FORMATO CONDES

IX. CONTENIDO DEL PROYECTO

TITULO DEL PROYECTO

Síntesis de análogos de acetogeninas con potencial actividad antineoplásica

RESUMEN (150-300 palabras) Identifique el problema u objeto de investigación, cómo será analizado y los resultados
que se esperan de la misma.

Las acetogeninas son un grupo de sustancias cerosas con diferentes bioactividades, cuya
estructura posee un grupo γ-lactónico y uno, dos, o tres anillos tetrahidrofuránicos sobre una larga
cadena alquílica la cual también presenta grupos hidroxilos dispersos. Una de las bioactividades
más destacadas en las acetogeninas consiste en inhibir selectivamente el crecimiento de las
células cancerígenas. Las terapias utilizadas actualmente para el tratamiento contra cáncer no han
surtido el efecto deseado en las células cancerígenas, por lo tanto es relevante la búsqueda de
nuevas fuentes y/o métodos alternativos viables para la obtención de nuevos fármacos
fitoterapéuticos con mayor efectividad e inocuidad. El principal objetivo de esta investigación es la
síntesis total de análogos de acetogeninas con potencial actividad antineoplásica, por lo cual se
realizará la comprobación de esto mediante la aplicación de pruebas biológicas in vitro tanto con
células normales como neoplásicas, para así demostrar su acción en ambos casos.

PROBLEMA / OBJETO Y JUSTIFICACIÓN: Describa el problema u objeto que será investigado y las interrogantes que
habrán de guiar el proceso de investigación. Cabe señalar que una justificación adecuada de dichas interrogantes debe ir
acompañada de una idea de la posible contribución al conocimiento que aportará la investigación y el lugar que ocupa en
el debate actual o en los adelantos tecnológicos pertinentes.
Esta sección debe proporcionar una breve visión panorámica de la literatura y la investigación ya existentes en el área de
la problemática de la investigación propuesta y los vacíos que ésta vendría a llenar.

Los productos naturales son compuestos formados esencialmente por carbono que
presentan excelente actividad biológica, utilizados de forma terapéutica, como modelo para realizar
modificaciones estructurales, a través de síntesis parcial o total para generar nuevos fármacos.
Se ha demostrado que algunos de estos productos presentan actividad antineoplásica y se
han empleado con éxito en el tratamiento contra el cáncer (efecto antitumoral y anticancerígeno)
(Colom-Loo et al., 2005; Tayarani-Najaran, Ahmad-Emami, Asili, Mirzaei y Hadi-Mousavi, 2009).
Por lo tanto, se ha incentivado el estudio para establecer y/o estandarizar métodos para el
aislamiento, caracterización y posterior evaluación de la actividad biológica de nuevos fármacos
fitoterapéuticos con efectos anticancerigenos (Bohlin, Göransson, Alsmark, Wedén y Backlund,
2010)
La graviola, es un complemento alimenticio coadyuvante en el tratamiento contra el cáncer,
comercialmente presentado en capsulas. Este producto se obtiene a partir de la hoja de arboles de
Annona muricata L., conocida comúnmente como Guanábano
El principio activo de este fármaco, está conformado por un grupo de sustancias cerosas
conocidos como acetogeninas las cuales son las responsables de la actividad antineoplásica que
presenta. Estas poseen un grupo γ-lactónico α, β-insaturado o saturado y uno, dos, o tres anillos
tetrahidrofuránicos sobre una larga cadena alquílica, las cuales presentan diferentes
bioactividades. Se ha demostrado que las acetogeninas pueden inhibir selectivamente el
crecimiento de las células cancerígenas, asimismo de células resistentes a múltiples fármacos
(Schlie-Guzaman, González-Esquinca, Luna-Caseres, 2009).
En Venezuela, existe gran interés por diversificar la explotación de frutas cultivadas en el
territorio nacional, La guanabana en Venezuela es la especie más importante de las Annona
comestibles cultivadas. La creciente demanda e interés por esta, hace que sea muy apreciada por
sus propiedades alimenticias y excelente sabor comercial, para la elaboración de jugos, helados,
 néctares, mermeladas, dulces y pulpa congelada. Se estima que Venezuela es el país con mayor
superficie sembrada en América del Sur, con un área plantada superior a las mil hectáreas, siendo
el Sur del Lago de Maracaibo la zona con mayor área plantadas.
Tomando en consideración que la graviola solo se obtiene de la hoja de este árbol y es el
único producto natural antineoplásico del que se han obtenido resultados positivos verdaderamente
relevantes, se busca realizar productos análogos a éste, que partan de su mismo principio activo
(acetogeninas) tomando su composición como patrón a seguir, debido a su gran efectividad tanto
en células cancerígenas como tumorales.
Para la realización de la síntesis de las acetogeninas se deben tener en cuenta ciertos
aspectos ya que aun cuando la estereoquímica de sus componentes no afectan su actividad
inhibitoria, la distancia óptima entre el grupo tetrahidrofuranico y el anillo lactónico debe ser de 13
carbonos, si la cadena posee mayor o menor cantidad de carbono separando estos dos grupos su
actividad inhibitoria decrece (Schlie-Guzaman, González-Esquinca, Luna-Caseres, 2009).
Según lo descrito anteriormente se considera relevante tomar a las acetogeninas mono-
tetrahidrofuranicas con una cadena espaciadora de 13 carbono entre el anillo lactónico y el
tetrahidrofuranico como patrón para el diseño y la síntesis de análogos con potencial actividad
antineoplásica, haciendo variaciones estructurales entre el numero de anillos lactónicos y la
presencia de este en la cadena alifatica.
Actualmente las terapias utilizadas para el tratamiento contra cáncer no han surtido el
efecto deseado en las células cancerígenas, por lo tanto es relevante la búsqueda de nuevas
fuentes y/o métodos alternativos viables para la obtención de fármacos fitoterapéuticos de mayor
efectividad e inocuidad.

