UD8. GRUPOS SANGUÍNEOS.

DONACIÓN DE SANGRE
Contenidos
1. Introducción
2. Grupos sanguíneos.
3. Principales sistemas de grupos sanguíneos
4. Técnicas para el estudio de la hemocompatibilidad
5. Donación de sangre
6. Preparación de hemoderivados
7. Seguridad transfusional
1. INTRODUCCIÓN:
TRANSFUSIÓN paso de sangre, o algún componente, de un donante a un receptor.
OBJETIVOS DE LAS TRANSFUSIONES:
▪ reponer el volumen sanguíneo,
▪ aumentar la hemoglobina y la capacidad de transporte de oxígeno
▪ corregir los niveles de proteínas o de otros componentes de la sangre.

Para una transfusión es necesaria la compatibilidad entre donante y receptor


Garantizar que no habrá reacción inmunológica entre Ag y Ac de donante y receptor.

Las células sanguíneas poseen Ag de membrana que:

▪ pueden provocar la formación de Ac en personas que carecen de ellos.
▪ determinan el grupo sanguíneo  condicionan la compatibilidad entre donante y receptor.
2. LOS GRUPOS SANGUÍNEOS:
SISTEMA DE GRUPO SANGUÍNEO:
conjunto de Ag presentes, fundamentalmente, en la membrana de células sanguíneas
La identificación de los Ag es vital en las transfusiones
Si el receptor posee Ac frente a los Ag del donante  reacción inmunológica
Estos Ac pueden ser:
▪ Naturales: presentes en la sangre de forma natural: Ej. Ac anti-B en la sangre de grupo A.
Suelen ser IgM: son multivalentes  aglutinantes
▪ Inmunes: aparecen en la sangre tras una respuesta inmune previa, por transfusión o Ag fetales.
Suelen ser IgG: son bivalentes  bloqueantes.
Además pueden ser:
▪ Regulares: siempre presentes cuando no existe el Ag correspondiente (Ej. Ac del sistema ABO)
▪ Irregulares: No siempre presentes en ausencia del Ag.
2.1 GRUPOS SANGUÍNEOS ERITROCITARIOS

Hay 34 grupos identificados,

y codificados por la Sociedad
Internacional de Transfusión
Sanguínea (ISBT), a los que
se asigna:
▪ un código
▪ una abreviatura.

Cada uno está codificado por

un gen o un clúster de genes
estrechamente ligados.
 ANTÍGENOS ERITROCITARIOS
 La mayoría están en la membrana de los hematíes.
 Algunos de ellos también se pueden encontrar en secreciones y plasma (sintetizados por células mucosas)
Cada uno es producto de un gen y puede ser expresado:
▪ Directamente. Ej. sistema Rh,
▪ Indirectamente. Ej. sistema AB0: el gen  enzima  modifica una sustancia base  Ag sanguíneo.

PATOLOGÍAS RELACIONADAS CON LOS GRUPOS SANGUÍNEOS ERITROCITARIOS

▪ Reacciones hemolíticas postransfusionales: Ac del receptor reaccionan con los Ag eritrocitarios del
donante  hemolisis.
▪ Enfermedad hemolítica del recién nacido (EHRN). Durante un embarazo, parto o aborto, la madre puede
inmunizarse frente a los hematíes del feto. Si los Ac producidos son del tipo IgG (capaces de atravesar la
barrera placentaria), puede dar lugar a una hemólisis en el feto.
▪ Anemia hemolítica autoinmune: se producen Ac frente a los Ag de sus propios hematíes  hemólisis.
2.2 GRUPOS SANGUÍNEOS LEUCOCITARIOS
Ag que se encuentran en la superficie de los leucocitos.
No se determinan en la práctica diaria transfusional, pero sí en:
▪ los trasplantes de órganos y tejidos
▪ las pruebas de identificación de individuos

ANTÍGENOS LEUCOCITARIOS
▪ Ag exclusivos de la membrana leucocitaria.. Cuando los Ac séricos reaccionan frente a Ag leucocitarios.
Producen neutropenia
─ neonatal: si la madre tiene Ac frente a Ag leucocitarios del feto y atraviesan la placenta..
─ autoinmune: por autoanticuerpos contra los leucocitos propios.
▪ Ag de histocompatibilidad o sistema HLA presentes en los leucocitos:.
Producen Reacciones febriles transfusionales. Se producen Ac anti-HLA que provocan la liberación de
sustancias pirógenas  fiebre y escalofríos.
2.3 GRUPOS SANGUÍNEOS PLAQUETARIOS

ANTÍGENOS PLAQUETARIOS
Ag de membrana del sistema HLA
Producen:
▪ Reacciones febriles transfusionales  fiebre y escalofríos en el receptor de plaquetas.
▪ Trombocitopenia neonatal: si la madre está inmunizada frente a Ag plaquetarios del feto y sus Ac
atraviesan la placenta.
▪ Trombocitopenia autoinmune (púrpura trombocitopénica idiopática): destrucción de plaquetas por
autoanticuerpos.
▪ Refractariedad a la transfusión de plaquetas: se forman Ac anti-HLA que destruyen algunas plaquetas.
3. PRINCIPALES SISTEMAS DE GRUPOS SANGUÍNEOS:
Los más importantes desde el punto de vista transfusional son el AB0 y el Rh
3.1 EL SISTEMA AB0
ANTÍGENOS DEL SISTEMA ABO: Ag A y Ag B
Establecen 4 grupos sanguíneos según existan en la membrana del eritrocito 1 de ellos, los 2 o ninguno.
La presencia o no de estos Ag en la membrana eritrocitaria viene determinada genéticamente:
1 gen con 3 posibles alelos: A, B y O: A y B codominantes y dominantes sobre 0 (recesivo):

▪ Alelo A  Ag A  Grupo A
▪ Alelo B  Ag B
▪ Alelo O  Ausencia de Ag  Grupo B
AyB>0  Grupo AB
 Grupo 0
 Ejemplos de herencia mendeliana de grupos
ABO según el genotipo de los padres.

