Trace metals

Listado de las enzimas más comunes de fitoplancton que requieren de un metal traza
como cofactor
Fe Citocromo f Transporte de electrones en la fotosíntesis
Citocromos b y c Transporte de electrones en la respiración y la fotosíntesis
Ferredoxina Transporte de electrones en la fotosíntesis y la fijación de
nitrógeno
Proteínas ferro-sulfurosas Transporte de electrones en la respiración y la fotosíntesis
Catalasa Degradación de H2O2 a H2O y O2
Peroxidasa Reducción de H2O2 a H2O
Quelatasa Síntesis de porfirina y ficobiliproteínas
Fe y Mo Nitrogenasa Fijación de nitrógeno
Nitrato y nitrito reductasas Reducción de nitrato a amonio
Mn o Fe Dismutasa Desprotonación de radicales O2- a O2 y H2O2

Mn Enzima envolvente del O2 Oxidación del agua a O2 en la fotosíntesis

Zn Polimerasas del ADN y ARN Replicación y transcripción de ácidos nucleicos

Anhidrasa carbónica Hidratación y deshidratación de CO2
Fosfatasa alcalina Hidrólisis de ésteres de fosfato
Cu Plastocianina Transporte de electrones en la fotosíntesis
Citocromo c oxidasa Transporte de electrones mitocondrial
Oxidasa del ascorbato Reducción y oxidación del ácido ascórbico
Co Vitamina B12 Reacción de transferencia de carbón e hidrógeno

Ni Ureasa Hidrólisis de la urea

 Metales traza
Elementos de transición a concentraciones traza en aguas naturales.
A pesar de su baja concentración juegan un papel clave medioambiental.
Controlan el desarrollo de la biomasa en muchos medios debido a su doble papel
fundamental como oligonutriente esencial y como compuestos altamente tóxicos.
Fotosíntesis
Citocromo b6f (cloroplastos)
 Cd substituye a Zn en muchas proteínas

Ferritina (almacenamiento
celular de hierro)
METAL TIPOS DE AGUAS CONC. (nM)
Metales traza
Fe Océano Pacífico 0.05 - 0.5

Aguas costeras 4 – 23 concentraciones

Estuarios 60 – 250

Mn Océano Pacífico 0.3 – 4

Oligonutrientes
Océano Antártico 0.08

Mar de los Sargazos 2–5

Aguas costeras 21

Estuarios 16 - 400

Cu Océano Pacífico 0.4 – 1.4

Mar de los Sargazos 1.2

Aguas costeras 4.1

Bahía Narragansett 3 - 260

 Oligonutrientes
El hierro es un nutriente limitante en amplias
zonas del océano.
Cobre, Zinc y Cobalto tienen requerimientos
bajos pero se hallan a muy bajas
concentraciones. Se ha especulado que podrían
ser limitantes en algunas circunstancias.
También existen requerimientos de Mo (fijación
de nitrógeno) y Mn, pero estos se encuentran a
elevadas concentraciones para su reducido
requerimiento
Las concentraciones de metales traza juegan
definitivamente un papel importante en definir
que especies de plancton son mayoritarias en
función de los requerimientos y sensibilidad de
esa especie a las concentraciones de metales
traza del medio.
Importancia de la especiación química
Biodisponibilidad

Sunda 1975
 Trace metals
Cd un caso de metal muy tóxico que a muy bajas concentraciones de metales
traza se convierte en oligonutriente al reemplazar al Zn
Bioacumulación y biomagnificación
 Efectos tóxicos de los metales traza en organismos acuáticos.
Información extraída de la EPA

Aluminio

Toxicity information about Al is generally lacking. It has been determined that fish tend to be
more sensitive to Al toxicity than aquatic invertebrates. Al can cause pulmonary and
developmental problems. Al toxicity has been linked to soil pH--the amount of soluble Al, rather
than the total Al concentration in the soil.

Arsénico

In plants, arsenic has been shown to cause wilting (marchitamiento), chlorosis (baja Chl-a),
browning, dehydration, mortality, and inhibition of light activation. Arsenic is a carcinogen
(cancer-causing), teratogen, and possible mutagen (causing mutations in genes/DNA) in
mammals (ATSDR 1993). Chronic exposure can result in fatigue, gastrointestinal distress,
anaemia, neuropathy, and skin lesions that can develop into skin cancer in mammals. It can
cause death in soil microbiota and earthworms. Cancer-causing and genetic mutation-causing
effects occur in aquatic organisms, with those effects including behavioral impairments, growth
reduction, appetite loss, and metabolic failure. Aquatic bottom feeders are more susceptible to
arsenic. In birds tolerance to arsenic varies among species, but effects include destruction of gut
blood vessels, blood-cell damage, muscular incoordination, debility, slowness, jerkiness, falling,
hyperactivity, fluffed feathers, drooped eyelids, immobility, seizures, and systemic, growth,
behavioral, and reproductive problems
Cadmio

Cd is highly toxic to wildlife; it is cancer-causing and teratogenic and potentially mutation-causing, with
severe sublethal and lethal effects at low environmental concentrations. It is associated with increased
mortality, and it effects respiratory functions, enzyme levels, muscle contractions, growth reduction,
and reproduction. It bioaccumulates at all trophic levels, accumulating in the livers and kidneys of fish.
Crustaceans appear to be more sensitive to cadmium than fish and mollusks. Cd can be toxic to plants
at lower soil concentrations than other heavy metals and is more readily taken up than other metals
(EPA 1981).

