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MUESTRAS BIOLÓGICAS
U NIDAD D IDÁCTICA 11
C ONSERVACIÓN Y T RANSPORTE DE M UESTRAS
Daniel Brell Martín
Ldo. Biología y Bioquímica
Ciclo Formativo de Grado Superior en Anatomía Patológica y Citodiagnóstico
MÉTODOS DE CONSERVACIÓN DE MUESTRAS
❖ Niveles de protección para una correcta conservación de muestras (3 niveles)
❖ Protección química → se basa en la incorporación de aditivos que eviten la degradación del material
o la aparición de reacciones químicas indeseadas, de forma que las muestras
se conservan por más tiempo.
❖ Cualquier aditivo o medio de transporte que se añada a la muestra (así como sus concentraciones
respectivas) debe especificarse en el documento de entrega de muestras o en la propia etiqueta del
contenedor.
❖ Muestras para Bioquímica → los tipos de aditivos dependen de las características fisicoquímicas de
la muestra y de las pruebas analíticas que se prevean realizar.
❖ Conservantes utilizados en muestras de orina (constituye un tipo especial de muestra a efectos
de los plazos mayores de tiempo que suelen
acontecer entre su toma y el análisis).
▪ Aceite de parafina → favorece la formación de una película sobre la superficie de la muestra de
orina que impide el contacto con el aire, de forma que evita la pérdida de
CO2 posibilitando la realización de pruebas analíticas de acidificación.
MÉTODOS DE CONSERVACIÓN DE MUESTRAS
❖ Niveles de protección para una correcta conservación de muestras (3 niveles)
❖ Protección química
❖ Muestras para Bioquímica
❖ Conservantes utilizados en muestras de orina
▪ Cloroformo (CHCl3) → únicamente utilizado para la determinación de aldosterona
(hormona esteroide corticosuprarrenal que provoca la retención de Na+ y favorece
la eliminación de K+ en el riñón).
▪ Clorhexidina (C22H30Cl2N10) → sustancia bactericida y fungicida cuya acción prolonga la
conservación de muestras de orina hasta 6 meses, siendo especialmente útil para
la determinación de la concentración de glucosa libre.
▪ Tolueno (C7H8) → al igual que el CHCl3, forma una película protectora en la superficie de la
muestra que evita el contacto con el aire y previene el crecimiento bacteriano. Se
utiliza principalmente para determinar la concentración de acetona, proteínas y
otros analitos libres en orina. Sin embargo, una vez añadido, su retirada conlleva
cierta dificultad.
MÉTODOS DE CONSERVACIÓN DE MUESTRAS
❖ Niveles de protección para una correcta conservación de muestras (3 niveles)
❖ Protección química
❖ Muestras para Bioquímica
❖ Conservantes utilizados en muestras de orina
▪ Formalina (CH2O) → generalmente usado al 10% del volumen total para la conservación de
fracciones celulares obtenidas tras centrifugaciones y aquellas destinadas a
citologías. Interfiere negativamente en la determinación de glucosa.
▪ Timol (C10H14O) → sustancia cristalina incolora, de olor característico, presente en los aceites
esenciales de algunas plantas aromáticas (tomillo, oregano, etc.), con acción bactericida
y fungicida. Su uso se está restringiendo cada vez más debido a que favorece la
aparición de falsos positivos.
▪ Ácidos → algunos de los más utilizados son el ácido bórico (H3BO3), ácido clorhídrico (HCl) y
ácido acético (CH3COOH), a diferentes concentraciones y volúmenes en función de la
muestra a conservar y analizar.
▪ Bases → la más utilizada es el carbonato sódico (Na2CO3), útil para la determinación de
urobilinógeno y porfirinas.
MÉTODOS DE CONSERVACIÓN DE MUESTRAS
❖ Niveles de protección para una correcta conservación de muestras (3 niveles)
❖ Protección química
❖ Muestras para Microbiología → es especialmente importante seleccionar el recipiente adecuado para
el microorganismo a transportar (aerobios vs anaerobios / frotis en
contenedores), así como medios de cultivo concretos o soluciones
salinas estériles.
