CURSO ONLINE DE

LABORATORIO DE
ANDROLOGÍA

6to Manual OMS 2021

 POST EXAMINACIÓN
MOVILIDAD ESPERMÁTICA
Clase 4

MSc. Acosta Campos Láyonal Germán

Director de Laboratorio de Gestar Perú
Director de Citogenética de GenNor
Layonal.acosta@gmail.com
 EVALUACIÓN BAJO EL MICROSCOPIO

◸ Un microscopio de luz equipado con óptica de contraste de fase

es necesario para todas las evaluaciones de preparaciones no
teñidas de semen fresco.

BAJA MAGNIFICACIÓN

◸ Una evaluación inicial microscópica de la alícuota del eyaculado

involucra escanear la preparación con un aumento total de 100x
(combinación del objetivo 10x y el ocular 10x).
◸ Esto proporciona una visión general de la muestra para poder
revelar si los espermatozoides están distribuidos uniformemente
en la preparación, cualquier presencia de hilos de moco y
presencia de aglutinaciones y agregaciones.
◸ En caso de observar una distribución desigual la razón podría ser:
una mezcla insuficiente, una falta de licuefacción, viscosidad
aumentada, aglomeración de espermatozoides.
 EVALUACIÓN BAJO EL MICROSCOPIO

ALTA MAGNIFICACIÓN

◸ Las preparaciones deben evaluarse con un aumento total de 200x

o 400x (es decir un objetivo de 20x o 40x y un ocular de 10x). Esto
permite evaluar:

 La movilidad espermática
 Determinar la dilución requerida para evaluar con precisión el
número de espermatozoides.
 Determinar la presencia de células redondas que requieran una
evaluación posterior.
 Determinar la presencia de otras células distintas a los
espermatozoides (células epiteliales o células redondas (leucocitos
o células germinales inmaduras).
 PREPARACIÓN PARA LA INVESTIGACIÓN MICROSCÓPICA

◸ Para obtener resultados fiables de la investigación

microscópica, es esencial que las alícuotas examinadas
sean representativos de todo el eyaculado.

 Viscosidad aumentada: Altamente problemático obtener

una muestra representativa.
 Si no mezclamos bien la muestra a pesar de hacer de 2
alícuotas, no se tendrán muestras representativas.
Diferencias en concentración, movilidad, morfología y
vitalidad.
 Aún así tengamos una muestra homogénea, las pequeñas
alícuotas no serán representativas.
 MEZCLA DEL EYACULADO

◸ Antes de extraer una alícuota de semen para

cualquier evaluación, mezclar bien la muestra de
semen en el recipiente original. Este no debe ser muy
fuerte porqué se puede crear burbujas de aire.
◸ Se recomienza usar un agitador orbital dentro de la
incubadora a 37 grados.
◸ Si no se tiene un agitador orbital se puede realizar la
mezcla básica mediante forma manual durante 15 a
30 segundos.
 MUESTRA REPRESENTATIVA

◸ Utilizar alícuotas repetidas de al menos 50µl para

la dilución para la evaluación de la concentración
espermática.
◸ Utilizar alícuotas repetidas de al menos 10µl para
la evaluación de la movilidad espermática.

◸ La comparación de las alícuotas repetidas es

necesario para reducir el riesgo de error debido a
un muestreo no representativo.
 EVALUACIÓN DE LA AGLOMERACIÓN ESPERMÁTICA

1. AGREGACIÓN ESPERMÁTICA

 Adhesión de espermatozoides inmóviles

entre sí.
 Adhesión de espermatozoides móviles a
hilos de moco, células no espermáticas
(células epiteliales) o debris.

 Agregaciones no específicas.
Agregaciones No específicas
 EVALUACIÓN DE LA AGLOMERACIÓN ESPERMÁTICA

2. AGLUTINACIÓN ESPERMÁTICA

 Se refiere a ´los espermatozoides móviles que

se adhieren entre sí ya sea cabeza a cabeza,
cabeza a cola o cualquier forma mixta.
 La movilidad suele ser vigorosa con un
movimiento frenético, pero a veces los
espermatozoides aglutinados pueden tener
una movilidad limitada.
 El tipo principal de aglutinación que refleja el
grado y el lugar de adhesión debe registrarse.
Grados de aglutinación:

◸ GRADO 1: Aislado (<10 espermatozoides aglutinados, muchos

espermatozoides libres).
◸ GRADO 2: Moderado (10 – 50 espermatozoides aglutinados,
espermatozoides libres)
◸ GRADO 3: Abundante (>50 espermatozoides aglutinados, algunos
espermatozoides libres).
◸ GRADO 4: Denso (Todos los espermatozoides están aglutinados y
las aglutinaciones están interconectadas.