El gen ABO está relacionado con el sistema Hh: determinado por 1 gen con 2 alelos (H > h), responsable
de la formación de Ag A y Ag B del sistema AB0:
 Alelo H: el más frecuente en la población mundial,
 Alelo h (alelo amorfo o nulo): frecuencia muy baja.
▪ Genotipos HH y Hh: sintetizan una enzima que añade una
fucosa a una sustancia precursora  .sustancia H
 Alelo A: codifica otra enzima que añade N-acetil-
galactosamina a la sustancia H  sustancia A (Ag A)
 Alelo B: codifica otra enzima que añade D-galactosa a
la sustancia H  sustancia B (Ag B)
 Alelo 0: no altera la sustancia H. (Ag H) Ni Ag A ni Ag B.
▪ Genotipos hh: incapaces de producir sustancia H, y por
tanto, carecen de Ag A y Ag B (Grupo Bombay o Oh)
 Ag que componen
el sistema ABO

No toda la sustancia H se transforma en A o B


siempre hay sustancia H en los hematíes
(excepto en el grupo Bombay).

Resumiendo:

En el grupo Bombay no hay sustancia H, ni A, ni B.

Este grupo (hh) tiene una frecuencia muy baja,
pues el alelo H tiene una incidencia muy alta en la
población.
LOS SUBGRUPOS A y B

Varios subtipos A y B La mayoría de los subgrupos A y B presentan:

(por mutaciones en el gen ABO) ▪ Menos Ag A (subgrupos A débiles)
 ▪ Menos Ag B (subgrupos B débiles)
diferentes alelos A y B

variaciones en las sustancias A y B
 Subgrupos
débiles
especificidades antigénicas distintas..
Principales subgrupos de A y B en
Los subgrupos A son más comunes. orden decreciente de cantidad de Ag.

Los 2 subgrupos mayoritarios del grupo A son:

▪ A1 (≈ 80% de las personas del grupo A son A1) El grupo AB también tiene varios subgrupos,
▪ A2 (≈ 20% de las personas del grupo A son A2). Los más importantes son el A1B y el A2B.
Diferencias entre A1 y A2::
▪ A2 presenta < [Ag]  Algunos individuos A2 trasfundidas con A! pueden producir Ac anti-A1.
▪ Ag A1: muy ramificado  los hematíes aglutinan con la lectina Anti-A1 (Dolichos biflorus).
▪ Ag A2: poco ramificado  los hematíes NO aglutinan con la lectina Anti-A1
Ambos subgrupos aglutinan con los antisueros anti-A convencionales (esta lectina permite diferenciarlos)

SISTEMA SECRETOR

Gen secretor (Se), con 2 alelos (Se > se) es responsable de la aparición de sustancias H, A y B en las
secreciones (saliva o semen).
▪ Genotipo SeSe y Sese: presenta sustancias H, A y/o B (Ag H, A y/o B) en las secreciones
▪ Genotipo sese (nulo): no las presenta..
Importante cuando la detección del grupo sérico y hemático no es concluyente
ANTICUERPOS DEL SISTEMA ABO: ANTICUERPOS ANTI-A y ANTI-B
El sistema AB0 tiene gran interés transfusional, ya que presenta Ac naturales contra los Ag que no
poseen sus hematíes.
Estos Ac suelen ser del tipo IgG e IgM.

IgM IgG

Muy rara vez IgA (presente en

el plasma y en las secreciones.).

▪ grupo A: presenta Ac anti-B;

▪ grupo B: presenta Ac anti-A;
▪ grupo O: presenta Ac anti-A y Ac anti-B.
Características de A B AB 0
los fenotipos ABO
Ag A Ag B

Ag presentes en
los eritrocitos
Ag A y Ag B No Ag

Ac anti-B Ac anti-A
Ac presentes en No Ac
el plasma Ac anti-A
Ac anti-B

Grupo A Grupo B
Pueden donar a Grupo AB Todos
Grupo AB Grupo AB

Grupo A Grupo B
Pueden recibir de Todos Grupo O
Grupo O Grupo O
Además de estos Ac, se puede encontrar:
▪ Ac anti-H: en el grupo Bombay  puede dar lugar a hemólisis y aglutinación eritrocitaria.
▪ Ac anti-A1 y Ac anti-A2: muy útiles para detectar Ag A y B débiles (pueden dar un falso grupo O).

Combinaciones posibles de alelos, incluyendo el gen H y

los grupos sanguíneos que determinan cada una de ellas.
IMPORTANCIA TRANSFUSIONAL DE LOS ANTÍGENOS A Y B DÉBILES

Los subgrupos A y B débiles no aglutinan con los antisueros anti-A y anti-B


en la prueba celular pueden ser falsamente identificados como grupo O.

