrante nasal superior, el cuadrante 2 es el cuadrante nasal inferior, el cuadrante 3 es el
cuadrante temporal inferior y el cuadrante 4 es el cuadrante temporal superior.
123
Figura 44 Categorías de manchas pigmentarias

Categoría 1: sin manchas de pigmento. Categoría 2: entre una y dos manchas pigmentarias. Categoría 3: más de dos manchas pigmentarias. Cualquier lesión bien delimitada que
variara en color desde tostado hasta marrón oscuro se consideró mancha pigmentaria. Las flechas negras ilustran ejemplos de manchas de pigmento.
124
Figura 45 Categorías de surcos de contracción

Categoría 1: sin surcos de contracción. Categoría 2: surcos de contracción que se extienden menos de 180° alrededor del iris. Categoría 3: surcos de contracción
que se extienden más de 180° alrededor del iris. Las líneas negras siguen la extensión de los surcos de contracción alrededor del iris.
125
Figura 46 Categorías de nódulos de Wolfflin

Categoría 1: sin nódulos de Wolfflin. Categoría 2: Nódulos de Wolfflin que se extienden menos de 180° alrededor del iris. Categoría 3: Nódulos de Wolfflin que
se extienden más de 180° alrededor del iris. Los nódulos de Wolfflin se definieron como lesiones bien delimitadas de color blanco a naranja. Las flechas
negras apuntan a ejemplos de nódulos de Wolfflin.
126
Figura 47 Categorías de cripta

Categoría 1: sin criptas. Categoría 2: sólo pequeñas criptas centradas alrededor del collarete. Categoría 3: al
menos una cripta grande ubicada en menos de tres cuadrantes del iris. Categoría 4: al menos tres grandes
criptas ubicadas en tres o más cuadrantes del iris. Las criptas grandes se definen como aquellas que se
extienden desde el collarete hasta más del 50% de la zona ciliar. La aplicación web utilizó los límites de la esclerótica
y del iris para distinguir automáticamente entre criptas grandes y pequeñas. En las imágenes siguientes se ilustran
ejemplos de criptas. No todas las criptas están etiquetadas en cada imagen. Las criptas que se definirían como
grandes están delimitadas en verde y las criptas que se definirían como pequeñas están delimitadas en amarillo.
127
Figura 48 Color del iris autodescrito, según lo define la escala de fototipo de Fitzpatrick La
escala de Fitzpatrick caracteriza el color del iris en cinco categorías: 1/ azul claro, verde o gris, 2/ azul, verde o gris, 3/ avellana o marrón claro , 4/
marrón oscuro y 5/ negro pardusco. Las fotografías a continuación representan un ejemplo autodescrito de cada una de las cinco categorías.
128
Figura 49 Categorías de melanosis conjuntival

La melanosis conjuntival (flechas negras) se midió mediante un esquema de presencia o ausencia. Cualquier iris que mostrara manchas en la esclerótica
se caracterizó por tener melanosis conjuntival. Este manchado normalmente tomaba la forma de un anillo alrededor del iris o manchas aisladas en la esclerótica.
129
4.8 Referencias
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Capítulo 5:
Observaciones finales
132
133
5.1 Introducción
El objetivo general de mi investigación fue investigar la distribución global y la genética.
base del color y la estructura del iris en poblaciones de diversa ascendencia. Para lograr esto, yo
adquirió fotografías de iris de alta resolución de participantes de Asia Oriental, Europa y el Sur.
Ascendencia asiática que vivió en el área metropolitana de Toronto. Para mi primer artículo (Capítulo 2), utilicé un
Muestra piloto de 205 participantes para desarrollar mi metodología. Para mi segundo y tercer
En mis artículos (capítulos 3 y 4), llevé a cabo un estudio de investigación completo con 1.465 participantes. yo estaba específicamente
interesado en responder las siguientes preguntas de investigación: 1/ ¿Cómo puedo cuantificar el color del iris y
¿Heterocromía central en poblaciones de ascendencia diversa? 2/ ¿Cómo puedo caracterizar la superficie del iris?
características en poblaciones de ascendencia diversa? 3/ ¿Cómo se modifica la distribución fenotípica del iris?
El color y las características de la superficie difieren en las poblaciones de Asia oriental, Europa y Asia meridional.
¿ascendencia? 4/ ¿Qué variantes genéticas son responsables de la variación del color y la estructura del iris en
¿Poblaciones europeas, de Asia oriental y del sur de Asia?
5.2 Resumen de hallazgos