Cromo

There is no significant biomagnification of Cr in aquatic food webs. However, there are a wide range of
adverse effects in aquatic organisms. In benthic invertebrates there has been observed reduced
fecundity and survival, growth inhibition, and abnormal movement patterns. Fish experienced reduced
growth, chromosomal aberrations, reduced disease resistance, and morphological changes.
The toxic effects of Cr are primarily found at the lower trophic levels. The main potential ecological
impacts result from direct exposure of algae, benthic invertebrates, and embryos and fingerlings of
freshwater fish and amphibians to Cr. Cr may bioaccumulate in algae, other aquatic vegetation, and
invertebrates, but it does not biomagnify. Cr inhibits growth in duckweed and algae, reduces fecundity
and survival of benthic invertebrates, and reduces growth of freshwater fingerlings. It is cancer-
causing, mutation-causing, and teratogenic. Cr exists in two oxidation states in the environment:
trivalent (+3) and hexavalent (+6), the latter of which is more toxic. Cr(VI) is readily converted to Cr(III)
in animals, which appears to protect higher organisms from the effects of low level exposures.
Cobre

Copper is a micronutrient and toxin. It strongly adsorbs to organic matter, carbonates

and clay, which reduces its bioavailability. Cu is highly toxic in aquatic environments and
has effects in fish, invertebrates, and amphibians, with all three groups equally sensitive
to chronic toxicity. Cu is highly toxic to amphibians (including mortality and sodium loss),
with adverse effects in tadpoles (renacuajos) and embryos. Cu will bioconcentrate in
many different organs in fish and mollusks. There is low potential for bioconcentration in
fish, but high potential in mollusks. Cu sulfate and other Cu compounds are effective
algaecides (free Cu ions are the lethal agent). Single-cell and filamentous algae and
cyanobacteria are particularly susceptible to the acute effects, which include reductions
in photosynthesis and growth, loss of photosynthetic pigments, disruption of potassium
regulation, and mortality. Sensitive algae may be affected by free Cu at low (parts per
billion) ppb concentrations in freshwater.
There is a moderate potential for bioaccumulation in plants and no biomagnification.
Toxic effects in birds include reduced growth rates, lowered egg production, and
developmental abnormalities. While mammals are not as sensitive to Cu toxicity as
aquatic organisms, toxicity in mammals includes a wide range of animals and effects
such as liver cirrhosis, necrosis in kidneys and the brain, gastrointestinal distress,
lesions, low blood pressure, and fetal mortality.
Plomo

Pb is cancer-causing, and adversely effects reproduction, liver and thyroid function, and disease
resistance (sistema inmune). The main potential ecological impacts of wetland contaminants result
from direct exposure of algae, benthic invertebrates, and embryos and fingerlings of freshwater fish
and amphibians to lead. It can be bioconcentrated from water, but does not bioaccumulate and tends
to decrease with increasing trophic levels in freshwater habitats. Pb adversely affects algae,
invertebrates, and fish. There are also limited adverse effects in amphibians, including loss of sodium,
reduced learning capability, and developmental problems. Fish exposed to high levels of Pb exhibit a
wide-range of effects including muscular and neurological degeneration and destruction, growth
inhibition, mortality, reproductive problems, and paralysis. Pb adversely affects invertebrate
reproduction; algal growth is affected. Pb partitions primarily to sediments, but becomes more
bioavailable under low pH, hardness and organic matter content (among other factors). Pb
bioaccumulates in algae, macrophytes and benthic organisms, but the inorganic forms of Pb do not
biomagnify. At elevated levels in plants, lead can cause reduced growth, photosynthesis, mitosis, and
water absorption. Birds and mammals suffer effects from lead poisoning such as damage to the
nervous system, kidneys, liver, sterility, growth inhibition, developmental retardation, and detrimental
effects in blood.
Pb poisoning in higher organisms has been associated with lead shot and organolead compounds, but
not with food chain exposure to inorganic Pb (other than lead shot, sinkers or paint). There are
complex interactions with other contaminants and diet. Pb poisoning in higher organisms primarily
affects hematologic and neurologic processes.
Mercurio

Mercury is a mutagen (mutágeno), teratogen, and carcinogen (cancer-causing), with toxicity and
environmental effects varying with the form of mercury, dose, and route of ingestion, and with the
exposed organism's species, sex, age, and general condition. There is a high potential
for bioaccumulation and biomagnification with mercury, with biomagnified concentrations
reported in fish up to 100,000 times the ambient water concentrations. Methylmercury is the
most toxic form. Inorganic mercury is methylated primarily by bacteria in both anaerobic and
aerobic environments. The organic mercury compounds are more readily absorbed and poorly
excreted in comparison with inorganic forms. The primary targets of acute exposures are the
central nervous system and kidneys in fish, birds and mammals.
In invertebrates, effects range from non-observable to chromosomal abnormalities in some flies
and reduced segment regeneration in worms. Mercury can inhibit frog metamorphosis and has
many effects in fish. In water, at concentrations at or well below even 1 ppb (part-per-billion),
mercury can cause effects including: loss of appetite, brain lesions, cataracts, abnormal motor
coordination, and behavioral changes. There are also effects on reproduction, growth, behavior,
metabolism, blood chemistry, osmoregulation, and oxygen exchange at relatively low
concentrations of mercury. Juveniles are commonly more susceptible than adults.
Upper trophic level fish, birds and mammals are particularly vulnerable because of the
pronounced biomagnification of organomercury. There are numerous effects in birds, including
delayed testicular development, altered mating behavior, reduced fertility, reduced survivability
and growth in young, and gonadal atresia. In mammals, it has been shown that mercury can
cause ataxia (pérdida de coordinación), aphagia (perdida abilidad de tragar), tremors
(temblores), and diminished movement coordination. There are varied neurological and
reproductive effects as well.
Ciclos ambientales extremadamente complejos
2 Glutatión + H2O2 Glutatión disulfuro + 2 H2O
El consumo de selenio (Se) está inversamente relacionado con la toxicidad por metilmercurio (MeHg).

