HISTOLOGIA-ANATOMIA-FISIOLOGIA-BIOQUIMICA 15-4177-8535

1-HISTOLOGÍA 2021
Microscopía
Microscopio
Es un instrumento que sirve para visualizar diversas estructuras que escapan al límite de resolución del ojo humano, a través
del aumento de los objetos observados. Pueden ser:

Simples
Una sola lente. Por ejemplo, la lupa.

Compuestos
Sistemas ópticos centrados. Se clasifican en:
o Fotónicos
 Microscópio óptico
 Microscópio de campo oscuro
 Microscópio de fluorescencia
 Microscópio de polarización
 Microscópio de contraste de fase
 Microscópio de interferencia
 Microscópio de luz ultravioleta

o Electrónicos
 Microscopio de transmisión
 Microscopio de barrido
El microscópio óptico está compuesto por dos partes:

Mecánica o estativo
1 Pie
2 Columna o asa
3 Tubo
4 Tornillo micrométrico
5 Tornillo macrométrico
6 Articulación
7 Revolver
8 Platina

Óptica
Sistema de Lentes
9 Ocular (10X)
10 Objetivos (10X – 45X)

Sistema óptico de iluminación

11 Condensador
12 Diafragma
13 Porta filtro
14 Tornillo del condensador
15 Espejo/fuente de luz

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Nociones de óptica
Apertura numérica
Es la cantidad o porcentaje de rayos luminosos emergentes del preparado que son captados por el objetivo.
Ejemplo:
 A.N.= 0,65 (Indica que penetran el 65% de los rayos que emergen del preparado)
 A.N.= 1 (Penetran el 100%, con objetivo de Inmersión)

Índice de Refracción del Seno del semiángulo de

medio que separa el apertura del cono de luz
cubreobjetos de la lente que penetra en el
frontal del objetivo objetivo

Ejemplos:
Aire = 1
Vidrio = 1,52
H2O = 1,33
Aceite = 1,51
Semiángulo de apertura α: Es el semiángulo formado por los rayos más periféricos, que partiendo de la fuente
luminosa penetran en la lente frontal del objetivo.

Poder resolutivo
Es la CAPACIDAD que posee el objetivo de dar los detalles más finos del objeto en estudio.
Es la inversa al límite de resolución.
Ejemplos:
Luz Blanca = 5550 Å
Longitud de onda de Luz Azul = 4860 Å
la luz empleada Luz Violeta = 4000 Å
Luz Ultravioleta = 2500 Å
Electrón = 0,056 Å

Límite de resolución
Es la mínima DISTANCIA que separa dos puntos para que se puedan ver separados en el microscopio.
Cuanto menor sea el límite de resolución de un microscopio, este nos dará mejores datos sobre la estructura del
objeto que queremos observar.

Límite de resolución del:

 Ojo humano: 0,2 mm ó 200 µm Unidades de medida
 M. óptico: 0,25 µm 1 mm = 10-3 m
 M. de luz UV: 0,10 µm 1m = 10-6 m
 M. electrónico 1 nm = 10-9 m
o Teórico: 3 – 5 Å 1 Å = 10-10 m
o Práctico: 10 Å

El L.R. se puede disminuir:

Disminuyendo : Utilizando luz ultravioleta.
Aumentando la A.N.: Cambiando el medio interpuesto entre la lente frontal del objetivo y el
preparado. Por ejemplo, transformando el objetivo seco en objetivo de inmersión, colocando una
gota de aceite de cedro.
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Microscopios
La imagen definitiva del microscopio es virtual, mayor e invertida. Tipos:
Microscopio de campo oscuro
- Basado en la propiedad que tiene la luz de dispersarse entre los diversos materiales del objeto, que tienen distintos
índices de refracción.
- La luz se hace incidir en forma oblicua sobre el preparado, esta se refracta en las estructuras microscópicas haciéndolas
visibles sobre un fondo oscuro, esto da el efecto Tyndall (semejante al polvillo que se observa en una habitación oscura
cuando penetra un rayo de sol).
- Se utiliza un condensador especial (paraboloide) que bloquea los rayos que ingresan por el centro del condensador
dando un campo oscuro y se reflejan oblicuamente sobre el objeto los rayos que ingresan por la periferia, o sea, que
hace brillar objetos suspendidos en campo oscuro.
- Este microscopio es útil para estudiar células vivas, movimientos de bacterias y espermatozoides, etc.