5.2.1 Cuantificación de la pigmentación del iris
Obtener una medida del color del iris ha sido tradicionalmente una tarea muy difícil.
Los métodos categóricos para caracterizar el color del iris no pueden dar cuenta de la extensa
variación continua observada en este rasgo. Por el contrario, los métodos cuantitativos ignoran las regiones de
heterocromía en el ojo. Uno de los principales objetivos de mi investigación fue desarrollar un método cuantitativo de
medir el color de ojos que también podría explicar la heterocromía central. En el primer estudio de mi
tesis (Capítulo 2), intenté extraer el color del iris de un cuadrado de 256 por 256 píxeles en el lado izquierdo.
cuadrante del ojo. Un colaborador creó una macro en Adobe Photoshop CS5 que llevó a cabo esto
procesar automáticamente. La medida de color promedio de este cuadrado se registró luego en CIE.
1976 Espacio de color L*a*b* (CIELAB). CIELAB es un sistema de color universal que estrechamente
se aproxima a la visión humana (McLaren, 1976). Esto significa que la mayoría de las personas deberían poder
detectar un cambio de una unidad en el espacio de color (Kuehni y Marcus, 1979). Esto es muy ventajoso
para un rasgo como el color de ojos, que tradicionalmente se ha calificado visualmente.
Aunque este método cuantitativo inicial tuvo bastante éxito en capturar características fenotípicas
variación, tenía limitaciones considerables. Otros grupos de investigación notaron correctamente que este método
134
aislaron solo una porción muy pequeña del iris (Andersen et al., 2013). Esto significa que si un
Una anomalía de pigmentación, como una gran mancha de pigmento, se encuentra en ese cuadrado de 256 por 256 píxeles,
el color general de ese iris podría estar tremendamente tergiversado. Además, este método proporcionó
No hay una manera fácil de aislar o estudiar la heterocromía central.
Para mi segundo estudio (Capítulo 3), refiné mi metodología de cuantificación del color del iris para
tener en cuenta estas limitaciones. Una aplicación web fue diseñada por un segundo colaborador que fue
capaz de extraer una cuña de 60˚ del cuadrante izquierdo del iris. Aunque este nuevo método no es
Automático, ofrece una estimación mucho más profunda y completa del color del iris. Como es el usuario
requerido para definir los límites esclerales, pupilares y del collarín, el programa puede obtener
mediciones de color individuales de las zonas pupilar y ciliar. Esto significa que el
La cantidad de heterocromía central en el iris, así como el color general del iris, pueden ser
cuantificado. Continué usando el espacio de color CIELAB para cuantificar el color del iris, como demostró este sistema.
ser muy eficaz en las primeras etapas de mi investigación. Esta nueva metodología es poderosa,
preciso y permite a los investigadores abordar la variación de la pigmentación del iris desde una perspectiva completamente nueva.
dirección.
5.2.2 Caracterización de las características de la superficie del iris
Aunque se ha estudiado la diversidad de las características de la superficie del iris en varios continentes
grupos de población, todavía no ha habido un intento de observar la variación en estos rasgos entre
diferentes grupos continentales. Como resultado, la mayoría de los métodos que se han utilizado para
caracterizar la estructura del iris se diseñaron teniendo en mente un único conjunto de muestras. En la tercera investigación
En el estudio de mi tesis (Capítulo 4), intenté desarrollar un método para clasificar las características de la superficie del iris.
que podría aplicarse a poblaciones diversas. En la actualidad, la forma más eficaz de
caracterizar la estructura del iris es categóricamente. Tanto los nódulos de Wolfflin como los surcos de contracción.
se clasificaron según su presencia y extensión alrededor del iris. Las criptas de Fuchs fueron clasificadas
según la cantidad y extensión de la hipoplasia en el iris. Finalmente, se clasificaron las manchas de pigmento.
según su recuento general en el ojo. La misma aplicación web que se utilizó para caracterizar
El color del iris se modificó para describir también la textura del iris. Esta aplicación web consta de once
pasos que hacen que el usuario observe manualmente la presencia y extensión de cada una de las características de la superficie en
ellos son. Luego, el programa asigna automáticamente una calificación para cada una de las características. Curiosamente,
Mientras investigaba la variación de la textura del iris, noté que muchos ojos mostraban manchas o anillos de
135
pigmento en la esclerótica. Esta afección, conocida como melanosis conjuntival, aún no se ha
sido ampliamente caracterizado. Por lo tanto, elegí incorporar también la 'presencia o ausencia' de
este rasgo en la aplicación web.
Este método categórico de medir las características de la superficie del iris muestra resultados consistentes y confiables.
resultados. Además, la frecuencia de cada uno de los rasgos descritos en mi estudio refleja los resultados anteriores.
frecuencias reportadas (Donaldson, 1961; Harbor et al., 2004; Sidhartha et al., 2014a, 2014b). A
El método estandarizado para medir las características de la superficie del iris en diversas poblaciones debería permitir
investigadores para comparar mejor la distribución de estos rasgos entre diferentes grupos ancestrales.
5.2.3 Distribución fenotípica del color del iris y heterocromía central

