CITOLOGIA VAGINAL EXFOLIATIVA

Metodologa de toma de muestra En la bibliografa consultada hay reportes de varios mtodos para recoger las muestras para realizar frotis vaginales. El mtodo seleccionado se basa en cumplir algunos principios bsicos: a) Debe ser simple de realizar y econmico. b) No debe ser doloroso. c) Debe poderse realizar en presencia o ausencia de descarga vaginal. d) Debe ser realizable por los dueos despus de un breve aprendizaje. e) Debe ser realizable, a pesar del tamao o temperamento de la perra. Lo ideal es que el tcnico se acostumbre a una metodologa exitosa. En lo que a m respecta, recomiendo la utilizacin de la tcnica del hisopo de algodn porque cumple con los criterios anteriores. Tcnica del Hisopo La perra debe colocarse de pie, mientras un asistente le sostiene la cabeza con una mano y la cola con la otra mano. Los labios de la vulva son separados suavemente con una mano del operador. Con la otra mano se sostiene un hisopo de algodn estril de 15 cm de longitud. El hisopo es pasado por la comisura dorsal de la vulva, avanzando en direccin crneo-dorsal hasta que se pasa el arco isquitico por la regin dorsal de la vagina de manera de evitar la fosa del cltoris. La distancia que se debe introducir el hisopo depende de las dimensiones del animal, teniendo en cuenta que se debe alcanzar el canal plvico. Luego de rotarlo sobre la pared dorsal hacia lateral, ste se retirara tratando de no arrastrarlo por la regin ventral. Todo este procedimiento abarca solo unos segundos y es raro que sea doloroso. Si la perra no presenta descarga, puede manifestarse desconforme con la manipulacin, por lo que seria conveniente que se humedezca el hisopo con unas gotas de solucin salina fisiolgica para lubricar y facilitar la toma de muestra. No es recomendable la utilizacin de agua destilada o del grifo porque altera las clulas. Una vez que es retirado el hisopo, el mismo es girado suavemente a lo largo de un portaobjeto, realizando tres impresiones lineales separadas entre s. Se debe realizar dos frotis de cada muestra. Cada portaobjeto es secado al aire y posteriormente sumergido en alcohol absoluto o alcohol 95GL para fijar las clulas. Este frotis puede ser coloreado en el momento o guardados para ser coloreados posteriormente. Coloracin 6

Existen mltiples tcnicas para colorear el frotis e incluso est descrita la observacin de los mismos con un microscopio de contraste de fase. La tcnica a utilizar debera ser fcil de realizar, econmica, que permanezca sin modificarse por un tiempo considerable y quizs en forma permanente por varios aos. Las coloraciones ms utilizadas son las siguientes: May Grunwald Giemsa o Wright-Giemsa, Diff-Quick, Azul de Metileno nuevo Azul de Toluidina o Violeta de Genciana Papanicolao o Harris-Shorr Se realiz una comparacin de tres tcnicas de coloracin para la colpocitologa vaginal, Azul de Metileno (AM), Azul de Toluidina (AT) y HarriisShorr (HS), frente a 10 perras a lo largo de su ciclo estral. En funcin de los resultados obtenidos, se observ la sencillez y practicidad de dos de la tcnicas (AM y AT). Si comparamos estas dos tcnicas, la permanencia en el tiempo de la coloracin de AT frente al AM. Si observamos los resultados frente a una tcnica control especfica (HS), los resultados no presentan diferencias estadsticas. Por lo anterior se seleccion la tcnica de Azul de Touidina por su practicidad, sencillez, permanencia y su efectividad en pruebas de campo. Sin ser en desmedro de estas tcnicas sencillas de trabajo en la clnica, en el caso de ser necesario es recomendable utilizar la tcnica de Harris-Shorr. Azul de Toluidina 1- Secar el frotis al aire 2- Colocar el colorante sobre el porta 3- Dejar actuar dos minutos 4- Volcar el excedente de colorante 5- Dejar secar al aire 6- Evaluar Usos Clnicos Manejo de la monta normal 7