OBJETIVO/PROPÓSITO/UNIDAD DE ANÁLISIS: Defina en forma global, lo que se espera lograr con la investigación.

Sintetizar y evaluar biológicamente la actividad antineoplásica de análogos de

acetogeninas.

OBJETIVOS ESPECÍFICOS (SI APLICA): Identifique los logros particulares esperados a través de los cuales se
alcanzan los objetivos generales. Es importante distinguir entre los objetivos específicos y los medios para lograrlos, tales
como realizar trabajo de campo, organizar una red; un taller de trabajo o ejecutar un proceso de análisis de datos.

1. Sintetizar análogos de acetogeninas mono-THF empleando métodos convencionales.

2. Caracterizar a través de estudios espectroscópicos (IR, RMN y EM) los análogos sintéticos
de acetogeninas.
3. Evaluar la inhibición de la proliferación celular por análogos sintéticos de acetogeninas
sobre células neoplásicas.

HIPÓTESIS (Si aplica)

Los análogos de acetogeninas sintetizados poseen potencial actividad antineoplásica.

METODOLOGÍA: Describa los métodos y las técnicas e instrumentos de investigación a ser utilizados en el desarrollo del
proyecto. Los mismos deben ser coherentes con la naturaleza de los objetivos de la investigación.

I.- Síntesis Orgánica

1) Formación de 2͵5-dicloruro de hidrofuranoilo a partir de la reducción del 2,5-ácido

furánodicarboxilico.

El 2,5-ácido furánodicarboxilico se someterá a una hidrogenación catalítica en presencia de Níquel

Raney para obtener el derivado tetrahidrofuranico dicarboxílico. Posteriormente, el derivado
tetrahidrofuranico dicarboxílico se someterá a una reacción de sustitución nucleofilica sobre el acilo
utilizando Cloruro de tionilo, para así obtener al 2͵5-dicloruro de hidrofuranoilo.
 2) Síntesis del 3-bromo-hidrofuran-2(3H)- ona a partir de la 2(5H)-furanona

La 2-(5H)-furanona, se someterá a una halogenación mediante adición electrofílica vía radicales

libre con ácido bromhídrico en presencia de peróxido (ácido m-cloroperbenzoico), para obtener el
3-bromo-hidrofuran-2(3H)-ona.

