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UNIVERSIDAD PRIVADA

«SAN JUAN BAUTISTA»


FACULTAD DE INGENIERIAS.
ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERIA AGROINDUSTRIAL.
CURSO: ANÁLISIS QUÍMICO INSTRUMENTAL.
CICLO: VII
DOCENTE: Mg.Ing. CIP. SUMAYA N HUAMAN SKRLEC.
CORREO PERSONAL: alanissotelo@hotmail.com
CORREO INSTITUCIONAL: SUMAYA.HUAMAN@upsjb.edu.pe
UNIDAD DIDACTICA I:
ESPECTROSCÓPIA DE
ABSORCIÓN MOLECULAR U.V. –
VISIBLE.
INTRODUCCIÓN A LA ESPECTROSCOPIA DE
ABSORCIÓN MOLECULAR U.V/VISIBLE.
 Esta técnica de análisis se basan en la observación de las interacciones entre la materia y la
radiación electromagnética.
 Lo cual me permite determinar de manera cuantitativa la concentración de un compuesto
en solución, tanto de especies inorgánicas como orgánicas, estas detección de la
concentración del analito dependerá de la selección de longitud de onda de la radiación
absorbida en la región visible (VIS) y ultravioleta (U.V) del espectro electromagnético.
 La espectroscopia de absorción molecular se basa en la medida de la transmitancia To de la
absorbancia A de disoluciones que se encuentran en cubetas transparentes que tienen un
camino óptico de b c.
 Normalmente, la concentración c de un analito absorbente está relacionada linealmente con
la absorbancia como representa la ecuación:
 A = - logT = log P0 = €bc …………..(a)
 P
 Todas las variables las definimos en la tabla 3.1. Esta es una ecuación matemática de la Ley
de Beer.
 La Espectrometría de Absorción molecular basada en la radiación
ultravioleta y visible es una de las herramientas mas útiles de las que dispone
el químico para análisis cuantitativos.
 Las especies inorgánicas, orgánicas y bioquímicas.
 No todas absorben radiación U.V y VIS.
 Las especies que no son absorbentes o que absorben poco a una longitud
de onda se convierten a derivados absorbentes que se pueden cuantificar.
TABLA. 3.1. TÉRMINOS Y SÍMBOLOS IMPORTANTES
UTILIZADOS EN LAS MEDIDAS DE ABSORCIÓN.
Término y símbolo Definición Nombre y símbolo
alternativo.
Potencia radiante P, Po Energía de la radiación que incide Intensidad de la radiación I, Io
en el detector, por cm2 y por seg.
Absorbancia A Log Po/P Densidad óptica D, Extinción E.
Transmitancia T P/Po Transmición T
Camino óptico de la radiación b -- I, d
Absortividad a A/bc Coeficiente de extinción, K
Absortividad molar € A/bc Coeficiente de extinción molar
ESPECTRO DE RADIACIÓN ELECTROMAGNÉTICA.
 VISIBLE (VIS).- Es una estrecha banda formada por longitudes de onda a las
cuales la retina humana es sensible. Se extiende entre 400 y 700 nm.
 ULTRAVIOLETA (U.V).- Este rango esta formado por todas las radiaciones
comprendidas entre las que tienen longitud de onda desde 10 nm hasta 400
nm.
MEDIDA DE LA TRANSMITANCIA Y DE LA
ABSORBANCIA.
 Normalmente, la transmitancia y la absorbancia, no pueden medirse en el laboratorio ya
que la disolución del analito debe mantenerse en algún tipo de recipiente transparente, o
cubeta.
 En la figura 3.1, observamos en las dos interfaces aire/pared de la cubeta, así como en las
dos interfaces pared/ disolución tienen lugar reflexiones. La atenuación del haz resultante es
primordial, aproximadamente el 8,5% de un haz de luz amarilla se pierde por reflexión en su
paso a través de una cubeta de vidrio rellena de agua.
 Perdidas de reflexión en las interfases Perdidas por dispersión en la disolución