En este contexto, se utiliza para ayudar a los dueos o criadores a determinar el momento ptimo para la monta de una perra. Es una excelente ayuda para distinguir entre proestro, estro o diestro dentro del ciclo estral de la perra. Para realizar esto, es recomendado realizar 2-3 frotis en el entorno de 4 a 7 das. Como rutina recomendamos comenzar a realizar el frotis al tercer da de que la perra es identificada en celo (presencia de descarga vaginal), y luego continuar cada 48 horas realizando 3 frotis por perra para poder observar la evolucin del epitelio vaginal y determinar claramente el momento de comienzo del estro. Ciclos inusuales Todas aquellas perras que en su ciclo estral no se comportan como una perra promedio (o sea que no se cumple que el estro comience al da 10 de iniciado el proestro), realmente causan errores al intentar prearlas. Esto correspondera a perras que en forma normal presentan sus proestros cortos (3-5 das) o proestros largos (21-25 das), estos animales estn dentro de los rangos normales de duracin de las etapas del ciclo estral en caninos. Se debe tener en cuenta la variabilidad, o sea el rango de duracin, de cada etapa del ciclo. Ciclos anovulatorios Parea determinar esta patologa es necesario realizar un seguimiento desde el inicio del celo. Realizando esto podemos determinar que de la mitad del proestro se produce la transicin al diestro, por lo que nos orienta hacia una maduracin folicular incompleta. Predecir el momento del parto La duracin de la preez en la perra suele ser un rango variable desde 5772 das desde el momento de la monta. Pero si nosotros determinamos claramente el momento de inicio del estro (coincidira con el pico de LH), la duracin de la preez en relacin con el pico de LH varia de 63-65 das de duracin. Problemas de infertilidad La citologa vaginal es el reflejo de los niveles de estrgeno plasmtico y de la funcin folicular. Por intermedio de esta tcnica se puede determinar si existieron problemas de manejo (momento errneo de monta), nivel de estrgeno inadecuado (pobre desarrollo folicular), u otros desrdenes menos comunes. Patologas 8

Puede colaborar en el diagnstico de algunas patologas como ser: quistes foliculares, vaginitis, tumores vaginales, pimetra, y metritis aguda. Utilizacin de Progestgenos Los mejores resultados con la utilizacin de los mismos se manifiesta cuando el animal est en anestro, lo que se solucionara con un frotis vaginal realizando la teraputica, disminuyendo los riesgos de pimetra. El de mejor resultado a la utilizacin a inicio del ciclo es la proligestona (Covinan), pero an sera recomendable la utilizacin de esta tcnica teniendo en cuenta no pasarnos de la mitad del proestro.

Limitaciones de la colpocitologa
Esta tcnica es una herramienta muy utilizada en la reproduccin canina. Hay que tener en cuenta que es muy sencilla, a pesar de ello, la observacin del frotis implica entrenamiento para un correcto diagnstico. Hay que tener presente que con un solo frotamiento no se puede identificar el da de la ovulacin o el momento ptimo para la monta, as como tampoco el da del parto. Tambin se debe tener en cuenta, que esta tcnica no debera sustituir la anamnesis, el estudio de la sintomatologa y del comportamiento en las diferentes etapas del ciclo estral de la perra. La utilizacin de esta tcnica implica una complementariedad con lo antes mencionado. Clasificacin de las clulas del epitelio vaginal. Las modificaciones que ocurren en la mucosa vaginal son un resultado de las variaciones de la concentracin plasmtica de estrgeno, remarcado especialmente en el proestro y estro como va indirecta de deteccin. La nomenclatura de las clulas vaginales est basada en su morfologa, algunos autores las describen diferencindolas en queratinizadas y no queratinizadas o cornificadas y no cornificadas. En lo particular, prefiero una descripcin celular basada en su morfologa y en el propio proceso de muerte celular. Cuando las clulas vivas redondeadas se mueren, modifican su morfologa hacia una forma ms irregular y aumenta su tamao. Tambin los ncleos celulares reflejan los cambios de la muerte celular, estos se tornan cada vez ms pequeos, picnticos, antes de convertirse en una figura fantasma o desaparecer dejando a este tipo celular como anucleado. Encontramos entonces, varios tipos celulares: Parabasales, Intermedias, Superficiales, Escamosas, Metaestrales y Espumosas. Intermedias

