Identificación de especies de Aspergillus

spp.por métodos microbiológicos y

espectrometría de masas
 Diagnóstico de Aspergilosis
• Genero Apergillus, de distribución universal, lo encontramos en suelo, aire, plantas, materia
orgánica en descomposición etc. son inhalados constantemente y la inmunidad innata es
suficiente para eliminarlos.
• Los cuadros clínicos: Aspergilosis invasora, Aspergilosis cavidades y aspergilosis
brocopulmonar, siendo la aspergilosis invasora es una enfermedad grave que afecta a
pacientes inmunocomprometidos, provocando mortalidad elevada, hasta 90%
• Si bien existen más de 400 especies de Aspergillus
• El Aspergillus fumigatus es la mayor frecuencia se relaciona con aspergilosis pulmonar, ya que
tiene conidios de pequeño tamaño (2-6 μm) que pueden sobrepasar con mayor facilidad el
epitelio ciliado y llegar a los alvéolos, mientras que el Aspergillus flavus, que tiene conidios de
mayor tamaño, se vincula más frecuentemente con patología de los senos paranasales.
 Diagnóstico de Aspergilosis
 Las especies del género Aspergillus son ascomicetes
 En el año 2020 , en la revista Studies in Mycology 95: 5-69. 202 J. Houbraken, et
col, se realizó un estudio de los géneros Aspergillus, Penicillium, Taralomyces
entre otros
 Se hizo una clasificación basándose en estudios filogenéticos de 9 genes
diferentes.
 Del cual se propone para en género Aspergillus 27 secciones y 447 especies
 Diagnóstico de Aspergilosis
Muestras biológicas
• Sangre
• Lavado broncoalveolar
• Biopsias
• Suero
Las biopsias, una parte transportar en solución salina estéril para el
estudio microbiológico y la otra en formol al 10% para el estudio
histopatológico
Las muestras biológicas para el estudio microbiológico se deben
procesar de inmediato
Diagnóstico:
Diagnóstico Microbiológico
Muestra biológica

Examen directo KOH 10% Cultivo: sembrar en Agar Sabouraud Glucosado,

Agar Infusión Cerebro corazón

Hifas hialina
septadas
dicotómicas Evaluación periódica
Forman ángulo
de 45ºC Observar las características
macroscópica y microscópicas

40x

Se caracteriza con ayuda de las

10x claves taxonómicas
Evaluación Macroscópica

Consideraciones a tener encueta :

 Aspecto de la colonia
 Color anverso
 Color reverso
 Velocidad de crecimiento
 Pigmentos
Pruebas de identificación : Evaluación Microscópica

Compuesto por

 Célula pie
 Estípite o conidióforo
 Vesícula o cabezuela
 Métula
 Fiálide
 Conidios
 Algunas presenta célula de Hülle
 Las cabezas conidiales con cuatro
formas básicas: globosa, radiada,
columnar o claviforme.
 Pruebas de identificación : Evaluación Microscópica
(C)
Vesícula o cabezuela:
(A)Globosa
(B)Hemisferica
(C)Columnar
(A)Globosa
(D)Calviforme Aspergillus fumigatus Aspergillus lentullus

(D)

(B)

Aspergillus clavatus

Aspergillus flavus
Pruebas de identificación :
Evaluación Microscópica
 Estípite o conidióforo

Conidióforo rugoso
Conidióforo liso

 Fiálide.-Célula conidiogenica
 Métula.-Estructura unicelular que
se encuentra entre la fiálide y la
vesícula
 Pruebas de identificación :
Evaluación Microscópica

Células de Hülle:
Son estructuras
especilizadas que se pueden
observar en diferentes
especies fúngicas.
Presentan paredes gruesa

