UNIVERSIDAD MICHOACANA DE SAN

NICOLÁS DE HIDALGO

FACULTAD DE QUÍMICO FARMACOBIOLOGÍA

LABORATORIO DE FARMACIA II

PRÁCTICA No. 10

VARIACIÓN INDIVIDUAL A FÁRMACOS

DETERMINACIÓN DE LA DOSIS LETAL MEDIA (DL50)

DOSIS EFECTIVA MEDIA (DE50)

MARGEN DE SEGURIDAD

PROFESOR TITULAR:

D.C. ALONDRA ALELIE CORTÉS TÉLLEZ

PROFESOR DE LABORATORIO:

MICCF. ELVIRA RAMOS LÓPEZ

SECCIÓN: 07 SEMESTRE: 7
EQUIPO:08
BERMUDEZ MANDUJANO JUAN DIEGO
ESQUIVEL VANEGAS ESTEYSI

GUEVARA MONDRAGON BRAYAN

CEJA ZIRANDA TS`IUERITI DAVID

CICLO ESCOLAR: 2023 – 2024

FECHA DE REALIZACIÓN DE LA PRÁCTICA: 25/10/2023 FECHA DE ENTREGA DE LA PRÁCTICA: 01/11/2023

MORELIA, MICHOACÁN
 Cálculos y resultados.
Al inicio de la práctica se nos entregaron 4 ratones macho de la caja 5 para realizar el método de
marcaje, en este caso el de manchado.

Tabla 10.1.- Marcaje y peso de los ratones.

Clave Peso (g)
ECV 29.122
BCV 22.871
LOV 25.836

Tabla 10.2.- Clave, peso y dosis de pentobarbital en microgramos para cada ratón.
Clave Peso (g) Dosis (mg)
ECV 29.122 2.18415
BCV 22.871 0.0960582
LOV 25.836 0.4598808

Cálculos para la obtención de la dosis en miligramos de pentobarbital sódico que se le administro a cada
ratón del equipo 8.

• Ratón ECV.
-Peso: 29.122g
-75mg de pentobarbital sódico por cada kilogramo (1000g) de peso corporal.

(29.122𝑔)(75𝑚𝑔) 2184.15𝑔. 𝑚𝑔
== 2.18415𝑚𝑔
1000𝑔 1000𝑔
• Ratón BCV.
-Peso: 22.871g
-4.2mg de pentobarbital sódico por cada kilogramo (1000g) de peso corporal.

(22.871𝑔)(4.2𝑚𝑔) 96.0582𝑔. 𝑚𝑔
== 0.0960582𝑚𝑔
1000𝑔 1000𝑔
• Ratón LOV.
-Peso: 25.836g
-17.8mg de pentobarbital sódico por cada kilogramo (1000g) de peso corporal.

(25.836𝑔)(17.8𝑚𝑔) 459.8808𝑔. 𝑚𝑔
= = 0.4598808𝑚𝑔
1000𝑔 1000𝑔

Tabla 10.3.- Clave, peso y dosis de pentobarbital en solución para cada ratón.
Clave Peso (g) Dosis (ml)
ECV 29.122 0.29122
BCV 22.871 0.22871
 LOV 25.836 0.25836

Conversión de la dosis en miligramos a mililitros de pentobarbital sódico.

• Ratón ECV.
-2.18415mg
-7.5 mg de pentobarbital sódico por cada mililitro en solución.
(2.18415𝑚𝑔)(1𝑚𝑙) 2.18415𝑚𝑔. 𝑚𝑙
== 0.29122𝑚𝑙
7.5𝑚𝑔 7.5𝑚𝑔
• Ratón BCV.
-0.0960582mg
-0.42 mg de pentobarbital sódico por cada mililitro en solución.
(0.0960582𝑚𝑔)(1𝑚𝑙) 0.0960582𝑚𝑔. 𝑚𝑙
== 0.22871𝑚𝑙
0.42𝑚𝑔 0.42𝑚𝑔
• Ratón LOV.
-0.4598808mg
-1.78 mg de pentobarbital sódico por cada mililitro en solución.
(0.4598808𝑚𝑔)(1𝑚𝑙) 0.4598808𝑚𝑔. 𝑚𝑙
== 0.25836𝑚𝑙
1.78𝑚𝑔 1.78𝑚𝑔

Tabla 10.4.- Clave, peso y dosis de pentobarbital de los ratones administrados por el equipo 8.
Clave Peso (g) Dosis administrada (U)
ECV 29.122 29
BCV 22.871 23
LOV 25.836 26

Conversión de mililitros de solución de pentobarbital en mililitros a unidades de insulina (U).