Las exposiciones al mercurio que son uniformemente neurotóxicas y letales entre los animales alimentados con
bajo contenido de Se dietético son mucho menos graves entre las personas con consumo normal de Se y no tienen
consecuencias observables en los alimentados con dietas enriquecidas con Se. Aunque estos efectos se conocen
desde 1967, solo recientemente se han entendido bien.
Estudios recientes han demostrado que las dietas enriquecidas con Se no solo previenen la toxicidad de MeHg,
sino que también pueden revertir rápidamente algunos de sus síntomas más severos. Ahora se entiende que MeHg
es un inhibidor altamente específico e irreversible de las enzimas dependientes de Se (selenoenzimas). Las
selenoenzimas son necesarias para prevenir y revertir el daño oxidativo en todo el cuerpo, particularmente en el
cerebro y los tejidos neuroendocrinos. La inhibición de las actividades de las selenoenzimas en estos tejidos
vulnerables parece ser la causa proximal de los efectos patológicos que se sabe que acompañan a la toxicidad del
MeHg. Debido a que las afinidades de Hg por el Se son hasta un millón de veces mayores que las del azufre, su
segundo mejor compañero de unión, el MeHg secuestra inexorablemente el Se, lo que afecta directamente a las
actividades de las selenoenzimas y su síntesis. Esto puede explicar por qué los estudios de poblaciones maternas
expuestas a alimentos que contienen Hg en exceso molar de Se, como tiburón o carne de ballena piloto, han
encontrado resultados infantiles adversos, pero los estudios de poblaciones expuestas al MeHg al comer peces
oceánicos ricos en Se, observan una mejoría del coeficiente de inteligencia infantil en lugar de daño.
Dado que los contenidos de Se de los peces de agua dulce dependen del estado del suelo local, los peces con alto
MeHg de regiones con poca disponibilidad de Se pueden ser motivo de preocupación. Se necesitan más estudios
de estas relaciones para ayudar a las agencias reguladoras a proteger y mejorar la salud infantil.
Dado que las especies atómicas no tienen niveles de energía vibracional, los fotones
emitidos están en la misma longitud de onda que la radiación incidente. Este proceso
de reemisión del fotón absorbido es "fluorescencia de resonancia" y es característico
de la fluorescencia atómica.

Esto significa que si desea determinar el mercurio por AFS, se DEBE emplear una
lámpara de mercurio.

Debido a este hecho, la técnica es específica del elemento y está mucho menos sujeta a
interferencias por la presencia de otros elementos.

La intensidad de la fluorescencia emitida es directamente proporcional a la cantidad

de energía de excitación proporcionada.

Se deben utilizar lámparas de descarga de alta energía o lámparas de cátodo hueco

reforzadas para obtener la mejor sensibilidad.

Los analizadores AFS tienen límites de detección excepcionales.

Metilmercurio con GC previa
Manganeso
Elevated levels of manganese in birds have been shown to cause the following effects: decreased
hemoglobin, anemia, reduced growth; in mammals, effects include alterations of brain chemicals,
gastric irritation, delayed testicular development, low birth weights, behavioural changes, and
muscular weakness.
Niquel
Nickel is cancer-causing (carcinogen) and mutation-causing (mutagen). Some observed effects of
nickel in aquatic environments include tissue damage, genotoxicity, and growth reduction
(Environment Canada 1994a). Mollusks and crustaceans are more sensitive than other organisms.
 Selenio
Selenium undergoes bioconcentration, bioaccumulation and biomagnification as trophic levels
increase. It can enter the food web through both sediments and surface water. Elevated levels cause
growth reduction in green algae. In other aquatic organisms, the following adverse effects have been
observed: loss of equilibrium and other neurological disorders, liver damage, reproductive failure,
reduced growth, reduced movement rate, chromosomal aberrations, reduced hemoglobin and
increased white blood cell count, and necrosis of the ovaries.
Plata
Silver may biomagnify in some aquatic invertebrates. However, it is highly toxic to aquatic organisms
(EPA 1992). Elevated concentrations can cause larval mortality, developmental abnormalities, and
reduced larval growth in fish; growth reduction in juvenile mussels; and adverse effects on
reproduction in gastropods. There are some indications of toxicity in plants. However, there are other
reports suggesting that silver is not highly phytotoxic. Silver is toxic to soil microbes, thus inhibiting
biotransformation. Effects on mammals include pulmonary edema, congestion, and mortality.
Talio

Low rates of bioconcentration may occur in aquatic systems and Tl may be as toxic as Cu on a weight
basis. Thallium can cause reductions in larval fish growth and percent embryo hatchability and mortality.