Está bien establecido que la mayor variedad de diversidad de pigmentación del iris se encuentra en
poblaciones de ascendencia europea. Sin embargo, se sabe muy poco sobre la distribución del iris.
variación de color en poblaciones fuera de Europa. En el primer y segundo artículo de mi tesis.
(Capítulos 2 y 3), investigué la distribución de este rasgo en Asia oriental, Europa y
Poblaciones del sur de Asia.
Como era de esperar, la muestra europea mostró la mayor gama de variación de color en todo el mundo.
Espacio de color CIELAB. Sin embargo, también se pudo observar una gran diversidad en el sur y
muestras de Asia oriental, y la muestra de Asia meridional muestra algo más de dispersión que la
Muestra de Asia oriental. La distribución de las tres poblaciones en el espacio de color CIELAB.
confirma que el color de ojos es un rasgo continuo que debe abordarse cuantitativamente.
Curiosamente, los ojos marrones en la muestra europea parecen ser mucho más claros que los ojos marrones en la muestra europea.
las muestras del este y sur de Asia. Esto sugiere que puede haber marcadores de población fijos.
que controlan la intensidad del color de ojos marrones en estos diferentes grupos.
La distribución de la heterocromía central también mostró claras diferencias poblacionales. El
La muestra europea mostró las mayores cantidades de heterocromía central, seguida por la
Muestras del sur de Asia y del este de Asia. Dada la baja diferencia de color entre la pupila
y zonas ciliares en poblaciones fuera de Europa, la heterocromía central parece ser un rasgo
Se encuentra casi exclusivamente en iris de colores más claros. Las poblaciones con iris más oscuros no muestran
Hay mucha variación entre las diferentes regiones del ojo.

136
5.2.4 Distribución fenotípica de las características de la superficie del iris
En el tercer artículo de mi tesis (Capítulo 4), analicé la distribución fenotípica de
Criptas de Fuchs, surcos de contracción, nódulos de Wolfflin y manchas pigmentarias en poblaciones del Este
Ascendencia asiática, europea y del sur de Asia. Curiosamente, la distribución global de los cuatro iris
Las características parecen depender en gran medida de la ascendencia. Criptas de Fuchs, manchas pigmentarias y Wolfflin
Los nódulos tenían un grado significativamente más alto en la muestra europea en comparación con los otros dos.
grupos. Sólo los surcos de contracción mostraron una calidad igualmente alta tanto en Europa como en el Sur.
Muestras asiáticas. A su vez, la muestra del sur de Asia tenía un mayor grado de criptas de Fuchs y
surcos de contracción que la muestra de Asia Oriental. Sin embargo, ambos grupos mostraron una
grado similar de manchas pigmentarias y nódulos de Wolfflin. Las diferencias específicas de la población en
Las manchas pigmentarias y los nódulos de Wolfflin probablemente se explican por el diferente color de ojos.
frecuencias. Como ambos rasgos son más prominentes en iris más claros, tiene sentido que
sería más común en individuos de ascendencia europea. Sin embargo, es poco probable que el
Las diferencias globales en el surco de contracción y el grado de las criptas se pueden atribuir únicamente al color del iris.
Las criptas de Fuchs no se asociaron con el color del iris en ninguno de los tres grupos. De manera similar, el
La población de Asia oriental con pigmentación oscura mostró el grado más bajo de surcos de contracción.
Sin embargo, dentro de la población europea, la extensión de los surcos de contracción fue positiva
asociado con iris más oscuros.
Estos resultados sugieren que la distribución de las características de la superficie del iris depende de la población.
Esto puede ayudar a explicar por qué tantas enfermedades y trastornos oculares dependen de la ascendencia.
distribuciones.
5.2.5 Base genética del color del iris
En la actualidad, la base genética de la pigmentación del iris se conoce bastante bien en poblaciones
de ascendencia europea. La mayor parte de la variación entre el color de ojos azules y marrones puede deberse
atribuyó a un único marcador, rs12913832, ubicado en el intrón 86 del gen HERC2 (Eiberg et al.
otros, 2008; Kayser y otros, 2008; Sturm et al., 2008). Sin embargo, otros polimorfismos en OCA2,
SLC24A4, SLC45A2, TYR, IRF4, TYRP1, ASIP, DSCR9, NPLOC4 y LYST pueden desempeñar un papel más
subtle role as well (Beleza et al., 2013; Frudakis et al., 2003; Kanetsky et al., 2002; Liu et al.,
2010; Sulem et al., 2007). En la actualidad, muy pocos estudios han intentado examinar el color del iris.
diversidad en poblaciones de ascendencia no europea.