Superficiales nucleadas Superficiales Anucleadas o

Parabasales

El estudio del ciclo estral mediante el hisopado vaginal es un procedimiento antiguo pero an imbatible por costo, practicidad, tiempo y utilidad. De igual forma el hisopado vaginal nos da muchos ms alcances respecto al estado del tracto reproductivo pues puede determinar infecciones, inflamacin y neoplasia. Se sabe que un estudio vaginal bien realizado no es menos fiable que un dosaje de progesterona. Estoy seguro que muchos tienen preferencias por determinadas pruebas pero desde nuestra columna deseamos que todos los veterinarios de animales menores puedan realizar un examen citolgico del ciclo estral sin complicaciones en su propia clnica o consultorio.

Fig.1.1 Secuencia del correcto hisopado de la vagina en las perras. Ntese que el hisopo contacta la pared caudal dorsal de la vagina. TCNICA Se introduce un hisopo limpio y si es posible estril en la vagina de la perra asegurndose no tocar la vagina ventral, ms bien debe ser orientado hacia la vagina dorsal o caudal. Sobar la zona, retirar el hisopo y rodarlo sobre una lmina portaobjeto nueva y limpia. La tcnica de tincin es la misma que para cualquier otra muestra citolgica. Algunos prefieren humedecer el hisopo con solucin salina para favorecer la adherencia celular y hacer el proceso menos incmodo para el paciente. En mi experiencia cualquier tincin es buena para el estudio, desde las tinciones hematolgicas (Diff Quick, Wright), azul de toluidina, azul de metileno, papanicolau, Shorr, H y E, hasta la tinta China.

Fig.2 Tipos celulares epiteliales a reconocer durante un hisopado vaginal. Mnemotecnia PISA TIPOS CELULARES EPITELIALES No debemos olvidar que para evaluar el ciclo estral debemos evaluar exclusivamente clulas epiteliales. La presencia de eritrocitos y clulas inflamatorias son igualmente una gran ayuda. Las clulas epiteliales a evaluar son: * Clulas Basales * Clulas Parabasales * Clulas Intermedias * Clulas Superficiales Clulas Basales Las clulas Basales son las precursoras de las clulas parabasales caractersticas del periodo de Anestro. Muy rara vez pueden observarse en un estudio citolgico. Se aprecian como clulas casi redondas, pequeas, uniformes con poco citoplasma basoflico. Clulas Parabasales Las clulas parabasales son las clulas ms pequeas que se encuentran de manera rutinaria en un hisopado vaginal. Son de forma redondeada con un ncleo grande y una relacin ncleo:citoplasma alta. Son clulas de tamao uniforme que se observan en los periodos de proestro temprano, diestro y anestro. Se obtienen muchas sbanas de clulas en perras que no han llegado a la pubertad, no confundirlas con clulas neoplsicas. Clulas Intermedias Son clulas parabasales intermedias con un tamao mayor (muchas veces el doble) al de las clulas parabasales. Presentan un aumento en el tamao del citoplasma ms no del ncleo por lo que la relacin ncleo:citoplasma baja. El citoplasma puede tornarse de un azul grisceo plido con ligeras irregularidades por la keratinizacin temprana. ste proceso se hace ms evidente a medida que pasa el tiempo y se acerca el periodo estral. Tambin se les conoce como clulas transicionales o superficiales intermedias. Clulas superficiales Son clulas grandes con un ncleo pequeo que se ha reducido de tamao y a medida que siguen madurando lo pierden por completo. El citoplasma es amplio con muchas irregulairdades y dobleces. En su estado ms maduro presentan ausencia total de ncleo y es el estado mas tardo de las clulas epiteliales vaginales. Estados Citolgicos del Ciclo reproductivo de las Perras * Proestro