Zinc

In many types of aquatic plants and animals, growth, survival, and reproduction can all be adversely
affected by elevated zinc levels (Eisler 1993). Zinc in aquatic systems tends to be partitioned into
sediment and less frequently dissolved as hydrated zinc ions and organic and inorganic complexes
(MacDonald 1993). Zinc is toxic to plants at elevated levels, causing adverse effects on growth, survival,
and reproduction (Eisler 1993). Terrestrial invertebrates show sensitivity to elevated zinc levels, with
reduced survival, growth, and reproduction. Elevated zinc levels can cause mortality, pancreatic
degradation, reduced growth, and decreased weight gain in birds (Eisler 1993; NAS 1980); and elevated
zinc can cause a wide range of problems in mammals including: cardiovascular, developmental,
immunological, liver and kidney problems, neurological, hematological (blood problems), pancreatic, and
reproductive (Eisler 1993; Domingo 1994).
Investigación en Contaminantes Inorgánicos Emergentes: REE (Gd), V, Ge, etc

Gd:
large positive Gd anomalies have been found in rivers in northwestern Germany and its use as far-field
tracer has been suggested for discharge from waste water treatment plants and from sewage in river,
ground and drinking water as chelated forms of Gd are not retained by standard sewage treatments (sub
ppb concentration in the effluent) (Kulaksız and Bau 2007). Gd nephrotoxicity and accumulation is
much higher in its inorganic forms and consequently is administered for medical purposes (MRI scans)
chelated.

Ce:
there is an important number of commercial applications both in the elemental and the CeO2
nanoparticle forms: catalytic converter for the in motor vehicles, hydrocarbon catalyst in self cleaning
ovens, polishing of optical components, hydrogen production, TV screens and fluorescent lamps, red
pigment t and aluminium and iron alloys. Concentrations in UK rivers have been found in the ppb range
with values one order of magnitude higher in rain water (Neal 2005). In mice, Ce proved to accumulate in
several organs (especially in suckling individuals). In humans there is evidence of higher incidence of
endomyocardial fibrosis in areas with high Ce soil concentrations and adverse lung effects if inhaled
(EPA Toxicological review, EPA/635/R-08/002F). Despite the important increment on its use, its
deleterious effects in the organism and its high presence in rainwater, to our knowledge, there have been
no studies about Ce presence in european continental waters in the last 10 years.
Cianuro

La toxicidad por cianuro es causada por los cianuros libres (HCN y CN-) que inhiben
la citocromo oxidasa y, por lo tanto, suprimen la respiración aeróbica. Los peces son
los organismos más susceptibles: las especies sensibles exhiben efectos crónicos y
letales a niveles tan bajos como 5 a 7 gramos / litro (crónico) y 20 a 76 gramos / litro
(letal), respectivamente. La toxicidad de los cianuros complejados es generalmente,
pero no siempre, baja, pero los productos de degradación a menudo incluyen cianuros
libres que son tóxicos.
Los cianuros libres se degradan fácilmente en el ambiente abierto pero persisten en el
agua subterránea. No se bioacumulan. Los efectos subletales en los peces incluyen
una capacidad reproductiva reducida (disminución del número de huevos y la
viabilidad, y reducción de la supervivencia de embriones y larvas), la capacidad de
natación disminuida, el crecimiento alterado y la necrosis hepática. Los cianuros libres
son fitotóxicos en concentraciones más altas que las asociadas con efectos adversos
en peces. Los mamíferos son menos sensibles que los peces y son relativamente
tolerantes a exposiciones subletales intermitentes.
Generalmente se fracciona a distintos pH y
se procede a valorar las distintas fracciones
con previa derivatización y detección
colorimétrica
 Cyanide

Glass dissolved oxygen bottles

2 NaOH pellets Made up as need
Addition of ascorbic acid,
then render alkaline to pH 11–12 with sodium hydroxide
This determinant must be preserved immediately.
Need for separate container. Any residual chlorine must be removed with ascorbic acid.
Official methods for the determination of cyanides include titration [11,12],
spectrophotometry [11, 12], potentiometry with cyanide-selective electrodes [11, 13], flow
injection (FI) - amperometry [14]; the best case LOQs range from 2 to 5 μg/L. Nuevos
métodos basados en GC

The first report of injecting a cyanide bearing sample through a column packed with
essentially insoluble CuS and releasing the copper as the soluble cuprocyanide and measuring
the copper by AAS as a measure of cyanide
Electrospray ionization tandem mass spectrometry (ESI-MS-MS) is one of the most
commonly used forms of mass spectrometry. Minakata et al [77] reacted cyanide in biological
fluids with NaAuCl4 to produce the dicyanogold anion, Au(CN)2−. This was extracted into
methyl isobutyl ketone (MIBK) in presence of tetramethylammonium ion as a paring agent
and the extract was injected directly into a negative ion mode ESI-MS-MS instrument. The
transition 248.9→26.2 (Au(CN)2− → CN− was monitored. The LOD was 1.04 μg/L.
 Trace metals

Los perfiles de metales traza en el

océano dependen de su
reactividad con la superficies de
partículas en sedimentación y de
su requerimiento para la
población residente en las aguas.
Dos tipos principales de perfiles:
• Nutriente
• Sedimentación (scavenged)