Se detectan por discrepancia entre la prueba celular y la prueba sérica:

▪ Los subgrupos débiles sólo presentan 1 Ac:
─ anti-B los subgrupos A débiles
Se puede confirmar por su detección
─ anti-A los subgrupos B débiles
en saliva (en individuos secretores).
▪ El grupo O presenta 2 Ac: anti-A y anti-B.
IMPORTANCIA TRANSFUSIONAL DEL GRUPO BOMBAY (Oh)
El grupo Bombay (hh) no tiene Ag A ni B pero sí Ac anti-A, anti-B y anti-H.
Resultados de la prueba:
▪ celular  falso grupo O
▪ sérica  fuerte aglutinación con hematíes de todos los grupos, incluido el grupo O
3.2 EL SISTEMA Rh
HERENCIA DEL SISTEMA Rh
Principales Ag eritrocitarios del sistema Rh: D, C, c, E y e.
Personas:
▪ Rh+: Tienen Ag D (≈85%)  solo pueden donar sangre a personas con Rh+.
▪ Rh-: NO tienen Ag D  pueden donar sangre a individuos Rh+ y Rh-..

El sistema Rh se debe a 2 genes:

▪ Gen RHD: codifica el Ag D.. Es un gen con 2 alelos: D > d
─ Alelo D  se produce Ag D  fenotipo Rh+
─ Alelo d (nulo)  NO se produce Ag D  fenotipo Rh-.
▪ Gen RHCE: codifica los Ag C, c, E y e.
Presenta 4 alelos, cada uno determina la expresión de una pareja de antígenos: CE, Ce, cE y ce.
El factor Rh presenta herencia mendeliana, pero en lugar
de hablar de 2 alelos codificantes, se habla de copias
funcionales del gen RHD:
2 copias (DD),
1 copia (D–)
ninguna (– –).
▪ Rh+ tienen, al menos, 1 copia funcional del gen (DD o D–).
▪ Rh- no tienen ninguna copia funcional del gen (– –).

Ejemplos de herencia mendeliana del

factor Rh según el genotipo de los padres.

El sistema Rh, para poder expresarse, requiere, además, un 3º gen, el gen RHAG que codifica una
glucoproteína precursora de los Ag (Glucoproteína de membrana asociada a Rh).
Este gen constituye un sistema de grupo sanguíneo: Sistema Rh-glicoproteína asociada (030, ISBT).
ANTÍGENOS DEL SISTEMA Rh
Existen múltiples variantes de los Ag D, C y E. La mayoría muy poco frecuentes.
ANTÍGENOS D DÉBILES: ANTÍGENO DU
El Ag DU se produce por un alelo débil del antígeno D

Fenotipo D débil: los eritrocitos tienen muy poco Ag D Ag D

no se detecta con métodos serológicos de rutina
(Falso Rh-)
 Fenotipo D normal Fenotipo D débil
Un donante Du + puede sensibilizar a un receptor Du -.
Se detecta mediante la prueba de antiglobulina indirecta (Coombs indirecto)  Ver protocolo.
ANTÍGENOS D PARCIALES
Son Ag D incompletos. Les falta una parte (carecen de varios epítopos)
Los fenotipos D parciales son Rh D+ (tienen Ag D), pero pueden inmunizarse contra la parte del Ag D que
les falta y producir Ac capaces de reaccionar contra los hematíes del donante.
Fenotipo D normal Fenotipo D parcial
Antígeno D normal
(todos los epítopos)

Antígeno D parcial
Falta 1 epítopo (amarillo)

Destaca la variante D VI; la sangre con

esta variante reacciona débilmente a la
prueba de antiglobulina humana pero
puede generar una respuesta Ac contra el
epítopo que
importante en una transfusión. falta (amarillo)
En el contexto transfusional, las variantes parciales o débiles del Ag D se interpretan:
▪ Como Rh+ si se trata de un donante.
▪ Como Rh- si se trata de una mujer embarazada o un receptor de transfusión.

ANTÍGENOS AUSENTES
▪ Silenciosas  no se produce ninguno de los Ag del sistema Rh.
Ej. Rh null o nulo  carece de todos los Ags del sistema Rh por ausencia o alteración funcional de la
glicoproteína asociada a Rh.  anemia hemolítica crónica con:
─ aumento de la fragilidad osmótica
─ esferocitosis y estomatocitosis.
▪ Parcialmente silenciosas  faltan los Ag EeCc, pero sí producen Ag D.

OTROS ANTÍGENOS
Se producen Ag extra como resultado de la cooperación de 2 genes. Ej.
▪ Ag f o ce: da lugar a un Ac muy potente que puede provocar la EHRN
▪ Ag G: presente en todos los hematíes D o C +. es capaz de producir un Ac específíco anti-G.
ANTÍCUERPOS DEL SISTEMA Rh
Los Ac contra los Ag Rh:
▪ son de carácter inmune. El Ag más inmunógeno es el D
▪ suelen ser de tipo IgG 
▪ activos a 37 ºC, El Ac más frecuente es el anti-D
▪ no fijan complemento,
▪ son clínicamente significativos:
─ provocan destrucción eritrocitaria
─ pueden provocar EHRN.
Los que se presentan con mayor frecuencia son el anti-D, el anti-E y el anti-c.
.
Se detectan con la prueba de la antiglobulina humana.
Para favorecer la aglutinación de los hematíes con los antisueros anti-Rh, se emplean suelen usar enzimas,
como la papaína, la ficina y la tripsina
LA HEMOCOMPATIBILIDAD

Grupos sanguíneos
combinando los
sistemas ABO y RH
 Compatibilidad entre los grupos
sanguíneos respecto de los
sistemas ABO y Rh