137
En mi primera y segunda publicaciones (Capítulos 2 y 3), analicé la asociación entre
marcadores putativos de pigmentación del iris y color de ojos en participantes de Asia oriental, Europa y
Ascendencia del sur de Asia. Mi primera publicación consistió en un estudio piloto a pequeña escala que analizaba
específicamente en HERC rs12913832. Mi segunda publicación incluyó HERC rs12913832 y 13.
marcadores adicionales. En ambos estudios, HERC rs12913832 se asoció significativamente con el iris
variación de pigmentación en los conjuntos de muestras de Europa y el sur de Asia. Sin embargo, este marcador tenía un
efecto muy diferente en cada población. Esto se ejemplifica particularmente bien en el segundo
publicación por individuos que eran homocigotos para el alelo derivado. homocigotos europeos
tenía valores b* que caían en la región 'azul' del espacio de color. En cambio, el sur de Asia
los homocigotos tenían valores b* que caían en la región 'verde/intermedia' del espacio de color. Este
sugiere que HERC2 rs12913832 no solo codifica directamente la diferencia entre azul y
color de ojos marrones. Más bien, debe haber otras variantes que modifiquen su efecto y que sean diferentes en
ambas poblaciones. En la muestra europea, otros cinco marcadores también se asociaron con el iris.
diversidad de pigmentación: OCA2 rs1800407, SLC45A2 rs16891982, SLC24A4 rs12896399, IRF4
rs12203592 y TYR rs1393350.
Aparte de HERC2 rs12913832, el color de ojos en el conjunto de muestras del sur de Asia fue en gran medida
determinado por SLC24A5 rs1426654. Este marcador tuvo un efecto aditivo sobre el color del iris, con cada
copia del alelo derivado que produce ojos marrones más claros. SLC24A5 rs1426654 es un interesante
Polimorfismo porque es uno de los principales marcadores asociados con el aclaramiento de la piel.
pigmentación en poblaciones europeas (Lamason et al., 2005). También se ha descubierto que
contribuyen sustancialmente a la diversidad de la pigmentación de la piel en el sur de Asia (Stokowski et al., 2007).
Por lo tanto, es poco probable que se haya seleccionado debido a su efecto sobre la pigmentación del iris. Un segundo
El marcador LYST rs3768056 también se asoció con el color de ojos en la muestra del sur de Asia.
Sin embargo, tuvo un efecto mucho menor.
Los únicos determinantes del color de ojos en la muestra de Asia Oriental fueron OCA2 rs1800414 y
OCA2 rs74653330. El alelo derivado en ambos marcadores se asoció con un iris más claro.
pigmentación. Aunque no se sabe mucho sobre la variación de la pigmentación en el este de Asia, tanto
Los marcadores muestran una fuerte asociación con la pigmentación de la piel en esta región, y se cree que
Ambos marcadores pueden haber jugado un papel en la evolución de la pigmentación clara de la piel en Oriente.
Asia (Eaton et al., 2015; Edwards et al., 2010). Por lo tanto, es probable que se asocie con el color del iris.
secundario a su efecto sobre el color de la piel.

