Laboratorio N°4:

Clasificación ABO/Rh(D) en RN
y Prueba Dvariante.

Banco sangre I
2021
Clasificación de grupo
ABO y Rh(D) en tubo
para Recién Nacido
 Introducción
● Al momento del nacimiento los
antígenos A y B del RN no se
encuentran totalmente desarrollados
debido a que las estructuras
oligosacáridas ramificadas
surgen de manera gradual,
encontrándose totalmente
expresadas entre los 2 y 4 años.
 Introducción
● En general la presencia de los
anticuerpos del sistema ABO se
comienzan a detectar por las
pruebas séricas (prueba inversa)
entre los 4 a 6 meses de edad.
● Pruebas séricas en menores de esta
dad se observan resultados
negativos o débiles y en general
estos últimos son anticuerpos que
suelen provenir de la madre.
 Introducción
● Con respecto a la expresión de los
antígenos del sistema Rh, estos
se expresan plenamente al
momento de nacer, siendo
detectables desde la 8° semana
de gestación.
● Los RN que den grupo D negativo
deben ser llevados a Dv (D
variante).
 Introducción
● En la rutina del laboratorio, además
de hacer la clasificación ABO/Rh del
RN se debe realizar el Test de
Coombs Directo, para detectar
posible aloinmunización feto-
materna.
 Técnica en tubo

Materiales Muestra
• Suero anti-A, anti-B, anti-
AB, anti-D y suero de
Coombs. • Sangre total con EDTA,
• Tubos de Kahn. lavada 3 veces con suero
• Pipetas desechables. fisiológico.
• Centrífuga.
• Fuente de Luz.
 Procedimiento

Suspensión al 5% Preparar 5 tubos Agregar antisueros Agregar suspensión

Preparar una suspensión Marcar 5 tubos por Agregar a cada tubo 2 Agregar a cada tubo 1
de los glóbulos rojos de la cada muestra (A, B, gotas de antisuero gota de suspension de
muestra del RN al 5% en AB, D y TCD) correspondiente. GR del RN al 5%.
salino.
 Procedimiento

Centrifugar Leer Interpretar grupo

Mezclar y centrifugar a Agitar suavemente cada Anotar el resultado en cruces
1000 rpm durante 15 tubo sobre una fuente de e interpretar de la misma
segundos. luz, para desprender el forma que se hizo con el
botón celular del fondo. grupo ABO Rh en adulto.

Registro Interno
Id de muestra Anti-A Anti-B Anti-AB Anti-D TCD Resultado
Preparar una suspensión
Procedimiento
de los glóbulos rojos de la
muestra del RN al 5% en
salino.

50 uL de GR del 950 uL de suero

RN Lavados 3 fisiológico.
veces en suero
fisiológico.
SF
 Procedimiento
Agregar a cada
tubo 2 gotas de
antisuero
correspondiente. Suero

TCD
Anti-D Coombs
A B AB D

Suspensión
5% GR RN
Agregar a cada tubo 1 gota de suspensión.
 Procedimiento
Agitar suavemente
cada tubo sobre una
fuente de luz, para
desprender el botón
celular del fondo.

Mezclar y centrifugar a
1000 rpm durante 15
segundos.
Lectura
Registro Interno
Registro Externo
Tecnica Dvariantes (Dv)
 Introducción
● A nivel biológico el sistema RH está
formado por dos proteínas que se
encuentran en la membrana del
Glóbulo rojo: RH D y RH CE, las que
interactúan con la glicoproteína
RHAG formando el complejo RH.
 Introducción
● El sistema sanguíneo Rh es el
segundo en importancia clínica
después del sistema ABO y el
antígeno D es el más inmunogénico
de todos los antígenos del sistema.
● Una persona que posee los
antígenos en sus GR se reconoce
por Rh D positivo y la ausencia del
antígeno D corresponde a una
persona Rh D negativo.
 Introducción
● Se estima que entre el 30 al 85% de
las personas RhD negativos que
reciben una transfusión RhD positivo
se aloinmunizan produciendo
anticuerpos Anti-D, la
aloinmunización también puede
ocurrir por incompatibilidad feto-
materna.
 Introducción
● Posterior a la aloinmunización, en
un segundo evento transfusional o
embarazo RhD incompatible, se
puede generar una reacción
hemolítica postransfusional o
Enfermedad Hemolítica
Fetoneonatal, respectivamente.
 Introducción
● De acuerdo a la Sociedad
Internacional de transfusión
sanguínea se han descrito 61
antígenos como parte de este
sistema sanguíneo, siendo los de
mayor importancia clínica los
antígenos D,C,E, c, e.
• Existen personas (< 0,1%) que tiene un grupo RH D
variante, lo que se debe a la presencia en menor cantidad
del antígeno D en la membrana, denominado Variante débil,
o a que el antígeno D carece de ciertos epítopes
denominado Variante parcial.