La atenuación de reflexión puede


ocurrir como consecuencia de la
dispersión causada por moléculas
grandes, y, a veces, de la absorción
de las paredes del recipiente.
 Para compensar todos los efectos, la potencia del haz transmitido por la
disolución del analito se compara, generalmente con la potencia del haz
transmitido por un cubeta idéntica que sólo contiene disolvente. Con las
siguientes ecuaciones obtenemos Transmitancia y Absorbancia verdaderas:
𝑃𝑑𝑖𝑠𝑜𝑙𝑢𝑐𝑖ó𝑛 𝑃
 T= = 𝑃𝑜
𝑃𝑜 𝑑𝑖𝑠𝑜𝑙𝑣𝑒𝑛𝑡𝑒
𝑃𝑑𝑖𝑠𝑜𝑙𝑣𝑒𝑛𝑡𝑒 𝑃𝑜
 A = log = = log
𝑃𝑑𝑖𝑠𝑜𝑙𝑢𝑐𝑖ó𝑛 𝑃
 Estos términos Po y P, se refieren a la potencia de radiación después de
pasar a través de cubetas que contienen el disolvente y el analito,
respectivamente.
PROCEDIMIENTO SEGUIDO PARA LA ESTANDARIZACIÓN DE UN
MÉTODO ESPECTROFOTOMETRICO U.V – VIS.
 Selección de la longitud de onda.- Se realizan medidas de absorbancia a una longitud de
onda de máxima absorción del analito de interés.
 Además, la curva de absorción suele ser horizontal en la longitud de onda máximo,
obteniéndose un buen cumplimiento de la Ley de Beer y una menor incertidumbre en el
ajuste de longitud de onda máximo en el instrumento.
 Ejemplo 1. Determinación de Longitud de onda. Absorción de una sustancia X.
Long. De onda máx. Absorción de una sustancia X.
Long. De onda (máx) Absorbancia(A) 0.6
400 0.00
420 0.01 0.5
440 0.02
0.4

long. De onda
450 0.08
455 0.20
0.3
460 0.45
Absorbancia(A)
465 0.50 0.2
470 0.48
475 0.20 0.1
480 0.05
0
500 0.01
440 450 455 460 465 470 475 480 500 540
540 0.01
Absorbancia
VARIABLES QUE INFLUYEN EN LA MEDIDA DE LA
ABSORBANCIA.
 Naturaleza del disolvente
 El pH de la disolución
 La temperatura
 Concentraciones altas de electrolito
 Presencia de interferencias.
FUNDAMENTO DE MÉTODO.
 Se basa en que las moléculas absorben las radiaciones
electromagnéticas y a su vez que la cantidad de luz absorbida
depende de forma lineal de la concentración.
 Para hacer este tipo de medidas se emplea un
espectrofotómetro, en el que se puede seleccionar la longitud de
onda de la luz que pasa por una solución y medir la cantidad de
luz absorbida por la misma.
LEY DE LAMBERT – BEER.
 La Absorbancia de una especie en solución homogénea es directamente
proporcional a su actividad óptica, longitud del paso óptico y su
concentración. Es una relación empírica que relaciona la absorción de luz
con las propiedades del material atravesado.
 Diagrama de la absorción de un haz de luz atravesando una cubeta de
tamaño I.
LEY DE BEER.
 Esquematiza el fenómeno de absorción por ejemplo consideremos que el bloque
del material absorbente (sólido, líquido o gas) que se muestra en la figura 2.

