CAPITULO6 ')
ESTERILIZACION Y DESINFECCION
Esterilización
si
Introducción
El término esterilización puede definirse como "el
proceso de remoción o destrucción de Ja totalidad de los
microorganismos viables produciendo una condición de
esterilidad”, mientras que el término estéril es "la ausencia
absoluta de toda forma viable de vida”.
Ambos términos son conceptos abstractos de estados
negativos y, como tales, no son factibles de demostrar
prácticamente.Esto significaque la muerte o remoción de
las bacterias sigue una función de probabilidad, y siempre
hay una posibilidad finita de que queden algunos
microorganismos vivos intactos en el sistema. En la práctica,
el término esterilización significa el proceso de alcanzar
un estado con el mínimo riesgo calculado de sobrevivientes,
mientras que por estéril se entiende la ausencia de formas
de vida demostrables. El alcance de este riesgo depende de
muchos factores que se discutirán más adelante, pero con
la mayoría de los procedimientos de esterilización éste es
normalmente de muy bajo orden.
Los microorganismos muestran casi el mismo patrón
general en su variabilidad de resistencia al calor, la radiación
o compuestos químicos. Las formas vegetativas de bacterias,
los mohos y las levaduras, así como la mayoría de los virus,
son los más sensibles; son aproximadamente entre cien y
mil veces más sensibles que las esporas bacterianas a la
radiación UV e ionizante, y muestran una respuesta
significativa al calor húmedo a 60-70*C.
Las bacterias termófilas, los virus pequeños, algunas
formas de esporas fúngicas, y algunas de las esporas
bacterianas más sensibles son destruidas a temperaturas de
entre 70 y 90°C, mientras que las esporas bacterianas en su
totalidad deben ser sometidas a temperaturas en el rango
de 90-115%C, con una completa hidratación, antes de que
pueda observarse una reducción significativa en su
viabilidad dentro de un lapso de tiempo razonable. Sin
María del Carmen Magariños
embargo, aun dentro de este patrón general, las especies de
organismos individuales pueden variar considerablemente
en el grado de respuesta a calor húmedo o seco, radiación o
agentes químicos.
Cuando se utilizan agentes físicos, el principal problema
consiste en decidir el nivel del tratamiento. Es necesario
decidir sobre factores como la temperatura y el tiempo de
calentamiento, o la dosis de radiación. Para esto, como para
comparar la eficiencia de los diversos tratamientos de
esterilización, debería conocerse, al menos en teoría, el tipo
y el número total de microorganismos presentes, como
también la respuesta de dichos organismos al tratamiento
propuesto. En la práctica es usual asumir que los organismos
presentes en una carga determinada no son más resistentes
que las esporas bacterianas más resistentes. Idealmente, cl
uso de un tratamiento de esterilización debería decidirse
para cada carga específica con el conocimiento previo del
tipo y número de microorganismos contaminantes presentes.
Velocidad de muerte de microorganismos
Cuando una población de microorganismos es
gemsndn a procesos ©a esterilización eds radiación O
mismo tiempo, El número de os vivientes disminuye
exponencialmente con el tiempo de exposición hasta que
no pueden detectarse más organismos viables.
Mientras esto se mantiene, la curva de sobrevivencia,
es decir, el gráfico del logaritmo del número de la
fracción de sobrevivientes (N/N, ) en función del tiempo
(1) independientemente del número inicial de micro-
organismos, es lineal (fig. 6-1 A).
La curva del tipo indicado en la figura 9-1 A puede
ser descripta por la expresión matemática:
N/N, = e (1)

lo cual es análogo a la expresión
de una reacción química
de primer orden, donde la velocidad es dependiente de la
concentración del reactante y puede suceder que la respuesta
celular sea debida al desarrollo de reacciones quimicas
letales intracelulares, de acuerdo con procesos cinéticos de
primer orden. En dicha expresión, K representa la constante
de inactivación y es una medida
de la velocidad de muerte.
Con algunos microorganismos, como
altamente resistentes, puede haber una fase inicial log en la
muerte en función del tiempo antes de que la curva de
sobrevivientes comience a decrecer exponencialmente. Esto
produce un "hombro" o plateau en la curva, que luego puede
ser lineal (fig. 6-1 B). En otros casos como, por ejemplo,
con organismos altamente sensibles, la porción inicial de
la curva puede ser muy aguda y no exponencial antes de
convertirse en lineal, dando lugar a una curva bifásica (fig.
6-1 C). Estos casos son típicamente demostrados con
procesos de esterilización por calor y radiación.
Con tratamientos químicos, la curva de sobrevivientes
puede iniciarse con características de linealidad, pero
después de un tiempo muestra un retardo en la velocidad
de muerte dando lugar a una "cola" (fig. 6-1] D). A veces,
toda la curva toma una forma sigmoídea; esto indica la
presencia de sobrevivientes resistentes en la suspensión
“original, aun cuando se trate de bacterias del mismo tipo.
También hay indicios de que las curvas de sobrevivientes
sigmoideas pueden demostrarse con microorganismos
altamente resistentes sometidos a calor o radiación, pero
no está perfectamente conocido cuánto de esto ocurre en la
práctica.
LOG N* SOBREVIVIENTES
_ — A —.-
<— Fig. 6-L. Curva de sobrevivencia.
EW 101 Ñ
En todos los casos, la pendiente de la curva en:ſa porción
lineal varía con muchos factores, tales como la” Severidad -.$
del tratamiento y la presencia de agentes protectivo=Pars”
todos los organismos, el tiempo requerido para lograr un
número dado de sobrevivientes disminuye con la cantidad
de microorganismos originalmente presentes.
las esporas
Valor D
Para muchos propósitos, el uso de la constante de
velocidad de muerte K no es la forma más conveniente de
expresar la resistencia de un microorganismo dado a un
proceso de muerte específico, y puede ser mejor
caracterizada por el "valor D" o tiempo de reducción
decimal. Este es el tiempo en minutos requerido para reducir
un 90% el número de organismos viables, es decir,al 10%
del recuento original, lo cual corresponde a una disminución
de un ciclo logarítmico en la curva de sobrevivencia. Todos
los factores, tales como la temperatura o dosis de radiación,
composición y pH del medio de calentamiento, etc., deben
ser especificados. Si todos estos factores son bien
conocidos, el valor D puede ser determinado con bastante
precisión para muchos microorganismos.
Este valor D puede correlacionarse de manera razonable
con la resistencia intrínseca de un microorganismo si éste
muestra una curva de sobrevivencia del tipo indicado en la
figura 6-1 A. Sin embargo, con las curvas del tipo señalado
en la figura 6-1 B o curvas que muestran algún tipo de
activación en el período inicial, los valores D pueden ser
20 30 40
TIEMPO (minutos) a 115 °C
—A= © “a D
 102

corregidos para dar lugar a este período inicial, donde no
hay reducción en los sobrevivientes.
Valor Z
Si se grafican los valores D de un organismo dado sobre
una escala exponencial o papel semilogarítmico en función
de las correspondientes temperaturas en escala lineal, resulta
una relación lineal.
Para un microorganismo dado, el "valor Z” es el
incremento en temperatura, dosis de radiación, o
concentración bactericida, requerido para reducir un 90%
o un ciclo logarítmico el valor D, e indica la respuesta de
un organismo al cambio en el valor del factor de muerte.
Este valor se usa muy extensamente en los cálculos de
esterilización.
El valor Z refleja el efecto del cambio de temperatura
(o dosis de radiación o concentración de agente bacteri-
cida) sobre la resistencia del microorganismo; es una
característica fundamental de cada especie dada.
Factor de inactivación +.
Puede apreciarse que, independientemente del tipo de
curva de sobrevivencia que muestren los microorganismos,
no hay un tiempo finito dentro del cual, con un 100% de
certeza, pueda asumirse que todos los microorganismos
presentes han muerto, debido a la naturaleza exponencial
de la curva. El método más simple de calcular la
probabilidad de alcanzar la esterilidad para cualquier
número inicial de sobrevivientes está basado en el uso del
El mismo producto que contenga la misma carga microbiana
poseerá al final 10” esporas, o lo que es lo mismo, habría
sólo una posibilidad entre 10.000 de que una sola espora
permanezca viable. Aquí se introduce el concepto de riesgo
calculado, ya mencionado. En líneas generales, se puede
decir que cuanto menor sea la posibilidad de contaminación
y mayor el factor de inactivación de un proceso de
esterilización, menor es el riesgo de defecto en la esterilidad
del producto.
Puede verse, entonces, que el factor de inactivación es
una medida del poder destructivo total del sistema.
Valor EF
El valor F es una unidad de letalidad utilizada para definir
la eficiencia de un proceso de esterilización, sobre todo en
el campo de la industria alimentaria. Puede definirse como
el tiempo requerido en minutos a 121*C para producir el
mismo efecto de muerte que el proceso empleado. Por
ejemplo, si un proceso de esterilización tiene un valor F de
10 minutos, significa que tiene el mismo efecto sobre la
muerte de un microorganismo de referencia que el
calentamiento a 121?C durante 10 minutos, indepen-
dientemente de la combinación temperatura/tiempo
empleada.
Para un proceso dado, este valor también variará según
la resistencia del organismo de referencia, y puede requerirse
una mayor caracterización por medio del valor Z del
organismo, por ejemplo, F?= 10, El valor F puede ser usado
para calcular el número probable de sobrevivientes
remanente en una Carga como:

factor de inactivación (1F).

De esta forma, el valor D puede ser utilizado para F=D (log N, - log N) (3)
caracterizar la eficiencia de un proceso de esterilización en
destruir un microorganismo específico. El "factor de donde D: valor D a 121*C del organismo,
inactivación” es la cantidad por la cual una combinación N,: número inicial de la población por unidad de
determinada de temperatura, o dosis de radiación, etc., y volumen.
tiempo de exposición reducirá el número de sobrevivientes N: número final de la población por unidad de
de un microorganismo determinado, Puede calcularse a volumen.
partir de los valores D conocidos del microorganismo, como El valor F también puede emplearse para evidenciar la
sigue: equivalencia entre dos procesos de esterilización por calor
de la siguiente forma:
factor de inactivación = 10%P (2)
td Dx log [ T-O (4)
log e lo — Mo NEAR id SS) ir
donde t: es el tiempo del tratamiento en minutos ro “8 FO Z
D: es el valor D para la misma temperatura, o dosis de
radiación, etcétera. donde td: tiempo de calentamiento a la temperatura T,

Por ejemplo, el valor D para algunas esporas de Bacillus F O: valor F a la temperatura O,

stearothermophilus a pH 7 es 11 minutos a 115%C. La
farmacopea británica recomienda autoclavar a 115%C
durante 30 minutos. El factor de inactivación de este
proceso para dichas esporas sería de aproximadamente 10”.
Esto implica que si el producto contiene 10*de estas esporas,
por lo menos lO quedarán viables como remanentes y el
producto, entonces, no será estéril.
Por otro lado, el valor D a 121%C es de 2 minutos, de '
modo que un tiempo de exposición de 15 minutos a 121%C
tiene un factor de inactivación de, aproximadamente, 10%.
DT: valor D a la T? del organismo de referencia,
I: factor de inactivación del proceso,
T: temperatura de calentamiento
O: temperatura de calentamiento de referencia
Z: valor Z del organismo de referencia (valor negativo).
Factores que afectan la sobrevivencia de los organismos
La presencia de humedad y oxígeno incrementa la
deficiencia de todos los procesos de esterilización. Sin
 ESTERILIZACION Y DESINFECCION
embargo, puede haber rangos criticos de humedad relativa.
para la actividad de gases bactericidas.
Entonces, el calor húmedo requiere temperaturas y
tiempos de exposición bastante menores para esterilizar,
que el calor seco.
Las bacterias en suspensión acuosa son más resistentes
a pH neutro, y los incrementos en acidez o alcalinidad de la
solución aumentan la eficiencia del proceso. Por ejemplo,
el agregado de carbonato de sodio al agua hirviendo puede
resultar esporicida. Los efectos inhibitorios del pH
parecieran estar debidos, fundamentalmente. a la formación
de moléculas no disociadas de ácidos o bases débiles en el
ambiente, más que al aumento del contenido de iones
hidrógeno o hidroxilo.
De manera similar, la presencia de agentes químicos
bactericidas aumenta el efecto del calor y permite el uso de
temperaturas mucho más bajas para producir el mismo
efecto. Esto también se aplica a muchas sustancias
terapéuticas de las preparaciones farmacéuticas inyectables,
como, por ejemplo, el hidroclorhidrato de procaína, aunque
cabe señalar que estos efectos son muy variables.
En general, no hay suficiente evidencia acerca del
comportamiento de las esporas resistentes en los productos
farmacéuticos como para garantizar alguna modificación
de los procesos de esterilización estándar.
Por otra parte, la mayoría de los organismos esporulados
son más resistentes cuando se forman en su hábitat natural
como. por ejemplo, el suelo, que cuando se desarrollan en
medios de cultivo artificiales.
La mayoría de las bacterias no se ven afectadas por
grandes cambios en la presión osmótica debido a la fuerza
de sus paredes celulares. La actividad inhibitoria de las sales
se debe, sobre todo, al efecto tóxico de susiones más que a
su efecto sobre la presión osmótica. En soluciones altamente
hipotónicas, algunas bacterias vegetativas sensibles pueden
sufrir shock osmótico: dependiendo del estado de la pared
celular puede haber lisis.
Los aceites, ácidos grasos y grasas y las proteinas (como
la sangre) tienen efecto protectivo sobre las bacterias,
particularmente contra la acción del calor. Las soluciones
azucaradas con glucosa en alta concentración también
protegen, probablemente, por reducción de la actividad del
agua dentro del sistema.
Esporas bacterianas
Los géneros Bacillus, Clostridium y Sporosarcina
forman endosporas, siendo los dos primeros aquellos en
los que más se centra la atención en esterilización.
Como el hábitat principal de estas bacterias es el suelo,
las esporas pueden encontrarse principalmente en las
partículas de polvo de la atmósfera. Estas pueden
contaminar cualquier preparación farmacéutica o quirúrgica
expuesta a ellas en aleún estado de su manufactura.
Además, los productos derivados de animales herbívoros,
de plantas o a partir del suelo pueden estar altamente
contaminados, como, por ejemplo, catgut, gelatina cruda, talco,
algodón crudo, etcétera. Por lo tanto, no es posible asumir
que un producto a esterilizarse no contenga ninguna espora.
103
Por esta razón, el principal criterio de eficiencia de un
proceso de esterilización es la capacidad de destruir
concentraciones relativamente altas de esporas bacterianas
resistentes,
Las diversas especies de esporas varían ampliamente en
su resistencia a un agente germicida dado, lo cual se
determina por el valor D. Además, la resistencia puede
diferir según el método de destrucción empleado. En
consecuencia, se seleccionan diferentes especies como
organismos marcadores (indicadores biológicos), para
controlar la eficiencia de los distintos procesos de
esterilización, a saber:
Bacillus stearothermophilus: para todos los procesos por
calor húmedo.
Bacillus subtilis var. niger o Clostridium tetani: para
esterilización por calor seco.
Bacillus pumilus o Streptococcus faecium: para las
radiaciones ionizantes.
Bacillus subtilis var. niger: para esterilización por óxido
de etileno.
Para el tratamiento de alimentos, se utilizan como
organismos de prueba esporas de Clostridium botulinum o
Bacillus stearothermophilus, siendo los primeros los
organismos productores de toxinas más peligrosos y
resistentes, mientras que los últimos corresponden a
organismos termofílicos, resistentes al calor y contaminantes
productores del "agriado chato” en los enlatados,
La naturaleza del producto puede afectar también la
resistencia de las esporas. Por ejemplo, algunas esporas de
clostridios en polvos adsorbentes secos pueden resistir Jos
métodos normales de esterilización por óxido de etileno.
Esto puede deberse a que el producto por sí mismo actúa
interfiriendo en el alcance de las correctas condiciones
(temperatura, humedad, concentración, etc.) a través de
todas las partes de la carga. Alternativamente, esto puede
deberse a otros factores, tales como la deshidratación de
las esporas por el producto con un aumento en la resistencia
con el tiempo de almacenamiento, Es, entonces, necesario
remarcar la necesidad de un adecuado monitoreo de las
condiciones de la carga durante toda la preparación y
proceso de esterilización.
1. Métodos de esterilización
Los_mé 2 lo
incluyen procesos de calor con agentes bactericidas, calor
por autoclavado, empleo de calor seco, filtración, agentes
gaseosos, radiación y compuestos químicos.
Calor
El calores el método
de elección para la esterilización
de los materiales que no pueden ser dañados por él, El
proceso es rápido, todos los microorganismos resultan
sensibles, y este agente puede alcanzar zonas que podrían
estar protegidas frentea los compuestos químicos. La
mayoría
de los virus
y formas vegetativas de bacterias, como
también los hongos, pueden ser destruidos luego de varios
minutos a 50%-70%C, mientras que las esporas de diversos
 104 SECCION 1: GENERALIDADES

