Tema 16.

Despirogenación
 Despirogenación

En términos generales, las preparaciones destinadas a su administración a través de cualquiera de las vías parenterales, deben
cumplir los siguientes requisitos básicos:
- Limpidez
- pH
- Isotonía
- Esterilidad
- Ausencia de pirógenos (apirogeneidad)
 Despirogenación

El término pirógeno engloba una serie de sustancias, tanto

endógenas como exógenas, de diversa naturaleza, que
pueden dar lugar a reacciones febriles, acompañadas de
escalofríos, aceleración del pulso, disnea, cefaleas y
mialgias.

Estos cuadros pueden ser más o menos intensos, pudiendo

producir incluso la muerte, y su gravedad es directamente
proporcional al volumen inyectado.
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Tipos de pirógenos

Exógeno

Endógeno Fármacos: (anfotericina B, atropina, vancomicina),

EDTA
Hormonas tiroideas, citoquinas, adrenalina
Microorganismos: levaduras, virus y bacterias (Gram+
y Gram-)
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Tipos de pirógenos
Endotoxinas de bacterias Gram –
lipopolisacáridos (LPS) de la pared celular bacteriana
Estructura compuesta por complejos de lípidos y azúcares liberado
por las bacterias Gram negativas con el fin de mantener la
integridad de la pared celular

Los LPS también son conocidos como endotoxinas porque consisten

en toxinas ubicadas dentro de las células bacterianas. Antes se
creía que las endotoxinas se liberaban una vez que la bacteria
moría. Actualmente se sabe con certeza que la bacteria libera
pequeñas cantidades de endotoxinas como parte de su
metabolismo normal, a pesar de que la mayoría quedan retenidas
dentro de la célula.
Bacteria gramnegativa. 1-membrana
citoplasmática (membrana interna), 2- espacio
periplasmático, 3-membrana externa, 4-
fosfolípidos, 5-peptidoglicano, 6-lipoproteína,
7-proteínas, 8-lipopolisacáridos, 9-porinas.
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Tipos de pirógenos

Antígeno O

Endotoxinas de bacterias Gram –

lipopolisacáridos (LPS) de la pared celular bacteriana

Actúan a dos niveles:

• directamente en el hipotálamo
• mediante la inducción de la síntesis de IL
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Endotoxinas de bacterias Gram –
lipopolisacáridos (LPS) de la pared celular bacteriana

Antígeno O Núcleo Lípido A

Receptor de reconocimiento para el
hospedador o la respuesta inmunitaria
humana
Consiste en una secuencia repetitiva de glucanos.
Esta secuencia es variable y produce diferentes
tipos de antígenos O. Existen aproximadamente
160 tipos conocidos de bacteria E. coli solamente
Contiene varias Componente menos variable de los LPS.
cadenas de Esta molécula adhiere los LPS a la pared
azúcares además celular. Una vez que la pared celular se
de componentes degrada, el lípido A se libera de la pared
no carbohidratos bacteriana y es el componente
responsable de los efectos tóxicos de
los LPS sobre el cuerpo humano.
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Endotoxinas de bacterias Gram –
lipopolisacáridos (LPS) de la pared celular bacteriana

Antígenos bacterianos La llegada de las endotoxinas (lípido A),

así como de determinadas sustancias
Antígeno O producidas por las células del sistema
inmune

Activación cascada complemento y

respuesta inflamatoria

FIEBRE Y OTROS
Activación sistema inmune

https://www.wakopyrostar.com/blog-es/post/el-impacto-de-las-endotoxinas-en-el-cuerpo-humano/
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Termoestables (resisten esterilización en autoclave)

Pequeño tamaño (Pasan la mayoría de los filtros de 0,2 m)

¡Más fácil prevenir
Retenidos por filtros de profundidad y por sustancias los pirógenos que
adsorbentes eliminarlos!
Sensibilidad según la especie: tº de latencia hombre: 1 h 15 min
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Fuente de pirógenos

Disolvente (agua): PRINCIPAL FUENTE DE PIRÓGENOS

Sustancias disueltas (productos de origen biológico, glucosa, aa)
Material
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Precauciones para evitar pirógenos

No almacenar innecesariamente el agua

Conservar el agua en condiciones que eviten desarrollo de microorganismos
Diseño canalizaciones: evitar estancamientos
Limpiar canalizaciones con antisépticos o vapor sobrecalentado
Utilizar reactivos libres de pirógenos
Lavar el material con ácidos o bases, enjuagar con agua apirogénica, calentar a tª > 200°C
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Procedimientos de despirogenación

1. Destilación (agua libre de pirógenos)

2. Adsorción sobre carbón activo ◦ Desventaja: alta afinidad por moléculas no-ionizadas de compuestos con
elevado PM
3. Tratamiento con agentes oxidantes: H2O2 , hipoclorito Na
4. Filtración: ◦ Filtros en profundidad ◦ Membranas de ultrafiltración porosidad: 0,2-0,002 mm
5. Calentamiento en medio ácido o alcalino: ◦ HCl 0,1 N 30 min, 100 °C  inactiva LPS por hidrólisis; ◦
NaOH 0,1 N en etanol 95 % ó dimetilsulfóxido al 80 %  saponificación del ácido graso del LPS
6. Calor seco: tª > 250°C, 30 min (vidrio, equipos metálicos)
7. Otros métodos: ósmosis inversa, técnicas cromatográficas, etc