Aspergillus nidulans
 Aspergillus fumigatus

• Las colonias de crecimiento rápido

• Al inicio algodonosas que rápidamente
adquieren apariencia pulverulenta
• Color azul verdoso o grisáceo. Conidias Pared rugosa o lisa
• Cabezuelas columnares típicas.
• Los conidióforos cortos, de pared lisa
• Las fialides, uniseriadas, cubren dos
tercios superiores de de la vesicula.
• Las conidias de forma globosa a
subglobosa, de pared rugosa
(equinulada)de color verde,
 Aspergillus flavus
• Colonias al inicio presenta micelio blanco
algodonoso de crecimiento rápido que en poco
tiempo adquiere la coloración verde-amarillenta
y una textura pulverulenta gruesa.
• Cabezas conidiales uniseriadas y biseriadas,
principalmente radiales
• Estipes normalmente rugosos, hialinos o de
color marrón pálido.
• Vesícula esférica;
• Métulas ocupan toda la superficie de la vesícula.
• Conidios globosos o elipsoidales, lisos o
ligeramente rugosos.
 Aspergillus terreus
• Colonias de color marrón canela o marrón
amarillento, reverso amarillo, dorado o
marrón.
• Colonia aterciopelada, lanosa en la zona
central, plana o con surcos radiales.
• Cabezas conidiales biseriadas, en columna
• Estipes de pared lisa, hialinos.
• Vesículas de forma variable, esférica o
subglobosa
• Métulas ocupando la mitad o dos tercios
de la vesícula.
• Conidios lisos, globosos o subglobosos.
Aspergillus niger
• Las colonias de rápido crecimiento, al inicio
blanco luego de color negro o marrón muy
oscuro; reverso incoloro a amarillo
• Cabezuelas son grandes, de color café
oscuro, biseriadas con métula y fiálides de
color marrón oscuro que cubren toda la
vesícula dando la forma radiada típica.
• Los conidióforos largos, pared lisa y oscura.
• Las conidias son globosas a subglobosas,
de color marrón oscuro a negro y de
paredes rugosas con crestas irregulares y
protuberancias
 Aspergillus section fumigati
• Agrupa a 59 especies como:
A. fumigatus, A. lentulus, A.
udagawae, A. felis, A. hiratsukae,
A.fumigatiaffinis, A.fisheri.
• Es termófila A. fumigatus crece a 50°C.
• CIM elevada anphotericina y azoles
• Colonias de color verde azulado oscura
• Estípite hialina de pared lisa
• Vesícula de clava ancha
• Cabeza uniserida columnares
• Conidio con rufgocidad fina, hialinas
subesféricos
 Aspergillus section fumigati
• Agrupa a 59 especies como:
A. fumigatus, A. lentulus, A.
udagawae, A. felis, A. hiratsukae,
A.fumigatiaffinis, A.fisheri.
• Es termófila A. fumigatus crece a 50°C.
• CIM elevada anphotericina y azoles
• Colonias de color verde azulado oscura
• Estípite hialina de pared lisa
• Vesícula de clava ancha
• Cabeza uniserida columnares
• Conidio con rufgocidad fina, hialinas
subesféricos
 Aspergillus section flavi
• Agrupa a 35 especies como: A.
flavus, A. parasiticus, A. tamarii, A.
nominus, A orizae A. sojae, A.
pseudonomio.
• Colonias pulvurulentas al inicio las
colonias son blancas y luego verde
amarillentas.
• Reverso incoloro a amarillo a
marrón rojizo
• Estípite hialino con paredes
finamente rugosa.
• Cabeza aspergilar uniseriada o
biseriada
• Conidios subesféricos finamente
equinulada
 Aspergillus section nigri
• Agrupa a 29 especies como: A.
niger, , A. carbonarius, A
brasiliensis, A. tubingensis, A.
japonicus
• Colonias de color de marron a
negro
• Estípite hialina de pared lisa
• Vesícula subesferica
• Cabeza biserida radiada
• Conidios subesfericos
pigmentados finamente
ornamentados
 Aspergillus section terrei
• Agrupa a 17 especies como: A.
terreus, A. alabamensis,
A.citrinoterreus A. hortae, A.
pseudoterreus.
• Colonias de color de marrón
amarillento a canela
• Estípite hialina de pared lisa
• Cabeza biserida columnares
• Conidio hialinos esféricos a
elipsoidales
• CIM elevada para anphotericina
B y algunos azoles
• Prepara el gel de agarosa
• Repartir aproximadamente 3 mL en lámina portaobjeto.
• Realizar pozos equidistantes con respecto al pozo central y
añadir 8 mL de cada insumo, según diagrama.
 ESPECTOMETRIA DE MASAS (MALDI-TOF)
Es una técnica de
determinación estructural
que permite estudiar la
distribución de las
moléculas de una sustancia
en función de su masa
Consta de 3 elementos
• Fue desarrollada en 1987 por Koichi ■ La fuente de ionización, laser ultravioleta
Tanaka que produce la desorción e ionización
■ El analizador, separa los iones
procedentes de la muestra en relación
con su ratio masa/ carga.
■ El detector, recoge la información del
tiempo de vuelo de un ion al alcanzarlo y
lo representa en una grafica.
ESPECTOMETRIA DE MASAS (MALDI-TOF)
Identificación directa
(levaduras) y método
de extracción
proteica (hongos
filamentosos)
ESPECTOMETRIA DE MASAS (MALDI-TOF)
ESPECTOMETRIA DE MASAS (MALDI-TOF)
 PROPUESTA DE ESTUDIO MOLECULAR
PARA IDENTIFICACIÓN DE Aspergillus sp y Aspergillus fumigatus
GRACIAS-
email: furcia@ins.gob.pe