Micrografías de la superficie de una

hoja que muestran diferencias de
contraste entre los diversos tipos de
iluminación. En la parte inferior se
aprecia el tipo de filtro empleado, en
campo claro (derecha) el haz de luz
pasa sin interrupción. En campo
oscuro, aún muchos detalles más
pequeños son visibles.

Microscopio de fluorescencia
- Utiliza luz ultravioleta que no es captada por el ojo humano (invisible).Se tiñe el espécimen a observar con una sustancia
fluorescente, dicha sustancia absorbe la radiación ultravioleta y emite una radiación de menor frecuencia, visible por el
ojo humano. Entonces se verá el fondo oscuro y el objeto de color. La vitamina A posee fluorescencia natural o
autofluorescencia.
- Los colorantes fluorescentes más utilizados son el naranja de acridina, isotianato de fluoresceína y amarillo de acridina.
- Se debe cambiar el condensador de vidrio por uno de cuarzo, ya que el vidrio no deja pasar los rayos ultravioletas.
- Este microscopio se utiliza para la localización de ácidos nucleicos y en inmunología.
Microscopio confocal: Iluminación con un láser. Mayor definición lograda por enfoque por orificio confocal. Detector
electrónico o cámara (reconstrucción tridimensional)
Microscopio de dos fotones: Similar al confocal (imágenes tridimensionales). Colorantes fluorescentes. Permite la
observación de células vivas

Micrografías de células en división, tomadas con un microscopio de

fluorescencia. Se emplearon tres fluorocromos: DAPI (emite luz azul)
para marcar cromosomas, GFP (proteína verde fluorescente intracelular
que emite luz verde) y rodamina (luz roja) para marcar microtúbulos.
Cada fluorocromo amerita el uso de filtros específicos, dependiendo de
la longitud de onda necesaria para su excitación, señalada arriba y a la
izquierda en cada imagen y expresada en nm.

Microscopio de polarización
- La luz proveniente de la fuente de un microscopio se disemina por planos de vibración.
- El fundamento del funcionamiento de este microscopio es saber si las sustancias que estamos observando producen o
no una rotación del plano de vibración de la luz polarizada.
- Si no producen rotación, las sustancias, son birrefringentes (colágeno, microtúbulos) o anisotrópicas y si producen son
isotrópicas o monorrefringentes.

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- Este microscopio posee dos prismas especiales de nicol (cuarzo), uno ubicado debajo de la platina y el otro (prisma
polarizador) y el otro ubicado debajo del ocular (prisma analizador).
- El polarizador recibe la luz de la fuente luminosa del microscopio (que se disemina en varios planos) transformándola en
una luz polarizada plana (filtra luz que gira en otros planos).
- El analizador registra las variaciones de la polarización de la luz que ha atravesado el preparado.

Micrografía de luz polarizada de fibras musculares estriadas en la cual se aprecia

el patrón de bandas y estriaciones transversales.

Microscopio de contraste de fase

- Los rayos que provienen de la fuente luminosa están en fase presentando la misma longitud de onda antes de incidir
sobre el preparado.
- Cuando los rayos atraviesan el preparado, debido a las distintas densidades ópticas que presentan, algunos de los rayos
emergentes quedarán más retrasados y tendrán una diferencia de fase de ¼ de su longitud de onda.
Este microscopio convierte y exagera estas diferencias imperceptibles por el ojo humano y las transforma en
diferencias de amplitud, evidenciables por grados de intensidad o brillo que si son perceptibles.
Es de índole cualitativa y es útil para observar células vivas, procesos celulares, identificación y cuantificación de
microorganismos y parásitos en fluidos y tejidos, efecto de medicamentos y otras sustancias en las células y sus procesos de
motilidad, ciclosis o digestión celular.