• Desde el punto de vista clínico se ha descrito en caucásicos a

la variante parcial DVI como la de mayor importancia, sin
embargo, en población Chileno no existen datos de frecuencia
de variantes, ni del impacto clínico de estos.
En la determinación serológica del
antígeno D, existen múltiples
variables que pueden influir en que
se presenten discrepancias en los
resultados intra o interlaboratorios,
entre estas se encuentran: variantes
del antígeno RhD, reactivos con
diferentes clones de anticuerpos
clasificadores y metodologías con
distintas especificidades y
sensibilidad.
Algoritmo para la clasificación de antigeno Rh D por ISP
Algoritmo para la clasificación de antigeno Rh D por ISP
 Técnica en tubo

Materiales Muestra
• Tubos de Kahn.
• Pipetas desechables.
• Centrífuga. • Sangre total con EDTA,
• Fuente de Luz. lavada 3 veces con suero
• Sueros clasificadores: fisiológico.
anti-D y suero de
Coombs.
 Procedimiento

Preparar 4 tubos Tubo Muestra Control + Control -

Marcar 4 tubos Tubo anti D utilizado Tubo con anti-D Tubo con anti-D
(tubo Muestra*, anteriormente en (igG) y suspensión (igG) y suspensión
C+, C- y TCD) clasificación de grupo de glóbulos rojos de glóbulos rojos rr.
sanguíneo R1r.
 Procedimiento

Tubo TCD Incubar Leer Lavar 3 veces

Incubar los tubos Centrifugar los Agregar solución

Suspensión 5% de Muestra, C+ y C- tubos a 1000 rpm salina y lavar 3
GR de paciente. por 30 minutos a x 15 segundos y veces los tubos
37°C. leer en la fuente durante 1 minuto
de luz. a 3000 rpm.
 Procedimiento

Agregar suero Coombs Leer Realizar tubo TCD

Después del último lavado
eliminar la mayor cantidad
de sobrenadante y
agregar una gota de suero
de Coombs.
Centrifugar los tubos a Para poder interpretar los
1000 rpm x 15 resultados obtenidos es
segundos y observar importante realizar paralelo
sobre una fuente de luz a este estudio un TCD del
si existe aglutinación o paciente.
no. Expresar en cruces.
 Procedimiento
GR 5% p

GR 5% R1r
Anti-D
Anti-D

C+
D 1 gota de
1 gota de Suspensión
Suspensión al 5% de GR
al 5% de GR R1r.

1 gota de Anti- 1 gota de Anti-

D IgM/IgG o D IgG.
IgG.
 Procedimiento

GR 5% p
GR 5% rr

Anti-D

TCD
C-
1 gota de 1 gota de
Suspensión Suspensión
al 5% de GR al 5% de GR
rr.
1 gota de Anti-
D IgG.
 Procedimiento

C-
C+
D
Mx

Centrifugar los
Incubar por tubos a 1000 rpm
30 minutos a x 15 segundos y
37°C. leer en la fuente
de luz.
 Procedimiento

C-
C+
D
Mx

Agregar lavar 3 veces los

solución tubos durante 1
SF
salina minuto a 3000 rpm
 Procedimiento

Después del Suero

Coombs
C- último lavado
C+

D
eliminar la mayor
Mx
cantidad de
sobrenadante y
agregar una gota
de suero de Centrifugar los tubos a 1000 rpm x
Coombs. 15 segundos y observar sobre una
fuente de luz si existe aglutinación o
no. Expresar en cruces.
 Procedimiento
GR 5% p

TCD
1 gota de
lavar 3 veces los
Suspensión Agregar
tubos durante 1
al 5% de GR solución
minuto a 3000 rpm
salina
SF
 Procedimiento

Después del Centrifugar los tubos

TCD

último lavado Suero

a 1000 rpm x 15
eliminar la mayor Coombs segundos y observar
cantidad de sobre una fuente de
sobrenadante y luz si existe
agregar una gota aglutinación o no.
de suero de Expresar en cruces.
Coombs.
Interpretación
• Los resultados deben establecer claramente si el paciente o donante es
“Rh positivo” o “Rh negativo”. La presencia de variantes débiles o
parciales del antígeno D debe ser interpretado como “Rh positivo” si se
trata de un donante y de “Rh negativo” si se trata de un paciente o
receptor de transfusión.

• La designación “Du” se encuentra actualmente obsoleta, por lo que se

debe hacer referencia a una designación más amplia para estas variantes
de D. Es correcto referirse a “Variantes débiles y parciales del antígeno D” o
simplemente a “D variantes”

Interpretación
Registro Interno
Registro Externo
Gracias!

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