138
Mi primer y segundo trabajo de investigación finalmente demostraron que la base genética del iris
la pigmentación es, al menos hasta cierto punto, específica de la población. Con la excepción de HERC2
rs12913832, los marcadores asociados con la variación de la pigmentación del iris fueron diferentes en los tres
grupos. En la muestra del sur de Asia, esto puede estar relacionado en gran medida con diferencias en la frecuencia de los alelos.
La frecuencia del alelo derivado en SLC24A4 rs12896399 (europeo: 0,402, sur de Asia: 0,278),
SLC45A2 rs16891982 (europeo: 0,931, sur de Asia: 0,1134) y TYR rs1393350 (europeo:
0,259, sur de Asia: 0,083) es mucho menor en el grupo del sur de Asia en comparación con el grupo europeo.
grupo. Por lo tanto, es posible que el tamaño de la muestra en el grupo del sur de Asia fuera simplemente demasiado pequeño para
recoger estas asociaciones. Por el contrario, los marcadores que controlan el color del iris en el este de Asia
La muestra parece ser completamente independiente de las observadas en Europa y el sur de Asia.
muestras. HERC2 rs12913832, OCA2 rs1800407, SLC45A2 rs16891982, IRF4 rs12203592 y
TYR rs1393350 están completamente ausentes o se encuentran en frecuencias insignificantes (<0,010) en el
Muestra de Asia oriental. Es interesante observar que los genes que determinan la pigmentación del iris
La diversidad en las tres regiones son en gran medida aquellas que se han asociado con otros pigmentos.
características como el color de la piel. Esto puede proporcionar algún apoyo a la hipótesis que argumenta
para los que se seleccionaron inicialmente estos marcadores debido a la influencia que tenían en otros
fenotipos pigmentarios.
5.2.6 Base genética de las características de la superficie del iris
En el tercer artículo de mi tesis (Capítulo 4), analicé la asociación entre la teoría de Fuchs
criptas, surcos de contracción, nódulos de Wolfflin y manchas pigmentarias y un conjunto de variantes genéticas que
había sido identificado previamente en una población australiana de ascendencia europea (Larsson et al.,
2011). Las criptas de fuchs se asociaron significativamente con SEMA3A rs10235789 en el este de Asia,
Muestras europeas y del sur de Asia. En los tres grupos, cada copia adicional del alelo derivado
se asoció con un mayor grado de criptas. También pude detectar una asociación límite
entre TRAF3IP1 rs3739070 y el grado de surco de contracción en la muestra europea. Sin embargo,
Estos resultados no se replicaron en los grupos del este o sur de Asia. El ancestral TRAF3IP1
El alelo tiene una frecuencia muy baja en los tres grupos. Sin embargo, se encontró con mayor frecuencia
en el grupo europeo (0,08) en comparación con los grupos del este (0,04) y del sur de Asia (0,03). Es
Es posible que sea necesario un tamaño de muestra mayor para detectar esta asociación.
139
Aunque HERC1 rs10235789 se ha asociado tentativamente con el número de nevos
en el ojo, no pude detectar una relación entre este marcador y las manchas de pigmento en mi
conjunto de muestra. Asimismo, DSCR9 rs7277820 no se asoció con nódulos de Wolfflin en ninguno de los
tres grupos ancestrales.
Aunque las características de la superficie del iris muestran una heredabilidad moderadamente alta, SEMA3A
rs10235789 y TRAF3IP1 rs3739070 explican muy poco de la variación total en las criptas de Fuchs
y surcos de contracción. Dado que las cuatro características del iris mostraron distribuciones muy diferentes en
En mis tres poblaciones de estudio, será necesario investigar la base genética de estos rasgos.
utilizando paneles más densos de marcadores genéticos y una representación diversa de poblaciones para
identificar otros marcadores contribuyentes.
5.3 Limitaciones de la investigación
Los hallazgos publicados en mis tres artículos de investigación representan una contribución importante a
los campos de la estructura del iris y la investigación del color. Sin embargo, existen varias limitaciones que deben
Ser dirigido. Estas limitaciones incluyen la estandarización entre diferentes conjuntos de muestras, el número
de las poblaciones estudiadas y las dificultades asociadas con la caracterización del iris dependiente del color
características
La aplicación web desarrollada para esta tesis representa un enfoque novedoso para la
Estudio de la variación del color y la estructura del iris. A diferencia de otros métodos, que generan un promedio
Medición del color de ojos e ignorar otras características como la heterocromía, esta aplicación permite
usuarios obtener una medición de color separada de las zonas ciliar y pupilar. Además,
porque la aplicación web no requiere que el ojo tenga un cierto tamaño o esté ubicado en un lugar particular
lugar en la fotografía, se puede aplicar a un amplio conjunto de fotografías de iris. A pesar de estos
ventajas, este método aún no permite la comparación de fotografías de iris tomadas de
Diferentes instrumentos y cámaras. Esto se debe en gran medida a que los diferentes instrumentos no tienen la
mismos ajustes de exposición y color. El siguiente paso en la investigación sobre la pigmentación del iris será encontrar una
manera de estandarizar las formas en que se toman fotografías del ojo en diferentes investigaciones
grupos. Quizás una solución sería colocar una tarjeta de color en cada fotografía. este color
Luego, la tarjeta podría usarse para estandarizar la variación de color y brillo en diferentes conjuntos de muestras.
Sin embargo, implementar un método de este tipo sería un desafío. Una táctica alternativa para combinar
140
Los resultados de diferentes estudios serían el uso de enfoques metaanalíticos en los que se busca un efecto global.
se puede calcular en función del efecto y la varianza de los estudios individuales.
Otra limitación de mi investigación fue la cantidad de poblaciones que elegí estudiar.
Los artículos presentados en esta tesis son los primeros en analizar el color del iris en el este y sur de Asia.
poblaciones. También son los primeros en comparar las características del iris entre diferentes grupos continentales.
Sin embargo, hay muchas poblaciones que aún necesitan ser estudiadas para comprender completamente la
diversidad global inherente a estos rasgos. El área metropolitana de Toronto fue un escenario ideal para la
Reclutamiento de voluntarios de Asia Oriental, Europa y Asia Meridional. Sin embargo, el estudio piloto
Indiqué que no podría reclutar un número suficiente de personas de origen africano,
Ascendencia hispana y del Medio Oriente. Se necesitarán investigaciones futuras para obtener una mayor
tamaño de muestra con una mejor representación de la ascendencia.
Por último, necesitamos desarrollar mejores formas de medir las características del iris que dependen del color.
Aunque las fotografías de alta resolución del iris hacen un trabajo maravilloso al capturar las criptas de Fuchs
y los surcos de contracción, no se puede decir lo mismo de los nódulos de Wolfflin y las manchas pigmentarias.
Los nódulos de Wolfflin a menudo son imposibles de ver en ojos de colores más oscuros (Falls, 1970). Esto significa
que su frecuencia general está muy subestimada en poblaciones donde los ojos marrones
predominar. Asimismo, 'manchas de pigmento' es una categoría que se utiliza para englobar dos tipos de
aberraciones pigmentarias: nevos y pecas. Ambas estructuras afectan el iris de diferentes maneras.
Aunque las manchas de pigmento se encuentran planas en la capa del borde anterior, los nevos finalmente distorsionan la
capa estromal subyacente (Eagle, 1988; Harbor et al., 2004). Actualmente no es posible
Distinga entre estos dos tipos de manchas utilizando fotografías del iris. Yo creo que el uso
de la fotografía infrarroja cercana puede ser una solución a ambos problemas. La luz infrarroja es
ni absorbido ni reflejado por la melanina. Por lo tanto, su uso puede permitir la visualización de
estructuras que se encuentran debajo de la superficie del iris. En el caso de las manchas pigmentarias, puede aumentar la
visibilidad de los nevos y disminuir la visibilidad de las manchas de pigmento debido a sus diferentes efectos sobre la
capa estromal.
5.4 Conclusiones
Finalmente, esta tesis ha llegado a los siguientes hallazgos:

141
1) Los métodos cuantitativos para medir el color de los ojos representan un medio ideal para investigar el iris.
variación de color en poblaciones de diversa ascendencia. También se pueden utilizar métodos cuantitativos para
cuantificar con éxito la variación heterocromática en el iris.
2) La distribución fenotípica del color del iris muestra grandes diferencias poblacionales. individuos de
La ascendencia europea muestra la mayor cantidad de diversidad de colores. Sin embargo, sustancial
También se pueden observar variaciones en el este y el sur de Asia. La heterocromía central es en gran medida
restringido a iris de colores más claros.
3) Las criptas de Fuchs, los surcos de contracción, los nódulos de Wolfflin y las manchas pigmentarias se muestran muy diferentes
distribuciones en poblaciones de ascendencia de Asia oriental, Europa y Asia meridional.
4) El marcador HERC2 rs12913832 es un determinante importante de la variación del color del iris en los individuos.
de ascendencia europea y del sur de Asia. Sin embargo, tiene efectos diferentes en cada grupo.
5) Los marcadores asociados con la variación de la pigmentación del iris en el este y sur de Asia son, hasta cierto punto,
Hasta cierto punto, diferente de los marcadores asociados con la variación de la pigmentación del iris en Europa.
OCA2 rs1800414 y OCA2 rs74653330 son los principales determinantes del color del iris en el
Muestra de Asia oriental. HERC2 rs12913832, SLC24A5 rs1426654 y LYST rs3768056 son los
determinantes primarios en la muestra del sur de Asia.
6) Muchos de los marcadores asociados con la variación de la pigmentación del iris en los tres grupos han sido
asociado con otras características pigmentarias, como el color de la piel y el cabello.
7) SEMA3A rs10235789 muestra una asociación con el grado de cripta de Fuchs en el este de Asia,
Muestras europeas y del sur de Asia. TRAF3IP1 rs3739070 muestra una asociación límite en
la muestra europea.
La investigación sobre el color y la estructura del iris tiene el potencial de contribuir en gran medida a los campos de la
antropología, forense, biología molecular y salud pública. En esta tesis he demostrado que
Tanto el color de ojos como las características de la superficie son rasgos muy complejos que muestran una considerable interacción.
variación poblacional. Por lo tanto, es importante que los grupos de investigación se diversifiquen y comiencen a considerar
la base genética y la distribución global de ambos rasgos en poblaciones fuera de Europa. A pesar de
El estudio de estos temas aún está en curso, esta tesis ha proporcionado un marco que
Puede ser utilizado por otros investigadores en el mismo campo.