* Estro * Diestro * Anestro

Fig. 3 Imagen citolgica de proestro. Clulas epiteliales parabasales e intermedias en presencia de eritrocitos y algunos neutrfilos. Las clulas epiteliales comienzan a formar ngulos a medida que comienza la queratinizacin. Proestro El proestro esta relacionado con un aumento del nivel de estradiol en sangre y la maduracin folicular. El epitelio vaginal prolifera y se produce un escape de eritrocitos por diapedesis a travs de los capilares tisulares. Todos estos cambios originan una imagen citolgica caracterstica del proestro. Los principales componentes celulares son las clulas parabasales y clulas intermedias con escasas clulas superficiales. La presencia de eritrocitos nos brinda una referencia vaga, no es un requisito. El fondo donde descansan las clulas es de un azul tenue por exceso de mucus. Se observan neutrfilos en cantidad moderada. A medida que va madurando el proestro van disminuyendo los eritrocitos y los neutrfilos con el consiguiente aumento de las clulas superficiales. Dependiendo del porcentaje de clulas superficiales podemos segmentar el proestro en proestro temprano, proestro intermedio y proestro tardo. En los pacientes felinos, especficamente en el gato, la nica diferencia es la ausencia de eritrocitos y neutrfilos, las bacterias pueden estar presentes.

Fig. 4 Imagen caracterstica de estro. Las clulas epiteliales superficiales no presentan ncleo, hay presencia de bacterias y algunas clulas con ncleo picntico.

Anestro La observacin de frotis obtenidos en el anestro es relativamente constante. A una primera observacin se encuentran clulas parabasales e intermedias. Los glbulos rojos y las bacterias estn generalmente ausentes, y los neutrfilos pueden o no estar presentes. Proestro Para interpretar los resultados de la colpocitologa durante el proestro se debe dividir el mismo en tercios, proestro temprano, mitad del proestro y final del proestro. En el proestro temprano lo que se observa en el frotis sera similar a lo que se observa en el anestro. Pero, en general, el proestro temprano presenta una cantidad variable de glbulos rojos, una cantidad abundante de clulas parabasales y un porcentaje bajo de clulas intermedias y superficiales. Esto significa que las clulas intermedias, superficiales y escamosas oscilan entre 20-40 %. Puede dar una imagen "sucia" debido a la presencia secreciones vaginales o cervicales en pequeas cantidades. En la mitad del proestro, se refleja sobre el tracto genital, los primeros efectos de la presencia predominante de estrgenos en sangre. Incluye la desaparicin de los neutrfilos y la aparicin de abundante cantidad de glbulos rojos. Adems, las clulas superficiales comienzan predominar sobre las clulas parabasales e intermedias. Esto significa que las clulas superficiales y escamosas oscilan entre 40-60 %. En el final del proestro no se observa neutrfilos, pero hay una cantidad variable de glbulos rojos, y cambia la predominancia a clulas intermedias, superficiales y escamosas. Esto significa que las clulas superficiales y escamosas oscilan entre 60-80 %.
PROESTRO (Azul de Toluidina)