❖ Muestras para Anatomía Patológica → las soluciones más usadas para la conservación de biopsias y
otras muestras de tejido incluyen formalina al 5% - 10%, al
40% (formol), así como alcohol al 70%.
❖ Muestras para Parasitología → incluye las siguientes soluciones preservantes de uso habitual:
▪ Solución de formalina (CH2O) al 5 - 10%
▪ Solución MIF (mertiolate-yodo-formaldehído) → constituye una solución preservante de bajo coste,
sencilla de preparar y de rápida actuación, de larga vida útil, con capacidad para
fijar y teñir de forma simultánea, muy útil para estudios de campo y en la fijación de
quistes, trofozoítos, larvas y huevos. Sin embargo, no es apto para la preservación de
preparaciones teñidas con tinciones tricómicas, y el yodo que contiene puede interferir
en estudios que utilicen fluorescencia, causando además cierta distorsión en la
visualización de protozoos.
MÉTODOS DE CONSERVACIÓN DE MUESTRAS
❖ Niveles de protección para una correcta conservación de muestras (3 niveles)
❖ Protección química
❖ Muestras para Parasitología → incluye las siguientes soluciones preservantes de uso habitual:
▪ Fijador de Schaudinn → al igual que el anterior, muy útil para la fijación de una gran variedad de
formas parásitas (quistes, trofozoítos, larvas, huevos, etc.) Como
contrapartida, presenta cloruro de mercurio (toxicidad), es inadecuado
para fijar larvas y huevos de helmintos, coccidios y microsporidios,
y proporciona una mala adherencia de las suspensiones celulares y
las muestras de mucosas a los portaobjetos.
▪ Solución PAF (fenol, alcohol 96% y formaldehído) → preserva quistes y trofozoítos de
protozoarios, así como huevos y larvas de helmintos.
▪ Fijador de glicerina al 50% → de gran versatilidad, permite la fijación de una amplia variedad de
organismos parasitarios.
▪ Fijador PVA (alcohol polivinílico) → permite fijar y conservar todo tipo de formas parasitarias. A
menudo, se presenta combinado con cobre o zinc (prefiriendo el 2º), posibilitando la
preparación de frotis permanentes con tinciones tricómicas. Sin embargo, éstas
combinaciones no aportan tinciones consistentes y la visualización de la morfología
de ciertos organismos pueden resultar difusa.
MÉTODOS DE CONSERVACIÓN DE MUESTRAS
❖ Niveles de protección para una correcta conservación de muestras (3 niveles)
❖ Protección mecánica → agrupa todos aquellos recipientes y sistemas de embalaje destinados a
proteger la muestra frente a contaminaciones indeseadas, vertidos
accidentales, caídas, roturas, etc.
❖ El recipiente que se utiliza para la toma de muestras constituye el recipiente primario, mientras que las
protecciones externas que se añadan durante el transporte constituyen el recipiente o embalaje secundario
y embalaje exterior, respectivamente.
❖ Recipiente 1º: contiene la muestra. Debe presentar
las siguientes características:
▪ Ser de material impermeable.
▪ Presentar un sistema de cierre hermético.
▪ Estar correctamente etiquetado.
Debe envolverse en material absorbente suficiente
para evitar salidas de líquido en caso de rotura.
❖Protección física → se basa en la preservación de las muestras frente aquellos parámetros físicos
que puedan condicionar su viabilidad o alterar sus propiedades. Entre los más
destacados encontramos:
❖ Temperatura: constituye el parámetro físico sobre el que se ejerce mayor control, estableciéndose para
cada tipo de muestra una tª de conservación óptima, tal y como:
Tª de estufa (37 ºC) / Tª ambiente (18 – 30 ºC) / Tª de refrigeración (4 – 8 ºC) / Tª de congelación (-20 a -70 ºC)
MÉTODOS DE CONSERVACIÓN DE MUESTRAS
❖ Niveles de protección para una correcta conservación de muestras (3 niveles)
❖Protección física → entre los más destacados encontramos:
❖ Temperatura: a menudo, las muestras transportadas incorporan refrigerantes dentro de los respectivos
embalajes, de forma que se minimicen al máximo las variaciones de tª que puedan ser
perjudiciales para la integridad de éstas. Algunos de estos refrigerantes son:
▪ Hielo: a la hora de retirar las muestras, debe prestarse suficiente cautela para evitar que éstas se
mojen (comprobar estanqueiedad de los embalajes y recipientes).
