Adjunto: Tabla de Tipificación ABO

PRUEBA CELULAR PRUEBA SERICA

GLOBULOS ROJOS SUERO DESCONOCIDO
DESCONOCIDOS
Anti-A Anti-B Anti-AB A1 B O Interpretación
0 0 0 + + 0 O
+ 0 + 0 + O A
0 + + + 0 0 B
+ + + 0 0 0 AB

4.1.2 DETERMINACIÓN DE GRUPO SANGUINEO GLOBULAR ABO-RH EN TUBO. DETERMINACIÓN DE

GRUPO SERICO ABO EN TUBO

A. OBJETIVOS

Determinar el Grupo Globular ABO-RH, mediante el uso de antisueros específicos, que actúen
aglutinando las células portadoras del antígeno respectivo. Correlación con el grupo sérico con
células de tipificación conocida.

B. COMPETENCIAS

Determina adecuadamente el grupo globular.

C. MUESTRA

Sangre entera anticuagulada y suero o plasma.

D. MATERIALES Y EQUIPOS

Reactivos: Sueros comerciales Anti A, Anti B monocional y Anti D policional o monocional.

Todos los reactivos deben usarse de acuerdo con las instrucciones del fabricante Glóbulos Rojos
A1 Y B al 5% opcional A2.

Equipos: Centrifuga de inmunohematología, aglutinoscopio, tubos 12x75, pipetas pasteur, sol-

Salina.

D. PROCEDIMIENTO

Según Manual Técnico Asociación Americana de Bancos de Sangre 15ava Edición.

 PROCEDIMIENTO EN LAMINA FACE CELULAR
1 Rotular la placa o lamina escavada identificando la muestra.
2 Colocar una gota de Anti-A en un pozo
3 Colocar una gota de Anti-B en otro pozo
4 Colocar una gota de Anti-D en un tercer pozo
5 Agregar una gota de glóbulos rojos en estudio
6 Mezclar con la ayuda de una bagueta
7 Observar la presencia de aglutación a partir de los 10 seg. Hasta los 2
minutos.
8 Leer, interpretar y registrar los resultados.

PROCEDIMIENTO EN LAMINA FASE SERICA

1 Rotular la lámina.
2 Colocar una gota de glóbulo rojo A en un pozo o en la placa
3 Colocar una gota de glóbulo rojo B en un pozo o en la placa
4 Agregar 2 gotas de suero o plasma en cada pozo de los numerales 2 y
3.
5 Agregar una gota de células A2 si correspondiera a un sub-tipo de A.
observar.
6 Mezclar con ayuda de una bagueta.
7 Observar la presencia de alutaciones a partir de 10 seg. Hasta los 2
minutos.
8 Leer, interpretar y registrar los resultados.
9 Compara los resultados de la prueba con los obtenidos en la fase
celular.

INTERPRETACIÓN
La aglutación de los glóbulos rojos constituye resultados positivos.
La resuspención de las células constituyen un resultado negativo.
GUIA DE PRACTICA N° 4

PROCEDIMIENTOS INMUNOHEMATOLOGICOS II

4.1. DETERMINACION DE GRUPO SANGUINEO ABO-RH EN LAMINA

A. OBJETIVOS

Determinar el grupo globular ABO-RH en pacientes, mediante el uso de antisueros específicos, que
actúen aglutinando las células portadoras del antígeno respectivo. Correlación con el grupo sérico
con células de tipificación conocida.

B. COMPETENCIAS

Determina adecuadamente el grupo globular.

C. MUESTRAS

Sangre entera anticuagulada y suero o plasma.

B. MATERIALES Y EQUIPOS

Sueros comerciales Anti A, Anti B, Anti-AB (opcional)

Anti D posicional o monocional todos reactivos deben usarse de acuerdo con las instrucciones del
fabricante.

G. Glóbulos rojos A1 Y B al 40% opcional A2 comerciales o preparados en el laboratorio.

Placa de vidrio o Placa escavada, pipetas Pasteur, Vegetas.

E. PROCEDIMIENTO

Según Manual Técnico Asociación Americana de Bancos de Sangre 15ava Edición.

Según Sistema de Gestión de la Calidad del PRONAHEBAS- Guía de Procedimientos Operativos

Estándar NORMA TÉCNICA N° 014- MINSA DGSP- V.01 LIMA-PERU 2004.
 INTERPRETACIÓN
Tiempos Óptimos de Reacción
ANTISUERO CÉLULAS USADAS AVIDEZ
ANTI A A1 15”
A2 30”
ANTI B A1B 30”
A2B 45”
ANTI B B 15”
ANTI Rho (D) R1 R1 DCE/ D CE 30”
R2 R2 DcE/ D cE 30”

3.4 DETERMINCIÓN DE LA ESPECIFICIDAD

A. OBJETIVOS

Determinar la capacidad de reacción de un anticuerpo frente a sus correspondientes

determinantes antigénicos.