microorganismos requieren temperaturas de 1219C durante
15 a 20 minutos para lograr la esterilización.
Los mecanismos de esterilización por calor se basan en
la desnaturalización de proteínas, aunque es posible que
también tenga alguna importancia la fusión de los lípidos
de la membrana. Los límites de temperatura a que se lleva
a cabo este proceso corresponden a los que desnaturalizan
la mayoría de las proteínas con un elevado coeficiente
de temperatura. Estos procesos requerirán mayores
temperaturas en los casos de materiales desecados o cuando
la actividad acuosa del medio se vea reducida por la
presencia de elevadas concentraciones de sustancias
neutras, como, por ejemplo, glicerina o glucosa.
El papel del agua en la desnaturalización de proteínas
se pone de manifiesto a partir de la utilización del vapor
de agua. La estructura natural de una proteína se halla
estabilizada, en parte, por puentes de hidrógeno
(especialmente entre los grupos carboxilo y amina), que
son destruidos con mayor facilidad cuando pueden ser
sustituidos por puentes de hidrógeno con moléculas de agua.
En consezuencia, tanto las bacterias como los virus y las
enzimas aisladas precisan temperaturas más elevadas para
sufrir lesiones irreversibles cuando han sido desecados. Por
otra parte, el aire caliente penetra mucho más lentamente
que el vapor condensado en los materiales porosos.
Tratamiento por calor húmedo. El autoclave brinda un
método conveniente de exposición de preparaciones y
artículos a vapor saturado a temperaturas superiores a
100*C. El vapor saturado seco es vapor en la fase de unión
entre éste y el agua a la misma temperatura. Posee alta
temperatura, la capacidad de formar agua de condensación
instantáneamente y una contracción simultánea en volumen
en el instante de condensación. Todo esto permite que el
autoclave sea muy adecuado para el rápido calentamiento
de soluciones altamente hidratadas, como por, ejemplo
inyectables acuosos, y para la hidratación adicional de
preparaciones secas, como la ropa de uso en cirugía, en
cuyo caso se deben tomar precauciones especiales que
permitan asegurar la penetración del vapor.
Fundamentalmente hay tres tipos de autoclaves de uso
común: el autoclave de laboratorio (como el de Chamberlain),
el autoclave de desplazamiento inferior del vapor y el
autoclave de alto vacío.
El autoclave de laboratorio (fig.6-2) consisteen una
cámara que genera su propio vapor a partir de agua
contenida en el fondo de la cámara por medio de
calentamiento interno (eléctrico) o externo (gas).
Está equipado con un manómetro que registra la presión
interna de la cámara, una válvula de seguridad y puede
contener un termómetro. El aire es ventilado desde la cámara
a través de la espita durante el período de calentamiento y
ebullición inicial.
Debido a la eyección de gotas de agua desde la superficie
del agua hirviendo, este autoclave es adecuado sólo para
botellas de líquido. Otros artículos, como, por ejemplo, ropa
o aparatos, incluyendo sus envolturas, se humedecerian con
agua durante la esterilización, lo cual puede producir su
recontaminación al ser introducidos en una atmóstera no
estéril.
El autoclave de desplazamiento inferior de vapor
consiste en una cámara de esterilización alimentada con
una fuente externa de vapor. Como el vapor que penetra es

DO VALVULA
oDE ESPITA MANOMET!
o
SEGURIDAD x } / ind

be

TORNILLOS MOVILES
PARA CIERRE HEAMETICO *-——— .

¡
ji L)
1

CALDERA aa TU |
1
| ; ELEMENTO A
ESTERILIZAR
ESTANTE e | | A ST
ni |
SEPARADOR DE AGUA AS
.

o —> AGUA
G-
AE GAS
CANILLA DE DESAGOTE 2
DE CALDERA
FUENTE DE an

Fig. 6-2. Autoclave tipo Chamberlain,

 ESTERILIZACION Y DESINFECCION 105

menos denso que el aire a la misma temperatura, éste último
es desplazado y ventilado a través de una abertura en el
punto más bajo de la cámara. Cuando se carga la cámara,
es sumamente importante dejar suficiente espacio entre los
artículos, de modo que el aire pueda escapar por la parte
inferior y no quede atrapado.
Luego de completado el ciclo de esterilización, este tipo
de autoclave permite un secado final de la carga por pasaje
de aire caliente esterilizado por filtración a través de ésta
durante algún tiempo.
El autoclave de alto vacío está diseñado para la
esterilización rápida de artículos secos, como ropa, aparatos,
artículos de goma, etc., y es el método de elección para
estos materiales. Consiste en una cámara revestida que
puede ser evacuada a baja presión. A diferencia de lo que
ocurre con el autoclave de desplazamiento inferior, este
esterilizador funciona mejor con una carga completa, más
que con unos pocos artículos, El ciclo total desde la carga
hasta la descarga suele demorar solamente entre 25 y 30
de instrumentos quirúrgicos. La misma funciona a 280C
en alto vacío, y el corte del vacío se realiza con nitrógeno
estéril para evitar la oxidación de los bordes.
El tiempo del ciclo total es de aproximadamente 15
minutos.
En relación con los tiempos de exposición, los ciclos de
temperatura/tiempo para esterilización por calor seco
recomendados por las diversas autoridades son muy
diversos. La farmacopea británica recomienda, para las
preparaciones no acuosas estables, polvos y ciertos tejidos,
el calentamiento a 150%C durante una hora, pudiéndose
emplear cualquier otra combinación de tiempo y
temperatura que resulte igualmente efectiva. Sin embargo,
el codex farmacéutico recomienda 160%C durante una hora
para la esterilización por calor seco de material de vidrio y
aparatos metálicos. La farmacopea de Estados Unidos no
PASO DE AIME ,
TEAMOMETRO

minutos.
Con respecto a los tiempos de exposición, hay diversos
ciclos de temperatura/tiempo recomendados para la E==0 /|
esterilización por autoclavado. Por ejemplo, la farmacopea
de Estados Unidos recomienda el calentamiento a 121*C
por 15 minutos como minimo. Generalmente se pueden
emplear otras combinaciones de tiempo y temperatura,
siempre que resulten efectivas.
Los ciclos recomendados representan los tiempos
i— PUERTA
mínimos de mantenimiento a la temperatura que se
especifica, y su eficiencia puede ser comparada por el uso
de la fórmula indicada como (4). A esto debe agregarse el
tiempo necesario para que la carga alcance la temperatura
del autoclave. Para los autoclaves de desplazamiento
inferior, es necesario determinarlo para cada tipo de carga
en el equipo en particular mediante termocuplas que
monitoreen batches representativos.
Tratamiento por calor seco. El calor seco aa temperaturas
por encima de 140°C mata a las esporas bacterianas,
probablemente por oxidación destructiva. Este proceso es y
LUZ DE LUZ DE . TERMOSTATO
de menor eficiencia de muerte que la coagulación e hidrólisis ENCENDIDO CALEFACCION
de proteínas y, por lo, tanto requiere de temperaturas más
Fig. 6-3. Estuta de aire caliente etéctrica (frente).
elevadas y tiempos de exposición más prolongados para la
esterilización, que el calor húmedo.
El equipo más comúnmente empleado es la estufa
eléctrica de aire caliente (figs. 6-3 y 6-4), que debería estar
equipada con un ventilador para una eficiente circulación
del aire dentro de la misma, puesto que la penetración del
calor con el aire caliente es menor. La carga se mantiene a
la temperatura de esterilización durante un período de
tiempo suficiente como para que todo haya sido sometido a
la temperatura correcta durante el tiempo correcto. Las
muestras deberían estar constituidas por unidades lo más
pequeñas posible, con aceites en volúmenes pequeños y
polvos en películas delgadas, con el fin de minimizar el
tiempo de calentamiento.
Con el objeto de aumentar la eficiencia se han
establecido otros métodos de calor seco, como la estufa
de calentamiento infrarrojo de gran velocidad, que opera
con vacio, especialmente diseñada para la esterilización Fig. 6-4. Estufa de aire caliente eléctrica (interior).
hace recomendaciones generales, pero menciona 160*C a radiación. Así se obtienen tres tipos diferentes de curvas de
170°C por 2 a 4 horas. Por otra parte, hay acuerdo sobrevivencia (fig. 6-5, A, B y C), de igual forma que lo
generalizado de que un tiempo de exposición de una hora a mostrado en la figura 6-1,
150%C es demasiado corto y no debe emplearse, salvo en Se ban desarrollado expresiones matemáticas para cada
circunstancias muy especiales. una de las respuestas, donde los tipos A y B de curvas
pueden expresarse de la siguiente forma:
Esterilización por radiación
N/N, =e*P (Tipo A) (5)
les
para esterilizac
Los tipos de radiación disponib ión
pueden categorizarse como electromagnética y corpuscular. N/N, =1 - (1 -eD)" (Tipo B) (6)
La última consiste en rayos Q, rayos [, y protones y
electrones, Sin embargo, tanto los rayos a, los rayos B como
los protones no tienen suficiente poder de penetración como N/N, representa la fracción de sobrevivientes en la dosis D.
para que puedan ser de utilidad; y solamente los neutrones
La ecuación (6) está desarrollada por extensión del
rápidos pueden utilizarse en la práctica, con varias
limitaciones. Los tipos de radiación más ampliamente modelo básico, donde un evento único es necesario sobre
empleados son las radiaciones electromagnéticas de muy más de un blanco, y el número de blancos está dado por n.
Elvalor numérico de n resulta de la intercepción de la
corta longitud de onda, rayos X y rayos y. Han sido
denominadas radiaciones ionizantes(principalmente
la porción lineal de la curva con el eje y. En ambos casos, la
radiación y ), y la radiación UY. pendiente en la porción lineal representa K. Las curvas del
E principio de disipación de la energía de las radiaciones tipo C son difíciles de expresar matemáticamente, y en la
ionizantes, en su pasaje a través de la materia, es la eyección mayoria de los tratamientos de esterilización por radiación
de un electrón, dejando un ión cargado positivamente. se asume que este tipo de respuesta es atípica y muy poco
Dentro de las células, este evento primario está seguido por frecuente.
reacciones químicas, algunas de las cuales producen la De igual manera que con el calor, las esporas bacterianas
muerte célular. Así como ocurre con el calor, la elección
de son más resistentes a la radiación en estado seco con
una dosis adecuada de radiación depende del conocimiento respectoa condiciones de completa hidratación; la
ión de
de la viabilidad
sobre las cinéticas de disminuc resistencia también puede incrementarse bajo condiciones
de anóxicas. Sin embargo, la radiación es más eficiente que el
esporas bacterianas sometidas a dosis crecientes