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Estro Una vez que comienza esta etapa, el frotis se convierte en una imagen relativamente constante, ya que las clulas que predominan, son las superficiales y escamosas, que se aproximan a un 100%. Los glbulos rojos pueden o no estar presentes, y en general los neutrfilos se encuentran ausentes. En las ltimas 24 horas del estro, se produce una cada dramtica de las clulas del epitelio observables encontrando un 20 % de clulas superficiales y escamosas anucleadas. Diestro El frotis obtenido de una perra en esta etapa, es claramente diferente a lo observado en el estro. El cambio es bien marcado y aparecen clulas que solo se observan en esta etapa. Pueden reaparecer los neutrfilos. Ocasionalmente aparecen clulas metaestrales que nos permiten identificar claramente la diferencia entre el inicio del proestro y el inicio del diestro. Las clulas metaestrales son clulas epiteliales vaginales "parabasales o intermedias" que en su citoplasma presentan incluidos uno o dos neutrfilos. Las clulas espumosas son clulas epiteliales vaginales que presentan un citoplasma espumoso o vacuolado. Las clulas epiteliales que predominan en esta etapa son las clulas intermedias y las clulas parabasales.
ESTRO:Comparacin de tamao de una celula superficial anucleada con un neutrfilo

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Ms del 90% de las clulas que se exfolian durante el estro son clulas superficiales y en algunas perras puede llegar al 100%. Los neutrfilos se muestran ausentes (su presencia indica inflamacin) y la presencia de eritrocitos es nula con frecuencia aunque se pueden presentar estros con eritrocitos en cantidad moderada. Como se mencion, las clulas superficiales son grandes, con ncleo picntico muy pequeo y en algunos casos ausente en el 100% de las clulas. El momento de mxima cornificacin clulas es variable. Puede suceder entre el da 06 antes del pico de LH o 03 das despus del pico de LH. El estro es el periodo de ovulacin y suele ocurrir en los das 1 al 3 despus del pico de LH. Se suele encontrar gran nmero de bacterias sobre las superficies de las clulas. El en promedio dura 09 das aunque hay reportes de 03 hasta 21 das. Cuando encontramos cambios citolgicos compatibles con estro en la perra podemos asumir que es un buen momento para realizar la cruza con el macho. Los felinos poseen un porcentaje menor de clulas superficiales durante el estro (40%-80%) con un porcentaje de hasta 40% de clulas superficiales totalmente anucleadas, los eritrocitos son ausentes.

Fig. 5 Diestro. Clulas epiteliales parabasales e intermedias. Las clulas presentan bordes ms redondeados, ncleo visible, presencia de eritrocitos y clulas epitelilales con neutrfilos en su interior (clulas metestrales). Diestro Comienza cuando nos percatamos que el nmero de clulas superficiales comienza a descender y las clulas parabasales e intermedias suben hasta un 50% de representatividad. Las clulas superficiales descienden en ms de 20%. Los neutrofilos suelen reaparecer luego de varios das de ausencia, igualmente puede aparecer eritrocitos. El diestro aparece en promedio a los 08 das luego del pico de LH. Es muy difcil diferenciar un PROESTRO de un DIESTRO citolgicamente. Se necesitan varias muestras y mucha informacin respecto del paciente, tamao de la vulva y percepcin macroscpica. Los felinos presentan un diestro con ausencia de eritrocitos, neutrfilos ausentes o en cantidad baja. Los cambios en las clulas epiteliales son similares en perras y gatas. Anestro

La imagen citolgica del anestro esta conformada por abundantes clulas parabasales e intermedias. Se pueden observar neutrfilos y bacterias. En la gata los neutrfilos estn ausentes, el resto de cambios son similares. * Juan Manuel Lajara Larrea. Director del Laboratorio Patolgico Veterinario San Isidro. Lima Per. Via: http://laboratoriosanisidro.blogspot.com/