Figura 2. Fenómeno de absorción

 Un haz de radiación monocromático paralelo de potencia Po choca contra el


bloque de forma perpendicular a la superficie, después de pasar a través de una
longitud b de material, que contiene n átomos, iones o moléculas absorbentes, cuya
concentración es c, su potencia disminuye hasta un valor P como resultado de la
absorción. Esto se debe a las interacciones entre los fotones y partículas
absorbentes. Por lo tanto la transmitancia T de la solución es la fracción de
radiación incidente transmitida (o no absorbida) por la solución según:
 Según la Ley de Beer, entonces, la absorción A estará determinada por:

donde: ξ absortividad molar


b longitud de paso óptico
c concentración en moles/l
Medición experimental de la absorción.
 Según vimos en el esquema anterior la absorción es directamente proporcional a la longitud
(b) de la trayectoria de la radiación a través de la solución y a la concentración (c) de la
especie absorbente: A = a . b . c (con a: cte. de proporcionalidad).
 Si c se expresa en moles por litro y b en cm, entonces la absortividad se denomina
absortividad molar (ξ):A=ξ.b.c.
 La Ley de Beer se cumple igualmente en soluciones que contienen más de una especie
absorbente, siempre que no haya interacción entre dichas especies. Por tanto, para un
sistema multicomponente la relación será:

AT = A1+A2+………+An
AT = ξ1bc1+ξ2bc2+………+ξnbcn
Limitaciones a la aplicabilidad de la Ley de Beer.
 Se observan frecuentemente desviaciones de la proporcionalidad entre A y c
(cuando b es constante).
 Algunas de estas desviaciones son importantes y representan limitaciones reales
de la ley. Estas son de tipo:
 Químico;
• Instrumental.
 La Ley de Beer.- es sólo aplicable a soluciones en las que las interacciones
dependientes de la concentración de las moléculas o iones son mínimas.
Concentraciones “altas” alteran las absortividades molares y por lo tanto conducen
a una relación no lineal entre A y c.
LIMITACIONES PROPIAS DE LA LEY DE BEER.

 Desviaciones químicas.- Cuando las especies absorbentes experimentan asociación,


disociación o reacción con el solvente originan productos con características absorbentes
distintas de las del analito.
 Un ejemplo típico se observa con soluciones de dicromato potásico no amortiguadas, en las que
existen los siguientes equilibrios:
 Cr2O7+H2O ↔ 2HCrO4 ↔ 2H+ + 2CrO4-2
 A casi todas las longitudes de onda los valores de ξ del ion dicromato y las dos especies de
cromatos son muy diferentes.
 Desviaciones instrumentales.-
 Radiación policromática: el requisito básico para el cumplimiento de la Ley de Beer es
que la radiación incidente sea monocromática. Dependiendo de las características tecnológicas
del sistema óptico del instrumento será más o menos accesible poder utilizar en forma práctica
una radiación una radiación limitada a una sola longitud de onda.
 Radiación dispersa: la radiación dispersa suele diferir considerablemente en longitud de
onda con respecto a la radiación principal; además puede alcanzar el detector sin haber pasado a
través de la muestra.
INSTRUMENTACIÓN.
 Los instrumentos que miden la absorción selectiva de la radiación en las soluciones se
conocen con los nombres de: colorímetros, fotómetros y espectrofotómetros. Hoy en día
es pertinente diferenciar los instrumentos según su sistema de detección: detectores
simples (convencional) o detectores multicanal (arreglo de diodo).
 Algunos de los diseños básicos de los instrumentos usados en la medición de la absorción
de Energía Radiante se ilustra en el siguiente esquema:
 Figura 3.6. Diagrama de bloques de diferentes tipos de instrumentos de medición de la
absorción molecular.
COMPONENTES DE LOS INSTRUMENTOS.

A) Fuente de energía radiante.