▪ Hielo seco: no forma agua, pero requiere diseñar los embalajes internos y externos de forma
específica para evitar acumulación de dióxido de carbono que pueda elevar la presión
interna del equipo transportado.
▪ Nitrógeno líquido: los recipientes primarios deberán estar diseñados de forma que puedan resistir las
bajas temperaturas alcanzadas, así como el conjunto deberá proveerse de
sistemas de seguridad para los operarios durante el transporte.
❖ Luz: generalmente, la conservación de muestras frente a este parámetro implica el uso de recipientes
opacos o su envoltura en material de aluminio. Debe hacerse constar en el etiquetado
correspondiente la vulnerabilidad de la muestra contenida a la luz para evitar alteraciones indeseadas
durante su tránsito y manejo.
CONDICIONES ÓPTIMAS DE
TRANSPORTE DE MUESTRAS
❖ Muestras de sangre
❖ Parámetros → deben controlarse los siguientes durante el transporte de muestras sanguíneas:
❖ Tiempo de transporte
▪ Se recomienda no exceder las 2 horas desde la toma de la muestra hasta su análisis.
▪ Es conveniente que en la zona de extracción existan centrifugadoras para procesar la muestra in situ,
teniendo en cuenta los siguientes puntos:
▪ Las muestras que requieren plasma pueden centrifugarse a los pocos minutos de su obtención.
▪ En caso de querer separar el suero, la sangre debe estar coagulada antes de someterse a su
centrifugación [para acelerar el proceso pueden usarse activadores, como la trombina (5’), o
partículas de sílice (15’)].
▪ También puede resultar útil el uso de geles separadores (eliminan la necesidad de separar suero y
plasma tras la centrifugación).
❖ Temperatura → debe garantizarse una tª adecuada para cada muestra (según su naturaleza y los análisis a los
que vaya a ser sometida) durante su transporte.
❖ Presión → cuando el transporte implique variaciones de la presión atmosférica debe garantizarse la integridad de
las muestras ante éstas.
❖ Luz → debe evitarse la exposición de muestras sensibles a la luz artificial y/o solar.
❖ Posición de los tubos → se recomienda que los tubos se mantengan en posición vertical durante el transporte,
evitando ser sometidos a agitación.
CONDICIONES ÓPTIMAS DE
TRANSPORTE DE MUESTRAS
❖ Muestras para estudio microbiológico
❖ Parámetros → deben controlarse los siguientes durante el transporte de muestras sanguíneas:
❖ Condiciones de transporte → las muestras deben transportarse en contenedores herméticos.
❖ Tiempo de transporte → no exceder las 2 horas desde la toma hasta su llegada al laboratorio.
❖ Requisitos según el tipo de muestra → existen algunos requisitos específicos:
▪ Hemocultivos → no almacenar en refrigeración ni en estufa, sino mantener a tª ambiente. Enviar al
laboratorio lo antes posible.
▪ LCR → enviar lo antes posible al laboratorio (S. pneumoniae se lisa rápidamente) y no refrigerar
(afecta a la viabilidad de N. meningitidis y H. influenzae).
▪ Orina → debe enviarse al laboratorio en un plazo no superior a las 2h. tras la toma (en caso
contrario, incorporar conservante o refrigerar a 4 ºC).
▪ Heces → debe enviarse al laboratorio en un plazo no superior a las 2h. tras la toma (inmediato si
la muestra de heces es líquida), siendo conservada a tª ambiente o refrigerada a 4 ºC.
▪ Muestras de tracto respiratorio
▪ Superior → las muestras de exudados faringoamigdalares en torunda y medio de transporte pueden
conservarse a 4 ºC durante 24h.