Aunque para algunos grupos del sistema

AB0 existen varias opciones, siempre es
preferible recurrir a sangre del mismo
grupo y solo como 2ª opción, al grupo O.
Para receptores AB (receptor universal):
▪ la 1ª opción es un grupo AB,
▪ la 2ª un grupo A,
▪ la 3ª un grupo B
▪ como última opción, un grupo O.
3.3 OTROS SISTEMAS DE GRUPO SANGUÍNEO
SISTEMA MNS
Los principales Ag de este sistema son:
▪ Ag M y Ag N (codificado por 1 gen con 2 alelos codominantes Los Ac anti-M y anti-N tienen un efecto
▪ Ag S y Ag s (otro gen con 2 alelos) dosis: muestras con Ac débiles solo
aglutinan eritrocitos homocigotos MM o NN.
Los Ac pueden ser naturales o inmunes.
▪ Ac anti-M (frecuentes) y los Ac anti-N (raros), si son activos a 37ºC pueden provocar hemolisis..
▪ Ac anti-S y anti-s (muy poco frecuentes) pueden activarse a 37 ºC  hemolisis y EHRN.
SISTEMA LEWIS
Los Ag Lea y Leb son solubles. Se encuentran en el plasma y en las glándulas epiteliales.
Los que se detectan en la superficie eritrocitaria se adsorben reversiblemente a partir del plasma.
▪ El Ag Lea se encuentra en los portadores del gen Lewis pero no del gen secretor (Se),
▪ El Ag Leb se encuentra en los portadores del gen Lewis y el gen secretor  Ag en secreciones.
Los Ac son naturales. No suelen reaccionar a temperatura fisiológica pero algunos son hemolizantes a 37ºC.
SISTEMA li
Los Ag de este sistema son el Ag I y Ag i:
▪ En el recién nacido se encuentra el Ag i y no aparece el Ag I.
▪ Durante el desarrollo Ag I, y  Ag i. Muy pocos adultos poseen el Ag i
Los Ac anti-I y anti-i, son Ac fríos, pero producen hemolisis a 30ºC  AHAI por Ac fríos.
▪ Los Ac anti-I suelen asociarse con Mycoplasma
▪ Los Ac anti-i, de naturaleza IgG, suelen detectarse en la mononucleosis infecciosa.

SISTEMA P
El sistema tiene un único Ag: el Ag P1:
▪ Si los eritrocitos expresan el Ag P1  fenotipo P1
▪ Si los eritrocitos carecen de Ag P1  fenotipo P2.
El Ac anti-P1 es:
▪ Generalmente, una IgM natural que se encuentra en personas P2 y que no es activa a 37ºC;
▪ En ocasiones, se produce una IgG activa a 37ºC  puede producir reacciones transfusionales hemolíticas.
 SISTEMA KELL
Hay muchos Ag clínicamente significativos, que pueden producir reacciones hemolíticas postransfusionales y la
EHRN.. Los principales Ag son:
▪ Ag K (Kell): muy poco frecuente, es fácil encontrar sangre negativa para una transfusión (muy improbable
que la sangre donada lo contenga).
▪ Ag k (Cellano): muy frecuente, complicado encontrar sangre negativa para una transfusión (muy probable es
que la sangre donada lo contenga).
Los Ac del sistema Kell son IgG inmunes y se detectan con la prueba de la antiglobulina indirecta.

SISTEMA KIDD
Los Ag del sistema son los Ag Kidd Jka y Ag Kidd Jkb (codificados por 1 gen con 2 alelos codominantes).
Su frecuencia es alta y, por tanto, es difícil encontrar Ac anti-Kidd (el fenotipo Jk (a–b–) es raro).
Los Ac Kidd, tras la inmunización  hasta niveles indetectables  frecuentes reacciones hemolíticas retardadas
SISTEMA DUFFY
Los Ag más frecuentes son Ag Fya y Ag Fyb (1 gen, 2 alelos codominantes).. Poco poder inmunógeno.
▪ Entre la población blanca: muy comunes los fenotipos Fy (a+b–), Fy (a+b+) y Fy (a–b+).
▪ Entre la población negra: muy abundante el Fy (a–b–), que es muy infrecuente en la población blanca.
Ags Fya y Fyb poseen receptores para el parásito de la malaria  Fy (a–b–) tiene resistencia natural..
Ac del sistema Duffy: Ac anti-Fya (mucho más común) y Ac anti-Fyb. Estos Ac son más frecuentes en:
▪ personas de raza negra
▪ pacientes politransfundidos.
Los Ags del sistema Duffy se detectan con la prueba de la antiglobulina indirecta.

SISTEMA LUTHERAN
Los principales Ag Lutheran: Ag Lua (menos frecuente) y Ag Lub (más frecuente).
Los principales Ac son Ac anti-Lua (más frecuentes) y Ac anti-Lub  causan patología leve.
4. EL ESTUDIO DE LA HEMOCOMPATIBILIDAD:
▪ La aglutinación: técnica más utilizada para la detección de Ag eritrocitarios
▪ Técnicas moleculares: para genotipado cuando no son útiles las técnicas de hemaglutinación.:
 Imposibilidad de identificar ciertos Ag debido a la débil reactividad de algunos reactivos frente a ellos.
 La tipificación de pacientes con transfusiones recientes.
 La identificación de riesgo de EHRN.
 La mejora de la fiabilidad de las unidades Ag- para transfusión.