 Debe producir un haz de radiación cuya potencia sea suficiente para facilitar la detección y
medida; debe ser estable. Ej.:
• Lámpara de hidrógeno
• Lámpara de deuterio.
 Ambas lámparas producen un espectro continuo entre 160–375 nm y deben emplearse
ventanas de cuarzo en los tubos: ya que el vidrio absorbe fuertemente en esta región del
espectro electromagnético.
• Lámpara de filamento de tungsteno.- Es la fuente más común para la zona del visible e
infrarrojo. Esta lámpara es útil para la región entre 320 – 2,500 nm.
B) Sistema selector de la longitud de onda de trabajo.
 (i) Fotómetro (colorímetro): este tipo de instrumentos utiliza filtros que permiten obtener
bandas de radiación que abarcan un intervalo limitado de longitudes de onda (con un
fotómetro no es posible obtener una banda de absorción variable en forma continua).
(ii) Espectrofotómetro: utilizan un complejo sistema óptico de selección de longitud de onda
(sistema monocromador). el cual consta de variados componentes tales como:
• prisma o rejilla;
• lentes;
• espejos;
• ranuras de entrada y salida.
 Estos instrumentos pueden seleccionar longitud de onda en forma continua y en algunos
casos con precisión de décimas de nm. Por lo tanto, es posible obtener en forma continua
el espectro de absorción de una molécula.
c) Recipientes para la muestra:
 La mayor parte de las aplicaciones espectrofotométricas utiliza las muestras en solución líquida, por
esta razón se requieren recipientes para colocar la muestra (celdas). La celda debe transmitir el 100%
de la energía radiante en la zona espectral de trabajo.
 Región U.V. = Celdas de cuarzo (200–2,000 nm)
 Región VIS = Celdas de vidrio (350–2,000 nm)
 Algún tipo de plástico.
 La longitud más común para el trabajo en las regiones UV-VIS es 1 cm (otras son: 2, 5 y 10 cm).
d) Detección de la radiación
 Dispositivo electrónico llamado transductor que convierten la energía radiante en una señal eléctrica.
 Requisitos:
 • Responder a la E.R. en un amplio intervalo de λ. • Poseer elevada sensibilidad.
 • Respuesta lineal. • Tiempo de respuesta rápido, etc…
 Detectores de fotones:
 • Celdas fotovoltaicas. • Tubos fotomultiplicadores.
 • Fototubos. • Diodo de silicio.
e) Procesadores de señales e instrumento de lectura
 Dispositivo electrónico que amplifica la señal eléctrica generada en un detector. En
este sentido existe una amplia gama de alternativas, desde galvanómetros hasta
avanzadas computadoras.
 Figura 3.1. Componentes y materiales de los instrumentos espectroscópicos
 Figura 3.1. Componentes y materiales de los
instrumentos espectroscópicos
ESQUEMA GENERAL DE LOS SISTEMAS ÓPTICOS DE
ESPECTROFOTÓMETROS.
 Figura 3.8. Sistema con arreglo de diodo mono haz.

Figura 3.9. Sistema convencional doble haz


Análisis cualitativo y cuantitativo
A) Técnicas cualitativas
 Las aplicaciones cualitativas no ofrecen una herramienta muy útil, ya que con estos
espectros existe un número relativamente escaso de máximos y mínimos. Sin
embargo el análisis cualitativo es una excelente herramienta cuando va precedido
de algún método de separación.
 Análisis cuantitativo
 a) Aplicación:
 Compuestos orgánicos: Aldehídos y cetonas
 Aromáticos
 Drogas
 Vitaminas, etc…
 Compuestos inorgánicos: (especies absorbentes)
 Compuestos no absorbentes → Derivatización
 (Por ej.: formación de complejos coloreados).
 B) Principales características:
 Alta sensibilidad:
 Absortividades molares ξ ≈ 105
 Intervalos de concentración 10-4 a 10-6M.
 Selectividad: selección de la longitud de onda en la que el único componente
absorbente de una muestra sea la sustancia que se determina.
 Precisión y exactitud: dependiendo del nivel de concentración es posible
lograr valores menores que 1% de error relativo.
APLICACIONES DE LAS MEDICIONES DE ABSORCIÓN DE
RADIACIÓN ULTRAVIOLETA Y VISIBLE.
 Especies absorbentes
 La absorción de radiación ultravioleta y visible por una especie M, puede considerarse
como un proceso en dos etapas, la primera de las cuales corresponde a la excitación según:
 M+h.v→M*
 donde M* representa la partícula atómica o molecular en su estado electrónico excitado
que se produce como resultado de la absorción del fotón h v. Este estado excitado tiene un
breve tiempo de existencia (10-8 a 10-9 s) y desaparece a través de través de algunos de los
diferentes procesos de relajación (calor).
 M*→M+calor
 La absorción de la radiación ultravioleta o visible, se produce por lo general como
consecuencia de la excitación de los electrones de enlace; debido a esto, la longitud de onda
de los picos de absorción se puede correlacionar con los tipos de enlace existentes en la
especie que se estudia.
 Explotación analítica
• Identificación proximal de los grupos funcionales en una molécula.
• Método bastante selectivo para el análisis cuantitativo de compuestos cuyos
enlaces producen absorción.
 Conviene considerar tres tipos de transiciones electrónicas que permiten explicar
porqué algunas especies pueden absorber energía radiante. Estos tres tipos son:
• Los electrones π, σ y η.
• Los electrones d y f.
• Los electrones de transferencia de carga.
 a) Especies químicas absorbentes que contienen electrones π, σ y η
 La absorción de radiación ultravioleta y visible (200–800 nm) se restringe a un
número limitado de grupos funcionales, llamados cromóforos, que contienen
electrones de valencia con energías de excitación relativamente bajos.
Tabla 3. Caracteristicas de absorción de algunos
cromóforos comunes