CONDICIONES ÓPTIMAS DE
TRANSPORTE DE MUESTRAS
❖ Muestras para estudio microbiológico
❖ Requisitos según el tipo de muestra → existen algunos requisitos específicos:
▪ Muestras de tracto respiratorio
▪ Inferior:
▪ Obtenidas por métodos no invasivos → conservar a tº ambiente si envío se retrasa más de 1h.
▪ Obtenidas por métodos invasivos → enviar de inmediato debido a la acción antimicrobiana de
los anestésicos locales utilizados.
▪ Muestras destinadas a estudios
microbiológicos específicos → enviar contenidas en envases estériles y herméticos a la mayor
brevedad posible (pueden ser conservadas a 4 ºC de 24 a 48h).
▪ Muestras de piel y partes blandas → el tiempo de transporte al laboratorio no debe exceder en
ningún caso las 2h desde la toma.
▪ Muestras genitales → transporte a laboratorio inmediato. No refrigerar ante sospecha de infección
por N. gonorrhoeae.
▪ Muestras de oído:
▪ Exudados de oído externo obtenidas por torunda → conservarán refrigeradas a 4 ºC durante 24h.
▪ Muestras de oído medio obtenidas por timpanocentésis → transportar en medio para anaerobios.
CONDICIONES ÓPTIMAS DE
TRANSPORTE DE MUESTRAS
❖ Muestras para estudio microbiológico
❖ Requisitos según el tipo de muestra → existen algunos requisitos específicos:
▪ Biopsias digestivas, catéteres y líquidos biológicos estériles → transporte inmediato.
▪ Muestras para estudio de anaerobios → recoger en recipientes específicos con medio de transporte
para anaerobios y enviar inmediatamente (en caso
contrario, conservar a tª ambiente). No refrigerar.
▪ Muestras para el estudio de hongos → envío inmediato (en caso contrario,
refrigerar a 4 ºC por un máximo de 24h).
▪ Muestras para el estudio de parásitos → muestras de orina y heces sólidas
pueden conservarse a tª ambiente hasta
su envío (sin exceder 24h desde su toma)
El resto de muestras deberán enviarse
inmediatamente al laboratorio y ser
Las muestra de orina para el estudio de procesadas a la mayor brevedad posible.
parásitos se conservan a temperatura
ambiente.
CONDICIONES ÓPTIMAS DE
TRANSPORTE DE MUESTRAS
❖ Muestras para estudio anatomopatológico
❖ El aspecto fundamental en relación a muestras destinadas al servicio de Anatomía Patológica es la
preservación de la estructura celular y la integridad tisular.
▪ Biopsias
▪ De pequeño tamaño → enviar sumergidas en formol (relación Vt:Vf = 1:20). Es importante asegurarse
que los tejidos no se adhieren a la tapadera ni a los bordes del recipiente (dificulta
el proceso de fijación).
▪ Piezas quirúrgicas → deben remitirse en fresco, sin abrir ni manipular, y a la mayor brevedad
posible.
▪ Piezas quirúrgicas procedentes de
intervenciones urgentes o realizadas fuera de horario laboral → deben sumergirse en formol (relación
Vt:Vf = 1:20) y abrirse solo cuando
favorezca el proceso de fijación.
▪ Otros aspectos a tener en cuenta:
▪ Cuando la biopsia se destine a estudios de microscopía electrónica debe remitirse
inmediatamente a su obtención y en fresco.
▪ Biopsias de tejido renal y cutáneo destinadas a estudios de inmunofluorescencia deben
remitirse en fresco y protegidas en papel de filtro empapado en suero fisiológico, de forma
inmediata.
CONDICIONES ÓPTIMAS DE
TRANSPORTE DE MUESTRAS
❖ Muestras para estudio anatomopatológico
❖ El aspecto fundamental en relación a muestras destinadas al servicio de Anatomía Patológica es la
preservación de la estructura celular y la integridad tisular.
▪ Citologías
▪ Muestras de orina, derrames y LCR → enviar inmediatamente contenidas en recipientes herméticos.