TÉCNICAS DE ESTUDIO CELULAR

KATYA TELLO BUENROSTRO 21121050

REFERENCIAS:
• Lodish, H. (2005). Biología celular y molecular. Ed. Médica Panamericana.
• Karp, Gerald. Biología Celular y Molecular. 1a edición. Ed. Mc Graw-Hill
• Alberts y cols. Biología molecular de la célula. 4a edición. Ed. Omega
• McGraw Hill MedicalError. (s. f.). https://accessmedicina.mhmedical.com/content.aspx?bookid=2214

CONCLUSIONES:
Existen diversos métodos para el studio de células, algunos con cosas en común y algunos otros relacionados entre sí para poder lograr un buen
análisis, cada una de estas técnicas tiene una metodología compleja y bien organizada. Algunas de las técnicas tienen varios años de descrubimiento
sin emabargo cada vez se van aportando cosas nuevas para el mejoramiento de la técnica. Las técnicas inestigadas no solo sirven en un campo,
sirven para realizar análisis en diversos campos las más importantes son: medicina, bioquímica, biología, microbiología.

TE# CNICA
DE DESCRIPCIO# N PARA QUE# SIRVE IMA# GENES
ESTUDIO
MICROSCOPIO ÓPTICO
Es ideal para usarse en la
observación de contornos,
bordes, fronteras, pero no brinda
mucha información sobre las
Técnica de contraste donde estructuras internas. Observar
solo la luz difractada desde el células no teñidas, útiles en
espécimen se usa para formar hematología para analizar la
Campo oscuro
la imagen, el espécimen sangre, observar minerales,
aparece brillante en un fondo cristales químicos, partículas
oscuro. coloidales, cerámicas, estudio de
células en acción y movimientos
implicados en el proceso de
mitosis y migración celular.

Permite visualizar muestras

En histología se usa para la
teñidas o con pigmentos
observación de cortes
naturales que resultan
histológicos finos, en
altamente contrastadas. La
inmunología sirve para la
fuente de iluminación es la luz
observación de reacciones de
Campo claro blanca. Los componentes de la
floculación y aglutinación, en
muestra se visualizan gracias a
hematología para el análisis de
las diferencias de contraste que
los frotis sanguíneos, contaje de
existen entre ellos y el medio
glóbulos rojos, leucocitos.
que los rodea.
 Permite la observación de
moléculas específicas llamadas
fluoróforos, estos absorben
fotones y liberan parte de la
energía en una longitud de
onda más larga. La fuente de
Detectar específicamente
luz en este tipo de
proteínas u otras moléculas en
microscopios, produce un haz
tejidos y células, también se
de luz que viaja a través de un
puede usar para localizar las
filtro el cual bloquea todas las
moléculas de ADN y RNA que
longitudes de onda
contienen secuencias de
Fluorescencia exceptuando aquellas que
nucleótidos específicas de igual
pueden excitar el fluoróforos, el
forma se ha usado para estudiar
haz de luz monocromático
los tamaños de las moléculas que
enfoca en la muestra, el cual se
pueden atravesar las células.
excita y emite una longitud en
el espectro visible enfocada por
el lente objetivo en una imagen
la cual puede ser vista desde
un dispositivo de carga
acoplada.

Emplea filtros polarizantes y

primas para producir imágenes
tridimensionales, se Estudio de células vivas, sin
caracteriza por tener buena tinción, especímenes un tanto
Interferencia resolución y contraste, que gruesos que no permiten el uso
de Normaski ayuda a identifican tanto de contraste de fases, utilizado
estructuras internas como también en la realización de
externas, permite obtener fertilización in-vitro.
imágenes de colores brillantes
sin necesidad de aplicar
tinción, ni de preparación de
muestras.
 MICROSCOPIO ELECTRÓNICO
Utiliza los electrones
dispersados o emitidos a partir
de la superficie de la muestra,
la muestra a estudiar se fija, se
seca y se cubre con una capa
delgada de un metal pesado,
posteriormente la muestra se
De barrido barre por un haz focalizado de
electrones, la cantidad de estos
es medido y utilizado para
controlar la intensidad del
segundo haz, que se mueve en
sincronía con el primero para
poder mostrar la imagen en
una televisión.
Proporcionan mejor resolución
que los microscopios de luz,
forman imágenes que usan
De
electrones que se trasmiten a
transmisión
través de una muestra.
Estudia células enteras o tejidos
y no organelos celulares, permite
observar la estructura externa de
la célula y todos los diversos
procesos, las extensiones y los
materiales extracelulares que
interactúan con el ambiente, se
permite tener una visión
tridimensional.
Se puede observar
macromoléculas individuales, se
puede determinar la morfología:
forma dimensiones y posición de
microcristales o partículas
observadas en la muestra; la
cristalografía: posición de los
planos cristalinos, estudio de los
defectos, así como la composición
química del material.
 CULTIVOS CELULARES

