PRÁCTICA N°2: EVALUACIÓN DE TÉCNICA DE

OZONIFICACIÓN PARA ELIMINACIÓN DE

BACTERIAS GRAM NEGATIVAS.
1.1. MATERIAL INDIVIDUAL
 Guantes de nitrilo, mandil, mascarilla.

1.2. MATERIALES Y REACTIVOS REQUERIDOS

 Ozonizador multifunción- Ozone 3 GL-2186

 Muestra de agua de Lixiviado (El Inga)
 Agar MacConkey
 16 cajas Petri
 4 micropipetas
 4 mecheros
 4 matraces Erlenmeyer
 4 plancha de agitación

1.3. OBJETIVO

 Simular el proceso de desinfección del agua mediante el tratamiento de

ozonificación para eliminación de bacterias gran negativas.
 Comparar el número de colonias de bacterias gram negativas para diferentes
dosificaciones de tratamiento de ozonificación.

1.4. MARCO TEÓRICO

El ozono es un compuesto formado por tres átomos de oxígeno, cuya función más
conocida es la de protección frente a la peligrosa radiación ultravioleta del sol; pero
también es un potente oxidante y desinfectante con gran variedad de utilidades. La más
destacada es la desinfección de aguas.

Mecanismo de acción

Cuando este gas es inyectado en el agua, puede ejercer su poder oxidante mediante dos
mecanismos de acción:

1. Oxidación directa de los compuestos mediante el ozono molecular.

2. Oxidación por radicales libres hidroxilos.

Los radicales libres hidroxilos, (OH-), se generan en el agua como a continuación se

expone:
 Figura 1. Mecanismo de acción del ozono.

Los radicales libres así generados, constituyen uno de los más potentes oxidantes en agua,
con un potencial de 2,80 V. No obstante, presentan el inconveniente de que su vida media
es del orden de microsegundos, aunque la oxidación que llevan a cabo es mucho más
rápida que la oxidación directa por moléculas de ozono.

Ozonificación como método de desinfección

La ozonización es un método de tratamiento de aguas que está siendo cada vez más
utilizado. debido al gran poder oxidante del reactivo tanto frente a sustancias inorgánicas
presentes en un agua y no convenientemente eliminadas con cloro, como compuestos
orgánicos susceptibles de provocar problemas de olor/sabor en aguas tratadas con cloro.
A continuación, se presentan las ventajas y desventajas de este sistema de desinfección
frente a otros tratamientos.

Tabla 1. Ventajas y desventajas de desinfección con ozono

Ventajas Desventajas

Es más eficaz que otros métodos de El ozono es muy reactivo y corrosivo, requiriendo
desinfección para la desinfección o así de materiales resistentes a la corrosión como
destrucción de virus y bacterias. acero inoxidable.

El proceso no es económico para aguas residuales

con altas concentraciones de sólidos suspendidos
Utiliza un periodo corto de contacto
(SS), demanda bioquímica de oxígeno (DBO),
(10-20 minutos).
demanda química de oxígeno (DQO), o carbono
orgánico total.

Inexistencia de residuos peligrosos

El costo del tratamiento puede ser relativamente
que necesiten ser removidos
alto en cuanto a la inversión de capital y demanda
después de la aplicación de este
energética.
tratamiento.
 Tabla 1. Ventajas y desventajas de desinfección con ozono
(Continuación…)
Una vez concluido el proceso de
La baja dosificación puede no desactivar
ozonización, los microorganismos
efectivamente algunos virus, esporas o quistes.
no crecen nuevamente.

El proceso de ozonificación eleva

Requiere equipos complicados y sistemas de
la concentración de oxígeno
contacto eficientes.
disuelto (O.D) del efluente.

Bacterias Gram negativas en agua de lixiviado (relleno sanitario El Inga)

El agua puede ser un vehículo para agentes patógenos y oportunistas portadores de multi
resistencia y con capacidad de formar biopelículas, causando enfermedades. Las bacterias
Gram negativas son un grupo de organismos procariotas pertenecientes al dominio
Bacteria caracterizados por no adquirir una coloración violeta o azul cuando son teñidas
por el método de Gram. Algunas bacterias Gram negativas están entre las bacterias
patógenas más importantes para la humanidad desde el punto de la salud pública (Figura
2).

Tabla 2. Ejemplos de bacterias gram negativas

Tipo de bacteria Vista microscopio Características

Es una bacteria Gram negativa y, aunque es residente normal

del tracto intestinal del ser humano y de otros animales, su
Escherichia coli proliferación puede provocar diarreas y malestares
estomacales.

Afecta a los seres humanos y que está asociada con

Helicobacter pylori enfermedades como la gastritis crónica, úlceras pépticas y
otras enfermedades extra-gastrointestinales severas.

Conocida por ser la causante de la fiebre tifoidea, que es una

Salmonella typhi enfermedad potencialmente letal y que se transmite a través
del agua o de alimentos contaminados con esta bacteria.

