Ácidos grasos

Ácidos grasos
 Ácidos grasos
Destinos celulares
AG

CoA

Acyl CoA
 Ácidos grasos
¿Reguladores de la expresión génica?

Distel et al., 1992

 Ácidos grasos
¿Reguladores de la expresión génica?

Sitios del promotor de

ap2 al que se uniría
un factor transcripcional
en respuesta a la
inducción por AG, al
que llaman ARF6
 Ácidos grasos
¿Reguladores de la expresión génica?

ARF6
ARF6 El heterodímero
RXRa/PPARg es ARF6
y regula la expresión
del gen ap2 inducido
por AG.

Gel de retardo c/ ARE7-P32
Extractos nucleares de
preadipocitos inducidos (-I)
y no inducidos (+I)
Gel de retardo c/ ARE7-P32
Purificación de ARF6: Diferentes
eluidos de matrices empleadas
para purificación por afinidad
(HA, PC HS, SP2 )
Análisis por electroforesis en PAGE
de eluidos cromatográficos.
Tinción AgNO3
Tontonoz et al., 1994
 Conclusiones

 Los ácidos grasos inducen la expresión génica con participación de los receptores nucleares PPAR-RXR
 Ácidos grasos
AG

CoA

Acyl CoA
 Ácidos grasos
¿Cómo entran al núcleo?

Schroeder et al., 2008

 Ácidos grasos
¿Cómo entran al núcleo?

AG

Proteína de unión a ácidos grasos (FABP)

 Ácidos grasos
¿Cómo entran al núcleo?

La señal se activa
presencia del ligando

Gillilan et al., 2007

 Ácidos grasos
¿Cómo entran al núcleo?

Esteves et al., 2016

 Ácidos grasos
¿Cómo entran al núcleo?

Esteves et al., 2016

 Ácidos grasos
¿Cómo entran al núcleo?

Esteves et al., 2016

 Ácidos grasos
Localización nuclear

Señal de localización nuclear. Células transfectadas con pcDNA3-

EGFP-fabp2 mutante. Verde: EGFP-FABP2 mutante ; azul: núcleo

Suárez, 2018
 Ácidos grasos
Localización nuclear

Efecto del del ligando en translocación nuclear.

A y B: pcDNA3-EGFP-fabp2 con ácido palmítico;
C-D: control. Verde: FABP2; azul: núcleo

Suárez, 2018
 Conclusiones

 Los ácidos grasos inducen la expresión génica con participación de los receptores nucleares PPAR-RXR

 Los ácidos grasos entran al núcleo transportados por proteínas de la familia de las FABPs

 En algunas FABPs se ha determinado la presencia de una NLS activada por ligando.

 Ácidos grasos
¿Reguladores de la expresión génica?
 Ácidos grasos
Receptores activados por proliferadores de peroxisomas (PPAR)

Chandra et al., 2008

 Ácidos grasos
Receptores activados por proliferadores de peroxisomas (PPAR)

Berger et al. 2002

 Ácidos grasos
Receptores activados por proliferadores de peroxisomas (PPAR)
 Ácidos grasos

PPARs

PPARa PPARg PPARd

 Ácidos grasos

Reguladores maestros del metabolismo lipídico

 Ácidos grasos
¿Es posible la interacción FABPs-PPARs?

• Coinmuoprecipitación

• Dicroismo circular

• FRET

• Inmunomicroscopía confocal

• Inmunomicroscopía electrónica L-FABP and PPAR (20 g c/u) se mezclaron e

inmunipreciptaron con anti-PPAR o anti-L-FABP),y
examinados por SDS-PAGE teñidos con Coomassie
• NMR

Hostetler et al., 2009

 Ácidos grasos
¿Es posible la interacción FABPs-PPARs?

• Coinmuoprecipitación

• Dicroismo circular

• FRET

• Inmunomicroscopía confocal

• Inmunomicroscopía electrónica

• NMR

Hostetler et al., 2009

 Ácidos grasos
¿Es posible la interacción FABPs-PPARs?

• Coinmuoprecipitación

• Dicroismo circular

• FRET

• Inmunomicroscopía confocal

• Inmunomicroscopía electrónica
Espectro de emisión de Cy3-PPARa y Cy5-L-FABP después de
excitar a 550 nm. Espectro 1:Cy3 marcado con PPARa, sin
aceptor; Espectro 2–7: PPARa marcado con Cy3 con adición de
4, 10, 50, 100, 200, y 300 nM de L-FABP marcado con Cy5
respectivamente

Hostetler et al., 2009

 Ácidos grasos
¿Es posible la interacción FABPs-PPARs?

