FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD

QUÍMICA Y FARMACIA
BIOQUÍMICA CLÍNICA

Laboratorio:
Componentes del tejido Sanguíneo

Frotis sanguíneo y laboratorio clínico

El estudio del frotis de sangre periférica consiste en precisar e informar las alteraciones morfológicas de
los elementos formes de la sangre; este es un examen sencillo, poco costoso, rápido en la realización del
informe de sus resultados, pero a la vez requiere de mucho cuidado y experiencia y esto está dado por
el tiempo e interés que se le dedique a su aprendizaje, a la calidad de la extensión y a su tinción.
Nos permite identificar series de glóbulos rojos (eritrocitos) y glóbulos blancos (leucocitos) y plaquetas

En el frotis se presentan 3 zonas (cabeza, cuerpo y cola), pero para poder observar se debe fijar
entre el cuerpo y la cola, esta zona se reconoce porque los glóbulos rojos están unos al lado del otro y
se observa la depresión central o halo blanco.

figura 1. Frotis sanguíneo

En la cola los glóbulos rojos están deformados, totalmente separados y no se les nota la depresión
central.
En la cabeza los glóbulos rojos están aplanados (por los puntos antes expuestos los extremos
cabeza y cola no son aptos para la observación del frotis sanguíneo).

Evaluación Eritrocitos:

Forma y tamaño:
Como referencia, para determinar el tamaño de un eritrocito se
puede comparar con el núcleo de un linfocito pequeño, este debe ser
cercano a los 8 -10 μm de ancho. Los eritrocitos más pequeños se
denominan microcíticos, mientras que los de mayor tamaño se
denominaran macrocíticos.

Figura 2. Comparación tamaño eritrocito

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Cuando estos últimos varían mucho en tamaño, se dice que hay anisocitosis. Cuando los eritrocitos
presentan muchas formas, se dice que hay poiquilocitosis. Los eritrocitos pequeños sin la palidez
central son esferocitos. Mientras, que la presencia de forma de lágrimas (dacrocitos), en forma de
casco (esquistocitos) se pueden asociar a diferentes anemias, por otro lado, los eritrocitos en forma de
estrella (equinocitos) pueden asociarse a una mala ejecución y/o secado del frotis, una forma similar,
pero mas irregulares, corresponden a los acantocitos, asociados a enfermedades renales.

Figura 3, diferentes formas de eritrocitos en frotis sanguineos

Análisis contenido hemoglobina en eritrocitos:

Dependiendo del contenido de hemoglobina estos serán de color normal (normocrómicas) o de color
pálido (hipocrómicas). Tenga presente que no encontrará eritrocitos “hipercrómicos”. A mayor
cantidad de hemoglobina los eritrocitos aumentaran de tamaño no de color

Inclusiones de los eritrocitos

En el citoplasma de eritrocitos no presenta organelos observables y por su naturaleza los eritrocitos

maduros carecen de núcleos, sin embargo, si los eritrocitos son liberados o expulsados de manera
prematura de la médula antes de la extrusión nuclear, presentaran núcleos en su citoplasma (
eritroblastos) , resultados de un proceso mieloptísico o una vigorosa respuesta estrecha a la anemia,
casi siempre anemia hemolítica. Si lo que se observan son, puntos azules difusos finos o gruesos en los
eritrocitos, (Punteado basófilo) pueden corresponder a residuos de RNA (por ej resultados de una
intoxicación por plomo). Si se observan inclusiones circulares azules densas remanentes nucleares o
Cuerpos de Howell-Jolly se puede asociar a una función esplénica alterada. En regiones tropicales la
inclusión de parásito en los eritrocitos puede estar asociadas enfermedades como el paludismo.
Finalmente, una alteración en la coloración del citoplasma asociado a la síntesis de hemoglobina por
eritrocitos jóvenes le confieren una tonalidad azulosa (Policromía), de ahí la importancia de las tinciones
no confundan el diagnóstico.

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Figura 4. Inclusiones en citoplasma de eritrocitos

Evaluación de Leucocitos

La línea blanca o leucocitaria, se divide en Granulocitos, Monocitos y Linfocitos. Corresponden a las

células de mayor tamaño, nucleadas, cuya función es mediar la respuesta inmune innata y de memoria.