y: LOG N? SOBREVIVIENTES

AT -

2 1 ] 1 1 1 AL 1
3 4 5 6 7 8
0 1
DOSIS DE RADIACION {x 10° RAD}
¿>A TB #C
Fig. 6-5, Curva de sobrevivencia.
 ESTERILIZACION
calor en condiciones de anoxia y sequedad, y es probable
que por estas condiciones sea el método de elección en
dichas situaciones.
Radiación y: Son emanaciones electromagnéticas de
alta energía con una longitud de onda en el rango de entre 1
y 102%,2 y valores de energía « de 10° a 10! eev.
Cuaui se
se absorben dentro de la célula ‘pueden producir
radicales libres. y 3moléculas.
las excitadas. Esto lleva a la
desorganización de enzimas y del DNA. El grado de daño,
particularmente sobre el DNA, depende de la dosis recibida
y puede llevar a la muerte celular.
A diferencia La calor, el_efecto de la saciación: yes
afaotivas, que una única dosis de la misma PRAT total. se emplea como método de esterilización de formas de
Es altamente penetrante y no induce radiactividad. Todos - dosificación farmacéuticas. Su eficiencia se ve seriamente
los microorganismos, incluidos los virus, son afectados por afectada por el polvo, la disminución de la temperatura
la radiación, pero no hay correlación entre la resistencia al ambiental y el envejecimiento de la lámpara.
calor y la resistencia a la radiación de un organismo dado, Presenta la desventaja adicional de que la mayoría de
La eficiencia de la radiación y está marcadamente
afectada por factores ambientales. En general, la presencia
de oxígeno y agua incrementa la sensibilidad de las bacterias
a las radiaciones ‘ionizantes, mientras quelos agentes
protectivos, tales como compuestos q|que c contienenTn grupos
sulfhidrilos, ascorbatos, glicerol, etc., incrementan
la
resistencia. es
Actualmente, se consideran suficientes dosis de radiación
de 2,5 Mrads (25 kGy), lo cual brinda un factor de
“inactivación de aproximadamente. 10” para £sporas de
Bacillus pumilus en. condiciones de anoxia, y de
aproximadamente 10* para Streptococcus faecium. Estas
dosis pueden afectar muchas sustancias farmacéuticas;
algunos productos biológicos en solución, como insulina y
heparina, algunos alcaloides, barbituratos y sulfonamidas
pierden la mayor parte de su potencia. Sin embargo,
muchos productos farmacéuticos y quirúrgicos termolábiles
son esterilizados por este. método, incluyendo £guantes ¿de
es y SULuras | quirúrgicas. También suedón
esterilizarse plasma, injertos Óseos y algunos : antibióticos
como, por ejemplo, penicilina y estreptomicina. Todos los
artículos esterilizados por radiación deberían considerarse
descartables, dado que pueden aparecer efectos adversos si
se intenta reesterilizar artículos por autoclavado u óxido de
etileno luego de su exposición o utilización.
Radiación ultravioleta. La luz ultravioleta (UV) es
también un tipo de radiación electromagnética que no es
capaz de producir la ionización de las moléculas que la
absorben, pero producer moléculas excitadas dentro de la
célula dando lugar a reacciones químicas de daño intra-
celular y que pueden llevar la
a mucrte de la célula sí el
tratamiento es suficientemente extenso.
Este proceso es menos drástico y menos letal que la
ionización, por lo cual no es un método tan eficiente de
esterilización, sin embargo, si se puede mantener una
intensidad de luz UV suficientemente elevada por un ttempo
de exposición adecuadamente prolongado, puede destruir
tanto formas vegetativas como esporuladas de bacterias y
mohos.
Y DESINFECCION 107
La porción UV utilizable es la porción del espectro
electromagnético entre longitudes de onda de 190 y'350 nm.
No obstante, la máxima eficiencia biológica se obtiene
alrededor de 260 nm, que resulta también el pico de
absorción del DNA aislado. Esto sugiere que el DNA es el
blanco para los eventos letales inducidos por UV. En
consecuencia, la esterilización se puede lograr por el uso
de una longitud de onda de 254 nm, que se corresponde
con la de alta emisión de las lámparas de mercurio utilizadas
como fuente UV.
El UV tiene muy bajo poder penetrante y no atraviesa
los materiales empaquetados, como tampoco vidrio y
plásticos. Resulta muy absorbido por sustancias, tales como
vidrio, plástico y líquidos turbios, y, en consecuencia, no
las bacterias tienen procesos enzimáticos activos que bajo
condiciones ambientales favorables permiten la reparación
del daño inducido por UV, De este modo, resulta bastante
frecuente la recuperación de células irradiadas.
El principal uso como agente esterilizante es la
esterilización de aire y de superficies para áreas de trabajos
asépticose instrumentos quirúrgicos.
Esterilización gaseosa
Los vapores químicos pueden emplearse para esterilizar
artículos (como productos farmacéuticos y equipo
quirúrgico). que no soportan las temperaturas necesarias para
la esterilización por calor húmedo o seco. De la cantidad
de compuestos disponibles, sólo el óxido de etileno y el
formaldchido se utilizan en la práctica. En algunos casos se
utiliza el óxido de propileno en lugar del óxido de etileno
por ser más fácil de manipular.
Dado que una parte importante del ciclo de esterilización
es la completa remoción final del esterilizante, estos
compuestos pueden utilizarse únicamente en la fase gaseosa.
Al igual que los bactericidas químicos, el formaldehído
y el óxido de etileno a bajas concentraciones tienen una
tendencia a producir curvas de sobrevivencia de tipo sigmoidco.
Sin embargo con las altas concentraciones empleadas en la
práctica, se aproximan bastante a las curvas del tipo señalado
en la figura 6-1 A; aun cuando el formaldehído, al igual que
el calor, puede estimular la activación de algunas esporas.
La actividad de ambos gases está afectada en forma
crítica por una serie de factores: lac concentración del gas,
la temperatura de exposición, la humedad |relativa de la
atmósfera esterilizante y del microambiente de las bacterias
contaminantes, la naturaleza física y penetrabilidad de la
carga a esterilizar, y el preacondicionamiento atmosférico
de la carga antes de su esterilización. Los organismos
tratados en estado seco resultan varias veces más resistentes
con respecto a los preacondicionados en una atmósfera de
alta humedad relativa.
Teniendo en cuenta la naturaleza crítica de los procesos
de esterilización gaseosa, no es conveniente su empleo si
 108 SECCION
se dispone de otros métodos. Asimismo, como puede
resultar difícil monitorear las condiciones, es recomendable
asegurar que los artículos estén lo más limpios posible antes
de su tratamiento, e incluir controles bacteriológicos con
cada carga.
Oxido de etileno. Es un líquido soluble en agua, de bajo
punto de ebullición (10, 20), que posee un alto poder « de
penetración. Puede actuar como vesicante por contacto con
la piel, y hay evidencia de su acción mutagénica” y
carcinogénica en sistemas de ensayo tanto bacterianos,en
semillas, Drosophila, como en líneas celulares. En
presencia de aire u oxígeno, da lugar a mezclas explosivás
por lo cual se lo emplea en mezclas con dióxido de carbono
o freones.
Elóxidode etileno puede resultar letal para todas las
_ bacterias,,incluyendo las esporas, pero como se explicó
anteriormente, la humedad es indispensable para esta acción.
Esto significa que los artículos requieren tiempos de
exposición prolongados (24 horas) a atmósferas de alta
humedad relativa antes de la esterilización.
El rango crítico de bumedad relativa es de 33-60% y
debe ser mantenido durante toda la operación. Por lo cual,
en la práctica, se utilizan humedades relativas superiores
en la cámara, mayores al 60%, para asegurar las condiciones
apropiadas contra las bacterias contaminantes.
El óxido de etileno posee un coeficiente de
temperatura
elevado. Por ello debe utilizarse a la mayor temperatura
posible (por. ejemplo, 40- 50°C), para reducir el tiempo de
exposición requerido, según la naturaleza de los matertales
a esterilizar. Bajo las condiciones mencionadas, se requieren
concentraciones de Óxido de etileno de más de 500 mg/l
pará un
u tiempo de exposición de Aprox mad: amente 22: horas.
con factores de inactivación del orden de 10” para esporas mencionados en esterilización gaseosa, y los discutidos en
de B. subtilis. Sin embargo, dada la incertidumbre acerca -esterilización por calor con agentes bactericidas, la mayoría
de la eficiencia del proceso, en las condiciones mencionadas
suelen emplearse tiempos de exposición de 3 a 4 horas para
garantizar un amplio margen de seguridad.
El tiempo requerido para alcanzar una esterilización
efectiva depende de la concentración del gas presente en la
cámara y de la velocidad de difusión del gas a través de los
paquetes y artículos a ser esterilizados. La concentración
en la cámara, que generalmente oscila entre 500 y 1000
mg/l, está controlada por la selección de la presión
temperatura (entre 30-50%C) apropiada. El tiempo de
exposición puede variar entre 3 horas para las temperaturas
más altas hasta 16-36 horas para las más bajas.
Puede ser absorbido por muchas sustancias, como gomas,
plásticos, fibras, debiendo ser removido. de éstos antes de
su uso. Asimismo, resulta inadecuado para alimentos con
altos contenidos en proteínas y vitaminas. 0 compuestos
con grupos sulthidrilos con los cuales reacciona. Dado que
es altamente penetrante, puede emplearse para esterilización
de artículos en paquetes sellados.
Finalmente, luego de la esterilización, se requiere la
eliminación de las trazas residuales del gas y el almace-
namiento de los artículos en atmósferas bien ventiladas por
al menos 24 horas antes de su utilización.
Formaldehido, El formaldehído puede resultar tan
efectivo como el óxido de etileno, siempre que se alcancen,
1: GENERALIDADES
Y mantengan las condiciones correctas, y que los artículos
a esterilizar las soporten.
Posee altos coeficientes de temperatura y de concentración,
es de muy bajo poder penetrante, y tiendea polimerizarse a
una forma inactiva a bajas temperaturas, lo cual reduce
rápidamente la concentración efectiva. Es seriamente
afectado por materia orgánica como pus, esputo, suero, u
otra materia protectiva, lo cual puede requerir tiempos de
exposición prolongados.
Generalmente, a través del período de esterilización,
debe mantenerse una humedad relativa de 80-90%, pero no
se debe permitir que los artículos se humedezcan. El uso
de un autoclave de alto vacío que funcione con vapor
subatmosférico a 90%C con concentraciones de
formaldehído a 2 g/l asegura la esterilización de artículos
que contengan esporas resistentes, luego de un tiempo de
exposición de 3 horas. Á temperaturas y concentraciones
inferiores, pueden ser necesarias exposiciones muy
prolongadas (20-24 horas), e incluso con algunos materiales
puede no resultar esporicida.
En resumen, los artículos deben estar lo más limpios
posible, libres de sustancias protectivas, en envases abiertos.
La humedad relativa debe ser mantenida entre el SO y 90%,
la temperatura por encima de 60%C. y la concentración de
formaldehído al mayor nivel posible.
Antes de la introducción del gas, debe asegurarse la
evacuación de la cámara. El tiempo de exposición debería
ser lo más prolongado posible y no menor de 4 horas.
Esterilización químic:
Con la excepción de los compuestos bactericidas
de las sustancias químicas resultan inadecuadas para esterilizar.
En general, losggermicida s tienden
a ser selectivos en su acción
sobre los microorganismos, son frecuentemente tóxicos y.
reactivos con Tas 5sustancias tratadas, y no pueden ser
fácilmente elimin: ados luego del tratamiento. Además,
algunas bacterias, como, por ejemplo, Mycobacterium
tuberculosis y Pseudomonas aeruginosa, el virus de hepatitis
B, y la mayoría de las esporas bacterianas, son altamente
y resistentes y se requieren tiempos de exposición prolongados
a concentraciones muy altas para producir algún efecto.
Unicamente unos pocos bactericidas químicos pueden
ser de valor bajo condiciones controladas y para
aplicaciones muy estrictas. En general, pueden resultar
efectivos para la esterilización de superficies duras,
impenetrables y limpias, como, asimismo, para instrumentos
quirúrgicos y termómetros que no pueden esterilizarse por
otros medios, La mayoría de los germicidas son afectados