4.1. LAS TÉCNICAS DE AGLUTINACIÓN PARA LA DETERMINACIÓN DE GRUPOS SANGUÍNEOS

Son técnicas inmunológicas basadas en la formación de inmunocomplejos visibles a simple vista.
Los Ag eritrocitarios:
▪ son particulados (unidos a la superficie del eritrocito)
▪ y tienen una gran densidad antigénica (múltiples moléculas de Ag en la superficie de las partículas)
Los Ac tienen varios sitios de unión al Ag y sirven de puentes de unión entre Ag próximas.
▪ Las IgG tienen 2 sitios de unión al Ag
▪ Las IgM tienen 10 sitios de unión al Ag
Esta unión forma macroagregagos de eritrocitos
Ac IgM
unidas que precipitan  HEMAGLUTINACIÓN..

Visible a simple vista
Mediante estas técnicas se pueden determinar:
▪ Ag eritrocitarios: poniendo en contacto una
suspensión de esos eritrocitos con el Ac
específico para ese Ag
▪ Ac séricos o plasmátcios: poniendo en contacto
ese suero o plasma con eritrocitos que
contengan el Ag específico para ese Ac.
PREPARACIÓN DE LAS MUESTRAS
PREPARACIÓN DE UNA SUSPENSIÓN DE HEMATÍES
Para determinar la presencia o no de un Ag eritrocitario específico, se prepara una suspensión de células:
▪ a concentración adecuada: determinada por las pruebas a realizar
▪ libre de elementos que puedan generar falsos positivos.
PROCEDIMIENTO:
1. Lavar los hematíes con solución salina para eliminar el plasma, hematíes hemolizados y coágulos.
2. Preparar la suspensión de hematíes (ver protocolo).
La presencia o no de un Ag eritrocitario se determina con un Ac específico (comercial)
PREPARACIÓN DE CÉLULAS DEL LOS GRUPO A, B Y 0
Para determinar la presencia o no de un Ac sérico se necesita el Ag eritrocitario correspondiente.
Estos Ag pueden se comerciales o se pueden preparar suspensiones de hematíes A, B y O, para utilizar
posteriormente en diversas pruebas (ver protocolo).
TÉCNICAS DE AGLUTINACIÓN PARA LA TIPIFICACIÓN ABO y Rh
▪ En porta, en placa o microplaca, en tubo  ver protocolos.
DETERMINACIÓN DEL GRUPO SANGUÍNEO EN COLUMNA DE GEL (Más utilizada)
Se basa en la separación por tamaño de los eritrocitos aglutinados, mediante centrifugación en un gel
poroso colocado en una columna.. El tamaño de poro del gel:
▪ permite el paso de los hematíes que no han aglutinado a través de la columna.
▪ impide o dificulta la migración de agregados y microagregados.
Resultados:
▪ fuertemente +: macroagregados retenidos en la superficie
▪ débilmente +: microagregados se distribuyen en la zona media
▪ Reacción -: los hematíes se acumulan en el fondo de la columna.

Reacción +: flechas largas y delgadas

Reacción -,: flechas cortas y gruesas
TARJETAS DG GEL®
Tarjetas con varias columnas de gel, en cada una de las cuales Tarjeta
tiene lugar una prueba hematoinmunológica. Existen distintos DG Gel®
tipos de tarjetas, según la combinación de pruebas:
▪ tipaje ABO,
▪ fenotipo Rh,
▪ detección de aC irregulares,
▪ pruebas cruzadas o test de Coombs directo e indirecto.

Tarjeta ABO/Rh: se utiliza para la determinación:

▪ Del Rh: anti-D y control
▪ De los grupos sanguíneos:
 Hemático: Anti-A y anti-B (tipificación directa)
Tarjeta
 Sérico: hematíes A1 y B (tipificación inversa) ABO/Rh
Tarjeta ABO/Rh para neonatos.
Al nacer, los Ag A y B no están totalmente desarrollados. Esto:
▪ produce reacciones débiles
▪ a menudo impide la identificación de los subgrupos.
Los Ac no aparecen hasta los 4-6 meses de vida  no se puede determinar grupo sérico al nacimiento.

Esta tarjeta permite:

▪ Determinación del grupo ABO hemático
(anti-A, anti-B y anti-AB),
▪ Determinación del Rh (anti-D y control)
▪ Prueba de antiglobulina directa (DAT, con
anti-IgG y anti-C3).

Tarjeta con columnas

de gel para neonatos
Además, hay otras pruebas disponibles: Hay tarjetas que pueden determinar, en menos
▪ Determinación de otros grupos (como el Kell) de 5 minutos, con 1 sola gota de sangre:
▪ Determinación del fenotipo Rh completo ▪ El grupo ABO,
▪ Screening e identificación de Ac irregulares. ▪ El Rh (D),
▪ Distintas pruebas cruzadas…. ▪ El fenotipo Rh y
▪ El sistema Kell
Las tarjetas DG Gel® son muy fáciles de Son muy útiles en situaciones de emergencia.
usar y funcionan en procedimientos:
▪ manuales,
▪ semiautomatizados
▪ automatizados.

Equipo automático para el

procesamiento de tarjetas.
LECTURA DE LOS RESULTADOS
En todas las pruebas de aglutinación, el resultado es visible. En el caso de:
▪ las microplacas se pueden usar lectores de microplacas
▪ las tarjetas DG-Gel® se pueden leer mediante un sistema automatizado.
Además de determinar el + o -, también es importante determinar la intensidad de la aglutinación.
La intensidad de aglutinación que se valora en una escala de 0 a 4+:
▪ 0: no aglutinación
▪ 4+: gran aglutinación en un fondo limpio que no tiene hematíes sin aglutinar.
Esta escala se correlaciona con un score o puntaje (tabla).
Valoración de la intensidad de la aglutinación.
4.2. PRUEBAS DE HEMOCOMPATIBILIDAD
Encaminadas a evitar la reacción hemolítica aguda, es decir, a asegurar la compatibilidad donante/receptor.
Incluyen estudios de:
▪ determinación de grupos ABO y Rh,
▪ detección de Ac irregulares
▪ pruebas cruzadas.