Granulocitos o polimorfos nucleares:

Los neutrófilos suelen ser los leucocitos más abundantes (50-70% de los leucocitos); son redondos, de
10 a 14 μm de diámetro y contienen un núcleo con dos a cinco lóbulos conectados por un fino hilo de
cromatina, su nombre deriva a que el citoplasma y sus gránulos se tiñen en forma Neutra. Los eosinófilos
son ligeramente más grandes que los neutrófilos 15 μm de diámetro y corresponden al 1-4% del total de
los leucocitos, sus núcleos son bilobulados y contienen grandes gránulos que captan las tinciones ácidas
por lo que adquieren una coloración roja. Los Basófilos, son la población que esta menos representada
entre los leucocitos, (0-1%), su tamaño es menor a un neutrófilo 10 μm , son bilobulados y poseen
grandes gránulos que capturan tinción básica siendo reconocidos por su color azul oscuro, las
alteraciones de eosinófilos y basófilos se asocian al aumento de ellos en la circulación, lo que implica la
existencia de una alergia, y/o enfermedades parasitarias.

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Figura 5: Granulocitos

Alteraciones de los Granulocitos.

Alteraciones de neutrófilos

Desviación a la Izquierda, corresponde a los neutrófilos inmaduros, su núcleo posee la forma de U,

debido a una falta de condensación de su cromatina y son denominados cayados, se generan cuando
los neutrófilos se dividen rápidamente por diversas patologías. Por el contrario si los neutrófilos presentan
más de 5 lóbulos nucleares (desviación hacia la derecha), se asocia a la anemia megaloblástica. La
presencia de inclusiones citoplasmáticas de color azul, se reconocen como cuerpos de Döhle, asociados
a infecciones, quemaduras y estados inflamatorios generales. Si los gránulos son grandes y deformes,
puede deberse al síndrome de chédiak-Higashi enfermedad hereditaria que se caracteriza por infecciones
recurrentes.

Figura 6. Ejemplos de Alteraciones Neutrofílicas

Referencias:

Capítulo 81. Atlas de hematología y análisis de frotis de sangre periférica introducción. Dan Longo.
https://accessmedicina.mhmedical.com/content.aspx?sectionid=114913044&bookid=1717capitulo

Capitulo Sangre, Atlas de histología vegetal y animal.

https://mmegias.webs.uvigo.es/a-imagenes-grandes/sangre.php

Basquiera, Ana L et al . Gránulos tipo Chediak-Higashi en un paciente con síndrome mielodisplásico.

HEMATOLOGIA, Vol. 10 Nº 1: 3 2006

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ACTIVIDAD Nº1: REALIZACIÓN Y ANÁLISIS DE UN FROTIS SANGUÍNEO

OBJETIVOS

1. Identificar en microscopio óptico los elementos del tejido sanguíneo.

2. Explicar parámetros

MATERIALES
1. lanceta para punción
2. lápiz para punción
3. Agua destilada
4. Tinción azul de tripán
5. PBS
6. Portaobjetos
7. Algodón
8. Alcohol Pad
9. Alcohol 70%
10. Microscópio óptico
11. Aceite de inmersión para microscopia
12. piseta com agua destilada

ACTIVIDAD Nº1: REALIZACIÓN DE UN FROTIS SANGUÍNEO

Para actividad 1 y 2, elija un voluntario de su grupo de laboratorio:

Limpieza Porta objeto

1. Dispondrá de 2 portaobjetos, 1 por cada alumno/a del grupo

Deben limpiarlos con alcohol al 70%, no deben quedar residuos en su superficie, una vez limpios
reserve para su uso (ver sección frotis)

Obtención de sangre:

1. Utilice lancetas que se muestra en la figura

2. Limpiar con un algodón embebido en alcohol el pulpejo del dedo, presionar y pinchar con
una aguja. (en paralelo, inicie actividad 2 para no tener que volver a pincharse)

Dejar caer una gota pequeña en el extremo de un portaobjeto limpio y con un extensor (otro portaobjeto)
realizar el extendido. Según el siguiente esquema

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Coloque el otro porta en ángulo de 45°C, antes de la gota, retroceda con el hasta que la gota
difunda por toda la extensión del borde del portaobjeto, lleve la sangre hacia el extremo que
está usted y ahora extiéndalo de forma uniforme y rápida en sentido contrario. pequeña gota de
sangre sobre un extremo de la porta, con el lado de otro porta, en un movimiento uniforme,
extienda la gota sobre el primer porta.