• Ratón ECV.
-0.29122ml
-1 mililitro de pentobarbital sódico corresponde a 100 unidades.
(0.29122𝑚𝑙)(100𝑈) 29.122𝑚𝑙. 𝑈
== 29.122𝑈 = 29𝑈
1𝑚𝑙 1𝑚𝑙
• Ratón BCV.
-0.22871ml
-1 mililitro de pentobarbital sódico corresponde a 100 unidades.
(0.22871𝑚𝑙)(100𝑈) 22.871𝑚𝑙. 𝑈
= = 22.871𝑈 = 22 U
23𝑈 1𝑚𝑙 1𝑚𝑙

• Ratón LOV.
 -0.25836ml
-1 mililitro de pentobarbital sódico corresponde a 100 unidades.
(0.25836𝑚𝑙)(100𝑈) 25.836𝑚𝑙. 𝑈 25 U
= = 25.836𝑈 =
26𝑈 1𝑚𝑙 1𝑚𝑙

Tabla 10.5.- Efectos del pentobarbital en los ratones administrados por el equipo 8.
Pentobarbital Respuesta

Dosis Solución administrada

Sedación Hipnosis Muerte
(mg/kg) (mg/ml)
4.2 0.42 - - -
17.8 1.78 - - -
75 7.5 + + -

Tabla 10.6.- Respuesta porcentual de los ratones al pentobarbital administrado.

Pentobarbital Respuesta

Dosis Solución administrada

Sedación Hipnosis Muerte
(mg/kg) (mg/ml)
--+-+----- ---------- ----------
4.2 0.42
20% 0% 2.5% 0% 2.5%
+++++++-++ -------+-- ----------
17.8 1.78
90% 10% 0% 2.5%
++++++++++ ++++++++++ --------+-
75 7.5
100% 97.5% 100% 97.5% 0% 10%
++++++++++ ++++++++++ ++++++++++
315 31.5
100% 97.5% 100% 97.5% 100% 97.5%

Cálculos para obtener los porcentajes.

Formula.
𝑛
∗ 100 = %
𝑛𝑡
Donde.

𝑛: número de individuos
𝑛𝑡: número total de individuos

Sustitución de la formula.

20% 0% 90%

10% 100%

Corrección de los porcentajes.

Al corregir los porcentajes solo se corrigieron los de 0% y 100%, debido a que la grafica a utilizar era
logarítmica.

Formulas. Sustitución de las fórmulas.

5%
𝑛

𝑛−0.25
100% = ∗ 100 %
𝑛

Donde.

𝑛: número de individuos

Grafica 10.1.- Dosis administradas versus el porcentaje (%) de respuesta de los ratones macho (sedación,
hipnosis y muerte).
𝐷𝐸50 𝑆 = 10𝑚𝑔/𝑘𝑔 𝐷𝐸50 𝐻 = 44𝑚𝑔/𝑘𝑔 𝐷𝐿50 = 186𝑚𝑔/𝑘

Cálculos para la determinación de los márgenes de seguridad (MS).

Formula.

𝐷𝐿50
𝑀𝑆 =
𝐷𝐸50
 Sustitución de la formula.

Margen de seguridad para la sedación.

186𝑚𝑔/𝑘𝑔
𝑀𝑆𝑆 = 10 𝑚𝑔/𝑘𝑔0=18.6

Margen de seguridad para la Hipnosis.

186𝑚𝑔/𝑘𝑔
𝑀𝑆𝐻 = = 4.23
44𝑚𝑔/𝑘𝑔

Grafica 10.2.- Sigmoides de dosis administradas versus el porcentaje (%) de respuesta de los ratones
macho (sedación, hipnosis y muerte).