Micrografías de una neurona en campo claro

(izquierda) con detalles casi invisibles y con iluminación
de contraste de fases oscuro o positivo (derecha) en el
que los detalles son más evidentes en un fondo claro.

Microscopio de interferencia
- Es similar al contraste de fase.
- Se basa en diferencias de fase que se observan a la luz que pasa a través del objeto y es de índole cuantitativa.
- Esto se obtiene dividiendo la luz de la única fuente luminosa en dos haces separados, uno es enviado a través del objeto
y el otro pasa alrededor actuando como haz de referencia, luego vuelven a unirse los dos haces, por lo cual interfieren
entre sí. El haz que pasa por el objeto se ha visto retrasado y sufre una modificación de fase.
- Permite la observación de células vivas y la masa de los elementos celulares individuales.

Microscopio de luz ultravioleta

- Utiliza luz ultravioleta y todas las lentes incluyendo el condensador son de vidrio transparente a estos rayos (el vidrio
común es opaco a estos).La imagen del objeto se obtiene por representación de este en película fotográfica sensible.
Posee menor límite de resolución que los demás microscopios ópticos. Se emplea en ciencia forense para el análisis de
ADN, drogas y estudios de evidencias.

Microscopio electrónico de transmisión

- Utiliza un haz de electrones que provienen de un cátodo emisor que contiene un filamento de tungsteno o wolframio,
el cual al ser calentado por el pasaje de corriente eléctrica emite electrones que circulan por dentro del tubo
(denominado canon).
- Los electrones son acelerados hacia el ánodo que tiene forma de una placa metálica con un orificio en el centro por donde
pasa el haz de electrones.
- Por medio de una bobina electromagnética condensadora, similar al condensador, los electrones son concentrados y
dirigidos hacia el plano donde se encuentra el objeto.
- Una vez que los electrones han pasado el nivel del preparado, algunos se dispersan y otros no. La masa emergente de
electrones es agrandada por otra bobina similar al objetivo.
- Los electrones son enfocados hacia una pantalla fluorescente donde podrá visualizarse la imagen final del objeto en
estudio (imagen fluoroscópica).

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- Cuenta, además, con un sistema de chasis porta películas, adaptado por debajo
de la pantalla fluoroscópica que permite fotografiar las partes del objeto que
estén analizando, una vez fotografiadas las estructuras se retiran del porta-
chasis los negativos y serán revelados. En la actualidad se utilizan cámaras
digitales conectadas a una PC. Se los ubica en ampliadoras fotográficas y se los
pasa al positivo sobre el papel fotográfico, entonces se obtiene la
microfotografía electrónica. El Canon, que es sector por donde transcurren los
electrones, debe estar vacío porque el choque de los electrones con partículas
de aire, pueden absorberlos o distorsionar la trayectoria del haz.
- No se utilizan colorantes sino métodos que aumenten la dispersión de
electrones como por ejemplo metales pesados como osmio, plomo, uranilo, etc.
- Los cortes deben ser muy finos y se realizan con ultramicrótomo. El límite de
resolución es de 3 a 5 Å y el poder resolutivo es de 0,2 Nm. El M. E. T. de Alto
Voltaje procesa muestras más gruesas con mejor resolución.

Micrografía de una mitocondria

con el MET.

Microscopio electrónico de barrido superficial o arrastre (scanning)

- Los electrones no atraviesan el objeto, sino que la imagen se va formando
indirectamente por acumulación puntiforme de detalles en la superficie del preparado.
- El preparado es bombardeado por un haz de electrones muy angosto que actúa sobre el
objeto en un patrón lineal y lo copia generando una imagen tridimensional.
- De cada copia se envían electrones secundarios, la irrigación secundaria es medida por un
detector ubicado cerca del preparado y adaptado a un tubo catódico con una pantalla de
televisión.
- La imagen se registra fotográficamente y no se necesitan cortes ultrafinos porque el haz de
electrones no atraviesa el preparado.
- El poder resolutivo es de 10 Nm.

Micrografía: imagen tridimensional de glóbulos rojos

con el MEB.

Diferencias entre M.O. y M.E.