Cultivar células fuera de un

organismo, uno de los objetivos
de esta técnica es desarrollar
Pueden usarse para diagnosticar
medios definidos libres de
infecciones, para probar
suero que respalden el
medicamentos nuevos y para la
crecimiento de las células,
investigación. Los cultivos
teniendo un enfoque práctico
celulares son esenciales en la
en probar diversos ingredientes
investigación científica, ya que
para determinar su capacidad
Cul9vos permiten estudiar los procesos
para determinar su crecimiento
celulares que ocurren en las células, y en
y la proliferación celular. En
diversas aplicaciones de la
condiciones nutritivas y
biotecnología, como la
ambientales adecuadas se
producción de moléculas de
estudio de la estructura y
interés industrial, ingeniería de
comportamiento de las células
tejidos.
vivientes. Existes varios tipos
de cultivos como lo son el
cultivo primario, cultivos
secundarios líneas celulares.

TÉCNICAS DE DISGREGACIÓN DE TEJIDOS, FRACCIONAMIENTO CELULAR

Las células pueden someterse a
shock osmótico o a vibraciones
ultrasónicas, pueden hacerse Permite entender el
pasar a través de un pequeño funcionamiento de la célula
orificio o pueden molerse. Este gracias al estudio de sus partes y
Técnicas de tipo de procedimientos rompen la manera en la que esta
separación de muchas de las membranas de reacciona, localización de
células la célula, como la plasmática y actividades enzimáticas,
las de los retículos proporciona información acerca
endoplásmicos y los de la organización estructural y
fragmentos se unen funcional de la célula.
inmediatamente formando
pequeñas vesículas cerradas.
 Las células primero se rompen, se
homogeneizan con una solución
Los organelos aislados mediante
isotónica que impide el
esta técnica pueden usarse en
rompimiento de las vesículas de la
sistemas libres de células para
membrana, se somete a una serie
estudiar una amplia variedad de
de centrifugaciones. Si se
Organelos actividades celulares, como la
centrifuga a bajas fuerzas solo los
celulares síntesis de proteínas unidas a la
organelos más grandes como los
membrana, la formación de
núcleos se sedimentan, a mayores
vesículas de transporte, la síntesis
fuerzas, los organelos
de DNA, transporte de solutos y
citoplasmáticos pueden ser
desarrollo de los gradientes iónicos.
expulsados de la suspensión.

TÉCNICAS DE SEPARACIÓN DE MACROMOLÉCULAS

Cromatografía de partición:
generalmente una gota se
aplica como una mancha en un
Técnica usada para el
material absorbente,
fraccionamiento de proteínas,
posteriormente se deja que una
separa pequeños como azúcares
mezcla de disolventes,
y aminoácidos, determinar
Cromatogra?a impregne la hoja desde uno de
tamaño de las moléculas. Se
sus extremos, a medida que el
puede usar cromatografía de
líquido se va desplazando en la
afinidad para retirar una sola
hoja, se van separando las
proteína de un conjunto de estas.
moléculas de la muestra en
función de la solubilidad