142
5.5 Referencias
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144
Reconocimientos de derechos de autor
El capítulo 1 ha sido publicado anteriormente como:
Edwards, M., Gozdzik, A., Ross, K., Miles J. y Parra, EJ (2012) Nota técnica: medidas cuantitativas del color del iris
utilizando fotografías de alta resolución. Soy. J. Física. Antro. 147, 141149.
Se ha obtenido permiso de John Wiley and Sons para la publicación de esta tesis (Licencia
Número: 3802541113357)
Edwards, M., Cha, D., S. Krithika., Johnson, M., Cook, G., Parra, EJ (2015) La pigmentación del iris como rasgo
cuantitativo: variación en poblaciones de ascendencia europea, asiática oriental y asiática meridional. y asociación
con polimorfismos de genes candidatos. Melanoma de células pigmentarias Res.
Este artículo fue publicado como acceso abierto. No se requirieron permisos de derechos de autor.
Edwards, M., Cha, D., S. Krithika., Johnson, M., Parra, EJ (2016) Análisis de las características de la
superficie del iris en poblaciones de ascendencia diversa. R. Soc. Ciencia abierta. 3, 150424.
Este artículo fue publicado como acceso abierto. No se requirieron permisos de derechos de autor.

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La arquitectura genética del color del iris y

Una tesis presentada de conformidad con los requisitos para obtener el

© Copyright de Melissa Edwards 2016

Número de ProQuest: 10138105

Reservados todos los derechos

INFORMACIÓN PARA TODOS

En el improbable caso de que el autor no haya enviado un manuscrito completo y falten

Reservados todos los derechos.

La arquitectura genética del color del iris y las características de la superficie

variación en poblaciones de diversa ascendencia. La metodología que he desarrollado proporcionará

Tabla de contenidos................................................. ................................................. ........................ IV

Lista de tablas................................................. ................................................. ................................ vii

Lista de figuras................................................. ................................................. ................................ viii

Adelante ................................................. ................................................. ........................................ ix

Capítulo 1: ................................................. ................................................. ...................................1

1.2 Anatomía del iris humano................................................ ................................................. ......3

1.2.1 Estructura del iris ................................................ ................................................. ...................3

1.2.2 Pigmentación del iris ................................................ ................................................. .............8

1.4 Bases genéticas de la pigmentación del iris................................................ ..........................................11

1.6.2 Caracterización de la heterocromía central ........................................ ................................17