Microscopio óptico Microscopio electrónico
Fuente de energía Luz solar o artificial Filamentos de tungsteno o wolframio
Funcionamiento Por absorción de luz Por dispersión de electrones
Tubo Al aire Al vacío
Lentes Ocular – objetivo – condensador Bobinas electromagnéticas
Captación de Imagen Ojo – cámara fotográfica Pantalla fluoroscópica o placa fotográfica
Montaje Vidrio (portaobjetos) Grilla (enrejado de cobre)
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Células Vivas o muertas Muertas
Imagen Coloreada o no Blanco – negro
Aumento total 100 X – 450 X – 2000 X 1.000.000 X
Fijación Formol – Bowin – Zenker Tetróxido de osmio - glutaraldehído
Inclusión Parafina o celoidina Resinas acrílicas (Epom 812)
Coloración Múltiple (H&E y tricrómicos) Metales pesados
Cortes Distintos micrótomos (navajas de Acero) Ultramicrótomo (navaja de cristal o diamante)
Espesor 5 – 10 µm 50 – 100 Nm
Límite de resolución 0,2 µm 2–4Å

Técnica histológica
Métodos de examen
Es el conjunto de procedimientos especiales a los que se somete el material en estudio para posibilitar la visualización
microscópica.
Se clasifican en:

1. Métodos inmediatos
Transcurre poco tiempo entre la obtención y la visualización.
Pueden ser:
- Sin coloración: Basado en los distintos índices de refracción del espécimen (m. de campo oscuro, m. de luz polarizada,
m. de contraste de fase).
- Con coloración: Utiliza colorantes vitales que no poseen efecto mortal sobre las células vivas. Por ejemplo:
Verde Jano (mitocondrias) - Azul de metileno - Rojo neutro (macrófagos) - Tinta china (macrófagos)

Puede ser:
Intravital: se introduce el colorante al organismo. Es in vivo. (Ejemplo: TINTA CHINA)
Supravital: se separa la célula del organismo y luego entra en contacto con el colorante. Es in vitro. (Ejemplo: VERDE
JANO)

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2. Métodos mediatos (técnica histológica propiamente dicha)

Comienza una vez obtenida la pieza y consta de distintos pasos:
a. Obtención de la pieza
b. Fijación
c. Inclusión
d. Montaje
e. Coloración
f. Montaje final

a. Obtención de la pieza
La pieza puede obtenerse por medio de distintos instrumentos como el bisturí. Si se obtiene de un organismo vivo se
denomina biopsia y si se obtiene de uno muerto necropsia.

b. Fijación
El objetivo es producir la muerte celular conservando su morfología. Para evitar la autolisis debe ser inmediata.
Un buen fijador debe:
1. Actuar rápidamente.
2. Conservar la morfología que presentaba in vivo.
3. Evitar aparición de estructuras.
4. Tener alto poder de penetración.
5. Facilitar la coloración.
6. Ser económico.
Tipos de fijación:
Física: Frío - Calor - Desecación
Química
1. Simples
 Formol al 4% P/V (1 parte de formol y 9 partes de agua). Es la técnica de rutina. Conserva grasas e hidrátos de
carbono (alto PM).
 Tetróxido de osmio ( además de fijador, tiñe grasa y mielina).
 Alcohol metílico (gelifica proteínas).
 Bicromato de potasio (tejido nervioso).

2. Compuestos (mezcla de fijadores)

Líquido de Zenker (utilidado para núcleos) - Líquido de Bouin (utilizado para proteínas) - Líquido de Helly (formol + Zenker)
- Carnoy.