• Coinmuoprecipitación

• Dicroismo circular

• FRET

• Inmunomicroscopía confocal

• Inmunomicroscopía electrónica

• NMR

Cultivo de hepatocitos de rata. Superposición anti-LFABP y anti PPARa

Huang et al., 2004

 Ácidos grasos
¿Es posible la interacción FABPs-PPARs?

• Coinmuoprecipitación

• Dicroismo circular

• FRET

• Inmunomicroscopía confocal

• Inmunomicroscopía electrónica

• NMR

Hostetler et al., 2009

 Ácidos grasos
¿Es posible la interacción FABPs-PPARs?

• Coinmuoprecipitación

• Dicroismo circular

• FRET

• Inmunomicroscopía confocal

• Inmunomicroscopía electrónica

• NMR
LFABP + LBD-PPARa. En azul se muestran los
residuos de LFABP que modifican su
conformación en presencia del receptor

Velkov, 2013
 Ácidos grasos
¿Reguladores de la expresión génica?

Schroeder et al., 2008

 Conclusiones

 Los ácidos grasos inducen la expresión génica con participación de los receptores nucleares PPAR-RXR

 Los ácidos grasos entran al núcleo transportados por proteínas de la familia de las FABPs

 En algunas FABPs se ha determinado la presencia de una NLS activada por ligando.

 Una vez en el núcleo, las FABPs cederían el ácido graso a los PPARs
 Ácidos grasos- Receptores nucleares
¿Los ácidos grasos activan a los PPARs?

Ácidos grasos

Transactivación de PPARa en células HepG2.

Wolfrum et la., 2001

 Ácidos grasos- Receptores nucleares
¿Los ácidos grasos activan a los PPARs?

Ácidos grasos Ácido linoleico Inductores

Transactivación de PPARa en células HepG2.

Wolfrum et la., 2001

 Ácidos grasos- Receptores nucleares
Activación de la expresión génica: PPAR-FABP

Dominio de activación
de GAL4

Dominio de unión al ADN

de GAL4

Promotor de GAL4

Ensayo de doble híbrido en COS-7

48hs post transfección se adiciona al cultivo ácido
linoleico.

Wolfrum et la., 2001

 Ácidos grasos- Receptores nucleares
¿Los ácidos grasos activan a los PPARs?

ácido esteárico bezafibrato

ácido linoleico Activación de PPARa en función de la concentración de LFABP
ETYA
ácido fitánico Wy 14,643

Wolfrum et la., 2001

 Ácidos grasos- Receptores nucleares
FABP1 y FABP2 en la activación de PPARa

vehículo vehículo

La translocación nuclear mediada

Ácido oleico Ácido oleico por FABP 1 y FABP2 es ligando
dependiente.

Fenofibrato Fenofibrato

GW7647 GW7647

Células transfectadas con FABP2 Células transfectadas con FABP1 Hughes et al., 2015
 Ácidos grasos- Receptores nucleares
FABP1 y FABP2 modulan diferencialmente la activación de PPARa

Ac. oleico Fenobritato GW7647

Hughes et al., 2015

 Ácidos grasos

Activación de PPARa por PUFAs

Unión de PPARa al ADN

Células HepG2 tratadas con y
sin PUFA –w3.
+ - + - - - - CDCA: ácido biliar
Competidor
- + + - - - - Control positivo: PPARa
Control positivo
EPA - - - - - 5mmol/l 5mmol/l
DHA - - - - - 5mmol/l 5mmol/l
CDCA - - - - 200mmol/l - 200mmol/l
Tillman et al., 2016
 Ácidos grasos

PPARs-AG y activación de la expresión génica

Caco-2 qRT-PCR
genes: CPT1-1; ACOX1, ACSL5
Gw7647 Y GF505: agonistas de
PPARa

Colin et al., 2013

 Conclusiones

 Los ácidos grasos inducen la expresión génica con participación de los receptores nucleares PPAR-RXR

 Los ácidos grasos entran al núcleo transportados por proteínas de la familia de las FABPs

 En algunas FABPs se ha determinado la presencia de una NLS activada por ligando.