por la presencia de materia orgánica, de modo que las
superficies deben estar libres de grasa, pus, sangre, etcétera.
Se puede emplear la inmersión en soluciones acuosas
de formaldehído a una concentración de 4-8%, a tem-
peraturas
de 40”C o más, Este proceso puede resultar
esporicida, si la concentración se mantiene durante tiempos
de exposición de aproximadamente 24 horas. Es necesario
mantener la temperatura para prevenir la polimerización
 ESTERILIZACIÓN Y DESINFECCION
del formaldehído. El formaldehído residual debe ser
removido mediante el lavado y la manipulación aséptica,
de modo de evitar la recontaminación.
Las soluciones alcalinas de g/utaraldehido también
pueden resultar esporicidas y, por ende, adecuadas para la
esterilización de superficies. Se necesitan concentraciones
del 2% en solución acuosa a pH entre 7,5 y 8,5.
Esto último se logra mediante el agregado de 0,3% de
bicarbonato de sodio que actáa como buffer, pero, por otra
parte, reduce la estabilidad de la solución a solamente 2
semanas, cuando se mantiene a 20*C, La inmersión a 20%C
durante 3 horas podría resultar esporicida para las esporas
de clostridios patogénicos, como, por ejemplo, Clostridium
tetani, aunque es recomendable la exposición por 8 a 10
horas para aumentar la probabilidad de un proceso más
seguro.
La mayoría de los otros desinfectantes, como los
alcoholes, fenoles, etc.. son esporicidas muy pobres y no
pueden emplearse con seguridad para Ta esterilización de
objetos que contienen varias poblaciones de micro
organismos desconocidos. Asimismo, los instrumentos
contaminados con sangre pueden contener el virus de
hepatitis B, y como aún no ha sido posible ensayar la
sensibilidad de los virus frente a los compuestos químicos.
es aconsejable evitar la esterilización de instrumentos que
estén muy contaminados.
Filtración
El proceso de filtración difiere de otros métodos de
esterilización en Que sisólo puede aplicarse a fluidos, estó
es, a líquidos móviles y gases, y en que los contaminantes
simplemente son removidos y no destruidos. El método es
rápido, puede llevarse a cabo a cualquier temperatura y es
particularmente adecuado para soluciones que contienen
componentes termolábiles. Incluso se pueden esterilizar por
filtración soluciones oleosas de baja densidad. Sin embargo,
es una operación delicada que exige una buena técnica
aséptica y ensayos de esterilidad sobre la preparación final.
Los microorganismos en suspensión se comportan como
pequeñas particulas cargadas con un tamaño mínimo fijo y
pueden, por lo tanto, ser removidos por los mismos métodos
que cualquier otra partícula del mismo tamaño y carga. Los
mecanismos de retención de tales partículas en el lecho del
filtro comprenden tamización, adsorción, efectos de tensión
superficial en las películas capilares retenidas y
atrapamiento en los pliegues de los canales del filtro. Los
dos primeros son de mayor importancia en la filtración de
líquidos, y el primero y el último, en la filtración de gases.
De todos, sólo la tamización, es decir, donde la partícula es
mayor en tamaño que el poro, puede considerarse absoluto.
Los otros procesos involucran un cierto grado de
probabilidad de retención, lo cual depende de una variedad
de factores, tales como la velocidad de flujo, la densidad
de carga sobre la panícula, la profundidad y naturaleza del
lecho del filtro, etcétera. Consecuentemente, los filtros que
descansan en otros mecanismos diferentes de la tamización
pueden permitir el escape ocasional de bacterias.
particularmente bajo alta presión. Por éstas y otras razones,
109
muchos de los viejos tipos de filtros bacterianos ya no son
utilizados.
Con líquidos. la eficiencia de remoción debe ser muy
alta, al menos comparable a otros métodos de esterilización,
y el proceso no debe ceder nada al líquido que está siendo
filtrado, como, por ejemplo, materia paniculada o aditivos
solubles. En este sentido, sólo los filtros de vidrio fritado,
los metálicos de porosidad 5, o los filtros de membrana
(compuestas por varios materiales poliméricos, como los
ésteres de celulosa) de porosidad <0,45 um son realmente
adecuados para propósitos farmacéuticos.
La baja velocidad de filtración de los filtros de vidrio
fritado atenta contra su empleo, con excepción de
condiciones especiales como el caso de líquidos corrosivos
o solventes orgánicos. Dado que este proceso está expuesto
tanto a contaminación externa como a ruptura interna, se
requieren estrictos controles de esterilidad sobre el producto
final como, asimismo, precauciones asépticas en el proceso
y en la integridad de los filtros.
Con los gases (principalmente aire), el uso de dicho gas
determina el grado de filtración necesario, por ejemplo, para
aire acondicionado, y puede no ser necesaria su esterilidad.
Las bacterias en la atmósfera se encuentran principalmente
adheridas a partículas de polvo y sólo las esporas fúngicas
más grandes están en estado libre. En consecuencia, la
remoción es más fácil que en el caso de los líquidos. Es
esencial una filtración que involucre mecanismos de
tamización (filtros HEPA de alta eficiencia), así como
también la instrumentación de métodos de inspección junto
con precauciones de control de los mismos.
Evaluación de la efectividad de los procesos .
Resulta indispensable realizar controles estrictos de los
procesos de esterilización a fin de garantizar la esterilidad
de los productos sometidos a ellos. Dichos controles
deberían asegurar, tanto como sea posible, la ausencia de
microorganismos viables. Para ello, básicamente, hay dos
tiposde controles: los controles de proceso de esterilización,
quese llevan a cabo mediante indicadores de esterilización,
y los de esterilidad, a los que se someten los “productos
esterilizados.
Los controles de esterilidad se realizan de acuerdo con
lo establecido por farmacopea, sobre los productos tratados
a fin de establecer su condición de estériles.
Son ensayos limitados, puesto que no es posible
determinar la ausencia de todos los tipos de micro-
organismos conocidos. De hecho, en las condiciones que
normalmente se realizan, no detectarán la presencia de virus
como tampoco bacterias termofílicas o psicrofílicas.
Además puede resultar inadecuado para evidenciar la
presencia de organismos en estado de shock o esporas
envejecidas.
Sin embargo, estos controles pueden ser más sensibles
mediante el diseño cuidadoso y la modificación del
procedimiento estándar en adaptación a circunstancias
especiales, como, por ejemplo, cuando se conoce el tipo y
la fuente de contaminación microbiana,
Para efectuar los controles del proceso de esterilización,
110 SECCION 12:
se puede recurrira tres tipos de indicadores básicos: físicos,
químicos y biológicos. Los indicadores físicos consisten
en registros de temperatura que se realizan durante cada
ciclo de esterilización por calor. Por ejemplo, se trata( de
dosímetros plásticos que determinan con bastante precisión
la dosis de radiaciónabsorbida. El uso de dosímetros se
considera, actualmente, la mejor técnica disponible para
los procesos de radioesterilización.
'Como indicadores químicos, se pueden mencionar: tubos
testigos que contienen sustancias que se fusionan a las
temperaturas de esterilización, pero que no resultan muy
satisfactorios, porque al igual que los indic adores físicos
no dan información sobre la relación tiempo y temperatura
como tampoco miden la penetración de vapor: los tubos de
Browne (hay varios tipos para los distintos procesos por
calor) que contienen una mezcla de reacción en solución e
indicadores ajustados, de tal forma que se necesita una
combinación específica de tiempo y temperatura para que
ocurra toda la reacción y se produzca el viraje de color del
indicador; cintas adhesivas sensibles al calor o radiación,
que modifican su color cuando se alcanza la temperatura o
dosis deseada. También se dispone de tiras de papel
impregnadas con derivados de 2,4-dinitrofenilhidracina, que
funde a la temperatura de esterilización; y envases con una
solución de cloruro de magnesio con indicador azul de
bromofenol para el control del proceso por óxido de etileno,
el que luego de una exposición adecuada, se alcaliniza y
cambia el color del indicador.
Los indicadores biológicos utilizan preparaciones de
esporas bacterianas de resistencia conocida al tratamiento,
que se secan sobre tiras de un material de prueba apropiado
(pueden usarse diferentes soportes, además del papel) para
el tipo de proceso y las cargas usados. Este tipo de
indicadores resultan los más apropiados para un adecuado
control del proceso. Las esporas a utilizar para cada tipo de
tratamiento esterilizante fueron indicadas anteriormente en
el texto (bajo el título "Esporas bacterianas").
Desinfección
Introducción
Se deben hacer importantes distinciones entre los
procesos de esterilización y desinfección: la esterilización
implica la muerte o remoción de todos los microorganismos
vivos, mientras que la desinfección
se refiere a la
eliminación de la infectividad potencial de un material
determinado, lo que no implica, necesariamente, la
eliminación de todos los organismos viables; , por |lo tanto,
puede o no concluir en esterilidad. Para la primera se
utilizan, por lo general, métodos físicos, como calor,
filtración por membrana e irradiación. En la segunda se usan
germicidas químicos.
Por tradición, los agentes químicos que son usados para
destruir microorganismos sobre objetos | inanimados,se
describen corao “desinfectantes”, mientras que
ue aquellos que
se aplican para este propósito “sobre tejidos. vivos son
conocidos como "antisépticos". Un compuesto individual
GENERALIDADES
puede ser empleado como desinfectante en una situación y
como antiséptico en otra.
Los desinfectantes y antisépticos no tienen un tipo de
€
toxicidad selectiva, que es un prerrequisitoo esencial para
un agente quimioterápico. Sus modo de acción tienden a
ser no especilicos y a afectar, tanto a microorganismos como
a las células de los tejidos.
Los compuestos usados primariamente como antisépticos
son, generalmente, aquellos que presentan un efecto
bacteriostático o bactericida en las concentraciones que
causan Sólo un ligero ( daño hístico. Estos son agentes que
asistirian y no impedirian los sistemas de defensa natural
del organismo. En este sentido, deben ser considerados los
que tienen una acción más selectiva que las sustancias usadas
predominantemente como desinfectantes. Algunos
desinfectantes poderosos son muy irritantes, corrosivos o
tóxicos para ser aplicados sobre la piel o los ; tejidos.
Conviene también tener en claro el concepto de
preservación, a la que podemos definir como la adición de
un agente a un producto, ya sea una fcformulación
farmacéutica, un cosmético o un alimento, para |inhibir la
contaminación y proliferación microbianas, y, por ende, el
deterioro del producto o su infectividad. El término
preservador refiere al contexto de uso más que a la
naturaleza de la sustancia. Algunos de los agentes químicos
usados como antisépticos y desinfectantes pueden
funcionar también como preservadores y hay, además, un
número de sustancias cuyo papel está restringido a la
preservación.
Factores que afectan la actividad
La velocidad y la extensión en que actúan los
por una cantidad de
_ desinfectantes químicos está influida
factores, Los más importantes son:
Tiempo. Cuando sometemos una población microbiana
a algún agente letal, 1 la velocidad de muerte de los
microorganismos ees directamente te proporcional a la
concentración de individuos vivos, en cualquier tiempo
considerado, siguiendo un curso constante de orden
logarítmico.
La constante de velocidad de muerte o constante de
desinfecciónn queda expresada c como:
No (7)
siendo: t =tiempo en minutos;
N,= concentración inicial de microorganismos
vivos;
Nt = concentración de microorganismos luego
de transcurrido el tiempo !.
En un gráfico obtendríamos la denominada curva de
muerte. De igual manera a lo señalado en esterilización,
del análisis de la ecuación 7 surge que la muerte microbiana
no es instantánea, resultando indispensable establecer
correctamente el tiempo mínimo que debe aplicarse el
agente elegido. Dado que el tiempo necesario para producir

