TEMA 10

ANCLAJE DEPENDIENTES: Son un tipo de células que necesitan adherirse a un superficie sólida para
poder crecer, el cual se da en el crecimiento en monocapa

AZUL DE TRIPÁN: Es el colorante msn habiul empleados en el colorante vital; es un coloide de color
azul que penetra en el interior de las células que tiene la membrana rota, pero que no atraviesa las
células con las membranas intactas.

ATMÓSFERA GASEOSA: Es la mezcla de gases en que se mantiene los cultivos; sus dos
componentes más importantes son el O2 y el CO2

BOTELLA ROLLER: Son botellas cilíndricas de distintos tamaños, con una gran superficie de
crecimiento, específicas para incubarlas sobre rodillos que las hacen girar lentamente, de manera que
las células pueden crecer en toda la superficie interior de la botella

CULTIVO DE ÓRGANOS: Consiste en mantener un órgano entero o parte de él en la interfase entre un

medio de cultivo artificial y un atmósfera controlada.

CULTIVO DE EXPLANTES: Consiste en adherir un fragmento de tejido a una superficie (placa o fresco
de cultivo) y nutrirlo con un medio de cultivo

CULTIVO DE CÉLULAS: Se realiza a partir de suspensiones celulares, que se introducen en un

recipiente adecuado junto con un medio de cultivo y se incuban en las condiciones óptimas para que las
células proliferen

CULTIVO CELULAR PRIMARIO: Es un tipo de cultivo de célula, en el que la suspensión celular de

partida se obtiene disgregando las células de un tejido por métodos mecánicos o enzimáticos. De esta
manera se obtiene una mezcla celular compleja formada por los distintos tipos celulares presentes en el
tejido. Se puede realizar a partir de esta mezcla o seleccionando un tipo celular concreto

CULTIVO CELULAR SECUNDARIO: Es un tipo de cultivo de célula, caracterizado ya que la

suspensión celular de partida se obtiene a partir de un cultivo primario o de otro secundario, mediante
un subcultivo o <<pase>>. También se pueden obtener a partir de una línea celular mantenida en
congelación.

CULTIVOS HISTOTÍPICOS: Son cultivos de un solo tipo celular que consigue alcanzar una elevada
densidad celular.

CULTIVOS ORGANOTÍPICOS: constan de varios tipos celulares que interaccionan entre sí de una
forma que intenta parecerse a la original. El objetivo final de este tipo de cultivos es la creación in vitro
de tejidos u órganos completamente funcionales que puedan ser usados en injertos o trasplantes.

CRECIMIENTO EN MONOCAPA: Es una forma de crecimiento que consiste en que las células crecen
adheridas sobre una superficie sólida (plásticos o vidrio). Se caracteriza por la inhibición por contacto
CRECIMIENTO EN SUSPENSIÓN: Es una forma de crecimiento en el que las células no necesitan
pegarse a una superficie para crecer, por lo que se mantienen dispersas en el seno del medio de cultivo
y proliferando. Se caracteriza ya que presentan inhibición por densidad

CURVA DE CRECIMIENTO: Es la representación gráfica de la dinámica de crecimiento de un cultivo, es

decir, la concentración de células por los días de evolución del cultivo.

CAMBIO DE MEDIO: Es una de las operaciones que se realiza para el mantenimiento del cultivo (
controlar su viabilidad y crecimiento). Es la operación más frecuente, para renovar los nutrientes
consumidos por las células y retirar los productos de desecho generados por el metabolismo celular,

CÁMARA DE NEUBAUER: Es un portaobjetos especial de un groso muy superior a un portaobjetos

convencional, que tiene en el centro un depresión central, hundida exactamente 0,1 mm con respecto
de la superficie del portaobjetos, aislada del resto de este por dos surcos laterales y dividida en dos por
un surco horizontal central.

DISGREGACIÓN CELULAR: Es el proceso que se realiza cuando se quieren cultivar células

procedentes de un órgano o tejido, el primer paso consiste en obtener el tipo celular que nos interesa en
suspensión. Para lo cual hay que separar las células entre sí y de la matriz extracelular en las que se
encuentran inmersas.

DMSO- Dimetilsulfóxido

FRASCO ROUX: Son frascos planos con tapón de rosca disponibles en muchos tamaños. Se
caracterizan por su superficie de crecimiento. Son idóneos para todo tipo de cultivo en monocapa y en
suspensión, y para el mantenimiento de líneas celulares. Se pueden realizar cultivos cerrados,
enroscando totalmente el tapón, o abiertos enroscando parcialmente el tapón. Estos últimos permiten el
intercambio gaseoso con la atmósfera del incubador, al tiempo que se previene la contaminación.