Inicialmente se utilizó para

separar mezclas de proteínas
tanto libres en soluciones
Las proteínas suelen tener una
acuosas como incluidas en una
carga neta negativa o positiva,
matriz sólida porosa como el
en que cual refleja la carga de
almidón, análisis rutinarios de
los aminoácidos que contienen,
las proteínas, como matriz inerte
al aplicarse un campo eléctrico
Electroforesis a través de la que migran las
a una solución que contenga
proteínas. Puede usarse para
una molécula proteica, la
todo tipo de proteínas, insolubles
proteína migrará a la velocidad
en agua, de membrana, entre
de su carga neta, su tamaño y
otras.
su forma.
 MÉTODOS DE DETERMINACIÓN DE CONFORMACIÓN MOLECULAR
Haz estrecho y paralelo de
rayos X a una muestra de una
proteína pura, la mayoría de
los rayos X pasarán a través,
sin embargo, una pequeña
fracción de estos serán Principal técnica utilizada para
dispersados por los átomos de determinar la estructura
la muestra. Si la muestra es un tridimensional de las moléculas,
cristal bien ordenado, los haces incluidas las proteínas a nivel
se reforzarán unos con otros y atómico. A partir de la secuencia
Cristalogra?a
se mostrarán como manchas de aminoácidos de una proteína
de rayos X
de difracción cuando los rayos generalmente pueden predecirse
X sean analizador por el los elementos de la estructura
detector. La posición e secundaria de la proteína, como
intensidad de cada mancha en las hélices que atraviesan la
el patrón de difracción de rayos membrana, así como el parecido
X brinda información acerca de de una proteína con otra ya
la posición de los átomos, el conocida.
producto inmediato de esta
técnica es un complejo mapa
tridimensional de densidades
electrónicas.

Analizar la estructura de las

Se requiere de un volumen pequeñas moléculas y estudiar la
pequeño de una solución estructura de pequeñas
proteica concentrada, la cual proteínas o de dominios
se coloca en un fuerte campo proteicos. Distingue señales
magnético. procedentes de los núcleos de H
Algunos núcleos atómicos de diferentes residuos de
como los de H, tienen un aminoácidos e identifica y mide
RMN momento magnético o espín, los pequeños cambios de las
este se alinea en el interior de señales cuando los núcleos se
un fuerte campo magnético, acercan para interactuar entre sí,
pero puede variarse a un de esta manera esta técnica
estado semialineado por medio puede aportar información sobre
de excitación, cuando los las distancias entre las zonas de
núcleos se relajan emiten la molécula de proteína, es
radiación RF la cual puede ser posible describir la estructura
medida y expresada en forma tridimensional de esta.
de espectro
 MARCAJE DE MOLÉCULAS
La manera más sencilla de Los anticuerpos marcados con
preparar anticuerpos es colorantes fluorescentes ayudan
inyectando varias veces una a localizar en las células
muestra de un antígeno a un determinadas moléculas
animal, como un conejo o una mediante microscopia de
cabra, y luego recogiendo suero fluorescencia, marcados con
rico en anticuerpo. Este partículas densas a los
contiene una mezcla electrones, se utilizan para
heterogénea de anticuerpos, localizar con una alta resolución
cada uno de los cuales ha sido moléculas determinadas. Como
producido por una célula herramientas biológicas se
secretora de anticuerpos utilizan para detectar y
diferente. Los diferentes cuantificar moléculas en
anticuerpos reconocen extractos celulares y para
An9cuerpos
diversas zonas de la molécula identificar proteínas
de antígeno y también determinadas, después de que
impurezas de la preparación de éstas hayan sido aisladas por
antígeno que se inyectó. electroforesis. Los anticuerpos se
Algunas veces, la especificidad pueden acoplar a una matriz
de un antisuero por un inerte con el fin de formar una
antígeno determinado puede columna de afinidad, la cual se
aumentarse eliminando las utiliza para purificar
moléculas de anticuerpo que se macromoléculas específicas a
unen a otras moléculas. partir de un extracto celular, o en
el caso de que la molécula se
halle en la superficie de la célula,
para seleccionar tipos
determinados de células vivas a
partir de una población
heterogénea.
Las moléculas radiactivas pueden
ser utilizadas para seguir el curso de
casi todos los procesos celulares,
Un funcionamiento típico de esta mostrar el camino seguido por las
técnica consiste en añadir a las proteínas desde el RE hasta el
células un precursor en su forma exterior celular, diferenciar
radiactiva, las moléculas moléculas que son químicamente
Radioac'vidad radiactivas se mezclaran con las idénticas pero que tienen historias
moléculas no marcadas, ambos diferentes, localización por
tipos de moléculas será tratados autorradiografía de compuestos
de forma similar por la célula ya radiactivos en secciones de células
que solo tienen distinto peso de su enteras o de tejidos.
núcleo atómico.