1.6.3 Variación de la población ......................................... ................................................. ......18

1.7 Justificación y objetivos del estudio................................................. ................................................. ....20

1.8 Referencias................................................ ................................................. ........................22

Capítulo 2: ................................................. ................................................. ................................28

2.1 Resumen ................................................. ................................................. ................................29

2.2 Introducción ................................................. ................................................. ........................30

2.3 Materiales y métodos................................................ ................................................. .........31

2.3.1 Reclutamiento ................................................ ................................................. ...................31

2.3.2 Genotipado ................................................ ................................................. .................32

2.3.3 Adquisición y Procesamiento de Fotografías de Iris.................................... ...................32

2.3.4 Adquisición de Medidas de Color................................................ ................................33

2.3.5 Análisis estadístico ................................................ ................................................. .........34

2.4 Resultados................................................ ................................................. ................................34

2.5 Discusión................................................ ................................................. ........................36

2.6 Tablas................................................ ................................................. ................................42

2.7 Figuras................................................ ................................................. ................................44

Capítulo 3: ................................................. ................................................. ................................49

3.2 Introducción ................................................. ................................................. ........................51

3.3 Materiales y métodos................................................ ................................................. .........54

3.3.1 Recolección de muestras ................................................ ................................................. ..........54

3.3.2 Adquisición de Fotografías ................................................ ................................................54

3.3.3 Adquisición del Color del Iris ................................................ ................................................. 55

3.3.4 Selección de marcadores y genotipado ........................................ ........................................57

3.3.5 Análisis estadístico ................................................ ................................................. .........57

3.5 Discusión ................................................ ................................................. ........................62

3.5.1 Color del iris en poblaciones europeas ........................................ ................................63

3.5.3 Color del iris en poblaciones de Asia oriental ......................... ................................67

3.7 Figuras................................................ ................................................. ................................86

Capítulo 4: ................................................. ................................................. ................................94

Análisis de las características de la superficie del iris en poblaciones de ascendencia diversa

4.1 Resumen ................................................. ................................................. ................................95

4.2 Introducción ................................................. ................................................. ........................96

4.3 Materiales y métodos................................................ ................................................. .........98

4.3.1 Reclutamiento de participantes................................................. ................................................. ..98

4.3.2 Genotipado ................................................ ................................................. .................98

4.3.3 Adquisición y Procesamiento de Fotografías de Iris ......................................... .................99

4.3.4 Análisis del iris................................................ ................................................. .................99

4.3.6 Análisis estadístico ................................................ ................................................. ......102

4.5 Discusión ................................................ ................................................. ........................106

4.5.1 Criptas de Fuchs................................................ ................................................. .................106

4.5.2 Manchas de pigmento ......................................... ................................................. ................108

Tabla 21 Estadísticas descriptivas generales.................................... ........................................42

Tabla 31 Resultados del análisis de confiabilidad entre e intraevaluadores.................... ..........73

Tabla 42 Resultados de la regresión ordinal genética................................... ........................117

Tabla 43 Frecuencias de las características de la superficie del iris.................... ........................................118

Figura 11 Características de la superficie del iris humano.................................... ........................................5

Figura 12 Sección transversal del iris humano................................. ................................................6

Figura 21 Metodología de extracción de color y coordenadas de color del iris................................44

Figura 22 Distribución de iris en el espacio de color CIELAB .................................. ...................45

Figura 23 Visualización de la heterocromía central ........................................ ................................46

Figura 42 Límites del iris................................................ ................................................. .....121

Figura 43 Cuadrantes del iris................................................ ................................................. .................122

Figura 44 Categorías de manchas pigmentarias................................. ................................................123

Figura 45 Categorías de surcos de contracción.................................... ........................................124

Figura 46 Categorías de nódulos de Wolfflin.................................... ........................................125

Figura 47 Categorías de cripta................................... ................................................. ...........126

Figura 49 Categorías de melanosis conjuntival.................................... ................................128

y manchas de pigmento (Figura 11).

Figura 11 Características superficiales del iris humano

Figura 12 Sección transversal del iris humano

La síntesis de feomelanina y eumelanina comienza con la hidroxilación de L

tirosina a Ldopa y la oxidación de Ldopa a Ldopaquinona (revisado en Sturm y

pasos, la Ldopaquinona se puede convertir en ciclodopa (en el caso de eumelanina