Enzimas de

Restricción
Biología Molecular y Celular

Elaborado por: David Becerra Avelar

 Objetivo

Identificar el concepto, nomenclatura y caracteristicas generales de las enzimas de

restricción
 Introducción
Las enzimas de restricción tambien conocidas como endonucleasas de
restricción, se encuentran en bacterias (y otros procariontes).
Reconocen secuencias específicas de ADN, llamadas sitios de
restricción, y se unen a ellas. Cada enzima de restricción reconoce solo
uno o unos pocos sitios de restricción. Cuando encuentra su secuencia
blanco, la enzima de restricción cortará las dos cadenas de una
molécula de ADN. Por lo general, el corte es en o cerca del sitio de
restricción y ocurre en un patrón ordenado y predecible.

Tijeras moleculares
 Definición
Una enzima de restricción es una proteína aislada a partir de bacterias que
cortan secuencias de ADN en sitios específicos de la secuencia, lo que
produce fragmentos de ADN con una secuencia conocida en cada extremo. El
uso de enzimas de restricción es sumamente importante para determinados
métodos de laboratorio, tales como la tecnología de ADN recombinante y la
modificación genética
 Restricción
Se denominan enzimas de restricción debido a que restringen la permanencia
de un ADN exógeno en la célula bacteriana que produce dicha enzima. Las
enzimas de restricción empleadas con más frecuencia en la metodología del
ADN recombinante suelen reconocer una secuencia única de 4 a 8 nucleótidos,
donde realizan el corte.
 Nomenclatura
1. Tres letras en cursiva que corresponden al nombre científico de la bacteria de donde
fue atraída. La primera letra, en mayúscula, corresponde al género; las otras dos, a la
especie.
2. La cepa o estirpe, si la hubiese
3. En números romanos, un número para distinguir si hay más de una endonucleasa
aislada de esa misma especie (orden de especificación)
4. Todas deberían indicar con una “R” por restricción o una “M” por metilasa, según la
función de la enzima, pero generalmente se omite.
Nombre cientifico de la bacteria
 Tipo 1: Reconoce, metila y corta. Necesita
ATP (MOVERSE). Hace el corte en diferente
sitio de reconocimiento
Tipo 2: Reconoce, Corta, NO metila. Hace
el corte en el mismo sitio de
Clasificación reconocimiento.
Tipo 3: Reconoce, Metila y Corta. Necesita
ATP (MOVERSE). Hace el corte en
diferentes sitios de reconocimiento
(cortan de 25 a 27 pb lejos del sitio de
reconocimiento)
Ejemplos de enzimas de restricción
 Secuencias palindrómicas
En el genoma existen secuencias denominadas palindrómicas o simplemente
palíndromos. Podrían considerarse como un tipo especial de secuencias
“capicúas”. Lo propio y característico de un palindromo es que la secuencia es
idéntica en una y otra cadena; ambas, al ser leídas en la misma dirección (de 5’ a
3’ o de 3´a 5´). Los palíndromos son lugares especiales del genoma ya que
constituyen secuencias “diana” de determinados enzimas de restricción y
señalan puntos de referencia en el genoma para otras funciones.

Ejemplo:
3’ ATGCGCAT 5’ 5’ TACGCGTA 3’
 Extremos pegajosos y extremos romos
Extremos pegajosos
Los extremos cohesivos son muy reactivos, por lo que reciben el nombre de
"pegajosos", ya que se adhieren a fragmentos de ADN con secuencias de bases
complementarias. Los extremos cohesivos son útiles en la clonación porque
mantienen dos fragmentos de ADN juntos para que la ADN ligasa los pueda unir

Extremos cohesivos 3’ Extremos cohesivos 5’

Extremos Romo
Son cortes a la mitad de la secuencia blanco son generados cuando la
enzima corta las dos hebras por el mismo lugar, generando dos extremos
doble cadena. La enzima de restricción SmaI es un ejemplo de enzima que
corta así
 Isoesquizómeros

Se denomina isoesquizómeros a las enzimas de restricción obtenidas de diferente

especie bacteriana pero que reconocen la misma secuencia diana de ADN y cortan
entre diferentes o en el mismo nucleótidos de dicha secuencia
 Conclusión
La importancia de las enzimas de restricción radica en su gran especificidad para
reconocer una secuencia corta de DNA bicatenario e hidrolizar un enlace fosfodiéster en
cada hebra, siempre en la misma posición. Cada enzima se caracteriza, pues, por su sitio
o secuencia de reconocimiento o de restricción, o secuencia diana.
Los fragmentos de DNA resultantes son útiles para iniciar la clonación celular o acelular,
para el análisis del DNA, para elaborar mapas físicos de restricción o para la detección de
polimorfismos.
Gracias