3. Secar el frotis al aire. (aprox 10 min)

4. Fijar del frotis con alcohol absoluto (echar metanol alcohol en la parte esmerilada e inclinar
levemente para que escurra suave sobre la muestra hasta cubrirla totalmente, dejar que el
alcohol se evapore totalmente (10 min).

5. Tinción con azul de tripan1 (en la parte esmerilada e inclinar levemente para que escurra
suave sobre la muestra hasta cubrirla totalmente, esperar exactamente 2 minutos, echando
más colorante si éste se evaporara).

6. Lavar abundantemente con agua, para que el colorante sobrante desaparezca y deje de
actuar.

Importante: no ponga el agua directa sobre la muestra

Se observa en 100X (usando aceite de inmersión)

Una vez ubicada la zona optima entre cuerpo y cola, valla al borde del frotis y empiece a realizar
un zic-zac por el frotis hasta llegar al otro extremo, de esta forma se visualizarán todos los elementos
formes presentes, por ejemplo, usted debe ser capaz de identificar las diferencias entre glóbulos rojos y
glóbulos blancos, tratar de localizar a las plaquetas, identificar los distintos tipos de leucocitos que se
observan.

• 1
Para el análisis de frotis sanguíneo se usa tinción de Giemsa o de May Grünwald Giemsa, ya que
esta permite identificar elementos ácidos y básicos de color rojo y azul respectivamente.

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Parte 2.

Grupos Sanguíneos y Hemostasia

INTRODUCCIÓN

El término de tejido sanguíneo es un tejido conectivo altamente especializado, cuya

matriz extracelular es líquida y se denomina plasma, además cuenta con elementos formes que
corresponden a las células sanguíneas: leucocitos, eritrocitos y plaquetas.
En cuanto a los Grupos sanguíneos, Berstein puso de manifiesto que este sistema
llamado ABO consistía en tres alelos de un único gen: A, B y O; que determinan 4 grupos
fenotípicos diferentes: A - B - AB – O.

Los alelos A y B exhiben codominancia y a su vez son dominantes con respecto a O.

El alelo A produce en la sangre un antígeno A, el alelo B produce el antígeno B y el O no
produce ningún antígeno. Estos antígenos son mucopolisacáridos y se denominan
aglutinógenos, encontrándose en la cara externa de la membrana plasmática de los eritrocitos.
Además de los antígenos, los grupos A, B y O presentan anticuerpos para cualquiera de
los antígenos A y B que no poseen. Estos anticuerpos o aglutininas producidas por las células
plasmáticas y linfocitos circulantes de la sangre, se denominan isoaglutininas, pues se
presentan naturalmente en el suero, sin que sea necesaria la presencia del antígeno
correspondiente para su producción.

Las transfusiones de sangre entre individuos de distintos tipos ABO puede dar lugar a
una reacción de aglutinación, especialmente si se introducen grandes cantidades de un tipo
sanguíneo distinto. Ottenberg estableció reglas prácticas para evitar accidentes, con el siguiente
esquema clásico, en el cual el sentido de cada flecha indica que la transfusión sólo es posible en esa
dirección.

Se puede deducir también que las personas del tipo O son “dadoras universales”
(ausencia de antígenos A y B).

Landsteiner y Wiener descubrieron un grupo de genes el sistema Rhesus (Rh), de los

cuales el más importante es el D por ser el más antigénico y las personas son, para fines
prácticos Rh positivas (si poseen el antígeno D) o Rh negativos (si carecen de él). El alelo D (+)
es dominante con respecto al alelo (-). Es el responsable de la incompatibilidad sanguínea
materno-fetal. En laboratorio clínico, la determinación de grupos sanguíneos es realizada exclusivamente
por Banco de Sangre.

Objetivo

Identificar grupo sanguíneo mediante técnica de aglutinación

Resultados de aprendizajes.