c. Inclusión
Es la penetración del material por agentes inclusores que le confieren firmeza y elasticidad para su corte.
El agente inclusor más importante es la parafina.
1. Deshidratación: para extraer el agua se pasa el tejido por cantidades crecientes de alcohol.
2. Aclaración: se reemplaza el alcohol por xilol o toluol (solubles en alcohol y en parafina).
3. Penetración: se coloca la pieza en un recipiente con parafina derretida a 56º C.
4. Inclusión definitiva: formación del taco

d. Montaje
Se realiza el corte de la pieza y luego se monta el material cortado en un portaobjetos.
1. Corte con micrótomo: se obtienen cortes delgados (5 µm aproximadamente) que pueden ser atravesados por la luz.
Tipos de micrótomo:
a. Rotatorio: cuchilla fija y platina móvil.
b. Deslizamiento: pieza fija y cuchilla móvil.
c. Congelación (criostato): permite cortar piezas sin fijación, ni inclusión previa. La cuchilla es móvil. Posee
aparato incorporado a la platina que libera un gas refrigerante que congela la pieza en forma rápida. Es
utilizado en anatomo-patología, en intervenciones quirúrgicas (biopsia por congelación).

2. Montaje: los cortes quedan flotando en agua. Se los pesca con aguja de disección y se los pone en portaobjetos.
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e. Coloración
 Se utilizan colorantes hidrosolubles.
Colorante:
o Son sustancias capaces de dar color a otras. Posee:
 Grupo cromóforo: es el que da color.
 Grupo auxócrono: se combina con el tejido transmitiendo
el color.
o Los colorantes se clasifican de acuerdo al PH en el que actúan en:
 Básicos: actúan a alto PH, son colorantes catiónicos
(carga +). Colorean núcleos, REG, ribosomas. Ejemplos:
“hematoxilina”, azul de metileno, alcian blue, crecyl
violeta.
 Ácidos: actúan a bajo PH, son colorantes aniónicos
(carga -). Colorean citoplasma y proteínas. Ejemplos:
eosina, fucsina ácida, naranja G.
o Coloraciones:
 Simples: un solo colorante.
 Combinadas: H&E o tricrómicos (Masson, Mallory, Van
Gieson).

Las proteínas pueden comportarse como ácidas ó básicas dependiendo del punto isoeléctrico (P.I = PH en el
que el número de cargas (+) es igual al número de cargas de cargas -), el PH normal del medio = 7,38 – 7,42. Si la
proteína está a un PH del medio por debajo de su P.I (ej: P.I = 8) dicho medio será ácido para esta proteína.
Entonces la proteína se comportará como básica (mayor cantidad de cargas +) uniéndose por diferencia de
cargas a colorantes ácidos (carga -) y por lo tanto se verá acidófila.

Los ácidos nucleicos presentan un P.I muy bajo, por lo que el PH del medio a pesar de ser ácido será alcalino
para ellos. Se comportarán como ácido y se unirán a colorantes básicos.

Proceso de coloración:
1. Directa: se sumerge el tejido directamente en el colorante.
2. Indirecta: se utilizan sustancias denominadas mordientes (sustancia que fija el colorante al tejido acelerando el
proceso de coloración, ejemplo: alumbre de potasio). Laca: mezcla de colorante + mordiente.

Basofilia: capacidad de coloración con colorantes básicos.

Acidofilia: capacidad de coloración con colorantes ácidos.

Una vez secos los cortes adheridos al portaobjetos se los colorea: técnica con H&E (de rutina)
1. Desparafinización: se coloca portaobjetos en recipiente con xilol.
2. Hidratación: se reemplaza xilol por cantidades decrecientes de alcohol y luego se lava con agua (para favorecer la
acción del colorante hidrosoluble).
3. Coloración propiamente dicha: se agrega el colorante.
4. Viraje: se lava con agua (vira de color rojo al azul).
5. Deshidratación: se sumerge en alcohol para extraer exceso de colorante.
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f. Montaje final
1. Deshidratación.
2. Aclaración (con xilol).
3. Se agrega bálsamo de Canadá o resinas sintéticas y se cubre con portaobjeto que se sella con betún de Judea.

Propiedades especiales
Ortocromasia: propiedad por la que el elemento teñido presenta una coloración semejante a la del colorante.
Metacromasia: propiedad resultante de la interacción entre ciertos colorantes y ciertas sustancias presentes en los
tejidos a colorear dando como resultado final el viraje del color azul al rojo.
El colorante debe:
 Ser catiónico.
 En solución acuosa diluida debe presentarse en estado monomérico y de color azul (absorbe luz de mayor
longitud de onda)
 Su forma polimérica debe ser de color rojo (absorbe luz de menor longitud de onda).