𝐷𝐸50 𝑆 = 7.5𝑚𝑔/𝑘𝑔 𝐷𝐸50 𝐻 = 34𝑚𝑔/𝑘𝑔 𝐷𝐿50 = 145mg/kg

Cálculos para la determinación de los márgenes de seguridad (MS).

Formula.

𝐷𝐿50
𝑀𝑆 =
𝐷𝐸50

Margen de seguridad para la sedación.

145𝑚𝑔/𝑘𝑔
𝑀𝑆𝑆 = 7 .5𝑚𝑔/𝑘𝑔0=19.333

Margen de seguridad para la Hipnosis.

145𝑚𝑔/𝑘𝑔
 𝑀𝑆𝐻 = 34𝑚𝑔/𝑘𝑔 =4.265

Tabla 10.7.- Respuesta de los ratones al pentobarbital administrado.

Pentobarbital Respuesta

Dosis Solución administrada

Sedación Hipnosis Muerte
(mg/kg) (mg/ml)

4.2 0.42
--+-+----- ---------- ----------
4.158UP 3.0325UP 3.0325UP

17.8 1.78
+++++++-++ -------+-- ----------
6.282UP 3.718UP 3.0325UP

75 7.5
++++++++++ ++++++++++ --------+-
6.960UP 6.960UP 3.718UP

315 31.5
++++++++++ ++++++++++ ++++++++++
6.960UP 6.960UP 6.960UP

Conversión de los porcentajes de respuesta a unidades de probabilidad (Probitas) UP.

Para realizar las conversiones se usó la tabla 10.8

• 20% = 4.158𝑈𝑃
• 90% = 6.282𝑈𝑃
• 97.5% = 6.90𝑈𝑃
• 10% = 3.718𝑈𝑃

• 2.5%
2%=2.946
3%=3.119
0.
∆= 3.119 − 2.946 = 0.173 = 0.0173 (0.0173)(5) = 0.0865
2.946 + 0.0865 = 3.0325

Tabla 10.8.- Tabla de conversiones de porcentaje en unidades de probabilidad (Probitas).

Grafica 10.3.- Sigmoides de dosis administradas versus unidades de probabilidad estadística (Probitas) de
respuesta de los ratones macho (sedación, hipnosis y muerte).

𝐷𝐸50 𝑆 = 7.5𝑚𝑔/𝑘𝑔 𝐷𝐸50 𝐻 = 33𝑚𝑔/𝑘𝑔 𝐷𝐿50 = 135𝑚𝑔/𝑘𝑔

Cálculos para la determinación de los márgenes de seguridad (MS).

Formula.

𝐷𝐿50
𝑀𝑆 =
𝐷𝐸50

Margen de seguridad para la sedación.

𝑆
135𝑚𝑔/𝑘𝑔 𝑀𝑆
=7
.5𝑚𝑔/𝑘𝑔0=18

Margen de seguridad para la Hipnosis.

135𝑚𝑔/𝑘𝑔
𝑀𝑆𝐻 = 33𝑚𝑔/𝑘𝑔 =4.091
 Discusión de resultados.
El ratón sigue siendo el animal más difícil para el logro de una verdadera sedación o hipnosis sin que se
produzca la muerte. Además de las sobredosis, quizás las causas más comunes de los fallos sean una
excesiva pérdida de calor y la hipotermia. La administración por la vía intraperitoneal con pentobarbital
sódico es la de uso más frecuente, aunque las grandes variaciones entre los diferentes ratones y cepas
hacen que sea mucho más arriesgado que la ruta intravenosa. Los ratones macho son menos
susceptibles a los barbitúricos que las hembras y existen también variaciones con respecto a la raza del
ratón (Clifford, 1978).