MUESTRAS DE SANGRE PARA ESTUDIOS PRETRANSFUSIONALES:

▪ Preferiblemente sangre recién extraída.
▪ Se puede usar sangre:
 De hasta 3 días antes, si el paciente
─ ha sido transfundido en los 3 meses anteriores
─ ha tenido un embarazo en los 6 últimos meses.
 De hasta 5 días antes si el paciente no se encuentra en ninguno de los 2 casos anteriores.
DETERMINACIÓN DEL GRUPO SANGUÍNEO
En todos los casos se deben determinar los grupos celular y sérico. Tipificación doble por determinación:
▪ directa: grupo celular. Con Ac anti-A y anti-B para detectar Ag A y B en los hematíes.
▪ inversa: grupo sérico. Con hematíes reactivos A y B para detectar Ac anti-A y anti-B en suero.
(ver protocolos)
Los reactivos monoclonales para la tipificación ABO permiten detectar también algunos subgrupos débiles.
Los 2 grupos obtenidos deben ser coherentes.
▪ Un grupo celular A debería tener un grupo sérico anti-B y no anti-A
▪ Un grupo celular B debería tener un grupo sérico anti-A y no anti-B;
▪ Un grupo celular O tendrá ambos Ac en el suero
▪ Un grupo celular AB no tendrá ningún Ac en el suero.
En casodiscrepancia
Si hay urgente, seentre
puedeambos
trasfundir 1 unidad
resultados del grupo O ylosposteriormente
determinar determinar
demás subgrupos débiles.. el grupo.
A TENER EN CUENTA:
▪ Ac anti A y anti B séricos de la mayoría de pacientes y donantes suelen ser demasiado débiles para
aglutinar los eritrocitos sin centrifugación o incubación prolongada  pruebas serológicas.
▪ En la determinación del grupo celular, además de Ac anti-A y anti-B se usa también un suero con
 Ac anti-AB tienen gran afinidad por los Ag débiles  aglutinación aunque los Ac anti-A y los anti-B
no la hayan provocado.
 Ac de reacción cruzada contra Ag A y B que producen los individuos O.
▪ Los subgrupos A1 y A2 reaccionan fuertemente
con el reactivo anti-A. Su distinción serológica se
hace con lectina anti-A1 de Dolichos biflorus;:
 Aglutinación  A1
 No aglutinación  A2.
Panel de Ac utilizados en
la determinación de
grupos sanguíneos.
DISCREPANCIAS ENTRE LAS PRUEBAS CELULAR Y SÉRICA
DISCREPANCIAS POR PROBLEMAS DE HEMATÍES
▪ Ag A débil o ausente. No se detecta Ag A, pero tampoco Ac anti-A en suero.
▪ Ag B adquirido. Se detecta una pequeña cantidad de Ag B y también Ac anti-B. En pacientes con cáncer
colorrectal, infección por bacterias gramnegativas y obstrucción intestinal.
▪ Glóbulos poliaglutinables. Se detectan Ag A y B, y también Ac anti-A o anti-B (el grupo sérico es el correcto, en
esta situación). Ocurre por diversas causas que hacen a los eritrocitos aglutinables frente a cualquier suero. Se
estudian mediante técnicas especiales.
▪ Campos mixtos. unos hematíes aglutinan y otros no. Se debe a la presencia de más de 1 población celular (por
transfusión ABO no isogrupo reciente, quimerismo congénito o hematíes de los subgrupos A débiles frente a
suero anti-A).
▪ Ac esperados no presentes. No se detectan los Ac ABO recíprocos. En hipoagammaglobulinemias y otras
patologías, ancianos y neonatos. El Coombs directo negativo, el autocontrol y la reacción contra células O alerta la
posibilidad de un Ag débil en los eritrocitos.
DISCREPANCIAS POR ERRORES TÉCNICOS
▪ Estandarización o conservación incorrecta de los antisueros.
▪ Muestra de sangre contaminada: olor desagradable y hemolisis. Es necesario solicitar una nueva muestra.
▪ Formación de pilas de monedas (pseudoaglutinación). Suele producirse en suero con proporción albúmina/globulina
anormal. Si al añadir 1 gota de solución salina hipertónica (1,5%):
─ desaparecen  pseudoaglutinación,
─ persisten  aglutinación verdadera.
▪ Presencia de gelatina de Wharton: recubre el cuerpo y el cordón umbilical del neonato y contamina las muestras
de sangre de cordón umbilical. Para retirarla, lavar las células en solución salina calentada a 37ºC varias veces.
▪ Presencia de autoanticuerpos y Ac fríos: Reaccionan con las células A, B y O en la determinación inversa del
grupo. Se corrige incubando la preparación a 37ºC antes de leer los resultados.
▪ Técnica incorrecta. Algunos falsos negativos en las pruebas ABO son resultado de:
─ no aplicar la técnica correspondiente de forma rigurosa:
─ usar una solución celular con una concentración incorrecta,
─ no aplicar los parámetros establecidos para la centrifugación o la incubación,
─ no interpretar los resultados según las pautas…
DETERMINACIÓN DEL GRUPO Rh
En la tipificación Rh de rutina de donantes y pacientes solo es preciso determinar el antígeno D.
La investigación de otros antígenos Rh solo se efectúa en circunstancias especiales:
▪ identificación de Ac Rh inesperados,
▪ búsqueda de sangre compatible para pacientes con Ac Rh,
▪ pruebas de paternidad y otros estudios familiares,
▪ selección de células fenotipificadas para el reconocimiento de Ac,
▪ evaluación para determinar si una persona es homocigota o heterocigota para RhD.