Citologia vaginal en perras

Diagnstico del ciclo estral en la perra La citologa vaginal es un mtodo complementario econmico y de simple realizacin orientativa para determinar en que etapa del ciclo estral se encuentra una determinada perra. Esto permite emplear la inseminacin artificial precisando el momento ms adecuado para llevar a cabo dicha tcnica ya que la ovulacin ocurre al inicio del estro y por lo tanto, es importante identificar esta etapa. Tambin ayuda a detectar patologas del aparato reproductor femenino. Fundamento de la citologa vaginal El principio de la citologa vaginal exfoliativa se basa en determinar el tipo y cantidad de clulas de las diferentes etapas del ciclo estral ya que los cambios hormonales que sufre la mucosa vaginal durante el ciclo estral, se reflejan en la morfologa de sus clulas epiteliales. Al inicio del ciclo, la clula epitelial est en contacto con la irrigacin sangunea Conforme los niveles de estrgenos se incrementan el epitelio vaginal se va engrosando ocasionando que la clula epitelial se vaya separando del aporte sanguneo dando como resultado una transformacin celular que va de clula parabasal a clula anucleada o escama. Clasificacin de las clulas vaginales En cuanto al tipo de clulas vaginales estas se clasifican en: Clula parabasal: Es una clula de forma oval o redonda con ncleo aparente y pequea cantidad de citoplasma. Esta clula se desprende de la capa de clulas germinales cercana a los vasos sanguneos y predomina en el anestro y principios del proestro. Clula intermedia: Es una clula grande de bordes irregulares con ncleo ms pequeo o ms grande que la parabasal pero con mayor cantidad de citoplasma. La presencia de esta clula indica la etapa anterior a su transformacin a superficial, predomina a la mitad del proestro. Clula superficial: Es una clula de bordes angulosos, con ncleo de menor tamao que

las anteriores. Es caracterstica del final del proestro y todo el estro, que es cuando la vagina se encuentra bajo la influencia del pico estrognico. Clula anucleada: Tambin se le conoce como escama, es una clula, sin ncleo, de bordes angulosos e irregulares que predomina en el estro y marca el final del proceso de descamacin de la clula parabasal. Observacin e interpretacin de los resultados

La interpretacin de los extendidos se realiza de acuerdo al predominio de los distintos tipos celulares presentes, los cuales pueden ser orientativos de los diferentes momentos del ciclo estral canino. No obstante es imprescindible hacer un seguimiento de la evolucin del cuadro celular a travs del ciclo estral, ya que un preparado aislado podra resultar compatible con distintos momentos del ciclo estral de la perra. Proestro: se caracteriza por la presencia de neutrfilos, abundantes glbulos rojos, clulas intermedias grandes y pequeas y escasas clulas superficiales. En tanto que un frotis obtenido hacia el final del proestro se caracteriza por la disminucin del nmero de neutrfilos y predominio de clulas intermedias y superficiales. Los eritrocitos pueden ser abundantes o estar marcadamente disminuidos en el frotis vaginal. Estro: durante el no se observan neutrfilos, disminuyendo asimismo la cantidad de glbulos rojos, si bien debe tenerse en cuanta que en algunas perras pueden observarse glbulos rojos durante todo el estro y an en principios del diestro. Mas del 90% de las clulas observadas en un frotis de una hembra en estro son clulas superficiales anucleadas (queratinizadas) o con ncleo picntico. El fondo del frotis de una perra en estro es limpio y libre de detritus celulares. Cuando se realizan frotis seriados durante el estro, un cambio abrupto en el nmero relativo del tipo de clulas epiteliales marca el comienzo del diestro. Diestro: Durante dicho perodo el nmero de clulas superficiales disminuye mientras que las clulas parabasales e intermedias se incrementan marcadamente. Asimismo, en los 7 - 10 das iniciales del diestro reaparecen los neutrfilos en nmero variable, lo cual usualmente coincide con el incremento en el nmero de clulas parabasales e intermedias. Es importante reconocer como normal esta aparicin de neutrfilos en los extendidos de