Un objeto que recibe luz blanca toma cierto color porque absorbe todos los colores del espectro menos el azul al que
rechaza, dando su propio color.

Colorantes metacromáticos o tiacínicos: Metil violeta - Azul de metileno - Azul de toloudina - Alcian blue - Mucicarmín de
Meyer

La sustancia a colorear (cromotropa) debe:

 Ser un polímero polianiónico como los mucopolisacáridos.
 Entonces, al poner en contacto las sustancias y el colorante se forman uniones electrostáticas entre las moléculas
del colorante cargadas positivamente y los grupos aniónicos de las sustancias cromotropas.
 El colorante se polimeriza y el espectro de absorción de la luz vira de modo que la preparación aparece roja.

Tejidos metacromáticos:
 Cartílago(por poseer condroitin sulfato en su matriz)
 Célula caliciforme
 Mastocito(por poseer gránulos de heparina)
 Basófilo de la sangre(por poseer gránulos de heparina)

Procesamiento para M.E.T (microscópio electrónico)

1. Obtención de la pieza.
2. Fijación con glutaraldehído y tetróxido de osmio.
3. Inclusión:
 Deshidratación (con solución creciente de alcohol).
 Aclaración (con óxido de propileno).
 Inclusión propiamente dicha (se utilizan acrílicos o resinas sintéticas de tipo epoxi).
4. Corte: ultramicrótomo (con cuchilla de diamante).
5. Montaje: sobre grillas metálicas, no se colorea, pero puede contrastarse con metales pesados
como plomo, uranilo, hierro, INMUNOFERRITINA, etc.

Métodos histoquímicos
Son métodos de tinción que tratan de localizar sustancias químicas en los tejidos.
Reactivo de Schiff: es una leucofucsina o bisulfito de fucsina. Es incolora, pero puede formar un color rojo (magenta
intenso) estable debido a la adición con grupos aldehídos.

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Método del ácido periódico de Schiff (PAS).
Se emplea para determinar la presencia de macromoléculas ricas en glúcidos (glucógeno,
glucoproteínas, etc.). El método de PAS se basa en que el ácido peryódico (HIO4) primero
oxida grupos hidroxilos (OH) libres de dos átomos de carbono vecinos transformándose en
grupos aldehídos. Los grupos aldehídos recién formados reaccionan con el reactivo de Schiff
dando el color magenta característico.
Estructuras PAS+:
- Polisacáridos simples: como el glucógeno.
- Mucopolisacáridos neutros: se encuentran en el epitelio gástrico, en glándulas del
intestino y estómago.
- Mucoproteínas como son algunas mucinas del tubo digestivo y del árbol respiratorio o
bronquial, también la tiroglobulina que está en el tiroides.

Método de Feulgen.
Método específico para la determinación del ADN basado en el contenido de desoxirribosa del
ADN. Por medio de hidrólisis ácida débil se eliminan los grupos púricos. Entonces se abre el
anillo de desoxirribosa y se forma un grupo aldehído.
Este reacciona con el reactivo de Schiff con lo que se observa el típico color magenta. Como
control se emplean cortes tratados con la enzima desoxirribonucleasa antes de la coloración,
por lo general el material Feulgen (+) está limitado a la cromatina nuclear.

Inmunohistoquímica
Se trata de identificar sustancias celulares o tisulares mediante anticuerpos contra ellos, marcados con sustancias
fluorescentes (se observa con microscopio de fluorescencia con peroxidasa o ferritina).
En las técnicas de inmunofluorescencia se utilizan como marcadores compuestos de fluoresceína que bajo luz ultravioleta
emiten luz de longitud de onda visible. El isotiocianato de fluoresceína emite luz verde amarillenta intensa. Estas técnicas
necesitan muestras en fresco y congeladas, sin fijación convencional, pues los antígenos están presentes en superficies
celulares o son muy lábiles a la fijación en formol. Para documentar cada caso, es necesario fotografiar la reacción.