la muerte microbiana es directamente proporcional al
logaritmo de la concentración inicial, se. necesitará mayor
tiempo para eeliminar Concentraciones Altas de miero-
SITIO La velocidad de Ta desinfección
normalmente se incrementa con laa temperatura, sin embargo,
el efecto es más marcado con algunos agentes que con otros.
En general, a medida que la temperatura se incrementa
en forma aritmética la vejocidad de muerte aumenta en
progresión geométrica. El efecto de la temperatura
incrementa la velocidad de la actividad bactericida, a una
concentración y tamaño de inóculo prefijado, y se expresa
cuantitativamente como un coeficiente de temperatura,
generalmente en términos de un aumento de temperatura
especificado de 10%C, designado Q,..
Q,. = tiempo requerido para matar a X *C
10. tiempo requerido para matar a (X + 10)*C.
bajo condiciones estáticas.
En el caso general:
Qin o
t, (9)
donde: T2 y Tl son las temperaturas que difieren en 10°C;
y tl y t2 son los tiempos | letales correspondientes. (Tiempo
letal es el tiempo mínimo necesario para matar una
población microbiana a una temperatura dada.)
Este valor de "Q" es característico para un desinfectante
en particular. Los valores para los distintos agentes varían
ampliamente,
La efectividad de un agente con un alto coeficiente, como
los alcoholes alifáticos (Q, entre 30 y 50), se incrementa
más por el aumento de temperatura, que para aquellos con
bajo coeficiente, como el formaldehído (Q,,= 1,5). Un
panorama de todo el proceso puede ser obtenido graficando
la velocidad de muerte frente a temperatura.
Concentración. El rango de muerte de una población
bacteriana varía directamente con la concentración del
desinfectante. Sin embargo, un pequeño aumento o descenso
de la concentración de ciertos agentes puede aumentar o
disminuir sus efectos bactericidas. En estas circunstancias,
los efectos de la dilución sobre la actividad pueden ser de
crucial importancia.
Como en el caso del coeficiente de temperatura, la
relación entre concentración y actividad es exponencial.
El coeficiente de concentración (n) es la pendiente de la
recta obtenida al graficar el logaritmo del tiempo requerido
para matar un inóculo estándar (log del tiempo en muerte)
en función del logaritmo de la concentración.
Alternativamente, el coeficiente de concentración puede
ser calculado como:
logt, - logt,
aj log C;- log C,
(10)
donde: t, es el tiempo de muerte a la concentración €,
“t, es el tiempo de muerte a la concentración e
111
S1 atendemos a la relación de Chick entre tiempo letal y
concentración, que es de tipo exponencial:
C"xt=cte (11)
siendo: C = concentración;
t = tiempo letal;
= exponente de concentración.
Este exponente de concentración expresa la modificación
del poder germicida de un desinfcctante cuando se usa a
diferentes concentraciones. Valores elevados de (n) indican
que el producto es útil dentro de un rango determinado de
concentraciones, perdiendo rápidamente su actividad por
dilución, ocurriendo el efecto inverso en el caso de valores
bajos.
El coeficiente de concentración es característico para
cada tipo de desinfectante. En el caso de un compuesto cuyo
(8) coeficiente es 1, como el cloruro mercúrico, formaldehído
u óxido de etileno, la actividad será reducida por dilución
en 1. Así, diluyendo a la mitad la concentración, el tiempo
requerido para desinfección se duplica. En forma semejante,
triplicando la dilución se incrementa el tiempo de
desinfección en 3 veces. Por otro lado, el fenol tiene un
coeficiente de 6: reduciendo lacconcentración a a la mitad, ES
prolonga el tiempo de desinfección 64 veces; mientras que
una dilución al tercio eleva el tiempo de muerte 729 veces.
Estos ejemplos demuestran lo dicho anteriormente, ya que
los fenoles pueden ser rápidamente inactivados por la
dilución,e indica que el uso de soluciones diluidas de fenol
no debería estar be $ obtenidos a altas
concentraciones. Por atro lado, sustancias con bajos valores
de (n) no son rápidamente inactivadas por la dilución, y en
estas circunstancias, deber, usarse un inactivador durante
su valoración o, si es apropiado, durante un ensayo de
esterilidad.
pH del medio. Los cambios de pH pueden afectar no
solamente la actividad de un desinfectante, sino también la
velocidad de crecimiento de las células bacterianas y el estado
fisico-químico de sus superficies. Un pH de 6-8 es óptimo
para el desarrollo de algunas bacterias y la velocidad de
crecimiento disminuye a ambos lados de este rango. Más aún,
el grado de ionización de los desinfectantes ácidos o básicos
depende, obviamente, del pH. Algunos compuestos son activos
en un estado no ¡onizado, mientras que otros son activos como
aniones o cationes. Por ende, la actividad será favorecida a
los pH que favorezcan la formación de especies activas.
Además, la negatividad incrementada
de las células
bacterianas a pil alcalino favorece la interacción con
de osinfectantes iónicos positivamente cargados; mientras que
la interacción con aniones se ve facilitada bajo condiciones
“ácidas, en las que la superficie celular está menos”
negativamente cargada.
Los antibacterianos catiónicos, como los colorantes de
acridina y compuestos de amonio cuaternarios, son
generalmente más activos en solución alcalina que en ácida.
Sin embargo, el pH óptimo varía con el compuesto en cuestión.
Inversamente, los fenoles y el ácido benzoico son más activos
en un medio ácido. Por otro lado, ciertos antibacterianos
activos en superficies anfóteras, los compuestos "Tego"
 112
(aminoácidos de alto PM), tienen actividades óptimas a
valores de pH ampliamente diferentes, dependiendo del
número de grupos nitrogenados. La actividad esporicida
del glutaraldehído en solución acuosa es favorecida a pH
alcalino posiblemente como resultado de un incremento en
la interacción con grupos amino, mientras que la actividad
de los hipocloritos es suprimida a valores de pH superiores
a 8, debido a la reducción en la cantidad de ácido
hipocloroso no disaciado.
Formulación. La correcta formulación es crucial para
la efectividad de los desinfectantes. Por ejemplo, el poder
penetrante y la efectividad de la clorhexidina y los
compuestos de amonio cuaternario serán aumentados en
alcohol al 70% en soluciones acuosas. Los fenoles tienen
baja actividad en agua y se preparan soluciones con-
centradas o emulsiones usando jabones, transportadores
hidrocarbonados y coloides protectores. En ciertas
concentraciones, los jabones agregados en solución forman
miscelas, éstas actúan como centros solubilizando sustancias
como los fenoles; la inclusión de un jabón a menudo tiene
un beneficio adicional mejorando la actividad del fenol.
Del mismo modo, el iodo es virtualmente insoluble en.
agua. Por lo tanto se disuelve en alcohol, soluciones de KI
o soluciones con agentes surfactantes activos. La
presencia de un surfactante conveniente puede moderar
las propiedades corrosivas y aumentar la estabilidad de las
preparaciones. Los surfactantes no iónicos, como la serie
de los Tween, pueden reducir la actividad de preservadores,
especialmente metil y propil p-hidroxibenzoatos. Por eso
es un factor que debe ser tomado en cuenta en la formulación
de productos farmacéuticos. La actividad de los compuestos
catiónicos es antagonizada por| los surfactantes aniónicos
y, en algunos casos pors surSciante ; Í cuaternario, diguanidinas, compuestos mercuriales, clorados
quimicos implica la Sdsorción ES la célula SEA 3 reducida con la presencia de proteínas coloidales u otra
penetración a través de la membrana celular hacia el
citoplasma, siguiendo por la reacción con constituyentes
celulares, frecuentemente proteínas. Aunque las propiedades
de adsorción y penetración dependen principalmente de la
naturaleza química y configuración del germicida, pueden
ser influidas por la presencia de otras sustancias, afectando
sí, la tensión superficial o la distribución lípido/agua
característica de cada desinfectante. Los efectos osmóticos
influyen en la membrana citoplasmática y están
estrechamente conectados con cambios en la tensión
superficial,
Naturaleza del solvente. Es importante en relación con
el coeficiente de partición del germicida, Los desinfectantes
químicos pueden ganar fácilmente acceso a la célula
bacteriana vía el medio acuoso en el cual ellos existen.
_ Algunos solventes reducen la concentración del germicida ,
en fase acuosa, lo cual disminuye su actividad.
Aceites, grasas y glicoles bajan la actividad del fenol.
Compuestos con un alto coeficiente de partición aceite/
agua se espera que sean más efectivos contra organismos
con un alto contenido en lípidos, tal como el Mycobacterium
tuberculosis y otros bacilos acidorresistentes, que uno con
un bajo coeficiente de partición.
Ánionesy cationes. Diferentes aniones y cationes ejercen
efectos independientes sobre la permeabilidad de la membrana
celular y el coeficiente de partición del desinfectante. La
actividad del fenol, por ejemplo, puede ser incrementada por
la presencia de varias sales inorgánicas en apropiada
concentración. Los surfactantes aniónicos reducen la actividad
de clorhexidina y de compuestos de amonio cuaternario,
Jabones. Su adición tiene efecto solubilizante, La
presencia de algunos jabones puede aumentar la actividad
de los fenoles por reducción de la tensión superficial
ayudando al contacto del desinfectante con la célula
bacteriana y, tal vez unido, por el incremento de la
permeabilidad de la membrana celular. También es probable
que las propiedades de superficie activa de los compuestos
de amonio cuaternario contribuyan a sus efectos sobre la
célula bacteriana.
Algunos desinfectantes industriales, particularmente los
usados cn la higiene diaria, son formulados con detergentes
en orden de llevar a cabo limpieza y desinfección.
Interferencia de sustancias en el medio. La influencia
de materia orgánica sobre la eficiencia de un desinfectante
es en extremo importante en la práctica. Así, materiales
como sangre y otros fluidos corporales, pus, leche,
residuos de alimentos, heces, proteínas coloidales, tan
sólo presentes en pequeñas cantidades, reducen la
efectividad de los desinfectantes en varios grados. Esto
puede ser debido a la adsorción o > interacción química o
por protección de los microorganismos.
Materiales de tejidos textiles, gomas, corchos y plástico
también pueden ser adsorbidos por ciertos desinfectantes.
Compuestos en suspensión, como el caolín, pueden
inactivar a un preservador por sorción.
La concentración efectiva de los compuestos de amonio
y algunos desinfectantes fenólicos es significativamente
materia orgánica. Los compuestos de amonio cuaternario
reaccionan con jabones y detergentes no iónicos, y los
mercuriales se combinan con grupos tioles en tejidos vivos.
Desinfectantes fenólicos diluidos, tal como los
cloroxilenoles, pierden actividad constantemente, debido a
cambios en el estado fisico de la emulsión; el agua dura
también puede romper la emulsión y precipitar jabones.
Naturaleza de los microorganismos. La eficiencia de la
desinfección depende de.la naturaleza, del número de
microorganismos contaminantes y, especialmente, de la
presencia o ausencia de bacterias esporuladas, las cuales
son mucho más resistentes que la correspondiente célula
vegetativa a la acción de los germicidas. Si el grado de
contaminación microbiana es alto, se requiere un largo tiempo
de exposición y/o alta concentración del desinfectante.
pedian ia vegetativo. Generalmente, la bacteria Ya
químicos, aunque los bacilos Gram negativos, especialmente
Pseudomonas aeruginosa, a menudo son menos sensibles
que los organismos Gram positivos.
Estas diferencias, relativamente menores en la
susceptibilidad, sólo pueden ser significativas en la práctica
cuando los germicidas de bajo nivel son usados en bajas
concentraciones, particularmente en presencia de
 ESTERILIZACION Y DESINFECCION
sustancias interferentes. Se puede mejorar usando
soluciones más concentradas.
Bacilos acidorresistentes. El Mycobacterium tuberculosis
y otros bacilos acidorresistentes son claramente resistentes
a bactericidas acuosos,pero son susceptibles al alcohol
70%, formaldehído, iodo y preparaciones fenólicas con un
alto contenido en jabón, como el Lysol.
Es probable que el hipoclorito de sodio en concentraciones
adecuadas sea también activo contra micobacterias, aunque
algunos resúmenes de la bibliografía sostienen lo contrario.
Asimismo, informaciones publicadas consideran que el
grado de actividad del glutaraldehído contra el bacilo de la
tuberculosis es, en cierto modo, conflictivo.
Bacterias esporuladas. La difícil destrucción de las
bacterias esporuladas supera la capacidad de la mayor parte
“de los germicidas disponibles. Las excepciones son el
glutaraldehído al 2% en solución alcalina, solución de
formaldehído al 4-8%. especialmente a altas temperaturas,
y Óxido de etileno. De cualquier manera, con estos agentes
el efecto esporicida es altamente dependiente de las
correctas condiciones de uso, particularmente del óxido de
etileno, y si el número de esporas es muy alto se requieren
exposiciones más prolongadas.
Debido a la alta resistencia de las esporas, la esterilización
por medio de agentes químicos sólo es utilizada como un
recurso cuando. “otros métodos, en particularel calor, son
inaplicables.
Hongos. Algunos de los desinfectantes comunes,
incluidos fenoles, compuestos clorados, todo, cristal violeta
y compuestos mercuriales orgánicos, tienen actividad
antifúngica. Los compuestos de amonio cuaternario posecn
actividad contra ciertas especies de hongos.
Virus. La acción viricida de los compuestos químicos
está menos definida, aunque iodo, cloro, glutaraldehído,
formaldehído y peimproptolaciona _Bhrecen. ser los agentes
y el éter, también son usados SEE veces para inactivar
_Virus. En general, los virus animales presentan una
susceptibilidad intermedia entre las bacterias vegetativas y
las bacterias esporuladas frente a los desinfectantes. Se
pueden dividir en dos categorías de sensibilidad: los virus
hidrofílicos, que son usualmente más resistentes que los
virus que contienen una envoltura de lípidos; y losvirus
lipotilicos (ejemplo: vaccinia, influenza, herpes y adenovirus).
Así, algunos líquidos germicidas se han dejado de usar para
inactivar al grupo de los enterovirus (poliomielitis) y a los
rinovirus. La presencia del virus de la hepatitis B es una
posibilidad, la esterilización por métodos físicos es lo
recomendado, pero a falta de éstos, se puede usar óxido de
etileno bajo condiciones adecuadas de calor y
humidificación. Si se debe usar un desinfectante bajo la
forma de líquido, es conveniente dejar en exposición por lo
menos 10 horas en soluciones acuosas o alcohólicas de
formaldehído al 8% o glutaraldehído alcalinizado al 2%.
Localización de los microorganismos. La presencia de
medjos acuosos es esencial para la desinfección química.
Además, películas secas de sangre, pus, esputo, excretas,
leche, aceite u otras sustancias pueden perjudicar o evitar
la penetración del desinfectante y así permitir a los
113
microorganismos sobrevivira concentraciones aparentemente
tóxicas del agente.
Finalmente, la flora residente en las profundidades de la
piel no es afectada por los desinfectantes aplicados sobre
esta superficie. Los microorganismos son también