Aquellos metales con un papel como micronutrientes

presentan distribuciones similares a la de los
macronutrientes
 Trace metals in aquatic resources. Environmental catastrophes.
Mercury. Minamata
Fue causado por la liberación de metilmercurio en las aguas residuales industriales de la
fábrica química de la Corporación Chisso, que continuó desde 1932 hasta 1968. Este químico
altamente tóxico se bioacumuló en mariscos y peces en la Bahía de Minamata y el Mar de
Shiranui, que al ser consumido por la población local resultó en envenenamiento por
mercurio.
Causó una contaminación masiva de la población. Los síntomas incluyen ataxia,
entumecimiento en las manos y los pies, debilidad muscular general, estrechamiento del
campo de visión y daño a la audición y al habla. En casos extremos, la locura, la parálisis, el
coma y la muerte se producen semanas después del inicio de los síntomas. Una forma
congénita de la enfermedad también puede afectar a los fetos en el útero.
Trace metals
Environmental catastrophes. Aznalcollar
On April 25, 1998, a spill at the Los Frailes mine in southern Spain resulted in a very high input of
metals (including Ag, As, Cd, Cu, Fe, Pb, Tl and Zn) into the river Guadiamar. Calculations
indicate that the discharges into the Guadiamar were of Cu (5100 t), Pb (24,700 t), Zn (26,200 t)
and Ag (138 t, based on mud only)
Bahía de Portmán
 Trace metals. Environmental concern.
Arsenic in groundwaters

Causada por la extracción mediante pozos de aguas

profundas contaminadas con arsénico debido a
largas exposiciones a minerales contaminados.
Se calcula que unos 137 millones de personas han
sufrido contaminación. Y que existen unos 1-2
millones de pozos que extraen agua contaminada.

http://users.physics.harvard.edu/~wilson/arsenic/pictures/arsenic_project_pictures2.html
Importantes esfuerzos dedicados al
desarrollo de equipos portatiles y baratos de
medida de As para asegurar un consumo
seguro de la poblacion
 Determinación de metales traza.
Contaminación
Importancia evitar contaminación. Todas las mediciones en agua de mar previas a 1980
han sido descartadas

La mayoría se encuentran a concentraciones totales disueltas por debajo de los límites de

detección de las técnicas analíticas más usadas: pretratamiento

Se necesita material especial de muestreo y un área específica de preparación de muestras

y análisis: CLEAN LAB (Sala límpia)

Laboratorio donde se bombea aire previamente filtrado (HEPA, high efficiency particle
air) y por sobrepresión se evita la entrada de partículas. El tratamiento de muestra se
realiza en cámaras de flujo laminar.

El analista debe usar siempre guantes y prendas que eviten la liberación de partículas.

Protocolos manos sucias/manos límpias o “buddy-up”

Recordar protocolos especiales de limpieza de material plástico para la
recogida y almacenamiento de la muestra
Purificación de reactivos
 Digestión UV
Se basa en el principio de la fotólisis. La radiación en el ultravioleta produce
radicales OH·- a partir de H2O2 (que es formado a partir de oxígeno o añadido
a la muestra). Los radicales son muy reactivos y espontáneamente reaccionan
con las moléculas orgánicas rompiendolas hasta obtener compuestos de bajo
peso molecular que no interfieren con el análisis: CO2, H2O, N2, or NH3.
 Preparación de muestras
Preconcentración y cambio de matriz
Aquellas muestras a niveles sub ppb o que tengan matrices con fuertes
interferencias suelen requerir tanto una modificación de la matriz como una
preconcentración.
Dificultad de reemplazar la matriz ya que el analito en ocasiones está 6-8
órdenes de magnitud por debajo de los iones mayoritarios (fase de lavado).

Tres técnicas son generalmente utilizadas en estudios ambientales para la

medida de hierro:

• LLE: extracción líquido-líquido

• SPE: extracción en una fase sólida
• Coprecipitación del analito
 Preparación de muestras
LLE (liquid-liquid extraction)
El método más usado es la quelación con APDC y DDDC con doble extracción
en cloroformo y extracción reversa en ácido nítrico

Bruland, K. W.; Franks, R. P.; Knauer, G. A.; Martin, J. H., Analytica Chimica Acta 1979, Vol. 105, 233-245.

RECETA

1. Una disolución quelante se prepara con 0.5% (w/v) de ammonium pyrrolidine

dithiocarbamate (APDC) y sodium diethyl dithiocarbamate (NaDDC)
1. Un buffer se prepara disolviendo 35 g de acetato amónico (preparado por destilación) en 100 mL de
agua ultrapura.
2. 1 mL de cada disolución se añade a la otra y los metales traza se retiran por extracción LLE con
cloroformo.
3. La muestra previamente acidificada (100-250 g) se lleva a pH 4.8 con 1-2 mL del buffer, APDC/NaDDC
y en un embudo de decatación de teflón se añaden 10 mL de cloroformo (x2) y después de varios
minutos de agitación se extrae la fase apolar por LLE donde se han concentrado todos los metales
complejados por el APDC.
4. Los quelatos de metal son descompuestos añadiendo 50 mL de HNO3 ultrapuro. Este concentrado se
lleva a 2 mL con agua ultrapura (factor de concentración x50).
5. Análisis generalmente por ICP-MS
 Preparación de muestras
SPE (solid phase extraction)

Ha sustituido a LLE ya que se puede operar fácilmente en línea con extracción reversa
con un ácido concentrado.
Tradicionalmente sólo Chelex-100 y 8-hidroxiquinolina inmovilizada en columna han
sido utilizados regularmente para preconcentrar metales traza. Su incoveniente es la
necesidad de añadir a la muestra inicialmente acidificada (pH~1.8) una alta
concentración de un buffer a pH 3-5 (generalmente acetato amónico) para poder retener
cuantitativamente el metal en la fase sólida.
El uso de técnicas espectroscópicas generalmente requiere un paso de lavado de sales
previo a la elución en ácido concentrado lo cual pone en peligro los porcentajes de
recuperación.