Existen dos métodos principales:

INMUNOFLUERESCENCIA DIRECTA (IFD): el marcaje es directo ya que se utiliza el anticuerpo primario marcado
con un colorante fluorescente.
INMUNOFLUORESCENCIA INDIRECTA (IFI): el marcaje es indirecto ya que el anticuerpo secundario es marcado
con un fluorocromo y se utiliza para reconocer un anticuerpo primario. Es la más utilizada en la actualidad ya
que es más sensible.

Determinación histoquímica de lípidos (Sudán)

Como la deshidratación con alcohol previo a la inclusión en parafina y luego los solventes de
la parafina arrastran lípidos, para teñirlos es necesario una fijación y procesamiento previo
que los conserva en los tejidos.
Se fija con formalina o por congelación y los cortes se realizan por congelación.
Se utilizan colorantes Sudán, son casi insolubles en agua. Se emplean disueltos en un
solvente orgánico en el que los lípidos sean relativamente insolubles y en el que el colorante
sea parcialmente soluble. Sudán rojo (tiñe células adiposas), Sudán black (tiñe vainas
mielínicas), Sudán en general (tiñe triglicéridos).El tetróxido de osmio también tiñe lípidos
de color negro.

Radioautografía
Revela el destino metabólico celular o tisular de sustancias que forman parte de las células o tejidos.
Consiste en administrar esas sustancias marcadas con isótopos radioactivos (que poseen igual característica y destino final
que la no marcada). Se obtienen los cortes, se los monta y se los coloca en un cuarto oscuro cubriéndolos con una fina capa
de emulsión fotográfica (cristales de bromuro de plata emulsionada con gelatina).
Durante el posterior periodo de explosión (al abrigo de la luz por días o semanas) los sitios radioactivos del tejido emiten
partículas o radiación gamma. Algunas pasan a través de la emulsión fotográfica e inciden parte de los cristales de bromuro
de plata. Entonces en cada cristal afectado se produce una transformación parcial de iones plata en plata metálica.
Transcurrido este período, se utiliza un resultado químico con lo cual todos los cristales incididos son transformados
totalmente en plata metálica.

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Se eliminan todos los cristales no afectados con solución de tiosulfato y se trata el corte de tejido como cualquier otro, se
colorea, etc. Los gránulos de plata se observan como puntos negros correspondientes a la localización de la sustancia
radioactiva en el corte de tejido subyacente.
Las sustancias marcadas más utilizadas son hidrógeno tritiado, timidita tritiada (específica para el ADN).

Otras técnicas
Técnica de Papanicolaou: Se la utiliza para citología exfoliativa. El método
permite estudiar cantidad, forma y color de las células de la mucosa vaginal,
obtenidas con fines diagnósticos. Los colorantes utilizados son: Hematoxilina –
orange G, verde brillante, eosina pardo de Bismarck. Las células que se
observan desde la superficie hasta la profundidad son: Acidófilas y basófilas
superficiales (cariopicnóticas), Intermedias, y Profundas (basófilas).

Técnica Tricrómica de Masson: Se la utiliza para diferenciar tejido conetivo del tejido muscular. El primero se tiñe de azul
o verde y el muscular de distintos tonos de rojo. Los colorantes utilizados son: Punzó de xilidina y azul de anilina.

Técnica de May Grümwald Giemsa: Se la utiliza para extendidos de sangre. La técnica consiste en:
1. Obtener una gota de sangre periférica.
2. Hacer el extendido.
3. Secar a temperatura ambiente.
4. Cubrir con 15 gotas de May Grümwald, 15 minutos.
5. Agregar igual cantidad de agua destilada en gotas, dejar 1
minuto y volcar sin lavar.
6. Cubrir con solución de Giemsa (30 cc de agua destilada y 35
gotas del colorante), dejar 10 – 15 minutos.
7. Enjuagar con agua destilada, secar y montar.