3) Síntesis de los derivados de acetogeninas

3.1.- Síntesis de DNDR1

El 6-clorohexanol se hará reaccionar con CuI y Litio metálico para obtener el reactivo de Gilman
correspondiente, sobre el cual se añadirá el 2͵5-dicloruro de hidrofuranoilo para obtener el producto
A. Seguidamente, el producto A se someterá a reacción con Cloruro de tionilo en presencia de
piridina para obtener el derivado diclorado correspondiente. Finalmente, el derivado diclorado será
agregado en una mezcla previamente preparada del reactivo de Gilman empleando 6-clorohexanol
con CuI y Litio metálico para obtener obtener el derivado DNDR 1.

A
 3.2.- Síntesis de DNDR2

Para la obtención del siguiente derivado se tomara al DNDR 1 y se le aplicara una

reducción, con el reactivo de Lucas para así obtener el segundo derivado el cual llamaremos
DNDR 2.

3.3.- Síntesis de DNDR3

DNDR 1, se someterá a una reacción con el Cloruro de tosilo (ClSO 2(C6H4)CH3) en

relación molar 1:2. El ditosilato formado se añadirá a una mezcla del reactivo de Gilman generado
al reaccionar 3-bromo-hidrofuran-2(3H)-ona con CuI y Litio metálico, obteniéndose el intermediario
dicarbonílico bilactónico. Finalmente, dicho intermediario se somete a una reacción de reducción
con NaBH4 para obtener el derivado dihidroxilado bilactónico DNDR 3.

3.3.- Síntesis de DNDR4

El derivado DNDR 1 se hará reaccionar con Cloruro de tosilo a una relación molar de 1:1,
con la finalidad de obtener el derivado monotosilato. El derivado monotosilato se añadirá a una
mezcla del reactivo de Gilman generado al reaccionar 3-bromo-hidrofuran-2(3H)-ona con CuI y
Litio metálico, obteniéndose un intermediario dicarbonílico monolactónico, el cual se hará
reaccionar finalmente con NaBH4 para obtener el derivado dihidroxilado monolactónico DNDR4.
 II.- Caracterización Espectroscópica

Se realizarán experimentos de RMNH1 y RMNC13, empleando un Espectrómetro JEOL

ECLIPSE 270 (270MHz) y un Bruker AVANCE II 300MHz. (Ubicados en Facultad de Farmacia de
la Universidad Central de Venezuela y el Instituto Venezolano de Investigaciones Científicas (IVIC),
respectivamente)
Los Espectros infrarrojo se realizarán empleando un espectrofotómetro Shimadzu modelo
470 (ubicado en Facultad de Farmacia-UCV).
Para los experimentos de Espectrometría de Masa se empleará un espectrómetro de
masas de la serie TSQ Quantum con triple cuadrupolo (marca Thermo Scientific) acoplado a un
sistema de cromatografía de líquidos (CL), ubicado en el Centro de Química del Instituto
Venezolano de Investigaciones Científicas (IVIC).

III.- Evaluación de los derivados de acetogeninas como inhibidores de la proliferación celular sobre
células neoplásicas.

Pruebas in vitro:

Cultivo de células primarias:

Las líneas celulares (normales y neoplásicas) serán cultivadas y mantenidas en
crecimiento logarítmico en los medios de cultivo MEM y DME (Dulbecco Modified Eagle Medium)
respectivamente, suplementados con 10 % de suero fetal bovino y 50 μg/mL de gentamicina. Las
dos líneas se mantendrán a una temperatura de 37 ºC, en un ambiente húmedo con 95% de aire y
5% de CO2.