Desde hace aproximadamente un lustro han aparecido nuevas resinas comerciales

basadas principalmente en grupos iminodiacéticos (NTA “Superflow”, Nobias-
chelate PA1, Toyopearl AF-Chelate-650M, columnas “seaFAST” y otras) que no
requieren un paso de síntesis + inmovilización y son capaces de retener hierro a un pH
tan bajo como 2.
 Preparación de muestras
SPE (solid phase extraction)
Resina Nobias PA1 como ejemplo
Un incoveniente de la extracción a pH 2 es que requieren elución en HNO3 al
menos al 50% (pH cercano a 0) que debe ser evaporado para preconcentración
en cabinas extractoras con filtros especiales de recogida de humos ácidos en un
proceso largo y costoso.
 Preparación de muestras
Coprecipitación (Mg / Fe)
Mg es un elemento que en agua de
mar se encuentra a concentraciones
lo suficientemente altas como para al
forzar su precipitación simplemente
con una adición de amonio para
llevar la muestra a pH 11, provocar el
arrastre cuantitativo del hierro de la
muestra.
Wu, MarChem, 2007
Centrifugación y resuspensión en
nítrico completan la receta.
J. Anal. At. Spectrom., 2012,27, 1743-1752
• Especiación química del hierro en el medio acuático
• Evolución geológica del ciclo biogeoquímico del hierro
• Variables necesarias para estudios acuáticos del hierro
• Toma de muestras.
• Tratamiento de muestras
• Preparación de muestras para análisis
• Técnicas analíticas totales
• Técnicas analíticas especiación
• Problemas sin resolver
• Desarrollos instrumentales futuros
Análisis concentraciones totales
Debe existir un cuidado especial en la determinación de blancos (instrumental y
reactivos) y en el análisis de material de referencia
La concentración de hierro varía muchos órdenes de magnitud en diferentes
medios acuáticos. Importante seleccionar un material de referencia de
concentración cercana a la muestra.

CRM Suministrador Tipo de agua [Fe] (mg L-1) [Fe] (nM)

Aqua-1 NRCC agua de boca 38 680
CASS-6 NRCC agua costera 1.6 29
NASS-7 NRCC agua de mar 0.35 6
agua
SLEW-3 NRCC 0.57 10
estuárica
SLRS-6 NRCC agua de río 84 1500
GEOTRACES UCSC* Oc. Atlántico 0.034 0.6
SAFE D UCSC* Oc. Pacífico 0.050 0.9
SAFE S UCSC* Oc. Pacífico 0.006 0.1
Análisis concentraciones totales
Análisis por espectroscopía
Debe existir un cuidado especial en la determinación de blancos y en el análisis
de material de referencia

Las técnicas más utilizadas en análisis ambiental son:

ETAAS: absorción atómica con horno de grafito

ICP en sus distintas variantes: ICP-OES, ICP- MS, etc
El análisis por ICP-MS va imponiéndose , pero el análisis de los distintos
isótopos de hierro presentan varias interferencias isobáricas. La interferencia
probablemente más conocida es la de ArO+ con el isótopo mayoritario 56Fe
pero hay varias más.
Su análisis requiere el uso de
Celdas de reacción dinámicas, celdas de colisión o columnas previas que
retengan el bien el hierro o el elemento interfiriente.
AAS
ICP/OES de los Servicios Cientifico-técnicos UIB
 Multiples bandas para cada
elemento que permiten
correciones

Fe
ICP/MS de los Servicios Cientifico-técnicos UIB
Cuadropolo: consiste de 4 barras de metal paralelas.
Las barras opuestas están conectadas electricamente y
un voltaje de radio frecuencia se aplica entre los pares
de barras opuestos al que se superpone un voltaje de
corriente. Los iones que viajan ente las barras son
desviados por el voltaje de tal manera que para cada
voltaje sólo aquellos iones de una determinada
relación masa/carga (m/z) llegan al final del
cuadropolo sin colisionar con los laterales. Variaciones
de voltaje permiten obtener señales en un intervalo de
relaciones m/z.
Análisis concentraciones totales
Análisis por espectroscopía
Avance reciente: el análisis por HR-ICP-MS permite también el análisis sin
interferencias isobáricas y es la técnica elegida por aquellos laboratorios con
disponibilidad económica
 Dilución isotópica
Principio: la muestra se equilibra con una adición de una cantidad conocida de un
isótopo sintético que no se encuentra normalmente en la muestra. Se determina la
concentración de cada uno de los isótopos por espectrometría de masas. La
concentración en la muestra original se mide a partir de la proporción entre los dos
isótopos determinada y la concentración conocida del isótopo sintético que fue
añadida a la muestra. En análisis multielemental es posible determinar la
concentración de elementos para los que no haya un isótopo sintético disponible
mediante comparación de las abundancias
determinadas por ICP-MS de elemento
y de un elemento similar para el cual se puede
determinar su concentración por
dilución isotópica (Saito and Moffett, 2001).
 Interferencias por ICP-MS
Interferencias isobáricas:

La interferencia probablemente más conocida es la de ArO+ con 56Fe. Requiere o el

uso de una celda de reacción dinámica previa a la cámara del cuadropolo en la que se
puede cambiar un gas o mezcla de gases para que reaccionen con el flujo de muestra.
Los iones múltiples son a veces disgregados pasando la muestra por una celda de
colisión donde un flujo de gas (de colisión –He- y/o reacción –H2-) es introducido
en el plasma.

El análisis de Cu requiere sacar residuos de Na+ (lavado con una disolución de

NH4OH) para evitar interferencias de ArNa+.