 Una vez en el núcleo, las FABPs cederían el ácido graso a los PPARs

 La L-FABP, interactuando con PPARa, activa la expresión génica

 La activación de PPARa mediada por FABP1 y FABP2 es ligando dependiente

 Varios ácidos grasos activan al PPARa , activando la expresión de genes vinculados a la oxidación de los ácidos
grasos
 Receptores nucleares

Vías de activación de la expresión génica

 Receptores nucleares

Vías de activación de la expresión génica

 Receptores nucleares

Vías de activación de la expresión génica

Ausencia de ligando de PPAR

HDAC: histona desacetilasa

GCN5: Acetiltransferasa
PGC1a: coactivador de PPAR

Transcripción inhibida
 Receptores nucleares

Vías de activación de la expresión génica

Transcripción activa
Sugden et al., 2010
 Receptores nucleares

Vías de activación de la expresión génica

TAG

CPT1
DAG

SREBP1

citoplasma núcleo

Sugden et al., 2010

 Receptores nucleares
Oxidación de ácidos grasos en el hígado

SREBP1

cpt1
Sugden et al., 2010
 Ácidos grasos- PPARs
Activación de la expresión génica

Western blot de células musculares en cultivo Western blot de células musculares en cultivo infectas
infectadas con adenovirus-PGC1-a tratados con con adenovirus-PGC1-a tratados con inhibidor de
ácidos grasos. Ac PGC1a anti-PGC1 a acetilada SIRT-1

La desacetilación de PGC1a depende de SIRT1

Lim et al., 2013
 Ácidos grasos poliinsaturados
Ácidos grasos esenciales

ÁCIDO LINOLEICO (18:2) ÁCIDO - LINOLÉNICO (18:3)

ARA (20:4) EPA (20:) DHA (22:6)

OMEGA 6 OMEGA 3

PPARs SREBP NF-kB ChREBP

 Ácidos grasos poliinsaturados
Ingesta

Insulina
CITOPLASMA
nSREBP
PPAR

NÚCLEO

PPARa AG oxidación
PPARg lipogénesis lipogénesis
PPARb AG oxidación
NF-kB interleukinas
quimiocinas
P

ChREBP glucólisis
lipogénesis

Citoquinas proinflamatorias

Rodríguez-Cruz et al., 2017

 Conclusiones

 En la vía de activación de la expresión génica por PPARa participan correpresores , desacetilasas de

histonas y activadores (PGC1a) y desacetilasas del tipo de la familia de las sirtuinas (SIRT-1)

 Los ácidos poliinsaturados omega-3 actúan como activadores o represores de varios receptores
nucleares vinculados al metabolismo energético.
Ácidos grasos poliinsaturados
Epigenética- Metilación

DNA DNMT: DNA metiltrasnferasas

mC: Metyl CPGs
HDACS: Histona desacetilasa
HATs. Histona acetilasa
 Ácidos grasos poliinsaturados
Epigenética- Metilación

Dieta occidental
Dieta rica en n-3

Transcripción de Bdnf

DNMT: DNA metiltransferasa;

CTCF: regulador transcripcional
Tyagi et al., 2015
 Ácidos grasos poliinsaturados
Epigenética- Metilación

Efecto de AG en la metilación del ADN en monocitos

Silva-Martínez et al., 2016

Ácidos grasos poliinsaturados
Epigenética- Metilación

Entomix: inhibidor de cpt-1

GW6471: antagonista de PPARa
GW9662: antagonista de PPARg
Sirtinol : inhibidor de SIIRT 1
Spitomycin: inhibidor de SIRT1
TSA: histona desacetilasa

Silva-Martínez et al., 2016

 Conclusiones

 En la vía de activación de la expresión génica por PPARa participan correpresores , desacetilasas de

histonas y activadores (PGC1a) y desacetilasas del tipo de la familia de las sirtuinas (SIRT-1)

 Los ácidos poliinsaturados omega-3 actuán como activadores o represeores de varios receptores
nucleares vinculados al metabolismo energético.

 Los ácidos poliinsaturados actúan sobre la metilación global del ADN modificando la expresión
génica
 Conclusiones

 Los ácidos grasos inducen la expresión génica con participación de los receptores nucleares PPAR-RXR

 Los ácidos grasos entran al núcleo transportados por proteínas de la familia de las FABPs

 En algunas FABPs se ha determinado la presencia de una NLS activada por ligando.

 Una vez en el núcleo, las FABPs cederían el ácido graso a los PPARs

 La L-FABP, interactuando con PPARa, activa la expresión génica

 La activación de PPARa mediada por FABP1 y FABP2 es ligando dependiente

 Varios ácidos grasos activan al PPARa , activando la expresión de genes vinculados a la oxidación de los ácidos grasos

 En la vía de activación de la expresión génica por PPARa participan correpresores , desacetilasas de histonas y activadores
(PGC1a) y desacetilasas del tipo de la familia de las sirtuinas (SIRT-1)

 Los ácidos poliinsaturados omega-3 actúan como activadores o represores de varios receptores nucleares vinculados al
metabolismo energético.

 Los ácidos poliinsaturados actúan sobre la metilación global del ADN modificando la expresión génica