diestro temprano a fin de diferenciarlo de posibles cuadros infecciosos. En algunas perras pueden no observarse los neutrfilos en frotis del diestro. Puesto que los glbulos rojos pueden presentarse en extendidos vaginales obtenidos durante principios del diestro, es imposible diferenciar el proestro del diestro basndose exclusivamente en la citologa vaginal. Anestro: se caracteriza por un predominio clulas parabasales y de clulas intermedias. Si bien pueden hallarse algunos neutrfilos, su nmero es muy inferior al observado durante el principio del diestro. Toma de muestras: Para tomar muestras para una citologa vaginal se recomienda el uso de guantes y se introduce un hisopo estril por la comisura dorsal de los labios vulvares (previa limpieza de estos). Se debe hacer suavemente hasta atravesar el cingulum (unin vestbulo vaginal) para llegar a la porcin caudal de la vagina, en la cual, mediante movimientos circulares del hisopo, se colectar el material celular. Hecho esto, se retira el hisopo y se hace un frotis por rodamiento en un cubreobjetos, se fija en alcohol al 95 % durante 5 a 10 minutos y se tie para observarla al microscopio. Existen tcnicas de tincin como la de Papanicolau, Diff-Quick, Giemsa, Wright y Shorr que pueden ser utilizadas para teir muestras de citologa vaginal Todas las tinciones para procesar las muestras pueden ser de utilidad. Sin embargo, el veterinario debe usar aquella tcnica que resulte prctica, barata, que no se deteriore al almacenar los frotis por mucho tiempo y que proporcione una buena observacin de la morfologa celular para llegar a un diagnstico efectivo.

CITOLOGA VAGINAL EXFOLIATIVA CUNDO Y PARA QU SIRVE? Vernica Garza Medina SERVICIO INTEGRAL VETERINARIO veropop7@ yahoo.com.mx 58 63 71 66 04455 10 04 10 55 Fundamento La toma de una citologa vaginal exfoliativa (CVE) es un procedimiento seguro, rpido, econmico y confiable. Conforme se adquiere experiencia, toda la tcnica, desde tomar la muestra, hasta su evaluacin, puede tardar no ms de diez minutos. Este procedimiento se basa en la obtencin de las clulas descamadas del epitelio vaginal para su estudio microscpico. Para una adecuada interpretacin es importante considerar que se deben observar detalladamente los siguientes criterios celulares: Forma y tamao de las clulas Forma y tamao de los ncleos Fondo de la laminilla Cuando es utilizada para determinar las etapas del ciclo estral, se debe observar el tipo y la cantidad de clulas presentes durante sus diferentes etapas, ya que la mucosa vaginal durante este periodo sufre muchas transformaciones debidas a los cambios hormonales: al inicio del ciclo, las clulas epiteliales estn en contacto con la irrigacin sangunea; conforme aumentan los estrgenos, el epitelio vaginal se va engrosando, lo que ocasiona que las clulas epiteliales se vayan separando del aporte sanguneo, lo que da como resultado una transformacin de clulas parabasales a clulas anucleadas. No obstante, es importante resaltar que la CVE tambin puede ser una valiosa y sencilla herramienta para diagnosticar: Vaginitis Pimetra Neoplasias (principalmente tumor venreo transmisible TVT) Gestacin, etc. Material necesario para la CVE Algodn Hisopos largos con punta de algodn y mango de plstico Portaobjetos Alcohol dcnica para obtener una CVE de buena calidad 1. Limpiar la vulva con un algodn humedecido con agua 2. Abrir un poco los labios vulvares con los dedos para introducir el hisopo por la comisura dorsal de stos. 3. | Introducir de verticalmente el hisopo hasta llegar al cingulum, que es un estrechamiento que une al vestbulo con la parte caudal de la vagina 4. Levantar la vulva y desplazar el hisopo horizontalmente hacia el interior de la vagina, lo ms profundo que se pueda. Consideraciones: El hisopo debe ser de mango de plstico largo, pues para alcanzar la vagina de la perra se tiene que recorrer una distancia larga y no se consigue hacerlo con los hisopos que se utilizan comnmente para la limpieza auricular. Tambin se debe corroborar que el algodn est bien adherido a la punta del hisopo para que no se desprenda en el interior de la vagina. 5. Hacer movimientos circulares de la mueca, con el fin de obtener una muestra de las paredes vaginales 6. Sacar el hisopo de la misma manera en que se introdujo. 7. Rodar el hisopo sobre una laminilla, tratando de que queden 3 lneas. 8. Fijar la laminilla en alcohol de 96 durante 10 minutos. 9. Teir con la tincin de eleccin. Clulas que se pueden observar en la CVE La vagina tiene un epitelio estratificado plano no queratinizado. Las clulas que lo forman desde la membrana basal hacia la superficie son: Clulas de reserva Clulas basales Clulas parabasales Clulas intermedias Clulas superficiales Clulas anucleadas Clulas basales Son pequeas redondas u ovales, de tamao uniforme, con ncleo evidente, central, de cromatina granular, y ocasionalmente se observa en mitosis. Su citoplasma es escaso. A partir de ellas se lleva a cabo la regeneracin del epitelio.