Es una especie resistente a múltiples antibióticos; vive en

condiciones estrictamente aeróbicas (necesita oxígeno) y
Acinetobacter generalmente es causante de las infecciones intrahospitalarias
bumannii más comunes, especialmente relacionadas con los pacientes
sometidos a terapias respiratorias.
Principales aplicaciones de ozono

Las principales aplicaciones del ozono se detallan en la Tabla 3:

Tabla 3. Principales aplicaciones de ozono.

Tipo de aplicación Resultado

Eliminación o inactivación de bacterias, partículas

Desinfección contra patógenos
virales y parásitos de los suministros de agua potable.

Una dosis de ozono de 2,5 a 2,7 mg/L con un tiempo de

contacto de 10 min reduce significativamente el olor y
sabor de las aguas tratadas, puesto que reacciona con los
Control de olor y sabor de agua
compuestos responsable de producir estos parámetros,
en el caso del olor compuestos que contienen azufre y
nitrógeno.

La principal causa de color en las aguas naturales

corresponde a la presencia de sustancias húmicas, las
Remoción de color cuales a una dosis de ozono de 3,1 mg 𝑂 por cada mg
de carbono total permite una remoción completa de
color.

Pueden eliminar muchos productos químicos orgánicos

Eliminación de compuestos sintéticos, los cuales incluyen a compuestos biocidas,
orgánicos sintéticos hidrocarburos, fenoles, plastificantes, colorantes, aminas
y solventes.

El ozono puede ser eficaz para producir una oxidación

Incremento de la parcial de compuestos orgánicos en el agua a
biodegradabilidad orgánica compuestos biodegradables, que posteriormente pueden
ser eliminados por tratamientos biológicos.

El ozono, al igual que otros oxidantes como el cloro y el

Control de algas dióxido de cloro, tiene un efecto letal sobre algunas
algas o limita su crecimiento.

Ozonizador multifunción- Ozone 3 GL-2186

El principio de funcionamiento del equipo se basa en que el proceso de descarga eléctrica

genera ozono y iones negativos. El equipo aprovecha este principio y toma el aire como
recurso para crear ozono y iones negativos en una circunstancia de alta frecuencia y
descarga de alta presión.
Los iones negativos pueden absorber las partículas de iones positivos del aire, esto puede
reducir efectivamente las causas de alergenos que causan asma y alergias.

Especificaciones del equipo:

- Voltaje de funcionamiento: 15W

- Salida de ozono: 400 mg/h
- Tiempo de funcionamiento 10,20,30,45 o 60 minutos
- Dimensiones: 340x245x75
- Peso neto:1,8 kg

1.5. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL

Cuantificación inicial de colonias de bacterias gram negativas

- Calentar el agar MacConkey en una plancha de agitación con calor a 150°C

- En un medio esterilizado y junto al mechero dispensar el agar dentro de las cajas
Petri (este será nuestro medio de cultivo).

Figura 2. Técnica utilizada para dispensar el agar.

- Esperar que el agar se gelifique dentro de la caja Petri.

- Tomar 100 µL de muestra con una micropipeta y colocarla dentro del medio de
cultivo (caja Petri con agar MacConkey gelificado).

Figura 3. Sembrado de muestra.

 - Con ayuda de un triangulo dispensar suavemente la muestra colocada alrededor
de toda la superficie del agar gelificado.
- Etiquetar e incubar el medio durante 24 horas.
- Cuantificar colonias de bacterias una vez transcurrido este tiempo

Dosificación de ozono para desinfección de agua de lixiviado

- Tomar 500 ml de agua de muestra por cada grupo.

- Colocar los 500 ml de agua dentro de un matraz Erlenmeyer y situarlo sobre una
plancha de agitación (SIN CALOR).
- Programar el ozonificador multiparamétrico de acuerdo con la dosificación
correspondiente para cada grupo.

Tabla 4. Dosificaciones por grupo.

Dosificación A Dosificación B Dosificación C Dosificación D

Tiempo (minutos)

Blanco Blanco Blanco Blanco

5 10 15 20

25 30 35 40

45 50 55 60

Una vez transcurridos cada intervalo de dosificación realizar el conteo de colonias de

bacterias gram negativas para evaluar el efecto producido por el ozono en cada intervalo
de tiempo (dosificación).

1.6. CÁLCULOS
Cuantificación de colonias de bacterias gram negativas

Realizar un conteo por placas para evaluar la efectividad del tratamiento empleado.

Figura 4. Cuantificación de bacterias.

 Figura 5. Cuantificación de colonia de bacterias.

1.7. BIBLIOGRAFIA
Apaza, C. (2012). OBTENCIÓN DE AGUA OZONIZADA ENVASADA POR
LABORATORIOS LA COOPER. UNIVERSIDAD NACIONAL DE SAN AGUSTÍN.
Recuperado 2 de agosto de 2023, de
https://repositorio.unsa.edu.pe/server/api/core/bitstreams/594c17d7-2752-4d77-af60-
dc95e330a1c2/cont