B. COMPETENCIAS.

Determina la especificidad de los antisueros.

C. MATERIALES Y EQUIPOS

Antisueros Anti A, Anti B, Anti AB Y Anti D

Glóbulos rojos A1, B Y D positivo.

Tubos 12*75 mm

Pipetas Pasteur, aglutinoscopio, Baño María, Centrifugas.

D. PROCEDIMIENRO

Según Sistema de Gestión de la Calidad del PRONAHEBAS – Guía de Procedimientos Operativos

Estándar NORMA TÉCNICA N° 014- MISNA- DGSP- V. 01 LIMA- PERÚ 2004.
 PROCEDIMIENTO
1 Rotula 3 series de tubos cada una como: A, B Y D
2 Añadir una gota de anti A a los tubos rotulados “A”y una gota de
hematíes A1.
3 Añadir una gota de anti B a los tubos rotulados “B” y una gota de
hematíes B.
4 Añadir una gota de anti D a los tubos rotulados “D” y una gota de
hematíes D.
5 Centrifugar a 3500rpm por 15c
6 Leer

INTERPRETACIÓN
Aglutinación: Reacción del anticuerpo con su antígeno especifico.

TITULACIÓN
8 Hacer una suspensión al 2% en solución salina isotónica de células
A, B, AB.
9 Colocar en una gradilla una serie de 11 tubos de ensayo por cada
reactivo aprobar.
10 Marcar los tubos como p, 2,4,8,16,32,64,128,256,512,1024.
11 Agregar a cada una uno de ellos excepto al primero, 01 ml (2 gts)
de diluyente de suero.
12 Agregar 01ml ( 2gts) del antisuero aprobar al tubo 2 y al P
únicamente.
13 Mezclar perfectamente el contenido del bubo 2 y transferir 01 ml
(2 gts) de esa solución al tubo siguiente, repetir este
procedimiento hasta el último tubo.
14 Desechar 0.1 ml (2gts) del ultimo tubo.
15 Agragar 0.1 ml (2gts) de celular conocidas a todos los tubos
16 Mezclar y centrifugar 25 segundos a 3500 rpm
17 Leer y anotar los resultados en cruces, dar puntaje y sumar estos.
CRUCES SCORE CARACTERISTICAS
4+ 10 Un botón sólido de eritrocitos, fondo claro
3+ 8 Un grumo grande y varios muy pequeños o
varios grumos grandes, fondo claro.
2+ 6 Varios grumos de tamaño mediano, fondo claro.
1+ 4 Grumos pequeños y muchos eritrocitos libres,
fondo turbio.
½+ 3 Arenilla, fondo turbio.

VALORES REFERENCIALES
ANTISUERO CELULAS USADAS TITULO MINIMO
ANTI A A1 256 dils
A2 128 dils
ANTI B B 256 dils
ANTI Rho (D) R1R1 DCE/DCE 32 dils
R2R2 DcE/DcE 32 dils
3.3. CONTROL DE CALIDAD DE LOS REACTIVOS DE INMUNOHEMATOLOGÍA.

3.3.1 DETERMINACION DE LA AVIDEZ

A. OBJETIVOS

Determinar la velocidad de fijación de un antígeno con su anticuerpo.

B. COMPETENCIAS

Determina la validez de los antisueros.

C. MATERIALES Y EQUIPOS

Antisueros Anti A, Anti B, Anti AB Y Lectina A1

Hematíes B al 50%

Hematíes O al 50%

Hematíes A1 al 50%

D. PROCEDIMIENTO

Según Sistema de Gestión de la Calidad del PRONAHEBAS – Guía de Procedimientos Operativos

Estándar NORMA TÉCNICA N° 014- MISNA- DGSP- V. 01 LIMA- PERÚ 2004.

PROCEDIMIENTO
1 Colocar en una lámina de vidrio una gota de reactivo a evaluar
2 Colocar una gota de hematíes específicos a aproximadamente 1 cm de
reactivo a evaluar.
3 Mezclar determinando un circulo de no más de 2cm de diámetro, accionando
en forma simultánea al cronometro.
4 Continuar la mezcla por balanceo de lámina hasta ver aglutinación.
5 Anotar el tiempo de inicio de aglutinación
6 Repetir 5 veces el procedimiento y sacar un promedio.