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Las primeras observaciones celulares se produjeron en la segunda mitad del siglo XVII, cuando
Hooke y Leeuwenhoel, realizaron las primeras observaciones a través del microscopio, desde
entonces los avances sobre el conocimiento tanto de la morfología celular como de la fisiología de
éstas, se han basado en los precisos y específicos métodos de trabajo.
Hoy en día siguen siendo un método de trabajo esencial aunque los avances tecnológicos, han
permitido el desarrollo de nuevos medios de estudio.
➢ MICROSCOPÍA ÓPTICA
Se produjo en 1590, cuando Janssen consiguió ampliar las imágenes, utilizando dos lentes, dando
lugar al microscopio óptico compuesto.
En los microscopios, una de las 2 lentes se coloca muy cerca del objetivo a estudiar, esta lente
recibe el nombre de objetivo, lo que se obtiene es una imagen invertida y aumentada.
La segunda lente o lente ocular es la que se coloca a una distancia de tal forma que proporcione el
aumento del tamaño de la imagen invertida, así se multiplicará el tamaño de la imagen obtenida con
la primera lente u objetivo.
El microscopio óptico tenía sus límites y estos eran la resolución, es decir la distancia mínima en la
que dos puntos pueden estar para que se les vea separado, el límite lo marca la longitud de onda de
la luz con la que el objeto se ilumine, un microscopio óptico tiene una resolución máxima de 0,2 µm,
500 veces superior a la del ojo humano, por lo que proporcionaba aumento pero no resolución. Dos
objetos que estén separados menos de la resolución máxima de 0,2 µm, se verán como un sólo
objeto.
La imagen se forma por medio de los electrones que rebotan al entrar en contacto con la superficie
de la muestra, la muestra deberá estar recubierta por una superficie metálica, normalmente se utiliza
una fina capa de oro, al contacto con la superficie metálica, los electrones rebotan proyectando
una imagen tridimensional.
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➢ TÉCNICA CITOQUÍMICA E HISTOQUÍMICAS
Sabemos que tanto las células como los tejidos están constituidos por proteínas, carbohidratos
además de otros elementos, estas sustancias son activas químicamente, por lo que se las puede
hacer reaccionar con otros compuestos en determinadas condiciones, la reacción de éstas ante otros
compuestos es en lo que se basa esta técnica.
Dependiendo del compuesto o sustancia aplicada y la reacción de las sustancias químicas, se podrá
determinar la actividad de una enzima o de los complejos enzimáticos celulares e hísticos.
El resultado de las reacciones se observarán mediante compuestos coloreados visibles al
microscopio óptico, mientras que si van a ser observados por un microscopio electrónico, el producto
de estas reacciones será de alta densidad, introduciendo sustancias como el tetraóxido de osmio, al
reaccionar con los lípidos no saturados nos muestra un compuesto de color negro de alta densidad,
visible al microscopio tanto óptico como electrónico.
Así también se podrá distinguir la presencia de orgánulos en la célula, poniéndolos en contacto con
una serie de sustratos específicos que sufrirán una reacción al entrar en contacto con los
componentes químicos de un orgánulo, esta técnica nos ofrecerá una información muy valiosa sobre
la química celular, su estructura y localización.
➢ El cultivo celular
Muy importante para el campo de la biología experimental, tanto en Medicina, Veterinaria, etc.
Gracias a los cultivos de células y tejidos, hemos podido conocer el proceso de la mitosis celular, los
movimientos celulares o las respuestas de éstos ante sustancias diferentes, tóxicas, víricas,
bacterias, etc.
Se puede estudiar los efectos tanto de adición como de eliminación al medio de cultivo de moléculas
tales como las hormonas además de los factores que influyen en el crecimiento.
El cultivo de los tejidos han servido como base en la técnica de aislamiento de clones, cultivando una
única célula y pudiendo sacar miles de réplicas de ella.
Se trata de una técnica muy útil en el campo de los estudios genéticos, hoy en día se pueden
generar piel en el laboratorio utilizando la técnica de cultivo de células, abriéndose un amplio
horizonte de utilidades se divide en tres pasos:
• Cultivos Primarios se obtienen de los animales o vegetales. El tejido se separa en
condiciones asépticas y se corta en pequeños trozos y se los trata con tripsina (enzima
proteolítica) que disocia los agregados celulares y genera una suspensión de células libres
que se cultivan en un medio apropiado.
• Cultivos Secundarios se obtienen mediante el tratamiento con tripsina de un cultivo
primario, seguido de un nuevo cultivo en una caja de Petri.
• Cultivos de líneas establecidas cuyo crecimiento se prolonga debido a las condiciones
cancerosas de las células, entre las más usadas se encuentran las células HeLa. A pesar de
tales anomalías son muy útiles para el estudio del cáncer.
Técnicas de fraccionamiento del contenido celular
Es una técnica por la cual se aíslan y separan los orgánulos celulares con el fin de poder
posteriormente, estudiarlos. Su metodología será la siguiente:
A nivel molecular, los organismos están formados por relativamente pocos tipos de compuestos, el
agua constituye alrededor del 70% de la mayoría de los seres vivos, de los demás compuestos, los
principales son los glúcidos, los lípidos, las proteínas y los nucleótidos, muchos de ellos combinados
para formar los ácidos nucleicos, ácido ribonucleicos (ARN) y ácido desoxirribonucleico(ADN).
Aunque hay muchos otros compuestos presentes, estas cuatro categorías constituyen la mayoría de
las moléculas orgánicas de los seres vivos y son los actores de los procesos metabólicos, por lo
tanto, su localización y función dentro de la célula como un estudio más detallado fuera de ella se
hace necesario.
Algunos ejemplos de técnicas para el estudio, la ubicación y la cuantificación de moléculas orgánicas
se mencionan a continuación:
• Difracción de rayos X
Este método consiste en el bombardeo de la molécula por un delgado haz de rayos X y provoca la
dispersión (difracción) de la radiación a través de los electrones de los átomos de la muestra, este
haz disperso debe alcanzar una placa fotográfica, la estructura molecular tridimensional se deduce
de las posiciones y las intensidades de las manchas registradas en la placa fotográfica.