Otras interferencias:
204 Hg y 204Pb
Diferentes isótopos diferentes interferencias. Selección del isótopo adecuado
Sector field ICP-MS
Análisis especiación isotópica
Descrita sólo desde 2007 gracias a los últimos avances en MC (muticolector)-ICP-
MS
Trabajos en laboratorio muestran que hay reacciones que alteran significativamente
la proporción isotópica pero existen muy pocos estudios de campo

Morgan et al Environ. Sci. Technol. 2010, 44, 6095–6101

Los ligandos de mayor estabilidad La composición isotópica es más pesada en

complejan preferentemente la fracción disuelta que en la particulada
isótopos más pesados
 Análisis especiación isotópica
La falta de definición de la composición isotópica de las diversas reacciones que afectan
al ciclo BGQ del hierro no han permitido su uso hasta ahora como trazador de procesos
Análisis concentraciones totales
Análisis por espectroscopía. Ejemplo práctico

 Sistema semi cerrado

 Sedimentos contaminados (Pb,
Cu) por actividades industriales
previas que vertían sin control
 Los sedimentos son continumente
resuspendidos por los ferries que
entran al puerto
 A pesar de eso, [Fe]=1-35 nM
(0.06-2 ppb)
Análisis concentraciones totales
Análisis por inyección en flujo
Permite el análisis portátil

Detección espectrofotométrica o
quimioluminiscente

Bajas concentraciones:
• Quimioluminiscencia con luminol
• UV-vis de la oxidación catalítica de
DPD (N,N-dimethyl-
pphenylenediamine dihydrochloride)
con Fe(III) en presencia de H2O2

Altas concentraciones
• UV-vis con fenantrolina o ferrozina
 Análisis concentraciones totales
FIA – Quimioluminiscencia Fe + luminol

Fe(II)/Fe(III)
El método sirve para la determinación
exclusiva de

Fe(II) -operando la muestra de forma

directa-
Fe TOTAL - si todo el Fe(II) es reducido
previamente en presencia de Na2SO3 -
Quimioluminiscencia
Fe(II)/Fe(III)
 Espectrofotometría
Determinación de cobalto: Oxidación catalítica de N,N-
dimethyl-p-phenylenediamine dihydrochloride (DPD) en
presencia de Tiron y H2O2 que produce derivados
semiquinonas que son detectados a 514 nm

Ferrozina para la detección de Fe(II)

 Fluorimetría
p-tosyl-8-aminoquinoline y FluoZin-3 para el análisis de Zn
 Análisis concentraciones totales
FIA - Espectrofotometría

• El Fe(III) cataliza la oxidación del

DPD por parte del H2O2

Complejo con ferrozina Complejo con fenantrolina

Ambos ligandos son usados para determinación de Fe(II) y FeTOT con reducción
previa (hidroxilamina)
 Técnicas acopladas a análisis en flujo

Ampliamente usadas debido a su bajo coste, gran sensibilidad y posibilidad de ser

utilizadas para análisis exsitu a pesar de sólo poder analizar un elemento.
http://www.watervilleanalytical.com/chemistries.html
 Técnicas que no dependen de la matriz
Voltamperometría
Una alta fuerza iónica es una de las condiciones de la voltametría por lo que la presencia de
forma natural de sales en la muestra no supone ningún obstáculo.
Ventajas:
• Utilización directa de la muestra
• Admite la cuantificación elemental y de algunos orgánicos
• Límite de detección excelente (subnanomolar para AdCSV, picomolar para técnicas
catalíticas)
• Bajo costo
• Posibilidad de ser llevado a barcos, integrado en cámaras bénticas o equipos autónomos
• En algunos casos permite estimar la especiación redox

Inconvenientes:
• El número de elementos que se determinan por análisis es uno o muy bajo
• Labilidad electroquímica (necesidad de digestión UV y/o acidificación previa)
• Algunos reactivos son difíciles de conseguir libres de contaminación y requieren
recristalización
• Electrodos contaminantes (Hg) o que requieren regeneración cada pocas muestras
• Difícil automatización
 La pérdida o ganancia de uno o más electrones se verifica a un
potencial característico para cada estado de oxidación de cada
elemento

Esta importante característica permite el análisis multielemental

Típico Montaje de un Equipo Voltamétrico
 TÉCNICAS MÁS COMUNES PARA EL ANÁLISIS DE ELMENTOS TRAZA
EN EL MEDIO MARINO
TIPOS DE TÉCNICAS ELECTROANALÍTICAS

Métodos Potenciostáticos Métodos Potenciométricos

(Intensidad variable y potencial controlado; (Medida de la variación del potencial a una
medida de la variación de la intensidad de corriente constante)
corriente)

Polarografía

Cronoamperometría Cronopotenciometría

Voltamperometría (Voltametría)
Stripping Chronopotentiometry

Stripping Voltammetry (concepto

de redisolución)
 Tipos de Electrodos

Electrodos de Trabajo

Mercurio: gota colgante, película de mercurio, etc.

Electrodos metálicos: platino, oro, plata

Electrodos de carbono vitrificado

(glassy carbon) o pasta de carbono

En desarrollo múltiples nuevos materiales y combinaciones:

Bismuto, compuestos mercapto adsorbidos sobre electrodos, etc
 Potenciales de Operación de los Electrodos de Trabajo

Según el material del que está hecho el electrodo de trabajo, hay un intervalo de
potenciales que pude ser aplicado
Introducción al Mecanismo de las Técnicas Voltamétricas
 Voltametría Anodica vs catodica
Alude al papel jugado por el electrodo de trabajo.