HEPES : Es el tampón más recomendado debido a su gran poder tamponador en el rango del pH óptimo
para el crecimiento celular (7,2 - 7,6)

INHIBICIÓN POR CONTACTO: Es una etapa del crecimiento en monocapa. Con el paso del tiempo, las
células ocupan toda la superficie disponible y entran en confluencia, produciéndose un fenómeno
denominado inhibición por contacto: las células detienen su crecimiento,aunque se mantienen vivas. Se
inicia la fase estacionaria de la curva decrecimiento, en que la morfología y la fisiología de las células se
parecen ,más a las de las células de origen

INHIBICIÓN POR DENSIDAD: Es una etapa del crecimiento en densidad. Llega un momento en el
cultivo en el que se alcanza un número crítico de células en relación con el volumen de medio de cultivo
y los nutrientes que quedan en él. En ese momento se produce este fenómeno, y las células dejan de
crecer, aunque se mantienen vivas. Esta esta se corresponde con la fase estacionaria de la curva de
crecimiento

LÍNEA CELULAR PRIMARIA: Es aquella obtenida a partir de un tejido u órgano mediante un cultivo
primario y que se mantiene en cultivo mediante pases seriados durante un tiempo limitado
LÍNEA CELULAR CONTINUA: Son aquellas que se obtienen a partir de un cultivo primario y que se
mantienen un cultivo por tiempo ilimitado mediante pases seriados

MICOPLASMAS: Son microorganismos procariotas sin pared que pueden infectar cultivos y producir su
muerte o una alteración en el crecimiento de las células.

PLACA MULTIPOCILLO: Son placas con un número variable de pocillos, recubiertas por una tapa no
hermética. Son útiles para realizar experimentos puntuales simultáneos con distintas líneas celulares o
diferentes condiciones de cultivo. No son aconsejables para el mantenimiento de líneas celulares por su
mala estanqueidad y porque presentan mayor riesgo de contaminación.

PLACA DE PETRI: Son las clásicas placas de cultivo celulares con tapa; tienen las mismas utilidades y
limitaciones que las placas multipocillos.

ROJO FENOL: Es el indicador de pH más utilizado que registre cambios mínimos en el rango de pH
óptimo para el crecimiento. Este es púrpura a pH 7,8, rojo a 7,4 , naranja a 7,0 y amarillo a 6,5.

SENESCENCIA: Es la etapa vital en la que las células van perdiendo su capacidad de dividirse y el
cultivo acaba muriendo.

SUBCULTIVO O PASE: Es una opresión que se realizar por el mantenimiento del cultivo, el cual
consiste en dividir las células de unciltov, en nuevas cultivadas y alimentadas con medio fresco para
facilitar la expansión

SUERO BOVINO FETAL (FBS):es un importante suplemento del medio de cultivo celular que favorece
el crecimiento y adhesión celular.

TELÓMERO: es una región de secuencias repetitivas de ADN en el extremo de un cromosoma. Los

telómeros protegen los extremos de los cromosomas para evitar que se desgasten o enreden. Cada vez
que una célula se divide, los telómeros se tornan ligeramente más cortos. Finalmente, se acortan tanto
que la célula ya no puede dividirse correctamente, y la célula muere.

TRIPSINIZACIÓN: Es el procedimiento de despegado de una monocapa de células de la superficie del

recipiente mediante una solución de tripsina / EDTA

TEMA 3
SOLUCIÓN DE LISIS: solución salina que suele contener detergentes que desnaturalizan las proteínas
y/o proteasas. Una vez separados los ácidos nucleicos de las proteínas y lípidos se lleva a cabo su
purificación.

HOMOGENEIZACIÓN MECÁNICA: Es un proceso de pretratamiento (homogeneización) que se aplica

previamente a la extracción de ácidos nucleicos en tejidos animales o vegetales frescos. Consiste en
someter al tejido a una acción trituradora o abrasiva para desmenuzarlo y liberar las células que lo
integran. Existen dos tipos de homogeneización mecánica automatizada o manual con mortero.
HOMOGENEIZACIÓN QUÍMICA: Es un proceso de pretratamiento (homogeneización) que se aplica
previamente a la extracción de ácidos nucleicos en tejidos animales o vegetales frescos. Consiste en
someter el tejido a la acción de proteasas y detergentes que degradan los componentes tisulares,
disgregando las células.