inaccesibles cuando están en grietas o en superficies
quebradas.
Tipos de desinfectantes
Introducción
Los desinfectantes y antisépticos son un grupo
heterogéneo de compuestos que varían enormemente
respecto de su estructura química, modo de acción, rango
de actividad y método de uso. Aunque pueden ser clasificados
de acuerdo con cualquiera de estas propiedades, generalmente
se hace según su estructura química.
Los compuestos que pertenecen a un mismo grupo químico
frecuentemente poseen propiedades antimicrobianas
características del grupo como un todo. Dentro del grupo,
las modificaciones de la estructura química pueden producir
cambios en la actividad. De todas formas, la acción
desinfectante de un compuesto no puede ser completamente
caracterizada por sus propiedades físicas y químicas.
Acidos
Durante muchos años los ácidos han sido utilizados para
prevenir la alteración de los alimentos. Además, la acción
antimicrobiana
de muchos otros agentes
se incrementa en
condiciones ácidas, reduciéndose también la resistencia de.
las esporas al calor,
La acción antimicrobiana de los ácidos inorgánicos se
debe, principalmente, a la presencia de hidrogeniones;
mientras que los ácidos orgánicos deben su acción a la
molécula no disociada,de allí que los ácidos orgánicos débiles
muestren un efecto mayor al que podría esperarse a partir
de su pH, puesto que la presencia de moléculas no disociadas
altamente impermeables favorece la penetración del ácido
en las células. El incremento de actividad al aumentar la
longitud de la cadena sugiere que dichos compuestos
orgánicos ejercen una acción directa. Los ácidos inorgánicos
son muy corrosivos para su uso general.
Acido acético. Una solución al 5% es bactericida para
un número de microorganismos, incluyendo Pseudomonas
aeruginosa y algunas Trichomonas, Candida y
Haemophylus spp., mientras que en concentraciones más
bajas son bacteriostáticas.
Acido bórico y borato de sodio. Son bacteriostáticos y
fungistáticos débiles. Han sido usados principalmente en
preparaciones tópicas, como colirios, enjuagues bucales y
gargarismos. También para el tratamiento del eczema del
pañal. Así mismo, se han empleado soluciones de ácido
bórico en heridas y úlceras, pero su utilización para estos
propósitos no es aconsejable, dada la posibilidad de
absorción. La toxicidad del boro, a veces fatal, ha llevado
al uso de compuestos r más efectivos y menos tóxicos.
Acido pberacético. Es un agente oxidante fuerte que ha
 SECCION
114
sido empleado en solución al 0,2% para desinfectar las,
manos de cirujanos y como spray para la desinfección del
aire.
Alcoholes
Los alcoholes alifáticos son bacteriostáticoscony fungicidas.
la adición
Tienen pequeña actividad esporicida, pero
de: 1% de ácido mineral o de álcali se convierten en
esporicidas. Aunque los alcoholes son activos contra virus,
el alcohol también precipita las proteinas de los tejidos o
‘de los fluidos del cuerpo que generalmente se asocian a los
virus y esto los protege de la acción inhibitoria del alcohol.
La acción antimicrobiana de los alcoholes alifáticos
aumenta con el peso molecular, y con el largo de la cadena
hasta 10 tomos de carbono, por encima del cual disminuye
considerablemente su solubilidad. La estructura de la cadena
como el largo de la misma afectan la actividad, y un alcohol
de cadena lineal es más activo que sus isómeros. Por -
ejemplo, el alcohol n-propilico es más activo que el alcohol
isopropílico. Algunos alcoholes clorados se usan también
como agentes antibacterianos.
Etanol. Es un líquido volátil, disponible como
mezcla con 95% v/v de alcohol etílico y 5% de agua. Las
propiedades antibacterianas, al igual que su efecto
n las
desnaturalizante sobre las proteínas, dependede
proporciones de alcohol y agua presentes. En concen-
traciones entre 50-70% en solución acuosa presenta la
máxima eficacia, siendo rápidamente bactericida contra la
mayoría de las células vegetativas. Las concentraciones
más bajas son bactericidas sí se aumenta el tiempo de
contacto; su acción es nula en concentraciones inferiores
al 20%. En concentraciones superiores al 95% se reduce
considerablemente su actividad. La duración de su acción
en las superficies es corta por su naturaleza volátil. Afecta
la permeabilidad de la membrana celular produciendo una
liberación del material celular, cuyo efecto parece ser mayor
en concentraciones entre 50-60%.
oclorhexidina, se utiliza como desinfectante de la piel, donde
elalcoho! se volatiliza dejando la piel seca, y por esto no
hay actividad residual si se usa solo. También se emplea en
la desinfección de superficies limpias, pero no se
recomienda para equipos o instrumentos, ya que no es
esporicida y se inactiva en presencia de materia orgánica;
puede usarse en la desinfección de termómetros.
Alcohol isopropílico. Es más activo que el alcohol etílico
en concentraciones por encima del 70% sobre células
vegetativas; también mantiene propiedades antimicrobianas
sin diluir, Ha sido utilizado para la desinfección de piel y
“termómetros, aunque actualmente su aplicación fundamental
es como solvente.
Alcohol bencilico. Tiene propiedades bacteriostáticas y
de anestésico local. Se utiliza principalmente, como
preservador.
Aldehidos
El formaldehído y el glutaraldehído pueden utilizarse
1°: GENERALIDADES
tanto para desinfectar como para esterilizar, siendo
empleados en soluciones y como vapores.
——Formaldehído . disponible como solución, contiene
Está
entre 34-38% de formaldehído, con alcohol metílico como
agente estabilizante para retardar la polimerización. Es
bactericida, fungicida y viricida. Bajo condiciones
controladas (como fue señalado en "Esterilización
gaseosa") también es efectivo contra esporas.
No tiene la capacidad de penetrar convenientemente y
polimeriza con facilidad a paraformaldehído, el cual se
condensa en las superficies. La acción antimicrobiana
de su capacidad para inactivar las proteínas
resulta
condensándose con los grupos aminos libres de ellas, dando
azometinas y otros compuestos. También puede causar lisis
de la pared celular. Los microorganismos pueden ser
inhibidos por concentraciones que no tienen efecto
observable en las proteínas celulares.
Recordemos que la acción del formaldehído depende
se
de la temperatura y de la humedad relativa, Su actividad
reduce, además, en presencia de materia orgánica. Se utiliza
en solución acuosa o alcohólicala 1-2% para desinfección
de equipamiento hospitalario,
una Como gas o spray se usa para fumigar habitaciones, y
como gas o en solución para la desinfección de ropa blanca
y ropa de cama. Es muy irritante para ser usado como
desinfectante de piel, pero en soluciones en alcohol o
glicerol se ha empleado en el tratamiento de la hiperhidrosis.
En soluciones acuosas diluidas, como enjuague bucal. Tiene
eran utilidad en la esterilización de bacterias o en la
inactivación de toxinas o virus, sin afectar su antigenicidad.
Durante mucho tiempo se utilizó en concentraciones del
0,1% para la preparación de vacunas.
Glutaraldehído. Es activo contra bacterias Gram
positivas y Gram negativas, bacterias acidorresistentes,
hongos y virus. Las soluciones acuosas de elutaraldehido
son ácidas. De esta forma, son estables, pero no esporicidas.
La actividad óptima se alcanza con las soluciones de pH 7,5-
8.3 con el bicarbonato de sodio. En condiciones alcalinas,
el glutaraldehído es polimerizado; esta reacción es rápida a
pH superior a 9.
carbonilos activos que pueden
Posee dos grupos
reaccionar con los grupos aminoácidos de las proteínas.
También se combina con otros grupos, incluyendo los
grupos tioles de enzimas esenciales de la membrana y
constituyentes citoplasmáticos. Su acción letal
probablemente se deba a la acumulación de los efectos de
varias acciones inhibitorias. No penetra en la materia
su acción
orgánica, pero de acuerdo con diversos informes,
no se ve afectada en presencia de 20% de suero.
Una solución acuosa al 2% de glutaraldehido tamponada
a pH 7,5-8,5 se utiliza para desinfectar instrumentos
termolábiles. No corroe metales ni afecta los plásticos o
gomas. La desinfección puede requerir tiempos de
exposici ón r de 15 a 20 minutos, mientras que
de alrededo
para la esterilización puedo llevar varias horas.
Amidinas
Fueron inicialmente utilizadas para tratar infecciones por
 ESTERILIZACION Y DESINFECCION
protozoos. La pentamidina se utiliza como treponemicida,
pero la dibromopropamidina y la propamidina son usadas
como desinfectantes..
El isotiocianato de dibromopropamidina es activo contra
bacterias Gram positivas y algunas Gram negativas,
incluyendo algunas Pseudomonas spp. Su actividad puede
ser bacteriostática O bactericida, dependiendo de la
concentración. También tiene propiedades anti fúngicas.
Se puede utilizar para el tratamiento de infecciones de
piel y pequeñas quemaduras. Como colirio, para “el
tratamiento de infecciones oftálmicas.
El isotiocianato de propamidina es activo
bacterias Gram positivas y hongos, pero a diferencia del
anterior, no es activo contra bacterias Gram negativas. Su
utilización por períodos prolongados como antiséptico
puede provocar necrosis superficial.
Surfactantes anfolíticos
Son derivados de aminoácidos N-sustituidos de cadena
larga que tienen por fórmula general R-NHCH,COOH
donde R es un radical alquilo, acilo, o un sustituyente
aminoetilo del ácido aminoacético. Estos compuestos
pueden ser no iónicos, catiónicos o aniónicos, dependiendo
del pH. Son aniónicos a pH por encima del punto
isoeléctrico, y catiónicos a pH por debajo de ¿ste. Presentan
las propiedades detergentes de los surfactantes aniónicos y
las propiedades desinfectantes de los surfactantes
catiónicos. Son bactericidas
y fungicidas, y su actividad
no se reduce en presencia de materia orgánica,
El clorhidrato de dodicinas se usa en solución al 1% para
la desinfección de superficies e instrumentos en hospitales,
como también para la desinfección de piel.
Estos desinfectantes anfolíticos pueden emplearse en la
industria alimentaria y láctea.
Surfactantes catiónicos
Son compuestos de amonio cuaternario o derivados del
piridinio. Su acción es bacteriostática o bactericida
dependiendo de la concentración. Son activos contra
bacterias Gram positivas y en menor grado contra Gram
negativas, de las cuales Pseudomonas spp. son particular-
mente resistentes. No son efcctivos contra esporas bacterias
acidorresistentes 5 y viru
virus, pero algunos se comportan como
antifúngicos,
Los compuestos de amonio cuaternario son haluros de
amonio sustituidos en los que al menos uno de los
sustituyentes debe tener un largo de cadena de 8alS
átomos de carbono, para la actividad antibacteriana;cuya
fórmula general es:
R, AU iz” R,
Ry AR,
” A,
donde R, y R, representan radicales alquiio, acilo,o
heterociclos, y X es un halógeno.
115
Los compuestos de piridinio son aquellos en los cuales
un anillo piridínico reemplaza a 3 de los 4 radicales unidos
al nitrógeno.
La actividad de los surfactantes catiónicos es
dependiente de pH, aun cuando pueden permanecer
¡onizados a todos los valores de pH, siendo casi completamente
inactivos a pH menor de 3,5. Su actividad aumenta con el
pH hasta un máximo a pH neutro o ligeramente alcalino.
Son bacteriostáticos
en concentraciones mucho menores.
Resultan absorbidos sobre la superficie de la membrana
celular cargada negativamente. Esto produce cambios en
contra su permeabilidad y la pérdida del contenido de consti-
tuyentes de bajo peso molecular. En concentraciones
bacteriostáticas, el daño sobre la membrana puede ser
reversible. La actividad bactericida se reduce marcadamente
en presencia de materia orgánica; son adsorbidos por
plásticos y tejidos. Se emplean como desinfectantes de piel
ysuperficies, siendo frecuentemente utilizados con
puanidas con cl objeto de mejorar las propiedades
humectantes y detergentes de estos últimos.
Cloruro de benzalconio. Es una mezcla de cloruros de
alquilbencildimetilamonio de fórmula general:
[C¿H,-CH,-N(CH,), ,]7 Cr
donde R representa una mezcla de alquilos de 8 a 18
carbonos. Tienen utilidad como desinfectantes de piel en
soluciones acuosas de 0,1-0,2%, y al 0,01% como
preservador de gotas oftálmicas.
Cloruro de bencetonio. Se emplea como desinfectante
de piel, y en la industria alimentaria y láctea. Se ha usado
para controlar el crecimiento de algas en los natatorios.
Cetrimide. Consiste principalmente en bromuro de
tetradecil-trimetilamonio con pequeñas cantidades de
bromuro de dodecil y hexadecil-trimetilamonio, y contiene
no menos de 96% de bromuro de alquiltrimetilamonio, Las
soluciones acuosas en concentraciones entre 0,1 y 1,0% se
utilizan para la desinfección de piel y utensilios. Con la
adición de nitrito de sodio al 0,4% se usa para el
almacenamiento de instrumentos. También puede emplearse
en solución alcohólica para desinfección preoperatoria de
piel.
Cloruro de metilbencetonio. Se utiliza como bacterios-
tático contra organismos que degradan la urea, en el
tratamiento y la prevención de la dermatitis amoniacal, Se
usa tópicamente en preparaciones que contienen entre 0,05
y 0,1%
Clorhexidina y otras diguanidas
El compuesto más importante de este grupo es la
clorhexidina, si bien en la década de 1950 también ha sido
utilizada con igualfinalidad la picloxidina,
Clorhexidina. Se utiliza bajo la forma de clorhidrato
o acetato, y más frecuentemente como gluconato. Es
activa contra bacterias Gram positivas y Gram negativas,
aunque es menos efectiva contra algunas Pseudomonas
y Proteus spp. Posee alguna actividad antifúngica y
puede resultar efectiva contra bacterias
 116 , SECCION
acidorresistentes, virus y algunas esporas, dependiendo
de la concentración.
Frecuentemente se le adicionan surfactantes catiónicos
o no iónicos para mejorar sus propiedades detergentes y
humectantes. Puesto que éstos también solubilizan las
sales menos solubles, mejoran la compatibilidad de la
clorhexidina con aguas duras.
La clorhexidina es incompatible con los jabones y otros
materiales aniónicos, y es inactivada por sangrey otro tipo
de materia orgánica. Como es de naturaleza catiónica,
alcanza su máxima actividad a pH 8, disminuyendo a medida
que éste lo hace. Pierde su actividad bactericida por debajo
de un pH 5,2.
Es un agente antibacteriano que actúa sobre la membrana;
es adsorbido por las células y reacciona con los grupos de
carga negativa de la superficie celular. El efecto producido
depende de la concentración y del número y tipo de especies
bacterianas. Daña las membranas provocando cambios en
su permeabilidad. A bajas concentraciones da como
resultado una pérdida de los constituyentes citoplasmáticos
de bajo peso molecular, mientras que a concentraciones altas
produce la coagulación del citoplasma y hay menos pérdida
del material. También puede inhibir las Funciones celulares
anaeróbicas por inhibición de la enzima adenosil trifos fatasa
de membrana,
El gluconato de clorhexidina se encuentra comercialmente
disponible en solución al 5% y al 20%, las que deben diluirse
antes del uso. La solución concentrada al 5% suele contener
un surfactante no jónico, y entonces no debe utilizarse en
heridas o mucosas, en cuyo caso se realizarán diluciones a
partir de la solución al 20%. Las soluciones stock deberían
contener al menos 7% de alcohol al 70%, o 4% de alcohol