Voltametría anódica. En el electrodo de trabajo el analito

experimenta una oxidación
Cu0 ————→ Cu2+ + 2 e-

Voltametría catódica. En el electrodo de trabajo el analito

experimenta una reducción
Cu2+ + 2 e-————→ Cu0
Introducción al Mecanismo de las Técnicas Voltamétricas

Potenciales de Operación de los Electrodos de Trabajo

H2O →H2

Hg2+ + 2e-  Hg
Voltamogramas clásicos

Respuesta de la corriente ante un cambio de

potencial
a) Cuando el potencial atraviesa el
potencial redox del analito se genera
una corriente cuya máximo valor
depende de la velocidad de difusión de
la disolución hasta la superficie del
electrodo. Caso real si hay agitación
b) caso real sin agitación, una vez se
sobrepasa el potencial redox la capa
límite se extiende con el tiempo y se
obtiene esa forma irregular.
 El Análisis Cuantitativo de Elementos Traza:

Voltametría de Redisolución (Stripping Voltammetry)

-Método muy sensible pues se lleva a cabo una preconcentración in-situ

sobre el electrodo

-Consta de dos pasos fundamentales:

1.Etapa de deposición, donde se aplica un potencial constante determinado

(disolución agitada) para que el propio elemento en cuestión o un complejo
del mismo sea depositado sobre la superficie del electrodo de trabajo

2.Etapa de redisolución (stripping): se aplica un barrido de potencial (LS,

SC, DP, SW) anódico o catódico (disolución en reposo) provocando la
oxidación o reducción del elemento depositado y con ello un pico de
corriente proporcional a su concentración
Introducción al Mecanismo de las Técnicas Voltamétricas

Voltametría de Redisolución. Anódica o catódica

Anódica: apenas
tratamiento de la
muestra
Cu, Pb, Cd, Zn

Catódica: necesidad de
añadir un ligando
artificial y buffer.
Límite de detección
bajísimo. Casi todos lo
elementos pueden ser
determinados pero por
separado.
ESPECIACION REDOX POR VOLTAMETRIA
Mecanismo

Deposición
Potencial

Fe(III)-Lartificial

As(III) Fe(III)-Lnatural

As(V)
Pasos previos al estudio y determinación de elementos traza
mediante técnicas electroanalíticas

Digestión de muestra:
la materia orgánica interfiere la determinación voltamétrica
de varias maneras

forma una película sobre la superficie del electrodo reduciendo la

deposición del metal o quelato orgánico de interés (decrecimiento de la
sensibilidad)

aparición de ondas que interfieren con la determinación del elemento

en presencia de materia orgánica, una fracción significativa de metal se

encuentra complejado; dicho metal complejado orgánicamente no es
electroactivo, conduciendo a subestimar su concentración
 Fundamentos de la Voltametría y Aplicación al Análisis de
Metales Traza En Diversos Tipos de Agua
Pasos previos al estudio y determinación de elementos traza
mediante técnicas electroanalíticas

La digestión debe conseguir

que el 100% del metal sea
lábil
 Digestión por radiación UV

M. Kolb et al., 1992. Fresenius J Anal Chem, 342: 341-349

-La digestión se debe llevar a cabo en tubos de cuarzo (no absorben la radiación UV)
-La radiación UV se genera con una lámpara de mercurio
-Para muestras con elevado contenido de DOC, se requiere la adición de H2O2 para
completar la digestión
 Análisis concentraciones totales
Voltametría catódica
Ligandos no específicos pero cuyo pico de reducción aparece a un potencial libre de interferencias

Se requiere acidificación y si es posible digestión antes del análisis

Límites de detección . Análisis de hierro en agua de mar

10 pM = 0.56 ppt
Análisis concentraciones totales
Voltametría catódica
Ejemplo práctico a niveles ppt en aguas
oceánicas HNLC

Oxígeno

salinidad
• Especiación química del hierro en el medio acuático
• Evolución geológica del ciclo biogeoquímico del hierro
• Variables necesarias para estudios acuáticos del hierro
• Toma de muestras.
• Tratamiento de muestras
• Preparación de muestras para análisis
• Técnicas analíticas totales
• Técnicas analíticas especiación
• Problemas sin resolver
• Desarrollos instrumentales futuros
 Problemas sin resolver
• Naturaleza ligandos (HPLC)
• Alcance reciclado biológico
• Exportación aguas profundas
• Polvo como fuente de hierro lábil al océano
• Alcance de los flujos hidrotermales
• Efecto de la acidificación oceánica en la especiación de hierro
• Efecto del cambio climático
• Efecto debido al desarrollo de OMZ
• Efecto de la agregación de oxihidróxidos de hierro en la precipitación de fosfatos
• Especiación química del hierro en el medio acuático
• Evolución geológica del ciclo biogeoquímico del hierro
• Variables necesarias para estudios acuáticos del hierro
• Toma de muestras.
• Tratamiento de muestras
• Preparación de muestras para análisis
• Técnicas analíticas totales
• Técnicas analíticas especiación
• Problemas sin resolver
• Desarrollos instrumentales futuros
 Desarrollos instrumentales futuros
• Nuevos métodos HPLC para medida de la especiación y de los ligandos
naturales del medio
• Electroquímica con electrodos funcionalizados a niveles naturales
• Analizadores insitu (boyas, gliders, cámaras bénticas, etc)
• Rutas de bioasimilación en organismos unicelulares
• Mejores métodos de preconcentración y cambio de matriz. Necesario para
aumentar la calidad de las mediciones a bajas concentraciones y mejorar la
fiabilidad de estudios de composición isotópica