Se observan en casos de atrofia, vaginitis o en lceras en la mucosa. Clulas parabasales Son originadas en la capa profunda del epitelio escamoso estratificado, se encuentran cerca del aporte sanguneo, por lo que son las ms saludables y pequeas del epitelio vaginal, tienen forma redonda u oval. La cantidad de citoplasma vara segn el grado de maduracin, pero en general es escaso, y en l se pueden observar ocasionalmente vacuolas o glucgeno. Su ncleo es central, grande, redondo u oval y puede ocupar casi toda la superficie celular. La relacin ncleo citoplasma es equitativa. e 96 Tinciones Estas clulas se encuentran durante el proestro, diestro y anestro. Algunas veces, las clulas parabasales e intermedias contienen leucocitos en su interior y reciben el nombre de clulas del diestro. Se observan en diestros tempranos o en vaginitis. Clulas intermedias Las clulas intermedias son una transicin entre las parabasales y las superficiales. Tienen contornos bien definidos y forma poligonal con bordes irregulares, ovales a redondeados y doblados. Su ncleo es ms pequeo y vesiculado con mayor cantidad de citoplasma. Se presentan en el proestro y diestro. Las clulas intermedias, bajo la influencia hormonal de progesterona, pueden sufrir cambios morfolgicos y reciben el nombre de: Clulas naviculares: Son alargadas con forma de bote o barco. Tienen importancia en la citologa de hembras preadas donde adems tienen gran cantidad de glucgeno. Clulas de metaestro o espumosas: Son clulas intermedias que pueden tener en su citoplasma vacuolas o leucocitos polimorfonucleares. Clulas superficiales Provienen de la capa madura ms externa del epitelio escamoso estratificado. Son clulas muertas, sin irrigacin, se observan solas, tienen forma poligonal con bordes citoplasmticos angulosos y doblados. Su citoplasma es delgado, traslcido, sin vacuolas. La relacin ncleo citoplasma es de aproximadamente 20:80. Su ncleo se encuentra en posicin central, es muy pequeo y picntico, propio de actividad estrognica, por lo que estas clulas son observadas durante el estro. En su citoplasma se pueden encontrar pequeos grnulos lipdico, perinucleares o perifricos, estrgeno-dependientes. Clulas anucleadas o escamas: Estas clulas estn muertas debido al proceso de engrosamiento del epitelio vaginal en respuesta al aumento de las concentraciones sricas de los estrgenos y por lo tanto, carecen de ncleo, son clulas grandes, de bordes irregulares y angulosos. Representan la etapa final de la maduracin del epitelio vaginal y por ende, son producto de un proceso que empez con las clulas parabasales, redondas y saludables. Clulas endocervicales Son clulas cilndricas, ciliadas, con citoplasma finamente vacuolado; ncleo basal, y uno o dos nucleolos pequeos. Se pueden ver aisladas o en grupos. Suelen verse en los frotis de procesos inflamatorios, de metaplasia y displasia y en atrofia