isopropítico, con el fin de disminuir la posibilidad de
contaminación por Pseudomonas spp. Se puede emplear al
0,5% en alcohol al 70% en la desinfección preoperatoria
de piel; en solución acuosa al 0,05% para heridas; y al
0,02% para irrigaciones vesicales; como crema al 1% en
obstetricia.
Con el agregado de nitrito de sodio al 0,1% a los efectos
de evitar la corrosión, puede utilizarse para guardar
instrumental estéril.
El acetato de clorhexidina al 0,01% se usa como
preservador en gotas oftálmicas. Cuando se requicren
acciones antibacterianas más prolongadas pueden emplearse
cremas y unglientos que contienen entre 0,1 y 1%
clorhidrato de clorhexidina. Finalmente, la clorhexidina
también puede usarse en la industria alimentaria y láctea,
Colorantes
Los principales son los derivados de la acridina y los
derivados de trifenilmetano. De los primeros, la proflavina
es la más importante, mientras que los segundos más
utilizados en medicina son el verde brillante y el cristal
violeta.
La proflavina y otros derivados de acridina
bacteriostáticos y, en general, más activos contra bacterias
Gram positivas. También son activos contra algunos virus,
pero tienen poca acción contra bacterias acidorresistentes,
l-: GENERALIDADES
hangos y esporas. Las bacterias pueden desarrollar
resistencia a las acridinas. Los derivados de acridina pueden
utilizarse como desinfectantes de piel y en el tratamiento
de heridas y quemaduras infectadas con bacterias Gram
positivas.
Los colorantes derivados del trifenilmetano son bac-
teriostáticos, y más activos contra bacterias Gram positivas.
También son fungistáticos, pero resultan inefectivos contra
bacterias acidorresistentes y esporas. Son compuestos
catiónicos y la acción antibacteriana aumenta cuando
aumenta la ionización. La actividad disminuye en presencia
de materia orgánica.
El verde brillante se usa en solución hipcrosmótica salina,
para el tratamiento de heridas y quemaduras. Se emplea,
además, como desinfectante de piel en soluciones con 0,5%
de verde brillante y 0,5% de cristal violeta. El cristal violeta
puede emplearse para tratar varias afecciones de piel y
candidiasis vaginales en soluciones acuosas al 0,5%.
Halógenos
Las propiedades desinfectantes de los halógenos son
debidas, principalmente, a su acción oxidante. Las
preparaciones de cloro y yodo han sido extensamente usadas
como desinfectantes, aunque, para muchos propósitos se
han reemplazado por preparaciones más modernas. El
bromo no ha sido empleado ampliamente, porque es muy
irritante, pero las salicilanilidas bromuradas tienen
propiedades antibacterianas y antifúngicas, y se han
utilizado en jabones medicinales,
A .Compuestos inorgánicos de cloro
Cloro e hipocloritos. Tienen una rápida acción
bactericida y fungicida; también son activos contra virus,
levaduras, protozoos y algas. Son menos activos contra
bacterias acidorresistentes y esporas.
La potencia de los compuestos de cloro se expresa como
el cloro disponible en el compuesto. El cloro en solución
acuosa, a valores de pH superiores a 2, es convertido en
ácido. hipocloroso (HOCI).
Cl, +H,0 <> HOCI + H'+CI
En forma similar, los hipocloritos en solución acuosa
de son convertidos en ácido hipocloroso no disociado (pKa
7,2), siendo, en consecuencia, dependiente del pH. La
actividad óptima se evidencia a pH 5. Sin embargo, como
el cloro gaseoso,se pierde en las soluciones ácidas, las
mismas se estabilizan por la adición de álcali hasta dar un
pH entre 7 y 9.
El ácido hipocloroso no disociado penetra las células y,
probablemente, actúa por oxidación y cloración del material
celular. Inhibe enzimas esenciales que contienen grupos tiol
en la membrana celular y el citoplasma. Causa lisis de la.
pared celular, probablemente debido a su acción sobre las
son enzimas que la sintetizan.
El cloro e hipocloritos se inactivan por cualquier material
orgánico al que pueden oxidar, y su acción antibacteriana
puede ser inactivada por el agregado de tiosulfato de sodio.
 ESTERILIZACION Y DESINEECCION
El cloro gaseoso es usado para la desinfección de
abastecimientos públicos de agua, variando las concen-
traciones entre 0,5 y 20 mg/l, dependiendo del grado de
contaminación. La concentración de cloro residual debería
estar entre 0,2 y 0,4 mg/l; mientras que en natatorios se
pueden mantener niveles de cloro residual que varíen entre
0,25 y 1 mg/l. Para desinfectar aguas de consumo
contaminadas se puede emplear cal clorada con 1 parte por
millón (ppm) de cloro disponible.
Los compuestos de cloro se usan en hospitales para
desinfectar superficies y equipos: soluciones de hasta 10.000
mg/l de cloro disponible para desinfectar superficies
contaminadas por sangre; soluciones de 100 a 250 mg/l de
cloro disponible para desinfección de mamaderas. Para
desinfección de equipos alimentarios y licteos, se suele
emplear en concentraciones de 200 a 300 mg/l.
b. Compuestos orgánicos de cloro
Se utilizan como desinfectantes muchos compuestos
orgánicos que contienen sustituyente > N-Cl, o -N-Cl,.
Tienen un espectro de actividad y mecanismos de acción
similar a los hipocloritos, pero son más estables. Son menos
irritantes y menos tóxicos que el cloro y los hipocloritos.
Las cloraminas en solución al 2% se utilizan como
“desinfectantes de heridas. También se utilizan para la
desinfección del agua de consumo (Smg/l) y natatorios.
C. Compuestos inorgánicos de yocdo
Yodo. Es un bactericida no selectivo, efectivo contra
hongos y virus, y un esporicida que actúa rápidamente en
las concentraciones usualmente empleadas.
La presencia de yoduros en las soluciones acuosas de
yodo produce la formación de triyoduro,y la pérdida de la
actividad. Esta reacción sólo es significativa si hay un gran
exceso de yoduro para complejar el yodo libre.
En soluciones alcalinas, el yodo se convierte en ácido
hipoyodoso, siendo a pH 8,5, la relación de yodo a ácido
hipoyodoso de 1:1, así la actividad bactericida y esporicida
es marcadamente reducida. Se piensa que la actividad se
debe a las propiedades oxidantes del yodo libre con las
proteínas celulares. El yodo combinado químicamente no
posee propiedades bactericidas. La materia orgánica reduce
considerablemente la acción del yodo.
Soluciones débiles de yodo se usan para la desinfección
preoperatoria de piel intacta y en el tratamiento de heridas
y abrasiones menores. También se ha utilizado el yodo para
la desinfección de agua.
Yodóforos. Son complejos de yodo con surfactantes.
No son volátiles y su actividad bactericida aumenta con la
temperatura hasta alrededor de 43?C; a temperaturas más
altas se descomponen con liberación de yodo.
Los surfactantes no iónicos forman yodóforos más
estables, y sólo pueden ser utilizados los surfactantes no
iónicos que actúan como transportadores de yodo y son
suficientemente solubles en agua.
Los yodóforos pueden solubilizar hasta un 25% en peso
de yodo. Algo del yodo es combinado químicamente, pero,
“en general, del 70 al 80% puede ser liberado como yodo
disponible. Proveen un medio para la formulación de
117
preparaciones acuosas de yodo sin el uso de los yoduros y
sin la consiguiente pérdida de yodo como triyoduro.
Los que liberan yodo en contacto con la piel o mucosas
son usados como desinfectantes preoperatorios. También
se utilizan para tratar heridas contaminadas, infecciones
bucales, tiñas y candidiasis vaginal.
Yodopovidona. Es ua complejo de yodo con povidona
que contiene entre 9 y 12% de yodo disponible, utilizándose
como soluciones que contienen entre 0,75 y 1% de yodo
disponible. Al igual que los yodóforos, se suelen emplear
en el ambiente hospitalario en muchas aplicaciones.
Metales
_La mayoría de los iones de metales pesados poseen
alguna propiedad antibacteriana;
y las sales inorgánicas o
los compuestos orgánicos de cobre, mercurio y plata han
sido extensamente usados como desinfectantes.
A. Compuestos de cobre.
El sulfato de cobre y otras sales cúpricas son bacterios-
táticos, efectivos contra algas y hongos; en algún grado
pueden resultar bactericidas y poseen una débil actividad
viricida. Su acción inhibitoria se debe a la capacidad dei
ion cúprico para combinarse con grupos tio] esenciales de
la célula bacteriana.Concentraciones más altas pueden
precipitar proteínas.;,Actualmente, el sulfato de cobre se
utiliza en concentraciones de 0,5-1 mg/l para prevenir el
crecimiento de algas en natatorios y reservorios de agua.
También se lo usa como spray antifúngico para árboles frutales.
B. Compuestos de mercurio.
El mercurio, sus sales inorgánicas, y los compuestos
orgánicos tienen propiedades bacteriostáticas debido a la
presencia de ¡ones mercúricos (Hg”*) los cuales se combinan
con grupos tiol de enzimas esenciales de membranas y
constituyentes citoplasmáticos. Las sales inorgánicas, como
el cloruro mercúrico, son muy poco usadas actualmente,
puesto, qua hey gr opiols preparaciones pacos tóxicas y
agentes OS incluyen nitromerosol y tiomerosal,
que se emplean en solución alcohólica para desinfección
de piel, puesto que una de las valencias del mercurio se
halla unida covalentemente y, por lo tanto, brindan una
acción antiséptica prácticamente no irritante. Estos
compuestos resultan útiles para la conservación de algunas
preparaciones farmacéuticas, sueros y vacunas.
C. Compuestos de plata.
La acción inhibitoria de los compuestos de plata se debe
a la capacidad del ¡on plata para combinarse con grupos
tiol esenciales de la célula bacteriana. También se combina
con los grupos carboxilo, fosfato, amino y otros dentro de
la célula. La acción del ¡on plata no se restringe a las células
bacterianas, puesto que las concentraciones bactericidas
son también tóxicas para los tejidos. Las concentraciones
altas precipitan proteínas.
El nitrato de plata se ha utilizado desde hace mucho
tiempo por sus propiedades astringentes, cáusticas y
 118 SECCION
antibacterianas. Es bactericida en concentraciones
1: 1000, y es bacteriostático en concentraciones menores.
Resulta más activo sobre bacterias Gram negativas. Las
soluciones en concentración de 0,2 - 1% se han usado para
cl tratamiento de infecciones oculares, y en gotas al 1%
para la profilaxis de la oftalmia gonocóccica neonatal.
Peróxidos y permanganatos
Los peróxidos y permanganatos son agentes oxidantes
que se utilizan como desinfectantes y desodorantes.
Los principalmente usados son el peróxido de hidrógeno
y el permanganato de potasio.
Solución de peróxido de hidrógeno (20 volúmenes).
Contiene entre el 5 y el 7% de agua oxigenada. Es un
compuesto inestable con acción germicida relativamente
débil y de corta duración. En contacto con tejidos se
descompone rápidamente formando agua y oxígeno. La
acción antimicrobiana se debe, fundamentalmente, a la
oxidación del material celular. Oxida diversos grupos
susceptibles de la célula, y en presencia de tones de
metales pesados puede ocurrir una reacción en cadena
autopropagable. Por otra parte, se ha encontrado que afecta
los ribosomas, pero no se piensa que ésta sea una reacción
primaria. La acción antimicrobiana se reduce en presencia
de otros materiales oxidables, como las proteínas.
“La acción desinfectante y desodorante ocurre durante la
liberación del oxígeno. Se usa parala limpieza de heridas,
donde, si bien no penetra bien, la efervescencia provee un
medio mecánico para el desprendimiento del tejido muerto
y las bacterias de partes inaccesibles de heridas. Además,
se ha utilizado en gotas Óticas para remover la cera. En la
industria se usa como oxidante y blanqueador.
Permanganato de potasio. Es un agente oxidante con
propiedades desinfectantes, desodorizantes y astringentes.
Su acción antimicrobiana se ve reducida en presencia de
otros materiales oxidantes. Una concentración de 1:10.000
por una hora resulta generalmente bactericida, Similarmente
a los peróxidos, se usan concentraciones de 1:1000 a 1:4000
para la limpieza de heridas, enjuagues bucales y
gargarismos, mientras que soluciones más diluidas se
emplean para irigaciones vesicales y vaginales. También
pueden utilizarse soluciones en compresas y baños en varias
condiciones de la piel, donde se presenta infección
secundaria. Por otra parte, ha sido usado en solución al 1%
para el tratamiento de infecciones micóticas.
Fenoles
El fenol ha sido utilizado como desinfectante desde el
siglo XIX, pero su utilidad está muy limitada por sus
propiedades corrosivas. El espectro de actividad y la.
toxicidad del fenol han sido modificados por la introducción
de sustituyentes en la molécula. Los derivados alquílicos y
halogenados son menos corrosivos que el fenol, pero como
sus sustituyentes son lipofílicos, la actividad se ve
marcadamenie reducida por la presencia de materia
orgánica. La nitración del fenol altera su mecanismo
HOCIón,
1% GENERALIDADES
de Fenol y derivados alquílicos. Son activos contra
bacterias Gram positivas y Gram negativas. La acción es
bactericida o bacteriostática, dependiendo de la concentr ación
y la especie bacteriana. Su actividad se incrementa con el
aumento de la temperatura. También son efectivos contra
hongos y virus, pero tienen poca actividad contra bacterias
acidorresistentes y esporas.
Los derivados alquílicos son compatibles con
surfactantes aniónicos, pudiéndose aumentar su actividad
bactericida y esporicida por el agregado de jabón. Esto se
asocia con la formación de miscelas mezcladas de fenol y
jabón. y depende de las propiedades y proporciones de cada
uno de ellos en el sistema. Los compuestos alquilados de
fenol son más activos, aumentando su actividad con el
crecimiento de la cadena, hasta n-amilo, lo cual se
corresponde con el aumento en la solubilidad lipídica.
También aumenta su capacidad para asociarse a la
membrana celular y traspasarla. La disminución en la
actividad asociada a sustituyentes de cadena más larga se
debe a la más baja solubilidad en agua.
Los fenoles y sus derivados dañan las paredes celulares
y producen cambios en la permeabilidad de la membrana,
con pérdida de ciertos constituyentes esenciales. Altas
concentraciones coagulan proteínas. Son más activos en
condiciones ácidas; la actividad del fenol depende de la
presencia de moléculas no disociadas, lo que puede estar
ligando a la solubilidad lipídica, ya que las moléculas de
fenol no disociadas son más solubles en lípidos que los iones
fenolato. El pKa del fenol es10,0, por lo tanto, en soluciones
ácidas se encuentra principalmente en la forma no disociada.
Siendo lipídicos, tienen un alto coeficiente de partición
aceite/agua. Las soluciones en aceites, glicerol y solventes
orgánicos, si bien son menos corrosivas, reducen la actividad
antimicrobiana. De igual manera, la reducción de la
actividad en presencia de materia orgánica es causada por
la partición del fenol en los materiales lipídicos.
El fenol (ácido carboxílico) resulta bacteriostático en
concentraciones de hasta 1%, mientras que concentraciones
superiores son bactericidas. Se ha utilizado en
concentraciones de hasta 2% para tratar heridas menores, y
de alrededor del 5% para la desinfección de excretas. En
soluciones al 0,2-0,5%. en glicerol se emplean en
gargarismos o enjuagues bucales. También es usado como
analgésico en odontología.
El cresol es una mezcla de o, m y p-cresoles obtenidos
a partir de la fracción de más bajo punto de ebullición por
destilación del alquitrán de hulla a 188-205*C, En