DESPARAFINACIÓN: Es un proceso que se lleva a cabo como pretratamiento en los tejidos fijados en
formol e incluidos en parafina para la extracción de ácidos nucleicos, que consiste en la eliminación de
la parafina en los tejidos FFPE.

XILOL: Es una agente desparafinante, que como su función indica se utiliza para la desparafinación de
los tejidos fijados en formol e incluidos en parafina para la extracción de ácidos nucleicos.

DETERGENTES: Son los principales componentes de las soluciones salinas. Son empleados para
desestructurar la bicapa lipídica de las membranas celulares así como las desnaturalizar proteínas
incluidas en ellas. Esta lisis celular libera el contenido citoplásmico y nuclear en el medio de reacción,
importante para el proceso de extracción de ácidos nucleicos

AGENTES CAOTRÓPICOS: Son sustancias que se emplean para inactivar las nucleasas células, ya
que desnaturalizan las macromoléculas impidiendo que realicen su actividad, por lo que se recomiendan
usar para cuando queramos purificar ADN / ARN

MICROTOMO: Es un aparato del laboratorio de biología molecular empleado para realizar cortes
histológicos de tejidos congelados. En esta unidad lo hemos relacionado para el uso de la
desparafinación

SDS:(dodecilsulfato sódico): Un compuesto tensoactivo aniónico, es el detergente más utilizado en las

soluciones de lisis celulares, sobre todo para muestras humanas y de animales, en combinación con
EDTA.

PROTEINASA K: Es un tipo de proteasa que digiere tanto las proteínas de la membrana celular como
las citoplasmáticas y eliminas las nucleasas. Su empleo es especialmente útil en muestras de tejidos
frescos y FFPE para simultanear la digestión del tejido con la extracción de los ácidos nucleicos.

EXTRACCIÓN: Es un proceso que consiste en la obtención de una lisado celular de aspecto

homogéneo en el que los ácidos nucleicos se encuentran libres de las estructuras celulares en las que
se mantenían aislados. Este proceso implica principalmente dos procesos: la lisis celular para liberar los
ácidos nucleicos y la inactivación de nucleasas celulares para evitarla degradación de los ácidos
nucleicos.

PURIFICACIÓN: Es un proceso que consiste en separar los ácidos nucléicos de los demás
componentes del lisado, las técnicas que abordaremos son: técnicas de purificación basadas en las
características físico-químicas de los ácidos nucléicos, algunas técnicas para la purificación de
plásmidos y algunas consideradas especiales que se requieren en la purificación del ARN.

CROMATOGRAFÍA DE INTERCAMBIO IÓNICO: Es una técnica de purificación de ácidos nucléicos

basada en la unión electrostática reversible de iones en solución a grupos funcionales cargados que
están unidos covalentemente a una fase estacionaria.
CROMATOGRAFÍA DE ADSORCIÓN: Es una técnica de purificación de ácidos nucleicos que se basa
en la capacidad de absorción de los ácidos nucleicos y a la sílice en presencia de sales caotrópicas. Se
usan membranas de lana de vidrio o perlas de sílice empaquetadas en columnas de polipropileno.

ULTRAFILTRACIÓN: Es una técnica de purificación de ácidos nucleicos basada en la retención por

tamaño de las moléculas de ácidos nucleicos mediante membranas con un tamaño de poro
determinado. Este método se suele utilizar para purificar productos de PCR con un tamaño superior a
150 pb.

INTEGRIDAD DE LOS ÁCIDOS NUCLEICOS: Es el parámetro que determina si un ácido nucleico

conserva su tamaño original o ha sido degradado en el proceso. La mejor manera de valorar la
integridad es la electroforesis en gel de agarosa el resultado esperado varía según si es ADN genómico,
plasmídico o ARN.

PUREZA DE LOS ÁCIDOS NUCLEICOS: Es el parámetro que determina la ausencia de posibles

contaminantes, los contaminantes son: proteínas, polisacáridos, sales, reactivos usados en la extracción
y purificación. La medida del grado de pureza se basa en una de las propiedades de ácidos nucleicos su
máxima absorbancia a una longitud de onda de 260 nm, de lo que salen dos coeficientes: A260/A280 y
A260/A230 y por último tenemos otra absorbancia donde su longitud de onda es de 320 nm.