 La presencia de aglutinación no es suficiente evidencia para deducir

una causa inmunológica de infertilidad, pero es sugestivo la
presencia de anticuerpos antiespermatozoides, por lo que se
requiere de pruebas adicionales.

 La aglutinación severa puede afectar la evaluación de la movilidad y

concentración espermática.
GRADOS DE
AGLUTINACIÓN
AGLUTINACIONES Y AGREGACIONES
AGREGACIONES
AGLUTINACIONES
AGLUTINACIONES
MOVILIDAD ESPERMÁTICA
 MOVILIDAD ESPERMÁTICA

# total de espermatozoide moviles

La velocidad de los
progresivos: # de espermatozoides
espermatozoides móviles es
total en el eyaculado x % de
dependiente de la temperatura.
espermatozoides moviles progresivos.

1 2 3 4 5

El grado de movilidad Si la licuefacción a

espermática progresiva Se requiere que el
ocurrido a los 30 minutos,
esta relacionado con las microscopio este equipado
ya se debe empezar la
tasas de embarazo. con una platina
evaluación de la movilidad.
calefactada.
 MOVILIDAD ESPERMÁTICA

La temperatura ambiente no
esta definida y puede varias
sustancialmente y puede traer
problemas para la evaluación.

6 7 8

Se recomienda el uso de un ocular con

La muestra, los portobajetos y retícula para facilitar la limitación del área
cubreobjetos se encuentren a 37°C. evaluada. Es muy útil en muestras con
elevado número de espermatozoides.
 EVALUACIÓN DE LA MOVILIDAD ESPERMÁTICA

1. Escanear varios campos y determinar que sea homogéneo en la

cantidad de espermatozoides. Esto se puede realizar a 100x o
200x total.
2. Evitar evaluar las zonas cercanas (<5mm) al borde del
cubreobjeto para evitar los artefactos por secado que afecten la
evaluación de la movilidad.
3. La elección de los campos a evaluar debe ser aleatorio.
4. Deben evaluarse al menos 5 campos diferentes, incluso si se
han contado más de 200 espermatozoides en menos de 5
campos.
5. Inicie la puntuación de un campo determinado en un instante
aleatorio (no espere a que los espermatozoides naden en el
campo o en la rejilla para empezar a puntuar).
 EVALUACIÓN DE MOVILIDAD ESPERMÁTICA

6. Evaluar la movilidad en una zona definida del campo. Evaluar solo la fila
superior de la cuadrícula si la concentración de los espermatozoides es alta.
Evalúe toda la cuadrícula si la concentración de espermatozoides es baja.
7. Se empezará evaluando los móviles progresivos rápidos y lentos y luego los
no progresivos e inmóviles.
8. Evaluar aproximadamente 200 espermatozoides por réplica, seguir contando si
aún no se han evaluado los 5 campos.
9. Comparar los valores de las réplicas para comprobar si son aceptablemente
cercanos. En caso afirmativo proceder con los cálculos, en caso contrario
preparar nuevas muestras.
10. Si 3 conjuntos de réplicas no han dado resultados aceptablemente cercanos
se da como resultado la media de 6 evaluaciones con un comentario en el
informe: EL RESULTADO ES LA MEDIA DE EVALUACIONES MUY VARIABLES
 CATEGORÍAS DEL MOVIMIENTO DE ESPERMATOZOIDES

A PROGRESIVA RÁPIDA (25µm/s):

Espermatozoide con movimiento activo, lineal o
C NO PROGRESIVO (<5µm/s): Todos los demas
patrones de movimiento activo de las cola con
en un gran circulo, cubriendo una distancia ausencia de progresión. Por ejemplo nado de
desde el punto de partida hasta el punto final de pequeños circulos, la fuerza flagelar desplazando
al menos 25µm (o media longitud de la cola) en la cabeza menos de 5µm (una longitud de la
un segundo. cabeza) desde el punto inicial al punto final.

B PROGRESIVA LENTO (5 a<25µm/s):

Espermatozoide con movimiento activo, lineal D
o en un gran circulo, cubriendo una distancia
desde el punto de partida hasta el punto final INMÓVILES: Sin movimiento activo de la cola.
de 5 a <25µm (o al menos la longitud de una
cabeza o media longitud de la cola) en un
segundo.
 COMPARACIÓN DE RÉPLICAS Y CÁLCULO DE LOS RESULTADOS

◸ Calcular las proporciones (%) de las 4 categorías de movilidad para las 2 réplicas por separado y
la proporción de progresivos y móviles.