Ensayo de la actividad citotóxica

Se utilizará una placa 0 (control) asignándose seis pozos para cada línea celular y una
placa 1 (experimental) con 12 pozos para cada línea celular. En cada pozo de ambas placas se
colocarán 160 μL de medio de cultivo conteniendo las células. Se incubará a 37 ºC en una
atmósfera húmeda con 5% de CO2 y 95% de aire por 24 horas. A la placa 0 se le añadirá acido
tricloroacético (TCA) para fijar las células y luego cuantificarlas en el tiempo cero. A la placa 1 se
agregarán las diferentes diluciones de los derivados.
La concentración inhibitoria de crecimiento 50 (CI50) se hallará mediante el análisis de
regresión linear (ecuación de la recta: y=a+bx). Luego se determinarán los coeficientes de
correlación de Pearson (r) que nos indican la relación dosis-respuesta entre las concentraciones y
el porcentaje de crecimiento. Para determinar la selectividad citotóxica de las sustancias
evaluadas, se calculará el índice de selectividad, según la fórmula:

Si el valor es >1, indica que la sustancia es más citotóxica para las células tumorales que
para las células normales, si es <1, lo contrario.

Las Líneas celulares a emplear serán: PC-3 (Cáncer de próstata), U-251 (Glio: Sistema
Nervioso Central), K-562 (Leucemia), HCT-15 (Cáncer de colon), MCF-7 (Cáncer de mama),
SKUL-1 (Cáncer de pulmón)

VIABILIDAD DE LA INVESTIGACIÓN: Indique elementos técnicos, financieros, institucionales y otros que garanticen el
desarrollo de la investigación

Los objetivos de este proyecto tienen gran factibilidad de lograrse debido a que la
infraestructura requerida para la síntesis se encuentra presente en los Laboratorios de Química del
 Bloque H de la Facultad de Humanidades y Educación (FHE) de LUZ, para la fase de
caracterización se cuenta con el Laboratorio de Síntesis Orgánica de la Facultad de Farmacia de la
UCV para los experimentos de IR y RMN así como con el Instituto de Química del IVIC para los
análisis de EM, además se cuenta con el apoyo del Laboratorio de Postgrado de a FEC para la
realización de las pruebas biológicas, y con la preparación académica del personal adscrito al
proyecto, quienes garantizarán en unísono el alcance de los objetivos propuestos.

RESULTADOS ESPERADOS DE LA INVESTIGACIÓN Y ESTRATEGIAS DE DIFUSIÓN: Defina, en relación con los

objetivos planteados y la productividad esperada, los posibles resultados del proyecto y resuma las estrategias para su
difusión o implementación. Ejemplo: talleres de trabajo, congresos, informe final, publicaciones, tecnologías nuevas, etc.
Defina como la investigación propuesta complementará las líneas y programas de investigación existentes en la unidad
de adscripción.

Se espera sintetizar análogos de acetogeninas con las variaciones estructurales

correspondientes, a fin de determinar su potencial actividad antineoplásica, generando resultados
que contribuyan en el análisis de la relación Estructura Química-Actividad Biológica de este tipo de
compuestos desde el punto de vista de la Química Medicinal.
Se prevé divulgar los resultados de esta investigación vía web y en revistas electrónicas, así como
también en congresos o jornadas de investigación estudiantil a nivel nacional, con el fin de que
sean de gran utilidad para futuros proyectos.

CRONOGRAMA DE ACTIVIDADES: Indique el tiempo necesario para llevar a cabo cada fase del proyecto, así como la
duración total del mismo (18 MESES).

Objetivo Actividades Tiempo

Síntesis del 2͵5-dicloruro de hidrofuranoilo

Septiembre-
Síntesis de la 3-bromo-hidrofuran-2(3H)- ona Noviembre 2014

Síntesis de análogo DNDR 1 Diciembre 2014-

1 Síntesis y
Caracterización de análogo DNDR 1 Febrero 2015
caracterización
de análogos de Síntesis de análogo DNDR 2
Marzo-Abril 2015
acetogeninas Caracterización de análogo DNDR 2
Síntesis de análogo DNDR 3
Mayo-Junio 2015
Caracterización de análogo DNDR 3

Síntesis de análogo DNDR 4

Julio-Septiembre
2015
Caracterización de análogo DNDR 4
Preparación de la líneas celulares a utilizar