Según Aparicio (2013), la dosis efectiva media (DE50) es la dosis necesaria de una sustancia necesaria para
producir un efecto específico en la mitad de la población (50%). Durante esta práctica se analizaron los
efectos de sedación e hipnosis. De acuerdo con De la Rosa et. al. (2022) la sedación es un estado de
calma y reducción de la excitación, y puede manifestarse en ratones de diversas maneras, como la
disminución de la actividad locomotora, la reducción de la respuesta a estímulos externos, y la relajación
muscular, la dosis de pentobarbital necesaria para alcanzar este efecto es de 4.8 miligramos por cada
kilogramo (Hernández y Vergara, 2019), en nuestro caso se obtuvo que la dosis efectiva 50 fue de 7.5
miligramos por cada kilogramo, valor que es bastante cercano al establecido por Hernández y Vergara.
La hipnosis es definida por De la Rosa et. al (2022) como la perdida del reflejo de enderezamiento en
animales de laboratorio, Ramírez (1990) expresa que para alcanzar este efecto se debe de administrar
una dosis de pentobarbital de entre 40 y 60 miligramos por cada kilogramo de peso del ratón, la dosis
efectiva 50 obtenida fue de 33 miligramos por cada kilogramo, valor que se encuentra ligeramente fuera
del rango establecido.
Aparicio (2013), define la dosis letal media (DL 50), como la dosis de una sustancia necesaria para producir
la muerte al 50% de la población. Al usar pentobarbital en ratones, la dosis para alcanzar esta respuesta
se debe ser de 100-150 miligramos por cada kilogramo (Ramírez, 1990). La dosis letal media de
pentobarbital en ratones que se obtuvo fue de 135 miligramos por cada kilogramo, esta dosis se
encuentra dentro del rango establecido por Ramírez (1990).

El margen de seguridad en farmacología se refiere a la medida de la diferencia entre la dosis terapéutica

efectiva de un fármaco y la dosis que podría resultar en toxicidad o efectos adversos graves en un
paciente. En otras palabras, es el rango de dosis entre la cantidad necesaria para lograr el efecto
terapéutico deseado y la cantidad que podría causar daño (Cantú, 2017). En este caso los márgenes de
seguridad del pentobarbital administrado a los ratones macho fueron de 19.333 para la sedación y 4.265
para la hipnosis, lo que nos indica que el pentobarbital al usarse para la sedación tiene una dosis
terapéutica efectiva relativamente baja en comparación con la dosis tóxica, además de reduce el riesgo
de efectos secundarios graves o intoxicación, lo que no sucede cuando el fármaco se usa para la hipnosis
puesto que el margen de seguridad es menor.

Conclusión.

 Bibliografía.
1. Aparicio, L. E. (2013). Evaluación de la inducción del efecto anestésico en rata de laboratorio
cepa Wistar vía Intraperitoneal. UNIVERSIDAD NACIONAL AUTÓNOMA DE MÉXICO FACULTAD DE
ESTUDIOS SUPERIORES ZARAGOZA.
https://www.zaragoza.unam.mx/wpcontent/Portal2015/Licenciaturas/qfb/tesis/
tesis_aparicio_lozano.pdf
2. Clifford, D. H. (1978). Preanesthesia, Anesthesia, Analgesia y Euthanasia. In: Fox, J. G.; Cohen, BJ.
and Loew, F.M. (eds.). Laboratory Animal Medicine. New York, Academic Press, INC. pp. 536-548
3. Cantú, P. A. (2017). Margenes de seguridad en fármacos. Lifeder.
https://www.lifeder.com/margenes-de-seguridad-en-farmacos/
4. De la Rosa, M. P., Hernandez, B. L., Merino, V. J., Molina, N. L. y Torres, S. D. (2022).
Determinación experimental de la dosis efectiva 50 (de50) sedante en ratones. Universidad
nacional autónoma de México.
https://www.studocu.com/es-mx/document/universidadnacional-autonoma-de-mexico/
farmacologia-ii/prectica-no6-determinacion-experimental-de-ladosis-efectiva-50-de50-sedante-
en-ratones/685516
5. Hernández, E. J. y Vergara, F. E. (2019). Determinación experimental de la dosis efectiva 50
(DE50) sedante en ratones. Studocu.
https://www.studocu.com/es-mx/document/benemeritauniversidad-autonoma-de-puebla/
farmacologia/138013918-de50-sedante-enratones/11676520
6. Ramirez, A. (1990). Anestesia en el animal de laboratorio. Centro de investigación hospitalaria
general de Valencia. https://www.studocu.com/es-mx/document/universidad-
nacionalautonoma-de-mexico/farmacologia-general/roedores-hipnosis-anestesia-rata-raton/
18320594 https://nucleus.usal.es/sites/default/files/servicios/sea/formularios/
EutanasiaPNSEA4.pdf