concentraciones de 0,3- 0,6% mata las células vegetativas,
incluidas las micobacterias, dentro de los 10 minutos de
contacto. Al 0,3% se usa como preservador de algunos
inyectables; como tal y en solución jabonosa se utiliza para
desinfección de equipos hospitalarios y como desinfectante
doméstico general. La actividad no se ve reducida
apreciablemente por la presencia de materia orgánica, pero
puede ser disminuida por plásticos y otros materiales de
los aplicadores,
Derivados halogenados cel fenol. La actividad del fenol
de puede aumentarse por halogenación, siendo principalmente
utilizados los derivados. clorados. La cloración de los
 ESTERILIZACIÓN Y DESINFECCION
alquilfenoles aumenta la actividad, que se ve más marcada
cuando el grupo alquilo ocupa la posición orto, respecto de
la función fenólica, y el halógeno la posición para.
Asimismo, la actividad se ve influida por la solubilidad
lipídica y el pFl, como los alquilfenoles.
Son activos contra bacterias Gram positivas, y al igual
que el fenol, su actividad puede ser bacteriostática o
bactericida, dependiendo de la concentración y de la especie
bacteriana. Resultan casi inactivos contra esporas y algunas
bacterias Gram negativas, como Pseudomonas aeruginosa,
Proteus vulgaris y algunas Salmonellas. Ciertos derivados
se utilizan por sus propiedades antifúngicas.
Algunos fenoles halogenados son también difenílicos;
la actividad antimicrobiana dependerá de la estructura. Los
compuestos que contienen un sustituyente hidroxilo en cada
anillo son más activos, pero para una actividad máxima la
posición de estos grupos debe ser orto respecto del grupo
de unión de los anillos. La halogenación de ambos anillos
también aumenta la actividad: los derivados diclorados son
más activos contra bacterias gramnegativas y hongos.
Clorocresol. Se emplea en concentraciones del 0,1% para
mantener la esterilidad de inyecciones multidosis. En
concentraciones de 0,2%, paraelproceso de calentamiento
con agente bactericida mencionado en esterilización por,
calor. Antiguamente se empleaba en solas. ARSImicas.
muy poco soluble, ICE se utiliza como
solución al 5% solubilizado con algún jabón. Se le suele
agregar terpenol como agente solubilizante y para darle
aroma a pino. Se lo ha empleado en dilución no mayor de
1:4 para desinfección de piel, El dicloroxileno! se utiliza
en forma similar.
Hexaclorofenol.
Es un derivado activo contra bacterias
Gram positivas, pero tiene muy poca acción sobre bacterias
Gram negativas. Algunas preparaciones suclen contaminarse,'
a veces, por Pseudomonas y Salmonella spp. Su actividad
se reduce en presencia de sangre. Suele utilizarse en
jabones y cremas en concentraciones de 0,25- -3,0% como
desinfectante hospitalario para la prevención de la infección
estafilocóccica cruzada. Las aplicaciones aisladas no
resultan electivas requiriéndose aplicaciones repetidas de
varios días para acumular una concentración efectiva en la
piel.
Antiguamente, el hexaclorofenol ha sido muy utilizado
para el cuidado de la piel de los niños. Sin embargo, su uso
fue restringido debido a informes de daño cerebral, a veces
fatal, por absorción de cantidades excesivas a través de piel
intacta y lesionada. Si se emplea con las precauciones
correspondientes, aún es de valor en el control de
infección estafilocóccica.
Paraclorofenol. Es un potente antiséptico, pero es más
tóxico e irritante que el fenol. Se ha utilizado en odontología.
Nurofenoles. La nitración como la alquilación y la
halogenación aumenta la actividad antimicrobiana del fenol,
así como su toxicidad sistémica. Los nitrofenoles tienen su
mayor actividad en condiciones ácidas, y la mayor parte de
la actividad se debe a las moléculas disociadas. En contraste
con el fenol, la forma iónica del dinitrofenol ha mostrado
contribuir a la actividad en condiciones menos ácidas. Los
119
nitrofenoles actúan desacoplando la oxidación de la
fostorilación en las células bacterianas y fúngicas, lo que
evita que la energía pueda ser almacenada como ATP.
Antiguamente se utilizaba una solución de trinitrofenol
para el tratamiento de quemaduras. Otros nitrofenoles se
emplean como fungicidas, insecticidas y herbicidas.
Derivados de la quinolina
La hidroxiquinolina (oxima) ha sido usada como agente
antimicrobiano durante muchos años, habiéndose producido
muchos derivados halogenados, algunos de los cuales se
utilizan como antisépticos.
La hidroxiquinolina y sus derivados son activos contra
hongos y bacterias Gram positivas pero poseen poca
actividad sobre las Gram negativas. Algunos presentan
propiedades antiamebianas.. Son agentes quelantes- que
requieren la presencia de ¡ones ferrosos o cúpricos para su
acción; en ausencia de éstos, si bien pueden penetrar a la
célula, no resultarán inhibidores. El agente antimicrobiano
activo está constituido por el complejo de la hidroxiquinolina,
o sus derivados, con hierro o cobre, siendo importante la
proporción de cada uno. Los complejos 1:1 pueden actuar
como agentes oxidantes y producir la oxidación de grupos
tioL.
una Valoración de desinfectantes químicos
La experiencia ba demostrado que el solo hecho de
conocer la composición química, las condiciones de acción
y las especies microbianas a las que va dirigido, no es
suficiente para evaluar la electividad de un germicida. Esta
actividad, propia de su composición, se afecta por múltiples
factores como son su solubilidad, miscibilidad, grado de
dispersión coloidal, ionización, tensión superficial,
presencia de materia orgánica, concentración, tiempos de
exposición, etcétera. Los microorganismos, según su
especie, se comportan de manera distinta frente a las
moléculas químicas. La vulnerabilidad depende de su
densidad y, sobre todo, de las propiedades del citoplasma
de neutralizar los desinfectantes o impedir su penetración.
Además, la resistencia microbiana a la acción química puede
variar considerablemente entre diferentes especies, cepas
de la misma especie y diferentes cultivos de la misma cepa.
El papel de las numerosas variantes mencionadas hace
sumamente difícil la estandarización de métodos para el
control de los desinfectantes, como tampoco permite que
un solo ensayo pueda evaluar la actividad antimicrobiana
la total. De este modo, será necesario adecuar métodos para
determinar actividad antibacteriana o antifúngica, así como
realizar diferentes ensayos para determinar actividad letal
o inhibitoria. Hasta el presente, no se cuenta con métodos
estandarizados para la determinación de la actividad
antiviral.
Se debe recordar que la mayor parte de estos ensayos
están diseñados de modo de garantizar la reproducibilidad
bajo condiciones de laboratorio, por lo tanto, los resultados
obtenidos no deberían utilizarse aisladamente para sacar
conclusiones bajo condiciones de uso. Más recientemente
 120 SECCION 1: GENERALIDADES
se han desarrollado métodos que tienen en cuenta las
condiciones en uso. La realización de éstos, junto con las
técnicas de laboratorio desde hace tiempo establecidas,
pueden brindar información útil sobre la acción de los
desinfectantes.
En la actualidad encontramos una gran variedad de
métodos, que pueden dividirse en dos grandes grupos: los
que miden de manera no muy exacta la capacidad
bacteriostática de un germicida, y los que incluyen los
ensayos destinados a la determinación del poder bactericida
y la eficacia de uso.
La comprobación de la actividad bacteriostática se lleva
a cabo a través del contacto y la incubación de diluciones
del desinfectante con un cultivo bacteriano y determinación
del efecto inhibitorio por medio de la observación de
desarrollo (cuando se realiza en medio sólido) o turbidez
(si se lleva a cabo en medio líquido).
La determinación de la acción letal de un germicida se
realiza en dos pasos generales: inicialmente, los micro-
organismos se ponen en contacto con diluciones apropiadas
del producto a ensayar, y en un segundo paso, luego de dar
lugar al tiempo de contacto correspondiente, se procede a
la siembra del inóculo en medio líquido o sólido, previa
eliminación del desinfectante residual por dilución o
inactivación, para establecer los sobrevivientes a la acción
del compuesto. En el caso de desinfectantes con bajo
coeficiente de concentración (n) se requieren neutralizantes
específicos, por ejemplo, tioglicolato 0,05% para productos
con metales pesados o halógenos, L-cisteina 0,08%
tiosulfato de sodio 0,5% para derivados clorados. El Tween
80 al 3%, la yema de huevo fresca al 5%, y la lecitina a
0,3%, solos o asociados, suelen emplearse para algunos
derivados fenólicos, aldehídos y derivados de amonio
cuaternario. El suero inactivado al 10% se utiliza como
neutralizante universal, cuando no es posible recurrir a los
específicos.
Las técnicas para determinar el poder bactericida
pueden, a la vez, dividirse en dos grupos: procedimientos
que utilizan portagérmenes y los de suspensiones
bacterianas. En las técnicas con portagérmenes, los
microorganismos son vehiculizados en soportes inertes muy
variados, como por ejemplo, cilindros de vidrio o acero. Si
bien son exactos, resultan irreproducibles y cualitativos, ya
que es difícil distinguir el efecto mecánico de arrastre del
líquido de lavado sobre los microorganismos, de la acción
bactericida del producto, y deben considerarse para
evaluaciones preliminares. Los procedimientos con
suspensiones bacterianas son los más utilizados actualmente
e incluyen los métodos de coeficiente de fenol, el test de
capacidad de Kelsey-Sykes, el test en-uso de Kelsey-
Maurer, las normas AFNOR, entre otros.
El método del coeficiente de fenol, ideado por Rideal y
Walker en 1903, permite determinar la dilución del
germicida que puede destruiral microorganismo de referencia
(principalmente Salmonella typhi y Staphylococcus
aureus) luego de un tiempo de contacto de 10 minutos,
pero no en 5 minutos, bajo condiciones específicas.
A partir de los resultados y en comparación con lós
obtenidos al mismo tiempo con el fenol, se hace el cálculo
del coeficiente fenólico dividiendo la máxima dilución del
desinfectante por la del fenol, que produce el efecto
mencionado. El número hallado se emplea para calcular la
dilución que se supone equivalente en actividad germicida
a la solución de fenol al 5%. Los resultados son fehacientes
cuando las condiciones del ensayo se mantienen rigidamente
constantes, sin este requisito, están expuestos a errores
groseros.
Uno de los mayores inconvenientes es la manera de
convertir el número del coeficiente de fenol en términos de
dilución de uso. En la práctica se suele multiplicar dicho
valor por 20 para determinar la cantidad de partes de agua
que se añaden a una de germicida. Si bien tiene gran
incidencia de error, puede considerarse, en principio, como
un valor guía, y se emplea como tal para determinar las
diluciones a ensayar en Jos test de confirmación indicados
por la AOAC. Por otra parte, el hecho de comparar el fenol
con desinfectantes totalmente diferentes en composición y
mecanismo de acción, conlleva un error básico, por lo que
su uso debiera reservarse para el estudio de otros
desinfectantes fenólicos. A pesar de ello, el método del
coeficiente de fenol es el ensayo de referencia más utilizado.
El test de capacidad de Kelsey-Sykes consiste en someter
diluciones del desinfectante al agregado de suspensiones
de gérmenes a intervalos de tiempo especificados y
comprobar cuando el producto se agota. El ensayo permite
realizar la evaluación para las condiciones en las que se
supone no existe una buena limpieza, mediante la realización
o del mismo en presencia de materia orgánica. Tiene utilidad
para determinar las diluciones de uso de los desinfectantes,
representadas por aquellas que pueden soportar tres o más
incrementos del inóculo, sin evidenciar desarrollo.
Las normas AFNOR de dilución-neutralización,
presentadas por la Asociación Francesa de Normalización
en 1978, son útiles para la determinación de la actividad
bactericida de antisépticos y desinfectantes en estado
líquido, miscibles en agua y neutralizables, Se conforma
de dos ensayos. Uno preliminar, en el que se determina el
neutralizante idóneo para un desinfectante dado frente a
cinco especies bacterianas, y otro definitivo, en el que se
determina la concentración del producto con la que se
consigue frente a las cinco cepas, luego de un tiempo de
contacto de S minutos a 219%C, una reducción bacteriana
del 99,999 %, es decir, de 5 ciclos logarítmicos. Con las
especies bacterianas de ensayo se cubre bastante bien la
gama de bacterias Gram positivas, Gram negativas y
acidorresistentes (representadas por el uso de M.
smegmatis). También se recomienda la incorporación de
otros microorganismos a la prueba, cuando se deseen evaluar
acciones particulares.
Los test en uso, a diferencia de los descriptos, no
permiten el cálculo de la dilución en la que usar el
desinfectante, sino que confirmar si el germicida, una vez
aplicado sobre objetos especificos, cumple con el fin
propuesto. En estos ensayos se valoran múltiples factores
como la exactitud y frecuencia de renovación de las
diluciones, limpieza de los recipientes que los contienen,
inactivaciones por materia orgánica, etcétera. Consisten en
determinar la sobrevivencia de microorganismos luego de
 121
ESTERILIZACION Y DESINFECCIÓN
Anon. Pharmaceutical Handbook. 19th. Ed., Pharmaceutical Press,
de elementos
la aplicación del producto en la desinfección London, 1980.
evaluaciones
determinados. Resultan de gran utilidad para
Preservation. 2nd. Ed.,
Block SS. (Ed). Desinfection. Sterilisation and
de desi nfectantes en el ambiente hospitalario. Lea and Febiger, Philadelphia, 1977.
s el
ieren A. Les méthodes d'étude in vitro desantiseptique
Finalmente, los desinfectantes de uso sobre piel requ Cremieux
desinfectants: méthodes par dilution-neutralisation, evaluation
et
el examen
deevaluaciones de eficacia real en que comprende critique. Revue de ['InstituiPasteur de Lyon 1978; 113): 433.
ensayo,
de la tolerancia de la piel y mucosas al producto en Favero MS. Esterilización, desinfección y antisepsia
en el hospital. En
tóxico Clínica.
puesto que un desinfectante puede tener un efecto tan Edwin H. Lennette, Bolowe, Hausler, Truant. Microbiología
su valor 3 ed., Ed, Médica Panamericana, 1982: 1143-1151.
para las células tisulares que lleve a la pérdida de Microbiology. 3rd. Ed.,
o como Hugo WB, AD, Russell (Eds). Pharmaceutical
práctico. Para ello se utilizan tanto métodos in vitr Oxford, Blackwell Scientific Publications, 1983: 366.
odo de
in vivo (entre los que podemos mencionar el mét Kelsey SC. Disinfectants and method of testing. J Med
Lab Technol
Burn, y el método de Price). 1969; 26:79.
(Eds.). Control of
Lowbury EJL, Ayhlle GAJ, Geddes AM, Williams JD
BIBLIOGRAFIA hospital infection. Chapman £ Hall, London, 1975: 306.
. Edit par
Normas AFNOR T 72-151, T-160 (December 1977)
London, 1973:597. l'Association Francaisc de Normalisation, 1977.
Albert A. Selective Toxicity. 5a. Ed., Chapman £ Hall, Russell AD, Hugo WB, GAJ, Aylifre (Eds.). Principles
and Practise of
n of Official
AOAC. Official Methodos of Analysis ot the Associatio Disinfection Preservation and Esterelisattion. Blackwell Scient
ihc
Analyticcal Chemists. W. Horwitz (Ed), 12a. Ed., ADAC,
Publications, Oxford, 1982.
Washington DC, 1975.