2 Actividad Incubación de las líneas celulares Octubre 2015-

antineoplásica Enero 2016

Ensayo de actividad citotóxica

3 Vinculación de Procesamiento de datos, y análisis de resultados Febrero-Marzo

resultados Redacción del Informe Final 2016
FORMACIÓN DE RECURSOS HUMANOS: Indique la manera en que el proyecto podría contribuir a la capacitación de
personal. Señale si existen trabajos de grado y tesis adscritas a la investigación. Señale si el proyecto incorporará
estudiantes como colaboradores. Indique si algún miembro del equipo de investigación es tutor de Becarios Académicos
o PIN y si el mismo forma parte del equipo de investigación. Señale quienes del equipo de investigación participan en
actividades de postgrado (El. Dictado de cátedra, Comité Académico, Coordinación de Programas u otro).

Durante la ejecución del proyecto se entrenarán en la metodología propuesta a los

bachilleres: Gonzales, David; Loaiza, Deangerlin; Montero, Nelson, cursantes de la asignatura
Seminario de Investigaciones Químicas dirigida por el Dr. Fernando Rincón adscrito al Centro De
Investigaciones en Química de los Productos Naturales “Dra. Gladys León De Pinto” ubicado en la
División de Postgrado e Investigación de la Facultad de Humanidades y Educación, estudiantes de
últimos semestres de Licenciatura en Educación Mención Química, bajo la tutoría de la Dra. Rosa
Ferrer adscrita al Departamento de Química de la Facultad de Humanidades y Educación.

OTROS LOGROS DEL PROYECTO: Indique si el proyecto generará relaciones interinstitucionales, nacionales y/o
internacionales. Señale cómo el proyecto contribuirá a consolidar o producir nuevas líneas, programas o proyectos de
investigación. Registre otros logros que considere importantes. (Ej. Impacto del proyecto en el avance o solución de
problemas asociados al entorno socio-cultural, tecnológico o al desarrollo regional, nacional o continental).

El proyecto pretende consolidar y vincular las diferentes líneas de investigación en el

campo medicinal a nivel universitario, no solo a escala interinstitucional sino también nacional,
dando respuesta a las áreas de Salud Pública, Desarrollo Sustentable y Biodiversidad delimitadas
en el Plan Nacional de Ciencia, Tecnología e Innovación (2005-2030) , y a su vez favoreciendo el
desarrollo de la estrategia nacional para la seguridad y soberanía farmacéutica, mediante un
desarrollo sustentable incluidas dentro de las directriz del Proyecto Nacional Simón Bolívar,
contribuyendo así con el desarrollo de futuras investigaciones en el estudio sobre nuevos fármacos
con actividad antineoplásica.

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

1. Ramos, J. 2014. (Tesis de grado), Síntesis quimioenzimática de anillos THF presentes en

acetogeninas. Facultad de Quimca, Universidad de la Republica, Uruguay.
2. Schlie-Guzaman, González-Esquinca, Luna-Caseres, 2009. Las acetogeninas de
Annonaceae: efecto antiproliferativo en líneas celulares neoplásicas. Boletín
Latinoamericano y del Caribe de Plantas Medicinales y Aromáticas, vol. 8, núm. 4, pp. 245-
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3. Posso, M. Quispe, A. Rojas, J. Vaisberg, A. Zabala, D. 2007 Efecto citotoxico de Annona
Muricata (Ganabana) en cultivos de líneas celulares de adenocarcinoma gástrico y
pulmonar. CIMEL Ciencia e Investigación Medica Estudiantil Latinoamericana año/vol 12
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Medicina, Lima, Peru, pp. 19-22
4. Posso, M. Quispe, A. Rojas, J. Vaisberg, A. Zabala, D.2006. EFECTO Citotóxico selectivo
in vitro de muricin h (acetogenina de annona muricata) en cultivos celulares de cáncer de
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5. Alonso, J. Antitumorales Vegetales. Curso Anual de Fitomedicina modulo n° XXXIX.
6. Peña, D. Pérez, J. Metodologías utilizadas en la investigación de plantas antitumorales:
descripción y comentarios. Revista Científica, Artículos Científicos.