Universidad Nacional Autónoma de México

Facultad de Ciencias
Biología de Plantas II

“Evaluació n de la viabilidad de semillas por las pruebas de

germinació n y cloruro de tetrazolio”

Mansilla Romeu,Sandra; Arana González Amanda Sofía.;

Morales Cruz, Alexandra; Rosas Cortina, Katya; Ojeda Gómez,
Omar.
11 de mayo del 2017
Introducción
La vida de una semilla inicia con la fecundació n y su desarrollo en la planta madre, hasta concluir en la
germinació n. La germinació n es un proceso que inicia con la absorció n de agua (hidratació n de la semilla),
hasta culminar con la emergencia de la radícula (segú n la especie, puede emerger la plú mula o el
hipocotilo). La toma de agua por la semilla para que inicie la germinació n, tiene tres fases: fase de
imbibició n (depende de las relaciones hídricas entre la semilla y el suelo), fase estacionaria (hay un
equilibrio entre el potencial hídrico de la semilla y el ambiente, debido a que el contenido de agua
aumenta poco o es constante) y fase de elongació n y crecimiento (se presenta si la cantidad de agua para
la semilla se excede).
La longevidad de las semillas es el periodo en el que estas mantienen su viabilidad, es decir mantienen su
funció n para germinar en condiciones apropiadas. Hay dos tipos de longevidad, una longevidad ecoló gica,
que es el tiempo en el que las semillas permanecen viables en condiciones naturales; longevidad
potencial, que es el tiempo en el que pueden permanecer viables pero en condiciones artificiales (en un
almacén, laboratorio, lugares ajenos a su ambiente natural).
Con base a la importancia de las semillas para el consumo humano, se han realizado estudios sobre su
comportamiento en almacén, por lo que las semillas se dividen en ortodoxas, intermedias y recalcitrantes
(Marquez, 2013). (Tabla 1)
Semilla ortodoxa. Son semillas con bajo contenido de humedad durante la dispersió n. Las
condiciones de viabilidad que necesitan estas semillas son bajo contenido de humedad y baja
temperatura (-15 y -150°C), porque bajo estas condiciones se reducen los procesos metabó licos y
se evita el desarrollo de agentes externos que las dañ en.
Semillas recalcitrantes. Tienen un alto contenido de humedad durante la diseminació n, por lo que
no se pueden almacenar a una temperatura superior a los 0° (el agua se puede congelar). La
viabilidad en condiciones ó ptimas de almacenamiento dura só lo algunas semanas o meses.
Semillas intermedias. Sus componentes son intolerantes a bajas temperaturas, a pesar de que se
puede reducir el contenido de humedad. La viabilidad en condiciones ó ptimas puede prolongarse
por añ os, dependiendo la especie.

Para conocer la viabilidad de las semillas, se utilizan diferentes pruebas. En el presente trabajo se evaluó
la viabilidad de 50 semillas de maíz mediante la prueba de cloruro de tetrazolio y germinació n.

Prueba de cloruro de tetrazolio. Consiste en hidratar las semillas y colocar el embrió n en la oscuridad,
en contacto con una solució n de 2,3,5-trifenil-2H-cloruro de tetrazolio. La concentració n de la solució n y
el tiempo depende de la especie, generalmente, es una solució n al 1% y se expone a la semilla durante 48
hrs. Al término, se observa si el embrió n ha reducido la solució n, por lo que este se tiñ e de color rojo
(Marque, 2013). La prueba tiene como fundamento la reacció n química de enzimas que participan en la
respiració n de la semilla con el cloruro de tetrazolio, la coloració n roja del embrió n, indica que partes del
embrió n realizan la respiració n y cuá les no. La evaluació n consiste en observar el patró n de la tinció n
(tejidos vivos) y determinar si la semilla tiene la capacidad de germinar. A partir de esta prueba se
obtiene el porcentaje de semillas viables de una muestra (SNICS, SAGARPA).
Prueba de germinación. Consiste en colocar las semillas en condiciones ambientales favorables para su
germinació n que se definen segú n la especie. La evaluació n de la prueba se realiza observando todas las
partes de la plá ntula y determinando si estas están defectuosas, dañ adas y si está n en posibilidad de
desarrollarse con normalidad. Con esta prueba podemos conocer el porcentaje de Plá ntulas Normales,
Plá ntulas Anormales, Semillas Frescas, Semillas Duras y Semillas Muertas que hay en la muestra y por lo
tanto en el lote que esta representa, esta informació n al igual que la resultante de la prueba de pureza es
ú til para saber qué cantidad de semilla debemos adquirir para lograr una densidad de siembra
determinada (SNICS, SAGARPA).