DETERMINACIÓN DEL Ag D
Es necesario utilizar
un control.

(Ver protocolo)
DETERMINACIÓN DEL GENOTIPO DEL SISTEMA Rh
Puede determinarse con estudios genéticos., pero el
procedimiento clásico es establecer el genotipo a
partir del fenotipo.
Se basa en determinar el fenotipo del sistema Rh
(ver protoclo).
Para ello se enfrentan los hematíes problema con
sueros:
▪ anti-D,
▪ anti-C, Posibles genotipos
▪ anti-E, según el fenotipo
▪ anti-e obtenido
▪ anti-c;
A partir del fenotipo obtenido se obtiene el
genotipo más probable.
 DETECCIÓN DE Ac IRREGULARES
Ac Irregulares (AI): Son Ac contra Ag eritrocitarios, diferentes a los Ac naturales del sistema ABO, dirigido
contra un Ag eritrocitario que el individuo no tiene. No siempre están presentes en ausencia del Ag.
Los AI suelen aparecer:
▪ En respuesta a la exposición a un Ag eritrocitario extraño, por transfusión o trasplante.
▪ Por incompatibilidad materno-fetal.
▪ En ocasiones sin que haya un estímulo identificable.
Los Ac irregulares más frecuentes son: anti-Lea, anti-K, anti-E y anti-D.
Si detectamos AI  prueba de autocontrol, enfrentando el suero del receptor con sus propios eritrocitos:
▪ Prueba de autocontrol positiva. Es probable que la persona tenga autoanticuerpos contra un Ag
eritrocitario  determinar si existen AI enmascarados por estos autoanticuerpos.
▪ Prueba de autocontrol negativa: confirma que se trata de AI.
TÉCNICAS PARA LA DETECCIÓN DE Ac IRREGULARES
Aglutinación, en tubo y en columna:
▪ Se usa suero.
▪ Las muestras deben ser almacenadas a 4 °C
▪ Realizar las pruebas antes de las 72 h desde su obtención.
DETECCIÓN DE AI: prueba de screening, enfrentando el suero con 2 o 3 suspensiones de hematíes de
composición antigénica conocida (incluyen todos los posibles Ag con importancia clínica).
Aglutinación en al menos una de las suspensiones y un autocontrol negativo  presencia de AI.
IDENTIFICACIÓN DE AI: una vez detectada su presencia, se utilizan paneles de hematíes de composición
antigénica conocida (≈10-12 tipos de hematíes). Deben expresar, al menos, los Ag:
▪ Ag del sistema Rh: Ag D, C, c, E y e ▪ Ag del sistema Kell: Ag K y k
▪ Ag del sistema MNS: Ag M, N S y s ▪ Ag del sistema Kidd: Ag Jka y Jkb
▪ Ag del sistema Lewis: Ag Lea y Leb ▪ Ag del sistema Duffy: Ag Fya y Fyb
▪ Ag del sistema P: Ag PI
El suero en estudio: se enfrenta con cada una de las células del panel (ver protocolo).
Para descartar la presencia de AI de naturaleza IgM e IgG, aglutinantes y no aglutinantes, las pruebas de
detección y de identificación de AI, se deben realizar:
▪ a temperatura ambiente
▪ a 37ºC,
▪ con reactivo de Coombs (prueba de antiglobulina indirecta)
Se registra la presencia o ausencia de aglutinación en cada caso. El perfil de aglutinaciones obtenido se
compara con una tabla que recoge la composición antigénica de cada tipo celular  permite la
identificación inequívoca del AI presente en la muestra.
Pueden realizarse pruebas de confirmación con células con expresiones homocigotas para los Ag D, C,
E, S, s, Fya, Fyb, Jka y Jkc.
 Perfil de aglutinaciones obtenidas al enfrentar un suero problema con un panel de hematíes de
composición antigénica conocida para identificar anticuerpos irregulares.

Todas las reacciones fueron negativas a temperatura ambiente y a 37ºC.

Con antiglobulina humana (AHG) el perfil de aglutinaciones concuerda con la presencia de un AI IgG
no aglutinante contra el Ag Fya del sistema Duffy, ya que se produce aglutinación con todos los
hematíes del panel que portan este Ag (columnas coloreadas).
▪ En las columnas del panel de hematíes, + indica presencia de Ag y O ausencia de Ag.
▪ En las columnas de resultados, + indica aglutinación y O no aglutinación.
PRUEBAS CRUZADAS
Tras determinar los grupos y los Ac irregulares se realizan pruebas cruzadas, también basadas en
aglutinación, que enfrentan la sangre del donante con la del receptor.
Existen 2 tipos de pruebas cruzadas:
▪ Prueba cruzada mayor: detecta Ac en el receptor contra Ag eritrocitarios del donante.
Se enfrentan suero o plasma del receptor y hematíes del donante. (Ver protocolo)
▪ Prueba cruzada menor: detecta Ac en el donante contra Ag eritrocitarios del receptor.
Se enfrentan suero del donante y hematíes del receptor.
Para completar las verificaciones y aumentar la seguridad conviene complementar las pruebas cruzadas
negativas con una prueba de antiglobulina indirecta para descartar la presencia de Ac no aglutinantes.
En la práctica transfusional se recomienda utilizar un sistema automatizado (menos errores)
Se pueden usar sistemas manuales, manteniendo unas estrictas medidas de control de calidad.
OTRAS PRUEBAS DE COMPATIBILIDAD
Aunque los problemas más graves por incompatibilidades en las transfusiones se deben generalmente a la
destrucción de las células transfundidas por los Ac del receptor, en ocasiones también tiene importancia la
presencia de Ac del donante.
Esto puede suceder en: transfusiones de plaquetas (CP) o de plasma fresco congelado (PFC) que ABO
incompatibles con el receptor.