Técnica de Impregnación Argéntica: Coloración especial que utiliza sales metálicas como
cloruro de oro, nitrato de plata, sales de cromo, originando precipitados metálicos. La técnica
consiste en tratar el material (ejemplo fibras reticulares) con una solución de una sal
reducible de plata y a continuación con un agente reductor, que actúa como lo hacen los
reveladores de fotografías, convirtiendo la sal de plata en plata metálica, que torna de negro
a los componentes que la toman. Una sustancia es “Argentafín” cuando reduce la plata, y es
“Argirófila” cuando la impregnación es posible luego de una reducción con mordientes o
formalina.

Artefactos
Son estructuras que pueden encontrarse en el preparado, no existentes en el tejido vivo, que han sido creadas artificialmente
en el transcurso del procedimiento de preparación. Son productos de accidentes o de técnicas inadecuadas.
 Degeneración post-morten: es la causa más común. Se produce en general por una fijación tardía, lilberándose enzimas
hidrolíticas que digieren las células.
 Contracción o retracción: los reactivos utilizados para preparar los cortes que incluyen la parafina caliente, suelen causar
contracción tisular.
 Pliegues o arrugas: los cortes son tan finos que ocurre cuando se monta.
 Muescas en la cuchilla: ocasionan líneas rectas en sentido perpendicular a la rebanada.
 Manejo burdo de los tejidos: cuando se obtienen, el tomarlo con pinzas inadecuadas o cortarlo con tijeras sin filo,
produce la rotura del tejido.

Guía Práctica
1) Indique la opción correcta respecto a la microscopia: c) El microscopio electrónico de transmisión utiliza
a) El límite de resolución del microscopio óptico es formalina como fijador.
menor que el del microscopio electrónico. d) La microscopia electrónica de barrido permite
b) El microscopio Óptico de luz permite observar ver superficies celulares.
ultra estructura celular.
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 HISTOLOGIA-ANATOMIA-FISIOLOGIA-BIOQUIMICA
2) La coloración de Feulgen:
a) tiñe lípidos
b) tiñe al mucígeno de las células caliciformes
c) al igual que la de PAS, utiliza el reactivo de Schiff
d) se utiliza para colorear al ARN
3) De qué manera se puede bajar el límite de
resolución:
a) aumentando la apertura numérica
b) aumentando la longitud de onda
c) utilizando luz violeta
d) utilizando luz infrarroja
4) El microscopio de contraste de fase se emplea para:
a) convertir diferencias invisibles del índice de
refracción en diferencias visibles de intensidad
lumínica
b) poner de manifiesto la birrefringencia de
componentes cristalinos o fibrilares de los tejidos
c) permitir la observación de la ultraestructura
celular
d) demostrar la fluorescencia natural de los tejidos
5) En la técnica histológica común el formol:
a) disuelve los lípidos de los tejidos
b) se utiliza para deshidratar a los tejidos
c) se emplea luego de la impregnación en parafina
d) mata rápidamente a las células
6) ¿Cuáles de los siguientes métodos de coloración
utilizan el reactivo de Schiff?
a) Feulgen.
b) Metacromasia.
c) Impregnación argéntica.
d) Sudan.
15-4177-8535
7) Para poder aumentar el poder de resolución de un
microscopio óptico se debe.
a) Aumentar el índice de refracción del medio.
b) Disminuir la apertura numérica.
c) Aumentar la longitud de onda de la fuente de luz.
d) Disminuir el aumento de la lente objetivo.
8) ¿Cuál de los siguientes enunciados es compartido por
las técnicas de PAS y Feulgen?
a) Ambas utilizan Acido Periódico.
b) Ambas utilizan Acido Clorhídrico
c) Ambas se utilizan para teñir Hidratos de Carbono.
d) Ambas utilizan un reactivo que interacciona con
grupos Aldehídos.
9) Durante el proceso de la técnica de rutina o
Hematoxilina y Eosina (HyE):
a) Los hidratos de carbono no se tiñen porque se
pierden con la técnica.
b) El Xilol se utiliza para detener procesos de
autolisis y putrefacción.
c) La congelación es un tipo de fijador químico.
d) La hematoxilina adquiere un color azul violáceo
luego del viraje.
10) Cuál de las siguientes es una técnica de tinción
intravital:
a) Verde Jano.
b) Alcian Blue.
c) Hematoxilina y Eosina.
d) Tinta China.

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