Comportamiento Contenido de Condiciones óptimas de Condiciones en las que se

en almacén humedad (CH) almacenamiento debe deshidratar
inicial

CH Temperatura Humedad Temperatura

Residual (°C) atmosférica (°C)
(%)

Ortodoxas Bajo <10 <-15 10 - 13 20l

Templadas Alto 10 – 12.5 >0<5 40 – 50 20

Tropicales Alto ≥5

Templadas Alto ≥ 15 >0<5 >70 20

Tropicales Alto ≥5
Tabla 1. Tipos de semillas con base en su comportamiento de almacén (Marquez, 2013).

Resultados
● Prueba de Germinación
Porcentaje total de viabilidad de las semillas: 96%

Caja 1.
No. de día Semillas germinadas p/caja (Acumulativo)

1 -

2 -

3 3

4 Las mismas 3

5 5

6 Las mismas 5

7 Las mismas 5
Tabla 2. Porcentaje de viabilidad de Caja 1: 100%
Caja 2.
No. de día Semillas germinadas p/caja (Acumulativo)

1 -

2 -

3 2

4 3

5 5

6 Las mismas 5

7 Las mismas 5
Tabla 3. Porcentaje de viabilidad de Caja 2: 100%

Caja 3.
No. de día Semillas germinadas p/caja (Acumulativo)

1 -

2 -

3 3

4 4

5 Las mismas 4

6 Las mismas 4

7 Las mismas 4
Tabla 4. Porcentaje de viabilidad de Caja 3: 80%

Caja 4.
No. de día Semillas germinadas p/caja (Acumulativo)

1 -

2 1

3 3

4 Las mismas 3

5 5

6 Las mismas 5

7 Las mismas 5
Tabla 5. Porcentaje de viabilidad de Caja 4: 100%

Caja 5.
No. de día Semillas germinadas p/caja (Acumulativo)

1 -

2 -

3 3

4 5

5 Las mismas 5

6 Las mismas 5

7 Las mismas 5
Tabla 6. Porcentaje de viabilidad de Caja 5: 100%
● Prueba de Cloruro de Tetrazolio
Porcentaje total de viabilidad de las semillas: 84%, de 25 semillas, solamente 21 fueron viables en esta
prueba.

Imagen 1. Semillas de maíz sometidas a la prueba de Cloruro de Tetrazolio.

Se puede observar la tinció n del embrió n para las semillas viables (21).
Discusión de Resultados

● Prueba de Germinación: 96%

● Prueba de Cloruro de Tetrazolio: 84%
Ambas pruebas realizadas tuvieron un porcentaje ó ptimo superior al 80%. La prueba de germinació n
tuvo un porcentaje mayor, ya que factores como la luz pudieron haber influido directamente en el
crecimiento de las semillas. Por otro lado la prueba de cloruro de tetrazolio tuvo un porcentaje menor, la
diferencia entre porcentajes de ambas pruebas puede deberse a cuestiones aleatorias, por lo que puede
concluirse que el lote de semillas es viable al 90%.

Ventajas y desventajas de cada una de las pruebas.

Ventajas de la prueba de germinación:
Hay varios métodos para evaluar la germinació n, los má s sugeridos son cuatro, que se pueden usar con la
mayoría de las especies y dan resultados uniformes.
1. Método de germinació n sobre papel.
2. Método de germinació n entre papel.
3. Germinació n en arena.
4. Método de germinació n en agar.
En los dos primeros métodos el papel absorbente se usa como sustrato para la germinació n.
Desventajas:
La germinació n só lo se puede lograr en condiciones ó ptimas de agua, oxígeno, luz y temperatura.
No existe un conjunto general de condiciones para germinar las semillas de todas las especies.
La contaminació n por hongos, es un evento comú n en la germinació n, en especial con las semillas de
leguminosas.
Ventajas de la prueba con cloruro de tetrazolio:
Debido a la rá pida determinació n de la viabilidad, es importante para la toma de decisiones en la
industria de semillas., es adecuada para la evaluació n de la capacidad germinativa potencial,
especialmente para lotes con elevada cantidad de semillas, ú til para estudiar procesos de deterioro.
Desventajas: La interpretació n visual de la tinció n es subjetiva y requiere experiencia, especialmente en
semillas pequeñ as, puede no detectar dañ os menores, como la presencia de infecció n por hongos o dañ os
por insecticidas (Ruiz, 2009).