PRUEBA DE COMPATIBILIDAD PLAQUETARIA

Las pruebas de compatibilidad, en la transfusión de concentrados de plaquetas (CP), solo se realizan de
modo excepcional en casos de sospecha de Ac.
Siempre que sea posible, se debe conservar identidad ABO.
También se pueden transfundir concentrados con incompatibilidad celular (mayor) o sérica (menor)
respecto del grupo del receptor. En estos casos está demostrada la menor supervivencia plaquetaria.
PRUEBA DE COMPATIBILIDAD PLASMÁTICA
En la transfusión de PFC no se llevan a cabo pruebas de compatibilidad de manera rutinaria, pero es
importante tener en cuenta la compatibilidad ABO.
En principio, el grupo ABO del plasma debe ser idéntico al del receptor, pero si esto no es posible, se
tendrá en cuenta:
▪ Receptores O: pueden recibir PFC de cualquier grupo.
▪ Receptores A o B: deben recibir PFC de su grupo, como primera opción. Si no es posible:
 Segunda opción: PFC del grupo AB.
 Tercera opción:
 PFC del grupo A para grupos B o AB,
 PFC del grupo B para grupos A o AB.
 Última opción: PFC de grupo O: los Ac anti-A y anti-B del grupo 0 tienen un título más alto de Ac IgM
que los demás y, con frecuencia, tienen Ac IgG, (puede dar lugar a anemias hemolíticas inmunes en
transfusiones repetidas o masivas).
4.3 PRUEBAS INMUNOHEMATOLÓGICAS DIAGNÓSTICAS
No forman parte de los estudios rutinarios de hemocompatibilidad para transfusiones.
PRUEBAS DE LA ANTIGLOBULINA O TEST DE COOMBS
Consisten también en reacciones de hemaglutinación.
Utilizan el reactivo de Coombs, que es un antisuero animal que contiene Ac contra globulinas humanas y/o
proteínas del complemento (C3 y C4).
El reactivo de Coombs puede ser:
▪ Monoespecífico: con anti-IgG, anti-IgA, anti-IgM o anti-C3-C4.
▪ Poliespecífico: con anti-IgG y anti-C3.
Se puede realizar en tubo, en microplaca o en columnas de gel.
Existen dos variantes de esta prueba: En ambas variantes, todos los tubos negativos se someten a un
▪ la de la antiglobulina directa control de Coombs con hematíes sensibilizados para asegurar el
▪ la de la antiglobulina indirecta. buen funcionamiento del reactivo de Coombs (ver protocolo).
PRUEBA DE ANTIGLOBULINA DIRECTA (PAD) O TEST DE COOMBS DIRECTO
Se enfrentan los eritrocitos del paciente con suero antiglobulina humana y/o anticomplemento.
En caso de resultado positivo, se aglutinan.
Especialmente útil para diagnosticar anemias
Esta prueba permite detectar la presencia de: hemolíticas autoinmunes y por fármacos.
▪ Ac unidos a Ag eritrocitarios
▪ complemento (C3) unido a la membrana de los hematíes.

La prueba también se realiza a:

▪ donantes de sangre
▪ neonatos Rh+ nacidos de madres Rh- candidatas
para profilaxis con inmunoglobulina anti-Rh.
Tarjeta para la prueba de antiglobulina
(Ver protocolo) directa en columna de gel
Todas las muestras son negativas
PRUEBA DE ANTIGLOBULINA INDIRECTA (PAI) O TEST DE COOMBS INDIRECTO

Permite detectar la formación de complejos Ag-Ac cuando: (Ver protocolos)

▪ la cantidad de Ag es muy pequeña (Ej. Ag D débiles) o la concentración de Ac es muy baja
▪ se trata de Ac no aglutinantes (Ej., algunos Ac irregulares (AI), como los del sistema Duffy).
En estos casos:
▪ las técnicas de hemaglutinación dan negativo (no aglutinación), a pesar de que hay unión Ac-Ag eritrocitarios.
▪ al añadir el reactivo de Coombs, los Ac del reactivo reaccionan con los Ac unidos a los Ag eritrocitarios
provocando la aglutinación.
Ej: detección en el suero materno de Ac anti-Rh que pudieran provocar una EHRN en un feto Rh+:
1. Incubar el suero materno con hematíes Rh+. Si hay Ac anti-Rh, se unirán a los hematíes..
2. Incubar la mezcla con reactivo de Coombs. Si los hematíes están recubiertos de Ac anti-Rh aglutinarán.
Para detectar e identificar AI conviene, también, realizar la PAI a las incubaciones del suero en estudio con los
distintos hematíes del panel de AI, para asegurarse la detección de Ac no aglutinantes..
 Esquema de las pruebas de antiglobulina (Coombs) directa e indirecta.

TEST DE DONATH-LANDSTEINER
La hemoglobinuria paroxística por frío suele dar positivo a C3 y negativo a IgG en la PAD durante una crisis.
Este resultado no es determinante y es necesario hacer el test de Donath-Landsteiner. (ver protocolo)
(Ver protocolo)