Cromóforo Ejemplo Disolvente λmáx (nm) εmáx Tipo de transición

Alqueno C6H13CH = CH2 n-Heptano 177 13,000 π→π*

178 10,000 π→π*


Alquino C5H11C=C—CH3 n-Hexano 196 2,000 -
225 160 -

Carbonilo
n-Heptano 186 1,000 π→σ*
280 16 π→π*

π→σ*
n-Hexano 180 larga π→π*
Carboxilo Etanol 204 41 π→π*
Amido Agua 214 60 π→π*
Azo CH3N=NCH3 Etanol 339 5 π→π*

Nitro CH3NO2 Isooctano 280 22 π→π*

300 100 -
Nitroso C4H9NO Éter etílico
665 20 π→π*

Nitrato C2H5ONO2 Dioxano 270 12 π→π*


 Absorción en la que participan los electrones d y f
• Iones de los metales de transición
• Serie de los lantánidos y actínidos
 Los iones y complejos de los 18 elementos de las dos primeras series de transición son
coloreados en uno de sus estados de oxidación o en todos ellos. Dependiendo las
(1) en = etilendiamina, un ligante bidentado.

características colorimétricas del complejo; del tipo de ligando (agente complejante) y del
estado de oxidación.
 Tabla 3.3. Efecto de los ligantes sobre los máximos de absorción asociados con transiciones
d-d
λmáx (nm) para los ligantes indicados
Aumento de fuerza del campo de unión
Ion central 6CI 6H2O 6NH3 3en(1) 6CN-
Cr (III) 736 573 462 456 380
Co (III) - 538 435 428 294
Co (II) - 1345 980 909 -
Ni (II) 1370 1279 925 863 -
Cu (II) - 794 663 610 -
 Absorción por transferencia de carga.-
 Para fines analíticos es el tipo más importante de absorción por especies inorgánicas,
debido a que las absortividades molares de los picos son muy grandes (ξ < 105). Esta es una
particular característica de los complejos inorgánicos denominados también, complejos de
transferencia de carga.
 Ejemplos:
• Hierro III- ion tiocianato
• Hierro II - (o-Fenantrolina)
• Ion triyoduro I3-
APLICACIONES CUANTITATIVAS.
 Existen especies inorgánicas, orgánicas y bioquímicas que son absorben
radiaciones U.V – VIS y se pueden cuantificar de manera directa.
 Las especies que no son absorbentes o que absorben poco a una longitud
de onda se convierten a derivados absorbentes que se pueden cuantificar.
«Hay una fuerza motriz más
poderosa que el vapor, la
electricidad y la energía
atómica: la voluntad.»
Albert Einstein

GRACIAS.

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