Estrategia para tratar semillas amenazadas.

Cambiaríamos la estrategia ya que no se poseen la cantidad de semillas necesarias para hacer las pruebas
de germinació n, buscaríamos otras técnicas de germinació n.
La técnica de electro-cultivo, se trata de una estimulació n de material vegetal o semillas para incrementar
la germinació n. Se ocupan electrodos que se encontraran en el suelo, preferiblemente el tipo de suelo
exacto de la planta. Se ocupan electrodos que se encontraran en el suelo, preferiblemente el tipo de suelo
exacto de la planta. El suelo se saturará con agua corriente y se aplica un campo eléctrico de corriente
directa por un tiempo determinado, con esto habrá un movimiento de partículas cargadas presentes en el
suelo, iones y agua. En las semillas se va a generar una estimulació n en la testa lo que permitirá la entrada
de agua y ayudará a que se rompa el estado de latencia y comiencen a germinar ya que se estimula un
mayor nú mero de semillas de las que normalmente germinan.

Conocer la viabilidad de un lote de semillas en un almacén de semillas o al momento de la siembra, es

importante para aspectos agrícolas, forestales, de conservació n; así como para la restauració n y
adquisició n de conocimiento científico de la germinació n de especies silvestres (Má rquez, 2013). Conocer
la viabilidad también previene importantes pérdidas econó micas.
Los bancos de germoplasma son depó sitos especializados que almacenan material vegetativo vivo en
forma de semillas y esporas, que a través de técnicas apropiadas, garantizan el aprovechamiento y la
provisió n de semillas forestales a mediano y largo plazo; en ellos se realizan procesos de limpieza y
almacenamiento de germoplasma forestal, bajo condiciones controladas de temperatura y humedad, así
como el aná lisis de sus características para conservar su potencial germinativo (CONAFOR).

Conclusiones
Conocer la viabilidad de un lote de semillas es sumamente ú til, tanto para la producció n agrícola como la
conservació n de especies vegetales. La viabilidad de una semilla depende de diversos factores como la
humedad, temperatura y el medio donde se almacenan. Realizar pruebas es sumamente importante para
determinar un porcentaje aproximado de qué tan viable es un lote.
La prueba de germinació n en este caso tuvo un mayor porcentaje, debido a que las condiciones de
temperatura, luz, agua fueron ó ptimas y no se presentó contaminació n por hongos, mientras que la
prueba de cloruro de tetrazolio tuvo un porcentaje menor. Puede concluirse que el lote de donde
provenían las semillas tiene un 90% de viabilidad.

Referencias
1. Marquez, J. et al. (2013). Biología de angiospermas. México: UNAM, Facultad de Ciencias:
Coordinació n de la Investigació n Científica.
2. Servicio Nacional de Inspecció n y Certificació n de Semillas (SNICS), SAGARPA. Pruebas de
viabilidad. Disponible en: http://www.lcrsemillas.org.mx/germinacion.html
3. Ruiz, M. (2009). El an·lisis de tetrazolio en el control de calidad de semillas. E.E.A. INTA Anguil.
Disponbible en: http://inta.gob.ar/sites/default/files/script-tmp-
el_anlisis_de_tetrazolio_en_el_control_de_calidad_de_.pdf
4. CONAFOR. Bancos de germoplasma. Disponible en:
http://www.conafor.gob.mx/innovacion_forestal/?p=997
5. Bustos, E. (2017). Método con electricidad para germinar plantas amenazadas. [en línea].
Obtenido de: http://www.cideteq.mx/metodo-electricidad-germinar-plantas-amenazadas/
6. Kameswara, R., Hanson, J., Dulloo, E., Ghosh, K., Nowell, D. & Larinde M. (2007). Manual para el
Manejo de Semillas en Bancos de Germoplasma. Biodiversity international. Roma: Italia. [en
línea]. Obtenido de:
http://www.bioversityinternational.org/uploads/tx_news/Manual_para_el_manejo_de_semillas_
en_bancos_de_germoplasma_1261_01.pdf