 Luego calcular el promedio de las 2 réplicas del grupo dominante (móvil o inmóvil).
 Calcular la diferencia entre la réplicas de los dos grupos dominantes.
 Determinar la aceptabilidad de las diferencias.
 COMPARACIÓN DE RÉPLICAS Y CÁLCULO DE LOS RESULTADOS

◸ Si la diferencia entre los 2 porcentajes es aceptable, reportar el porcentaje

promedio para cada grado de movilidad: (a) progresivo rápido, (b) progresivo lento,
(c) no progresivo y (d) inmóviles.

◸ Si la diferencia es demasiada elevada, tomar dos nuevas alícuotas de la muestra

de semen, hacer dos nuevas preparaciones y repetir la evaluación.
• Si las réplicas difieren mas que la diferencia aceptable, la evaluación no debe
repetirse más de 2 veces. Un resultado final del promedio de las 6 evaluaciones
puede darse como resultado, junto con un comentario de que el resultado es
incierto debido a la alta variabilidad entre las réplicas evaluadas.
 COMPARACIÓN DE RÉPLICAS Y CÁLCULO DE LOS RESULTADOS

◸ Reportar el porcentaje medio de cada grado de movilidad con la precisión de un

número entero más cercano.
◸ La suma de los cuatro grados deben sumar 100. Si esta suma es 99 o 101, el valor
del grupo dominante es ajustado para que la suma de 100.
◸ Si la suma es mayor a 99 o mayor a 101, un conteo o error de cálculo debe ser
eliminado.
 Ejemplo 1

◸ Al realizar la evaluación de movilidad se obtiene en la réplica 1:

(a) 5,2%; (b) 24.1%; (c) 58,1% y (d) 12,6%. En la réplica 2: (a)
16,1%; (b) 33,3%, (c) 24,2% y (d) 26.4%.

• Determinamos que el grupo dominantes es movilidad no

progresiva: R1: 58,1% y R2: 33,3%. Calculamos promedio y
diferencia de las réplicas:
- Promedio: (58.1 + 33.3)/2=45.7%
- Diferencia: 58.1 – 33.3=24.8%

• Se determina que con este promedio (45.7%), la diferencia

aceptable es 10, pero se ha obtenido 24.8%. Por lo tanto se
debe realizar dos nuevas alícuotas y repetir evaluaciones.
 Ejemplo 2

◸ Al realizar la evaluación de movilidad se obtiene en la réplica 1:

(a) 10,2%; (b) 42,2%; (c) 21,7% y (d) 25,9%. En la réplica 2: (a)
13,1%; (b) 43,6%, (c) 22,2% y (d) 21.1%.

• Determinamos que el grupo dominantes es progresiva lento:

R1:42,2% y R2: 43,6%. Calculamos promedio y diferencia de
las réplicas:
- Promedio: (43,6 + 42,2)/2=42.9%
- Diferencia: 43,6 – 42,2=1,4%

• Se determina que con este promedio (42.9%), la diferencia

aceptable es 9, y se ha obtenido 1,4%. Por lo tanto es
aceptable estos valores.
Obteniendo los valores:

◸ A= (10,2+13,1)/2=11,65 ~ 12
◸ B= (42,2+43,6)/2=42,9 Colocar número ~ 43
◸ C= (21,7+22,2)/2=21,95 entero ~ 22
◸ D= (25.9+21.1)/2=23,5 ~ 24
-----------
101

Se ajusta grupo dominante para llevarlo a 100. Colocamos los progresivos lento de 43
a 42.
Informe: (a)=12%, (b)=42%, (c)=22%, (d)=24%
 DETERMINACIÓN DE LA MOVILIDAD USANDO CÁMARA MAKLER

◸ Inicialmente contar el número de espermatozoides en la primera fila.

Este valor nos recomendara aproximadamente cuantas filas debes
evaluar, recordando que debes contar aproximadamente 200
espermatozoides por réplica.

◸ Ejemplo: Se conto 45 espermatozoides en la primera fila, entonces con

este valor podemos determinar que debemos contar 5 filas: 45*5=225
espermatozoides aproximadamente.

◸ Una vez determinado el número de filas, se empezara con la

evaluación de los grados de movilidad. Se empezara a puntuar los
grados a y b en las 5 filas y luego los grados c y d, en las mismas filas
analizadas inicialmente.
◸ Evaluar por réplica y se debe determinar si se aceptan las diferencias.
Para ello se sigue el mismo criterio de evaluación en láminas
portaobjeto y cubreobjeto.