1. Comprender los mecanismos de identificación de los grupos sanguíneos.

2. Relacionar los resultados obtenidos con la transfusión sanguínea

MATERIALES

1. Lanceta
2.Sangre fresca
3. Kit para determinación de grupos sanguíneos (Antisueros comerciales)

DETERMINACIÓN DE GRUPOS SANGUÍNEOS

1. Rotule dos portaobjetos como indica el siguiente esquema

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2. Obtener sangre del pulpejo del dedo como se indica en la actividad anterior y dejar caer
una gota de sangre sobre cada uno de los casilleros de un portaobjeto previamente rotulados
con los grupos sanguíneos. Figura 1.
Figura 1. Portaobjetos rotulados en casilleros con los grupos sanguíneos.

Parte 3.

Uso de Analizador Hematológico ( Demostración)

Materiales:
Analizador Hematologico CBC-3D Mindray
Muestras sangre
Buffer lisis
Buffer clean

1- Prenda el analizador
2- Valla a pestaña análisis de muestra
3- Ponga Tubo en sonda de aspiración
4- Aprieta botón aspirar (botón redondo tras la sonda)
5- Espere e identifique (responda en Informe)

Actividad 3

Análisis de Frotis virtual

Diríjase al lab virtual y responda:
https://view.genial.ly/62c78d88a9f6550012942e64

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Informe
Nombres integrantes:

Revise cuidadosamente el frotis,

Indique y dibuje

Línea de rojos:
Aspecto:
Forma:
Tamaño
Artefactos:
conclusiones

Línea de Blancos:
Aspecto:
Forma:
Tamaño
Artefactos:
conclusiones
Poblaciones identificadas
Abundancia por campo

Granulocitos ,

Linfocitos:
Monocitos

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Conclusiones:
Para ello revise atlas de hemogramas ( ISP) adjunto.

Informe Actividad 2:

1. Indique completando la siguiente tabla su grupo sanguíneo

Suero Anti A Suero Anti B Suero Anti Suero anti D Grupo
A+B (Rh) sanguíneo
Aglutina
No aglutina

2. Pida a sus compañeros de Sección (NCR de los tres laboratorios) el resultado de sus grupos
sanguíneos e indique la distribución de su población compara con datos bibliográficos de la
población Chilena

Grupo N total % % descrito en Bibiografía

literatura para
población chilena
A
B
AB
O
Rh (+)

3. Investigue, la distribución de grupos sanguíneos en la población chilena es la misma a la de

otras poblaciones, compare con dos poblaciones distintas /ej población argentina vs europea Y/o
norteamericana/ o asiática) discuta sus resultados y entregue bibliografía.

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Informe actividad 3

1. Discuta y dibuje que representa el histograma de leucocitos WBC, indique donde encuentra la
población de linfocitos, neutrófilos

2. Realice un cuadro comparativo de las tres muestras

línea blanca:
Parámetro M1 M2 M3
3 3
WBC totales x10 /ul x10 /ul x103/ul
N de Linfocitos x103/ul x103/ul x103/ul
N°células MID2 x103/ul x103/ul x103/ul
N ° Granulocitos3
% de linfocitos
%MID
%Granulocitos

2 Células (MID) incluyen células raras y menos frecuentes que se correlacionan con monocitos, eosinófilos,
basófilos, blastos y otros glóbulos blancos precursores que se encuentran en un rango de tamaño particular.
3 Población de Granulocitos incluye Neutrófilos, Eosinofilos, Basófilos y Monocitos

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línea Roja:

Parámetro M1 M2 M3
6 6
RBC 10 /ul 10 /ul 10 6/ul
HGB g/dl g/dl g/dl
HCT % % %
MCV fL fL fL
MHC pg pg pg
MCHC g/dl g/dl g/dl
RDW-CV % % %
RDW-SD fL fL fL

Responda:

1. ¿cuál muestra posee un hematocrito normal, explique por qué?

2. ¿Qué muestras poseen línea roja alterada? ¿indique cuál es la alteración?

3. ¿Qué parámetros les permite saber si el paciente cursa con una anemia? ¿porqué?

4. De las muestras analizadas, ¿hay alguna que presente eritrocitos microcíticos?, indique si/no, si
responde si, indique cual muestra; independiente de su respuesta (si/no), indique que parámetro
debe revisar para saber el tamaño de la población eritrocitaria

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